Αφηρημένο

Ιστορικό

Οι ασθενείς συνήθως πεθαίνουν από καρκίνο, μετά την αποτυχία των σημερινών θεραπειών για την εξάλειψη της νόσου. Ένας υποπληθυσμός κυττάρων όγκου, που ονομάζεται καρκινικά βλαστικά κύτταρα (CSC), εμφανίζεται μοναδικά σε θέση να τροφοδοτήσει την ανάπτυξη των φαινοτυπικά και ιστολογικά ποικίλες όγκων. Έχει προταθεί, ως εκ τούτου, ότι η αποτυχία για την αποτελεσματική θεραπεία του καρκίνου μπορεί εν μέρει να οφείλεται σε προτιμησιακή αντίσταση αυτών CSC σε χημειοθεραπευτικούς παράγοντες. Η υποομάδα των ανθρώπινων καρκινικών κυττάρων του παχέος εντέρου με ένα ESA

+ CD44

+ φαινότυπο είναι μοναδικά υπεύθυνο για την καρκινογένεση και έχουν την ικανότητα να παράγουν ετερογενή όγκων σε ένα περιβάλλον ξενομόσχευμα (

δηλ.

CoCSC). Υποθέσαμε ότι αν μη ογκογόνων κυττάρων είναι πιο επιρρεπή σε χημειοθεραπευτικούς παράγοντες, τότε θα μπορούσε να αναμένεται υπολειμματική όγκους για να περιέχει μια υψηλότερη συχνότητα CoCSC.

Μέθοδοι και Ευρήματα

ξενογενετική όγκους που ξεκίνησαν με CoCSC ήταν αφήνεται να φθάσει σε ~ 400 mm

3, στην οποία τυχαιοποιήθηκαν ποντίκια σημείο και ξεκίνησαν χημειοθεραπευτικά σχήματα που περιλαμβάνουν κυκλοφωσφαμίδη ή ιρινοτεκάνη. Δεδομένα από επιμέρους φαινοτυπική ανάλυση του όγκου και το σειριακό μεταμοσχεύσεις πραγματοποιούνται στον περιορισμό δείχνουν αραίωση ότι οι υπολειμματικές όγκοι εμπλουτισμένα για τα κύτταρα με φαινότυπο CoCSC και έχουν αυξηθεί ογκογόνο συχνότητα των κυττάρων. Επιπλέον, η εγγενής ικανότητα των υπολειμματικών CoCSC να παράγουν όγκους φαίνεται διατηρηθεί. Αλδεΰδη αφυδρογονάση έκφραση ενός γονιδίου και η ενζυμική δραστηριότητα είναι αυξημένα σε CoCSC και χρησιμοποιώντας ένα

in vitro

σύστημα καλλιέργειας που διατηρεί CoCSC όπως αποδεικνύεται από σειριακή μεταμοσχεύσεις και λεντοϊού σήμανση των απλών κλώνων κυττάρων που προέρχονται, δείχνουμε επίσης ότι ΑΙ_ϋΗ1 ενζυματική δραστηριότητα είναι ένας κύριος διαμεσολαβητής της αντοχής σε κυκλοφωσφαμίδη: α. κλασικό χημειοθεραπευτικό παράγοντα

Συμπεράσματα

CoCSC είναι εμπλουτισμένα σε όγκους του παχέος εντέρου μετά από χημειοθεραπεία και παραμένουν ικανοί να αναπαράγουν ταχέως όγκους από το οποίο προέρχονται. Με επίκεντρο την βιολογία του CoCSC, κύριοι μηχανισμοί αντίστασης στην συγκεκριμένη χημειοθεραπευτικούς παράγοντες μπορεί να αποδοθεί σε συγκεκριμένα γονίδια, γεγονός που υπονοεί κατευθύνσεις για τη βελτίωση της θεραπείας του καρκίνου

Παράθεση:. Dylla SJ, Beviglia L, Πάρκο IK, Chartier C, Raval J, Ngan L, et al. (2008) Cancer παχέος βλαστοκύτταρα είναι εμπλουτισμένο σε ξενογενετικών όγκων Μετά χημειοθεραπεία. PLoS ONE 3 (6): e2428. doi: 10.1371 /journal.pone.0002428

Επιμέλεια: Δ Gary Gilliland, Νοσοκομείο Brigham και Γυναικών, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 29 Νοέμ 2007? Αποδεκτές: 8η Μαΐου 2008? Δημοσιεύθηκε: 18 Ιούν, 2008

Copyright: © 2008 Dylla et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. MFC είναι ιδρυτής και μέλος του καταβεβλημένου συμβουλευτικής επιτροπής της OncoMed Pharmaceuticals Inc., και έχει μια θέση σε μετοχές της εταιρείας. Όλοι οι άλλοι συντάκτες είναι υπάλληλοι της OncoMed Pharmaceuticals Inc., μια εταιρεία βιοτεχνολογίας επικεντρώθηκε στην θεραπευτική στόχευση του καρκίνου Stem Cells που έχει υποβάλει αίτηση για τα διπλώματα ευρεσιτεχνίας που σχετίζονται με αυτή τη μελέτη. Η χρηματοδότηση για αυτές τις μελέτες ελήφθη μέσω ιδιωτικής χρηματοδότησης? Ωστόσο, τα κόμματα αυτά είχαν κανένα ρόλο στην απόφαση να εκτελέσει, να αναλύσει ή να δημοσιεύουν τα αποτελέσματα

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. MFC είναι ιδρυτής και μέλος του καταβεβλημένου συμβουλευτικής επιτροπής της OncoMed Pharmaceuticals Inc., και έχει μια θέση σε μετοχές στην εταιρεία. Όλοι οι άλλοι συντάκτες είναι υπάλληλοι της OncoMed Pharmaceuticals Inc., μια εταιρεία βιοτεχνολογίας που έχει υποβάλει αίτηση για τα διπλώματα ευρεσιτεχνίας που σχετίζονται με αυτή τη μελέτη.

Εισαγωγή

Η παρουσία των κυτταρικών πληθυσμών διαφορετικές σε κανονικές και νεοπλασματικών ιστών έχει μακρά αναγνωριστεί. Ενώ η κανονική δομή του ιστού και η λειτουργία διευκολύνεται από διάφορους τύπους κυττάρων, που παράγονται κατά την ανάπτυξη και συνεχώς αντικαθίστανται για τη διατήρηση της ομοιόστασης, ο καρκίνος χαρακτηρίζεται γενικά από αποδιοργανωμένη υπερπολλαπλασιασμό. Επειδή γενετικό υλικό διαδίδεται επί παρατεταμένες χρονικές περιόδους, λόγω των ιδιοτήτων αυτο-ανανέωση των βλαστικών κυττάρων, οι επιδεινώνοντας μεταλλάξεις που απαιτούνται για την ογκογένεση έχει πιθανολογηθεί ότι προκύπτουν σε αυτά τα σπάνια κύτταρα και όχι περισσότερο πολυάριθμες απογόνους τους, τα οποία έχουν ένα πεπερασμένο χρόνο ζωής κάποτε δεσμευθεί για διαφοροποίηση. Όπως φυσιολογικών αρχέγονων κυττάρων ιστών κάτοικος που υποστηρίζουν την κυτταρική ιεραρχία η οποία περιλαμβάνει ένα συγκεκριμένο ιστό κατά τη διάρκεια ζωής ενός ατόμου, τα καρκινικά βλαστικά κύτταρα (CSC) που ορίζεται από την ικανότητά τους να αυτο-ανανέωση επ ‘αόριστον, ενώ διατηρεί την ικανότητά τους να παράγουν τόσο ογκογόνα (TG ) και μη ογκογόνα (NTG) κυττάρων [1]. Σε αντίθεση με τη φυσιολογική ανάπτυξη, ωστόσο, οι πληθυσμοί νεοπλασματικών προγονικών κυττάρων μπορούν να αποκτήσουν δυνατότητες αυτο-ανανέωση, εκπληρώνοντας έτσι επίσης τον ορισμό του CSC [2], [3]. Τελικά, επίδειξη των δυνατοτήτων αυτο-ανανέωσης και της διαφοροποίησης που ορίζουν ένα βλαστοκυττάρων, τόσο φυσιολογικών και νεοπλασματικών, μπορεί να επιβεβαιωθεί από μελέτες σειριακή μεταμόσχευση που επιτρέπουν διάκριση κυττάρων που έχουν την ικανότητα αυτο-ανανέωσης έναντι εκείνων ικανό πολλές, αν και πεπερασμένη, μη αυτο -ανανεωτική κυτταρικές διαιρέσεις [4].

το παράδειγμα CSC βασίζεται πάνω στα θεμέλια που ετερογένεια του όγκου μπορεί να παραχθεί από ένα μόνο CSC. Επειδή τα παραδοσιακά κυτταρικές γραμμές και ξενομοσχεύματα δεν ανακεφαλαιώνουν η κυτταρική και μορφολογική ετερογένεια που παρατηρήθηκε σε ξενομοσχεύματα που προκύπτουν από την εμφύτευση των κυττάρων του όγκου που λαμβάνονται απ ‘ευθείας από τους ασθενείς και όχι περάστηκαν

in vitro

, CSC βιολογία εξαρτάται από την τελευταία μορφή ξενομοσχεύματα. Αν και η σημασία αυτών, και όλα, τα ξενομοσχεύματα σε όγκους ασθενών έχει αμφισβητηθεί [5] – [7], η μεταμόσχευση ανθρώπινων κυττάρων σε ποντίκια είναι το μόνο σύστημα μοντέλο που δεν εκθέτει τα ανθρώπινα κύτταρα σε aphysiological

ex vivo

περιβάλλον που αποτελείται από πλαστικό καλλιέργειας ιστού και μέσου καλλιέργειας και τα οποία μπορούν να ανακεφαλαιώσουμε την κυτταρική ετερογένεια ενός πρωτογενούς όγκου

in vivo

. Ένα άλλο θέμα της διαμάχης στα θεμέλια της υπόθεσης CSC είναι η πρόταση ότι η πλήρης ετερογένεια ενός όγκου μπορεί να προκύψει από ένα μόνο κύτταρο [8], [9]. Αδιαφορώντας για το στρωματικό, ενδοθηλιακά και αιμοποιητικά στοιχεία προσλαμβάνονται και να ενσωματωθεί εντός του όγκου, έχει προταθεί ότι TG και NTG πληθυσμούς προκύπτουν από διάφορα κύτταρα και όχι από ένα ενιαίο [9] CSC. Εάν CSC μπορεί να παράγει πράγματι την κυτταρική ετερογένεια που παρατηρείται σε όγκους ασθενών, και ξενομοσχεύματα ποντικών αποτελούνται από κύτταρα αυστηρά περάστηκαν

in vivo

καλύτερο διατηρούν τα χαρακτηριστικά των όγκων σε ασθενείς, τότε η εστίαση των προσπαθειών στον τομέα του καρκίνου βιολογίας πρέπει να ξεκάθαρα επί αυτών των κυττάρων και μικροπεριβάλλοντος θέση τους.

χημειοθεραπευτικές στρατηγικές που στοχεύουν ταχέως διαιρούμενα κύτταρα έχουν κυρίως χρησιμοποιηθεί για τη θεραπεία όγκων επιθηλιακής προέλευσης. Ενώ συχνά είναι αποτελεσματικά σε debulking μάζας του όγκου, οι παράγοντες αυτοί έχουν αποτύχει σε μεγάλο βαθμό για την εξάλειψη της νόσου [10]. Ένας λόγος που συχνά αποδίδεται σε αυτήν την αποτυχία είναι ότι τα υποσύνολα των κυττάρων αποκτήσουν αντίσταση στη θεραπεία μέσω της γενετικής μετάλλαξης και της φυσικής επιλογής. Ενώ αυτό εικασία θα ισχύει, ιδίως σε ένα περιβάλλον παρατεταμένης θεραπείας, το ένα δόγμα της «καρκινικά βλαστικά υπόθεση κύτταρο» προϋποθέτει ότι τα κύτταρα που είναι υπεύθυνα για επανεμφάνιση του όγκου μπορεί εγγενώς να είναι περισσότερο ανθεκτικά σε παράγοντες debulking όγκου μέσω οποιασδήποτε από έναν αριθμό μηχανισμών ? εξηγώντας έτσι πυρίμαχα ανάπτυξη του όγκου μετά από αυτές τις θεραπείες [11]. Σε υποστήριξη αυτής της υπόθεσης, η αντίσταση στην ακτινοβολία μπορεί να προκύψει από αυξημένη έκφραση των γονιδίων απόκρισης βλάβης του DNA, όπως είναι η περίπτωση για CD133

+ γλοιοβλαστώματος βλαστικών κυττάρων [12]. Σε αναλογία με αιμοποιητικά βλαστικά κύτταρα, συμπαγούς όγκου CSC έχουν προταθεί να εμφανίζουν υψηλό επίπεδο έκφρασης της οικογένειας γονιδίων μεταφορέα πολλαπλών φαρμάκων, όπως ABCG2 και ABCB5, πιθανότατα με αποτέλεσμα την πιο αποτελεσματική εκροή των χημειοθεραπευτικών φαρμάκων [13] – [15]. CSC μπορεί επίσης να εισέρχονται στον κυτταρικό κύκλο λιγότερο συχνά, επιτρέποντάς τους να αντισταθούν τοξικότητα από φάρμακα που στοχεύουν ιδιαίτερα πολλαπλασιασμού των κυττάρων. Αποδεικτικά στοιχεία για χημειοαντίσταση από βλαστικά κύτταρα που μοιάζουν σε επιθηλιακές κυτταρικές γραμμές και ξενογενή κύτταρα που προέρχονται από όγκους έχει παρουσιαστεί [16] – [19]? Ωστόσο, αυτές οι μελέτες έχουν είτε χρησιμοποιήθηκαν κυτταρικές γραμμές προσαρμόζονται σε ιστοκαλλιέργεια και /ή δεν αξιολογούν αλλαγμένη ογκογενή συχνότητα κυττάρων

in vivo

μετά από χημειοθεραπεία. Εξ ορισμού, τα καρκινικά κύτταρα-κίνηση που απαριθμούνται αναδρομικά, ως εκ τούτου μεταβληθεί CSC συχνότητες μετά τη θεραπεία είναι καλύτερα αποδεικνύεται από σειριακή μεταμόσχευση.

Η κυκλοφωσφαμίδη (CPA) και ιρινοτεκάνη είναι παράγοντες που στοχεύουν πολλαπλασιαζόμενα κύτταρα και χρησιμοποιούνται συνήθως για χημειοθεραπευτικούς παράγοντες σε η θεραπεία των συμπαγών όγκων. Μέσω διαφορετικών μηχανισμών, τόσο δρουν για να αναστέλλουν την αντιγραφή του DNA με αποτέλεσμα την επιβράδυνση ή την αναστολή της κυτταρικής διαίρεσης και καταλήγοντας σε απόπτωση. Αντοχή σε CPA έχει προταθεί να προκύπτουν από υψηλά κυτταροπλασματικά αφυδρογονάση αλδεΰδης (ΑΙ_ϋΗ) ενζυμική δραστηριότητα: ιδίως των ΑΙ_ϋΗ1 και ALDH3 [20], [21], η οποία οξειδώνουν και απενεργοποιούν το βιοδραστικό μεταβολικό παραπροϊόν του CPA, aldophosphamide /4-υδροξυκυκλοφωσφαμίδιο ( 4-HC) [22], [23]. ΑΙ_ϋΗ1, ειδικότερα, μπορεί να διαδραματίσει σημαντικό ρόλο στην αντίσταση CPA, καθώς είναι

K

m

για CPA είναι ~52 μΜ, ενώ εκείνη των άλλων μελών της οικογένειας ΑΙ_ϋΗ με καταβολική δραστηριότητα CPA, ALDH3 (

ALDH3A1

) και SSDH (

ALDH5A1

), είναι 10 φορές μικρότερη (

K

m

& gt? 520 μΜ) [24]. Αν και πολλοί ιστοί είναι σχετικά ανθεκτική ως επακόλουθο της θεραπείας CPA [25], μόνο αιμοποιητικών και νευρικών βλαστικών κυττάρων έχει αποδειχθεί ότι περιέχουν υψηλή δραστικότητα ALDH σε ανασύσταση μελέτες μεταμόσχευσης ακόλουθη απομόνωση αυτών των κυτταρικών πληθυσμών [26] – [28]. Επειδή ο καρκίνος του παχέος πιθανόν προκύπτει από στέλεχος του παχέος εντέρου ή προγονικά κύτταρα, είναι δελεαστικό να υποθέσουμε ότι παρόμοιοι μηχανισμοί μπορεί να καταστήσουν ανθεκτικά σε CPA CoCSC.

καρκινικά βλαστικά κυτταρικών πληθυσμών έχουν τώρα προοπτικά ταυτοποιήθηκε από διάφορους όγκους επιθηλιακής προέλευσης, συμπεριλαμβανομένων το στήθος, του παχέος εντέρου και του προστάτη [19], [29] – [33]. Σε όλους τους όγκους παχέος εντέρου ερευνήσαμε μέχρι σήμερα, οι όγκοι μπορούν να μεταμοσχεύονται με επιτυχία χρησιμοποιώντας μικρούς αριθμούς (

π.χ.

& lt? 1.000) των κυττάρων φαινοτυπικά θετικά τόσο για τα επιθηλιακά-ειδικό αντιγόνο (

δηλαδή

ESA ή EpCAM) και CD44 [30]. Σε ορισμένους όγκους, την απομόνωση των κυττάρων θετικά για CD166, εκτός από την ESA και CD44, εμπλουτίζει περαιτέρω για καρκίνο του παχέος εντέρου βλαστικά κύτταρα (CoCSC), επιτρέποντας την αποτελεσματική ογκογένεση με τόσο λίγα όσο 200 ESA

+ CD44

+ CD166

+ κύτταρα [30]. Όχι μόνο αυτό το φαινότυπο εντοπισμό CoCSC σε όγκους ξενομοσχεύματος, αλλά ογκογένεση μπορεί να ξεκινήσει από δείγματα πρωτογενούς όγκου με ένα μικρό αριθμό ESA

+ CD44

+ CD166

+ κύτταρα. Η επαναλήψιμη ταυτοποίηση των CoCSC χρησιμοποιώντας ESA και CD44 διευκολύνει όχι μόνο θεραπευτικές μελέτες αποτελεσματικότητας σε όλα τα ξενομοσχεύματα ασθενή που προέρχεται μελετηθεί μέχρι σήμερα, αλλά επίσης διευκολύνει την ανατομή των μοριακών οδών που εμπλέκονται στην καρκινογένεση και την αντίσταση στη θεραπεία.

Εδώ έχουμε αποδείξει ότι η ανθρώπινη ESA

+ CD44

+ CoCSC παράγουν αδενοκαρκινώματα που μοιάζουν με τη γονική τους όγκους και στις δύο φαινότυπο και ιστολογία τους κατά αύξοντα μεταμόσχευση σε μια ρύθμιση ξενομόσχευμα και είναι εμπλουτισμένα σε όγκους μετά από κλασική χημειοθεραπευτικών σχημάτων που προορίζονται να συρρικνωθεί όγκους. Έχουμε περαιτέρω επιδεικνύουν τόσο

in vitro

και

in vivo

ότι η αντίσταση στην CPA προκαλείται, τουλάχιστον εν μέρει, από δραστικότητα του ενζύμου ΑΙ_ϋΗ1 και ότι η αντίσταση στην άλλους χημειοθεραπευτικούς παράγοντες (

π.χ.

ιρινοτεκάνη) δεν είναι πιθανό αποδίδεται σε αυτόν τον μηχανισμό. Στο καλύτερο της γνώσης μας, αυτή είναι η πρώτη λειτουργική απόδειξη ότι ένα ανθρώπινα επιθηλιακά πληθυσμός CSC, όπως ορίζεται από σειριακή μεταμόσχευση, είναι εμπλουτισμένο σε υπολειμματικό συμπαγείς όγκους μετά από χημειοθεραπεία. Εμείς δεικνύουν περαιτέρω ότι η ετερογένεια του όγκου με τη μορφή ενός συμπλόκου που αποτελείται από αδενοκαρκίνωμα TG και NTG πληθυσμοί μπορούν να δημιουργούνται από ένα μόνο κύτταρο. Τέλος, οι πειραματικές μέθοδοι που χρησιμοποιούνται εδώ παρέχει μια πλατφόρμα για την αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας των νέων μέσων που στοχεύουν στερεά βλαστικά κύτταρα του όγκου.

Αποτελέσματα

CoCSC είναι εμπλουτισμένα σε υπολειμματική όγκους μετά από τη χορήγηση CPA

Πρόωρη πέρασμα όγκων ξενομοσχεύματος ανθρώπινου παράγονται από κύτταρα ουδέποτε επεκτάθηκε

in vitro

φαίνεται να μοιάζουν πολύ με εκείνα σε ασθενείς και έτσι μπορεί να χρησιμεύσει ως ένα εξαιρετικό μοντέλο με το οποίο να μελετήσει τον καρκίνο. Πρόσφατα έδειξαν ότι ο υποπληθυσμός των ανθρώπινων κύτταρα όγκου του ορθού με ένα ESA

+ CD44

+ φαινότυπος είναι μοναδικά υπεύθυνος για τη δημιουργία ετερογενών αδενοκαρκινώματα σε μια ρύθμιση ξενομοσχεύματος (Σχήμα 1Α & amp? Β) [30]. Ανθρώπινα ESA

+ CD44

+ κύτταρα από ξενογονιδιακά όγκους παχέος εντέρου μπορεί να υποδιαιρεθεί περαιτέρω με βάση την έκφραση CD166, με αποτέλεσμα τον εμπλουτισμό των ογκογόνων κυττάρων (TG) μεταξύ της CD166

+ πληθυσμού. Αντίθετα, όλοι οι υπόλοιποι καρκινικά κύτταρα ανθρώπινης προέλευσης φαίνεται σε θέση να κινήσει την ανάπτυξη του όγκου και αναφέρονται ως μη ογκογόνα (NTG). Έχοντας εντοπίσει καρκίνο του παχέος εντέρου βλαστικά κύτταρα (CoCSC) ικανό να τροφοδοτεί ξενογενών ανάπτυξης του όγκου, επιδιώξαμε να αντιμετωπίσει μια παρατεταμένη ερώτηση στον τομέα σχετικά με το αν η CSC είναι κατά προτίμηση ανθεκτικά σε χημειοθεραπευτικά φάρμακα.

A

) φαινοτυπική προφίλ του UM-C4 παχέος όγκους για την ESA, CD44 και CD166, μετά τον αποκλεισμό της Mlin

– κύτταρα.

B

) σταθερού φορμαλίνη, ενσωματωμένα σε παραφίνη τομές όγκου από ποντικούς ελέγχου υπό αγωγή με όχημα χρωματίστηκαν με αιματοξυλίνη & amp CPA- ή? Ηωσίνη (Η & amp? Ε), για πολλαπλασιασμό Ki-67

+, ή για ΤΟΥΝΕΛ

+ νεκρά κύτταρα. Μαύρη γραμμή = 100 μm.

C

) Μετά την τυχαιοποίηση για την εξομάλυνση των ομάδων θεραπείας στα 400 mm

3 την ημέρα 0, εβδομαδιαία χορήγηση δύο φορές οχήματος (πράσινα κουτιά) ή 38 mg /kg CPA (κόκκινοι κύκλοι) άρχισαν και οι όγκοι μετρήθηκαν περιοδικά .

D

) φαινοτυπική ανάλυση των μεμονωμένων όγκων, εμφανίζοντας το ποσοστό των ανθρώπινων καρκινικών κυττάρων με την ESA

+ CD44

+ φαινοτύπου ως συνάρτηση του μεγέθους του όγκου.

E

) Εκπρόσωπος επικάλυψη ιστόγραμμα εμφανίζει επιφανειακή έκφραση CD166 στην ανθρώπινη ESA

+ CD44

+ καρκινικά κύτταρα από με φορέα ή CPA-μεταχείρισης των ζώων. Η μαύρη γραμμή αντιπροσωπεύει χρώση έλεγχο ισοτόπου του ΕΟΔ

+ CD44

+ καρκινικά κύτταρα.

Η

Η κυκλοφωσφαμίδη (CPA) είναι ένας αλκυλιωτικός παράγοντας του οποίου το μεταβολικό παραπροϊόν, φωσφοραμίδιο μουστάρδα, διασυνδέει το DNA και επάγει την απόπτωση σε ταχέως διαιρούμενα κύτταρα [22]. CPA είναι ένα συνήθως χρησιμοποιούμενο χημειοθεραπευτικό φάρμακο στη θεραπεία διαφόρων τύπων καρκίνου, όπως σαρκώματα μαλακών ιστών, καρκίνο του μαστού και μη-Hodgkins λέμφωμα, αλλά γενικά δεν χρησιμοποιείται για τη θεραπεία καρκίνου του παχέος εντέρου, λόγω της επικρατούν αντίσταση εκ μέρους αυτών των όγκων . Για να διερευνήσουν αυτή την αντίσταση στη θεραπεία, διερευνήσαμε αν CoCSC είναι εμπλουτισμένα σε υπολειμματική όγκους μετά από τη χορήγηση CPA

in vivo

. Για να αντιμετωπιστεί αυτό το θέμα ενδιαφέροντος, οι όγκοι άρχισαν με υψηλής καθαρότητας CoCSC από πολλαπλές ξενογονιδιακά γραμμές όγκου (UM-C4 & amp? UM-C6) και φτάνοντας ~ 400 mm

3, τα ποντίκια τυχαιοποιήθηκαν να λάβουν είτε οχήματος ή 38 mg /kg CPA, δύο φορές την εβδομάδα. Εντός 15 ημερών από την τυχαιοποίηση και της διοίκησης, η ανάπτυξη του όγκου ήταν αισθητά καθυστερημένος στα ζώα CPA-αγωγή (Σχήματα 1C και Εικόνα S1 Α). Μετά ευθανασία, οι όγκοι αφαιρέθηκαν για ιστολογική και φαινοτυπική ανάλυση. Παρά το γεγονός ότι το ποσοστό των πολλαπλασιαζόμενων κυττάρων του όγκου (

δηλαδή

Ki-67

+) δεν φάνηκε να τροποποιηθούν, υπήρξε αισθητά πιο κυτταρικό θάνατο (δηλαδή ΤΟΥΝΕΛ

+ κύτταρα? Εικόνα 1Β) και του ΕΟΔ

+ CD44 sup> + κυττάρων

+ CD44

+ κυττάρων σε CPA-θεραπεία όγκων που πραγματοποιήθηκε γενικά αλήθεια ανεξάρτητα του μεγέθους του όγκου και ήταν πιο έντονη σε υψηλότερες δόσεις CPA (

π.χ.

38 mg /kg έναντι 25 mg /kg? δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Εμπλουτισμός της ESA

+ CD44

+ CD166

+ κυττάρων ήταν ακόμα πιο εντυπωσιακή και ιδιαίτερα εμφανές όταν η έκφραση CD166 αναλύθηκε για υπολειμματική ανθρώπινη ESA

+ CD44

+ κύτταρα (Σχήματα 1Ε, S1B & amp ? C). Παρόμοια αποτελέσματα παρατηρήθηκαν τόσο με ξενογενή γραμμές όγκου διερευνάται.

Για να καθοριστεί αν η αύξηση φαινοτυπική στο CoCSC μετά τη χορήγηση CPA συσχετίζεται με ένα αυθεντικό αύξηση στη συχνότητα των κυττάρων TG, εμείς σειριακά μεταμοσχεύθηκαν 4 σετ των ποντικών με όγκο UM-C4 καρκινικά κύτταρα χρησιμοποιώντας μια προσέγγιση περιοριστική αραίωση και βαθμολογήθηκαν τους ως θετικό ή αρνητικό για την ανάπτυξη του όγκου μετά από τρεις μήνες. Ποντίκια με ψηλαφητών όγκων στις 90 ημέρες κρατήθηκαν ζωντανοί για να προσδιοριστεί κατά πόσον η αύξηση του όγκου θα συνεχιστεί πέραν των 200 mm

3, μπορεί να εμφανιστεί ως σπάνια ψηλαφητή μάζα, αλλά οι οποίες περιέχουν στοιχεία ποντικού στρωματικά και κανένα ανιχνεύσιμο ανθρώπινα κύτταρα κατά την ανάλυση κατά τη λήξη της μελέτη (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Βασισμένο σε

Poisson & στατιστικές διανομής, τα κύτταρα TG ήταν & gt? 2,2 φορές πιο συχνή σε CPA αγωγή όγκων σε σχέση με ποντικούς στους οποίους χορηγήθηκε έκδοχο (

P

= 0,0016? Πίνακας 1 & amp? Σχήμα 2Α) . Είναι σημαντικό ότι, η κυτταρική φαινότυπος αυτών των σειριακά μεταμοσχευμένων δευτερογενείς όγκους ήταν ταυτόσημα με τα γονικά καρκινικά κύτταρα που χρησιμοποιούνται για την κίνηση της μελέτης (Σχήμα 2Β), αποδεικνύοντας ότι παρεμβαίνουν θεραπεία και σειριακή μεταμόσχευση κυττάρων σε περιοριστική αραίωση δεν μεταβάλλει είτε το ογκογόνο δυναμικό του CoCSC ούτε την ικανότητά τους να παράγουν ετερογενή όγκων που περιέχουν κατά κύριο λόγο μη ογκογόνα (

δηλαδή

CD44

-). κύτταρα

Α) ανάλυση περιοριστικής αραίωσης των μη κλασματοποιημένων κυττάρων όγκου UM-C4 χρησιμοποιήθηκε για να υπολογιστεί TG συχνότητα των κυττάρων χρησιμοποιώντας το

Poisson & στατιστικές διανομής (± 95% επίπεδο εμπιστοσύνης? *

P

= 0,0016).

Β

) Ποσοστό των ανθρωπίνων ESA

+ CD44

+ και του ΕΟΔ

+ CD44

+ CD166

+ κυττάρων σε δευτερογενείς όγκους που προκύπτουν από υπολειπόμενες ογκογόνο κύτταρα μεταμοσχεύονται σειριακά σε περιορισμό αραίωση εξής οχήματος ή θεραπεία CPA σχήματα.

Η

Επειδή τα κύτταρα TG ήταν πιο συχνές και καρκινικών κυττάρων πληθυσμών από ζώα CPA-αγωγή εμπλουτίστηκαν για φαινοτύπους που σχετίζονται με CoCSC, είμαστε δίπλα απομονωμένα κύτταρα φαινότυπο CoCSC από UM-C4 όγκους με φορέα έναντι ποντικών CPA επεξεργασμένο και το ερώτημα αν τα κύτταρα αυτά εγγενώς διέφεραν ως προς την ικανότητά τους να παράγουν δευτερογενείς όγκους. Serial μεταμόσχευση 50 ESA

+ CD44

+ ή ESA

+ CD44

+ CD166

+ κύτταρα από όγκους σε CPA- έναντι ποντικών ελέγχου υπό αγωγή με όχημα κατέληξε σε δευτερογενείς όγκους με περίπου την ίδια συχνότητα (Πίνακας 1), η οποία όταν εξετάζονται σε συνδυασμό με προηγούμενες παρατηρήσεις υποδεικνύουν ότι CoCSC είναι πιο συχνές στους όγκους που εκτίθενται σε CPA χημειοθεραπευτικές αγωγές και δεν επηρεάζονται στην ικανότητά τους να τροφοδοτήσουν την ανάπτυξη του όγκου.

CoCSC έχουν υψηλή έκφραση του

ALDH1A1

Η

Στην αναζήτηση για επιπρόσθετους δείκτες CoCSC, χρησιμοποιήσαμε προηγουμένως ένα εργαλείο που μπορεί να προσδιορίσει αιμοποιητικών και των πληθυσμών νευρικών βλαστικών κυττάρων: ΑΙ_ϋΗ ενζυμική δραστηριότητα [30]. Χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο Aldefluor ™, το οποίο υφίσταται μια αλλαγή στον φθορισμό ακόλουθη ενζυματική διάσπαση από ένζυμα ALDH, και το ΑΙ_ϋΗ1-ειδική diethylaminobenzaldehyde αναστολέα (ϋΕΑΒ) [34], ένα μεγάλο υποπληθυσμό ESA

+ CD44

+ κύτταρα και από τα δύο γραμμές όγκου UM-C4 και UM-C6 προσδιορίστηκε να έχει υψηλή δραστικότητα ALDH (Σχήμα 3Α) [30]. Παρόμοιες παρατηρήσεις έγιναν και σε άλλες ξενομόσχευμα παχέος γραμμές όγκου των ασθενών που προέρχονται από (Εικόνα S2). Επιπλέον, όταν ESA

+ CD44

+ κύτταρα υποδιαιρούνται με βάση τη δραστηριότητα ALDH και απομονώνονται με FACS, ΑΙ_ϋΗ

+ κύτταρα ήταν ογκογόνα σε όλες τις περιπτώσεις διερευνώνται [30]. Αξίζει να σημειωθεί ότι, ογκογενετικότητας αυστηρά ανατεθεί από την ESA

+ CD44

+ ΑΙ_ϋΗ

+ κύτταρα στο UM-C4 παχέος γραμμή του όγκου (Σχήμα 3Β). Αν και οι όγκοι μπορούν να προκύψουν από την ESA

+ CD44

+ ΑΙ_ϋΗ

– κύτταρα που λαμβάνονται από το UM-C6, OMP-C5 και γραμμές όγκου OMP-C8 [30], μια ΑΙ_ϋΗ

+ υποσύνολο των TG ESA

+ CD44

+ κυττάρων δεν υφίσταται σε όλες τις ξενογονιδιακό παχέος γραμμές όγκου ερευνηθεί μέχρι σήμερα (n = 6). Σε αντίθεση, ένας υποπληθυσμός CD44

-. Κύτταρα με υψηλή δραστηριότητα ALDH υπάρχει και σε όλες τις γραμμές όγκου, αλλά αυτά τα κύτταρα αποτυγχάνουν να παράγουν όγκους μετά την μεταμόσχευση

A

) το προφίλ φαινοτυπική ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα ESA

+ UM-C4 για την ενζυματική δραστηριότητα ΑΙ_ϋΗ1. Γκέιτς οριοθετούν υποπληθυσμών όγκου απομονώνονται με FACS για μελέτες ογκογένεσης, όπου

Β

) κινητική ανάπτυξη των CD44

+ ΑΙ_ϋΗ

+ (κόκκινοι κύκλοι), CD44

+ ΑΙ_ϋΗ

– (πορτοκαλί κουτιά) και CD44

-ALDH

+ (τα πράσινα τρίγωνα) πληθυσμούς απεικονίζονται. Μετρήσεις αντικατοπτρίζει μόνο τα ποντίκια με ψηλαφητών όγκων. Αντιπροσωπευτικά δεδομένα από n = 3 ανεξάρτητα πειράματα.

C

) δεδομένα Taqman qRT-PCR εμφανίζοντας σχετική έκφραση του

ALDH1A1

(

1A1

),

ALDH3A1

(

3A1

)

και ALDH5A1

(

5A1

) σε ογκογόνο (TG? μαύρο) έναντι μη ογκογόνων (NTG? λευκά) κύτταρα (n≥2) από 2 ξενογονιδιακών παχέος γραμμές όγκων προερχόμενων από ασθενή (UM C4-& amp? UM-C6). Δεδομένα αντικατοπτρίζει μέση ± SEM, κανονικοποιείται έναντι

GUSB

και εμφανίζονται σε σχέση με την έκφραση UM-C4 NTG για κάθε γονίδιο.

Η

Ένα υποσύνολο των ενζύμων ΑΙ_ϋΗ μπορεί να οξειδώνονται, και έτσι απενεργοποιούν, η κυτταροτοξική CPA μεταβολίτη 4-HC /aldophosphamide [23], [35]. Η παρουσία των κυτταροπλασματικών ΑΙ_ϋΗ1 και ALDH3, ειδικότερα, έχουν συσχετιστεί με αντίσταση CPA στην κυτταρική σειρά καρκίνου του πνεύμονα Α549 [20], [21]. ΑΙ_ϋΗ1 (που κωδικοποιείται από

ALDH1A1

) είναι μεγαλύτερη από 10 φορές πιο αποτελεσματική σε καταβολισμού 4-HC /aldophosphamide από σχετικές μέλη της οικογένειας του ALDH3 και SSDH: κωδικοποιείται από το

ALDH3A1

και

ALDH5A1

γονίδια, αντίστοιχα [24]. Στην ανάλυση Taqman ™ qRT-PCR του UM-C4 και UM-C6 όγκους,

ALDH1A1

εκφράζεται γενικά σε υψηλότερα επίπεδα από ό, τι

ALDH3A1

και

ALDH5A1

.

ALDH1A1

έκφραση γονιδίου είναι 2,8 φορές υψηλότερη σε CoCSC παρά σε κύτταρα NTG, και παρά ελαφρά αύξηση του

ALDH3A1

έκφραση σε CoCSC έναντι πληθυσμούς NTG (Σχήμα 3C), το μήνυμά του είναι μόλις ανιχνεύσιμα σε είτε γραμμή όγκου. Επιπλέον, λαμβάνοντας υπόψη ότι η

ALDH5A1

είναι ελαφρώς αυξημένα σε TG έναντι κύτταρα NTG από UM-C4 όγκους (-1.5 φορές), η έκφραση του είναι παρόμοια μεταξύ αυτών των πληθυσμών από το UM-C6 όγκους (Σχήμα 3C). Η προνομιακή έκφραση του

ALDH1A1

στα κύτταρα TG υποστηρίζει παρατηρείται ενζυματική μετρήσεις δραστηριότητα μεταξύ του ανθρώπινου ESA

+ CD44

+ υποπληθυσμό, όπου η πλειοψηφία αυτών των κυττάρων έχουν υψηλή ϋΕΑΒ ευαίσθητο, δραστηριότητα ΑΙ_ϋΗ1. Όταν εξετάζονται σε συνδυασμό με την 10-φορές υψηλότερη επάρκεια των ΑΙ_ϋΗ1 έναντι ALDH3 και SSDH στην αδρανοποίηση ενδιάμεσα CPA [24], θα μπορούσε κανείς να ερμηνεύσει αυτά τα αποτελέσματα να δείχνουν ότι CoCSC αντίσταση στην CPA θα μπορούσε να διαμεσολαβείται κυρίως με ενζυματική δραστηριότητα ΑΙ_ϋΗ1.

ALDH1A1

,

MYC

, και

ΜΥΒ

είναι εμπλουτισμένα σε υπολειμματικά κύτταρα TG μετά την θεραπεία CPA

Από

ALDH1A1

γονίδιο έκφραση είναι αυξημένη σε TG έναντι κύτταρα NTG, ΑΙ_ϋΗ1 ενζυματική δραστηριότητα είναι δυσανάλογα υψηλό σε κύτταρα με φαινότυπο CoCSC, και αυτή η δραστηριότητα μπορεί να μεσολαβήσει αντίσταση στην CPA, είμαστε δίπλα ρώτησε αν η συχνότητα της ESA

+ CD44

+ ΑίϋΗ

+ κυττάρων ήταν αυξημένα σε UM-C4, UM-C6 και όγκους OMP-C8 από ποντίκια που έλαβαν CPA έναντι εκείνων που χορηγούνται όχημα. Όπως και η παρατηρούμενη αύξηση φαινοτυπική στο CD166

+ κύτταρα (Σχήματα 1Ε, S1B & amp? S1c), η ΑΙ_ϋΗ

+ υποπληθυσμό ΕΟΔ

+ CD44

+ κυττάρων ήταν σταθερά υψηλότερη σε CPA- έναντι με φορέα αγωγή ποντίκια μάρτυρες (67,6 ± 6,3% έναντι 56,8 ± 6,8%, αντίστοιχα? n = 5,

P

& lt? 0.012 σε ζεύγη

t

-τεστ). (Εικόνα 4Α)

Α

) Αναλογία ΑΙ_ϋΗ

+ καρκινικών κυττάρων στον ανθρώπινο ESA

+ CD44

+ πληθυσμού σε όγκους από τον έλεγχο του οχήματος επεξεργασία ή CPA-ποντίκια με αγωγή. Δεδομένα αντικατοπτρίζει την αντιστοίχιση Μέση 5 ανεξάρτητα πειράματα χρησιμοποιώντας 3 διαφορετικά ξενογονιδιακά παχέος γραμμές όγκου (UM-C4, UM-C6 & amp? OMP-C8) και n≥5 ποντίκια ανά πείραμα.

Β

) δεδομένα Taqman qRT-PCR για τα συμβολίζεται γονιδίων χρησιμοποιώντας TG και NTG πληθυσμούς που απομονώθηκαν από (V) με φορέα ή CPA-θεραπεία όγκων UM-C4. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέσες ± SEM (n≥2).

C

) ανοσοφθορισμού ή χρώση ανοσοϋπεροξειδάσης των κατεψυγμένων ή σταθεροποιημένο με φορμαλίνη, ενσωματωμένα σε παραφίνη όγκους για ΑΙ_ϋΗ1 ή c-myc, αντίστοιχα, από φορέα και CPA-αγωγή ποντικούς. Μαύρη γραμμή = 100 μm

Η

Ο αριθμός των προϊόντων γονιδίου έχουν κριθεί ζωτικής σημασίας για την φυσιολογική ανάπτυξη του παχέος εντέρου και εκφράζονται ευρέως σε όγκους παχέος εντέρου [36] – [39].. Μετά την απομόνωση του TG έναντι NTG πληθυσμών από τόσο με φορέα και CPA επεξεργασμένο όγκους UM-C4 με & gt? Καθαρότητα 99%, η έκφραση πολλών γονιδίων με προτεινόμενες δεσμούς με καρκίνο του παχέος εντέρου προσδιορίσθηκε με Taqman ™ qRT-PCR. Εκείνοι εκφράζονται διαφορικά σε TG έναντι κυττάρων NTG περιλαμβάνονται όχι μόνο

ALDH1A1

, όπως περιγράφεται ανωτέρω (Σχήμα 3C), αλλά και c-Myb (

ΜΥΒ

) και c-Myc (

MYC

? Σχήμα 4Β). Σε αντίθεση, τα γονίδια που σχετίζονται με τη διαφοροποίηση και ενός φαινοτύπου μεσεγχυματικών [40], [41], όπως βιμεντίνης (

VIM

), ήταν περισσότερο εντόνως εκφρασμένο σε κύτταρα NTG.

Σύμφωνα με την αυξημένη συχνότητα των υπολειμματικών κυττάρων όγκου που εκφράζουν υψηλά επίπεδα γένεσιν όγκων που σχετίζονται δείκτες, όπως CD166, σχετική έκφραση CoCSC σχετιζόμενη έναντι NTG-σχετίζονται μεταγραφές, όπως

ALDH1A1

και

VIM

, αντίστοιχα, ήταν περαιτέρω ανόμοιες σε CPA- έναντι αγωγή με όχημα ελέγχου UM-C4 όγκους (Σχήμα 4Β). Σε συμφωνία με την υπόθεση ότι ΑΙ_ϋΗ1 μπορεί να έχει ένα ρόλο στη μεσολάβηση αντίσταση στην CPA,

ALDH1A1

γονιδιακής έκφρασης ήταν περαιτέρω αυξημένα σε υπολειμματικά κύτταρα με φαινότυπο CoCSC, αλλά

ALDH3A1

και

ALDH5A1

δεν ήταν (Εικόνες 4Β & amp? S3). Επιπλέον, γονίδια που ταυτοποιούνται προηγουμένως ως ιδιαίτερα εκφράζεται στο διαμέρισμα κυψελίδας στελέχους /προγονικών επιθηλιακών στη βάση του κρυπτών του παχέος εντέρου και σε νεοπλασματικό ιστό (

π.χ. ΜΥΒ

& amp?

MYC

) ήταν περισσότερο εντόνως εκφρασμένο σε μια υπολειπόμενη CoCSC όγκου από τον πληθυσμό NTG κυττάρων που αντιπροσωπεύουν το μεγαλύτερο μέρος του όγκου, αλλά τα οποία δημιουργούνται από CoCSC και εμφανίζονται πιο επιρρεπή σε CPA-επαγόμενη κυτταροτοξικότητα. Παρόμοια πρότυπα έκφρασης παρατηρήθηκαν επίσης σε άλλους ξενογενή γραμμές όγκου μετά CPA-θεραπεία, συμπεριλαμβανομένης UM-C6 (Εικόνα S3).

Τέλος, οι διαφορές της γονιδιακής έκφρασης σε CPA- έναντι όγκων ελέγχου υπό αγωγή με όχημα περαιτέρω σχετίζεται με πρωτεΐνη έκφραση με ανοσοφθορισμό και IHC. Τα ενδοκυτταρικά επίπεδα του ΑΙ_ϋΗ1 και πυρηνικών c-myc, για παράδειγμα, ήταν πιο διαδεδομένη σε όγκους CPA-αγωγή (Σχήμα 4C). Είναι ενδιαφέρον, ΑΙ_ϋΗ1 χρώση σε όγκους CPA-θεραπεία φάνηκε να εντοπίζεται στην κορυφαία επιφάνεια, όπου μπορεί να υποτεθεί να υποκλέψει CPA μεταβολίτες καθώς εισέρχονται στο κύτταρο. Σε αντίθεση, τα επίπεδα της πρωτεΐνης ΑΙ_ϋΗ1 ήταν χαμηλότερα και πιο διάχυτη σε όγκους ελέγχου. Παρομοίως, ο-Μγο ήταν αισθητά πιο συγκεντρωμένη στον πυρήνα του ορθοκολικού καρκινικών κυττάρων ποντικών CPA-θεραπεία, σύμφωνα με την αυξημένη συχνότητα των κυττάρων TG και αυξημένα

MYC

έκφραση μέσα σε αυτό το ελαστικό πληθυσμό.

αντίσταση CoCSC στη χημειοθεραπεία δεν είναι ειδικά για CPA

για να προσδιορίσετε αν CoCSC παρουσιάζουν επίσης αντίσταση σε άλλες σημαντικές χημειοθεραπευτικούς παράγοντες, εξετάσαμε την επίδραση της ιρινοτεκάνη (

aka

SN-38) σε συχνότητα CoCSC . Τα πειράματα ξεκίνησαν ποντίκια που φέρουν όγκο οπότε ελήφθη εβδομαδιαίες ενέσεις των 15 mg /kg ιρινοτεκάνη. Μετά από μια μικρή καθυστέρηση περίπου 1 εβδομάδα, η ανάπτυξη του όγκου σταμάτησε από το irinotecan (Σχήμα 5Α). Μετά την συγκομιδή του όγκου δύο εβδομάδες μετά την έναρξη της χημειοθεραπείας, το ποσοστό των υπόλοιπων CoCSC εκτιμήθηκε με κυτταρομετρία ροής. Σε ιρινοτεκάνη αγωγή όγκων, το ποσοστό των χύδην καρκινικών κυττάρων με τον φαινότυπο CoCSC αυξήθηκε 61% σε σχέση με τα ποντίκια ελέγχου χορηγήθηκε όχημα (Σχήμα 5Β). Στη συνέχεια, η εγγενής ογκογενετικότητας της ESA

+ CD44

+ CD166

+ κυττάρων από με φορέα ή ιρινοτεκάνη αγωγή ποντίκια δοκιμάστηκε σε ένα σειριακό μεταμόσχευση ρύθμιση σε σχέση με αυτά τα κύτταρα που δεν φαινοτυπικά χαρακτηρίσει ως CoCSC. Παρόμοια ποσοστά απορρόφησης παρατηρήθηκαν με CoCSC από ελέγχου-ή ιρινοτεκάνη αγωγή όγκων σε αυτές τις μεταμοσχεύσεις, και τα κύτταρα φαινοτυπικά ταξινομούνται ως «Άλλη» δεν κίνησε όγκων (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα). Η αυξημένη συχνότητα των κυττάρων φαινότυπο CoCSC στην υπολειμματική όγκους από τα ποντίκια χορηγήθηκε ιρινοτεκάνη και η ανικανότητα των κυττάρων με άλλους φαινοτύπους με μεταμόσχευση νόσο, καθώς δείχνουν ότι CoCSC είναι επίσης κατά προτίμηση ανθεκτικά στην ιρινοτεκάνη.

Μια

) κατά την τυχαιοποίηση να ομαλοποιήσει τις ομάδες θεραπείας σε 400 mm

3 κατά την ημέρα 43, μία φορά την εβδομαδιαία χορήγηση του οχήματος (πράσινα κουτιά) ή 15 mg /kg ιρινοτεκάνη (κόκκινα τρίγωνα) άρχισε και όγκοι μετρήθηκαν δύο φορές την εβδομάδα. Οι καμπύλες ανάπτυξης που αντιπροσωπεύει τη Μέση ± SEM απεικονίζεται. Β) Ποσοστό του ανθρώπινου ESA

+ CD44

+ CD166

+ κύτταρα φαινότυπο CoCSC στην υπολειπόμενη όγκων εμφανίζεται. Δεδομένα αντικατοπτρίζει n≥4 ποντίκια ανά ομάδα θεραπείας.

Η

αντίσταση CPA είναι ειδικά κύτταρα με υψηλή δραστηριότητα ΑΙ_ϋΗ1

Βλέποντας ότι τα κύτταρα ESA

+ CD44

+ όγκου έχουν υψηλή δραστηριότητα ΑΙ_ϋΗ, η συχνότητα της ESA

+ CD44

+ ΑΙ_ϋΗ

+ κυττάρων αυξάνεται σε όγκους από τα ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με CPA, και

ALDH1A1

γονιδιακή έκφραση είναι αυξημένη σε CPA-ανθεκτικά CoCSC , μπορούμε, συνεπώς, φρόντισε να διαπιστώσει αν η αντίσταση στην CPA επιτεύχθηκε με τη μεσολάβηση ενζυμικής δραστηριότητας ΑΙ_ϋΗ1. Επειδή η ΑΙ_ϋΗ1 ειδικός αναστολέας ϋΕΑΒ είναι εξαιρετικά ασταθής

in vivo

[42],

in vitro

ιδρύθηκαν συνθήκες καλλιέργειας που υποστηρίζουν TG ορθοκολικού όγκου επέκταση των κυττάρων. Αξίζει να σημειωθεί ότι, το κυτταρικό φαινότυπο των κυττάρων σε καλύτερη θέση να ιδρύουν αποικίες

in vitro

ήταν ESA

+ CD44

+ CD166

+ (επίσης, ότι από CoCSC), ενώ FACS καθαρίζεται CD44

– τα κύτταρα δεν ήταν σε θέση να το πράξουν (δεδομένα που εμφανίζονται τώρα). Για να επικυρώσετε ότι αυτό το σύστημα καλλιέργειας υποστηρίζει τη συντήρηση των κυττάρων TG, ταξινομήσαμε ESA

+ CD44

+ CD166

+ CoCSC στον περιορισμό της αραίωσης σε πλάκες που περιέχουν Μιτομυκίνη C-θεραπεία 3Τ3 ή ΥΠΟΙΟ τροφοδοτικά κύτταρα ως υποστήριξη, ανάλογα με τις η γραμμή όγκου που χρησιμοποιείται: UM-C4 ή UM-C6, αντίστοιχα. Αποικία συχνότητα σχηματισμό CoCSC υπό αυτές τις συνθήκες ήταν περίπου παρόμοια με τη συχνότητα των κυττάρων TG παρατηρήθηκε κατά την μεταμόσχευση (~1:86 ± 33? Η = 7 για UM-C4 και 1:52 ± 5? Η = 3 για UM-C6). Οι αποικίες καλλιεργήθηκαν για 14 ημέρες χωρίς ανακαλλιέργεια πριν την επανεμφύτευση σε ποντικούς. Όχι μόνο δεν τα κύτταρα διατηρούν ESA, η έκφραση CD44 και CD166 κατά τη διάρκεια του

in vitro

πολιτισμό (σχήματα 6Α & amp? Β), αλλά η ικανότητα να παράγουν ετερογενή όγκους που μοιάζει με τη γονική όγκους διατηρήθηκε, καθώς (Σχήμα 6C). Να επικυρωθεί ότι ογκογενή κύτταρα σε όγκους που προέρχονται από ενιαίο

in vitro

αποικίες τόσο έμοιαζε γονική όγκους και προήλθαν από ένα μόνο κύτταρο, κύτταρα UM-C4 μετήχθησαν με ένα φακοϊό μεταφέρουν GFP-λουσιφεράσης, οι όγκοι παρήχθησαν και μεμονωμένες αποικίες που λαμβάνονται από την ESA

+ CD44

+ CD166

+ κύτταρα μεταμοσχεύθηκαν σε ποντίκια. Μετά τη συγκομιδή αυτών των όγκων που προέρχονται από ένα και μόνο αποικία, είτε κύτταρα με φαινότυπο CoCSC ή όλα τα άλλα κύτταρα όγκου με διαφορετικούς φαινοτύπους απομονώθηκαν με FACS, και μελέτες ογκογένεσης και κλωνικότητα διεξήχθησαν.