Abstract

Μεταμόσχευση ήπατος για ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα (HCC) έχει ως αποτέλεσμα μια ειδική κατάσταση όπου η ανοσοαπόκριση κατευθύνεται έναντι δυνητικά αμφότερα τα αντιγόνα αλλογενή και τον καρκίνο. Ερευνήσαμε το επίπεδο ανοσίας κατά του καρκίνου κατά την διάρκεια αλλογενή ανοσολογική απόκριση. Dark Agouti-to-Lewis και Lewis-to-Lewis μεταμοσχεύσεις ήπατος αρουραίου εκτελέστηκαν και ανοσία οι παραλήπτες αντικαρκινικά αναλύθηκε κατά τον χρόνο της αλλοάνοση ενεργοποίησης. Η εμφάνιση της απόρριψης των αλλογενών αποδέκτες επιβεβαιώθηκε από μια μικρότερη επιβίωση (

σ

& lt? 0.01), αύξησε δοκιμασίες ηπατικής λειτουργίας (

σ

& lt? 0.01), η παρουσία των σημάδια της απόρριψης για ιστολογία και ένα δότη-ειδική

ex vivo

μικτή αντίδραση λεμφοκυττάρων. Κατά τη στιγμή της αλλοάνοση ενεργοποίησης, μονοπύρηνα κύτταρα του αίματος του αλλογενούς ομάδα έδειξε αυξημένη κυτταροτοξικότητα αντικαρκινικών (

ρ

& lt? 0.005), η οποία σχετίζεται με αυξημένο φυσικών φονικών (ΝΚ) κυττάρων συχνότητα (

σ

& lt? 0,05) και ένα υψηλότερο επίπεδο ενεργοποίησης των μονοκυττάρων /μακροφάγων (

σ

& lt? 0,01). Παρομοίως, αντι-καρκίνου του ήπατος κυττάρων ΝΚ κυτταροτοξικότητα (

ρ

& lt? 0.005), και τα επίπεδα ενεργοποίησης ηπατικών μονοκυττάρων /μακροφάγων (

ρ

& lt? 0,01) έχουν επίσης αυξηθεί. Η αλλοάνοση σχετιζόμενη κυτταροτοξικότητα διαμεσολαβείται μέσω του υποδοχέα NKG2D, των οποίων η έκφραση αυξήθηκε στο απορριφθέν μόσχευμα (

ρ

& lt? 0,05) και σε κύτταρα ΝΚ και μονοκύτταρα /μακροφάγα. NKG2D συνδετήρες εκφράστηκαν σε κύτταρα HCC αρουραίου, και η αναστολή της απέτρεψαν την αλλοάνοση σχετίζεται με κυτταροτοξικότητα. Αν και σε αναμονή για

in vivo

επικύρωσης, αλλοάνοση σχετιζόμενη κυτταροτοξικότητα μετά από μεταμόσχευση ήπατος αρουραίου φαίνεται να συνδέεται με αυξημένες συχνότητες και τα επίπεδα της ενεργοποίησης κυττάρων ΝΚ και μονοκύτταρα /μακροφάγα, και είναι τουλάχιστον εν μέρει προκαλείται μέσω της NKG2D υποδοχέα

Παράθεση:. Lacotte S, Oldani G, σχισμές F, Orci LA, Rubbia-Brandt L, Morel Ρ, et al. (2014) αλλοάνοσης Ενεργοποίηση Προωθεί Anti-Cancer κυτταροτοξικότητα μετά Rat μεταμόσχευση ήπατος. PLoS ONE 9 (3): e91515. doi: 10.1371 /journal.pone.0091515

Επιμέλεια: Jacques Zimmer, Centre de Recherche Δημόσια de la Santé (CRP-Santé), το Λουξεμβούργο

Ελήφθη: 6 Δεκεμβρίου 2013? Αποδεκτές: 11η Φεβρουαρίου 2014? Δημοσιεύθηκε: 20 του Μάρτη του 2014

Copyright: © 2014 Lacotte et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις από το ελβετικό Εθνικό Ίδρυμα Επιστημών (PP00P3_139021), το Ίδρυμα Artères, το Ευρωπαϊκό Ίδρυμα Astellas, και το Ίδρυμα Boninchi, την Elsie και Carlos de Reuter, και η Marie-France και Francis Ίδρυμα Minkoff. Christian Toso υποστηρίχθηκε από ένα Καθηγητή από το Ελβετικό Εθνικό Ίδρυμα Επιστημών (PP00P3_139021). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

μεταμόσχευση ήπατος είναι η πιο αποτελεσματική θεραπεία για ασθενείς με πρώιμη ανεγχείρητο ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα (HCC) [1], [2]. Ωστόσο, το 15% των δικαιούχων ζήσετε μετά τη μεταμόσχευση υποτροπή HCC, η οποία οδηγεί γρήγορα στο θάνατο σχεδόν σε όλους τους ασθενείς [3]. Διάφορες στρατηγικές έχουν προταθεί για να μειώσουν τον κίνδυνο αυτό, συμπεριλαμβανομένης μιας βελτιωμένης κριτηρίων επιλογής μεταμόσχευση, η στόχευση των κυκλοφορούντων κυττάρων HCC, τη χρήση του ανοσοενισχυτικού αντικαρκινικών φαρμάκων και προωθείται ανοσία κατά του καρκίνου [4].

Μεταμόσχευση για HCC είναι μια μοναδική κατάσταση, με ενεργοποίηση του ανοσοποιητικού συστήματος που κατευθύνονται έναντι αμφοτέρων των αλλογενή δότη και τον καρκίνο αντιγόνα. Αυτή η διπλή ενεργοποίηση σπανίως έχει διερευνηθεί. Μια ενεργοποίηση αλλοάνοση μπορεί να κατευθύνεται μόνο έναντι ειδικών αντιγόνων ή αλλογενή να συνδέεται με ένα ευρύτερο ενεργοποίηση προώθηση επίσης μια μη-ειδική αντικαρκινική ανοσολογική απόκριση. Η τελευταία υπόθεση έχει προταθεί από έναν αριθμό μελετών που δείχνουν έναν υψηλότερο κίνδυνο μετά τη μεταμόσχευση HCC υποτροπών σε ασθενείς με πιο βαθιά ανοσολογική αναστολή? για παράδειγμα, μετά τη χρήση αντισωμάτων αντι-λεμφοκυττάρων ή σε περίπτωση υπερέκθεσης για αναστολείς καλσινευρίνης [5] – [8]. Επιπλέον, μια μειωμένη έκφραση ενός NKG2D συνδετήρα επί HCC όγκους, οι αναλογίες αίματος χαμηλής ουδετερόφιλων-λεμφοκυττάρων και που σχετίζονται με όγκους μετράει μακροφάγων έχουν επίσης συσχετιστεί με HCC υποτροπή [9] – [12].

Στην ιδανική περίπτωση, ο αλλογενή ασυλία πρέπει να αποτραπεί και η ανοσία κατά του καρκίνου προωθούνται. Η καλύτερη κατανόηση του cross-talk μεταξύ των δύο είναι συνεπώς επιθυμητό, ​​προκειμένου να καθοριστούν καλύτερα οι μεσολαβητές και οι μηχανισμοί που εμπλέκονται σε κάθε είδος ανοσίας. Τελικά, τα εν λόγω δεδομένα θα βοηθήσει να καθορίσει τον ιδανικό συνδυασμό ανοσοκαταστολή μετά από μεταμόσχευση ήπατος για ΗΚΚ.

Η παρούσα μελέτη αξιολογεί το επίπεδο της κυτταροτοξικότητας αντι-καρκίνου στο ήπαρ, σπλήνα και το αίμα μετά από μεταμόσχευση ήπατος αλλογενή αρουραίου. Ορίζει το ρόλο της ειδικής ανοσολογικής τύπους κυττάρων, συμπεριλαμβανομένων και των φυσικών φονικών κυττάρων (ΝΚ) και μονοκύτταρα /μακροφάγα, και τη δράση των βασικών κυτταρικών υποδοχέων ΝΚ.

Υλικό και Μέθοδοι

Ζώα, μεταμόσχευση ήπατος και Δεοντολογίας Δήλωση

τα πειράματα έγιναν σε αρσενικούς αρουραίους Lewis και Dark Agouti (DA) βάρους 200-250 g (7 έως 8 εβδομάδες ηλικίας, Janvier). Υποβλήθηκαν ορθοτοπική μεταμόσχευση ήπατος σύμφωνα με ένα πρωτόκολλο που περιγράφηκε προηγουμένως [13]. DA-to-Lewis μεταμοσχεύσεις (μοντέλο αλλογενούς) θεωρήθηκαν ως η ομάδα μελέτης, και Lewis-to-Lewis μεταμοσχεύσεις χρησιμοποιήθηκαν ως συγγενικά ελέγχων (έξι ζώων σε κάθε ομάδα για την αξιολόγηση της επιβίωσης). Όλα τα ζώα φροντίζονται σύμφωνα με τις διεθνείς κατευθυντήριες γραμμές για τη φροντίδα των ζώων, και δεοντολογική έγκριση ελήφθη από την επιτροπή δεοντολογίας του Πανεπιστημίου της Γενεύης και από τις κτηνιατρικές αρχές της Γενεύης (N ° 1052/3653 /3).

Rat κυτταρικές σειρές HCC

κύτταρα JM-1 προσεφέρθησαν ευγενώς από τον Γιώργο Μιχαλόπουλο (Πανεπιστήμιο του Πίτσμπουργκ) [14]. κύτταρα MCA-RH7777 αγοράσθηκαν από την ATCC (Molsheim, France). Και οι δύο κυτταρικές σειρές καλλιεργήθηκαν σε μέσο DMEM σε υψηλό επίπεδο γλυκόζης (Gibco).

ήπατος Function Test Αξιολόγησης, ιστολογία του ήπατος και ανοσοσήμανση

Για την ανίχνευση σημάδια απόρριψης του ήπατος, δοκιμασίες ηπατικής λειτουργίας ορού, συμπεριλαμβανομένων ασπαρτική αμινοτρανσφεράση (AST), αμινοτρανσφεράση αλανίνης (ALT) και της χολερυθρίνης αξιολογήθηκαν σε μία ημέρα, τριών και δέκα μετά την μεταμόσχευση. Τα επίπεδα ορού μετρήθηκαν σε συνεργασία με την κεντρική κλινική του νοσοκομείου εργαστήριο (Synchron LX20). Δείγματα από εννέα ζώα σε κάθε ομάδα υποβλήθηκαν σε ανάλυση.

Η παρουσία της απόρριψης αξιολογήθηκε επίσης για ιστολογία μετά από χρώση hematoxin /ηωσίνη δειγμάτων ήπατος ανακτώνται την ημέρα δέκα μετά την μεταμόσχευση. Το επίπεδο της απόρριψης ήταν τυφλά βαθμολογούνται από έναν εμπειρογνώμονα του ήπατος παθολόγος σύμφωνα με την κατάταξη Banff [15]. κύτταρα ΝΚ σημάνθηκαν επί κρυοτομών με αντι-NKRP1 (CD161, 10/78, Biolegend) που ακολουθείται από Alexa Fluor®555 γαϊδάρου αντι-ποντικού IgG (Invitrogen). Τα μακροφάγα σημάνθηκαν επί εγκλεισμένους σε παραφίνη τομές με πολυκλωνικό κουνελιού αντι-Iba1 (Wako) που ακολουθείται από IgG Alexa Fluor®555 γαϊδάρου αντι-κουνελιού (Invitrogen).

περιφερικό αίμα, τη σπλήνα και το συκώτι μονοπύρηνων κυττάρων Απομόνωση

δείγματα ουραία φλέβα αίματος (500 μΐ) συλλέχθηκαν σε 150 μΙ κιτρικό οξύ δεξτρόζη. Ήπατος και του σπλήνα ανακτήθηκαν μέσω μιας μέσης γραμμής κοιλιακή τομή μετά από 10 U IV έγχυση ηπαρίνης. Το ήπαρ διαποτίστηκε με HBSS που περιείχε 0,5 mg /ml κολλαγενάσης D (Sigma). Αυτό κόπηκε σε μικρά κομμάτια, επαναιωρήθηκαν σε διάλυμα /κολλαγενάση HBSS, πέψη στους 37 ° C για 20 λεπτά. εναιώρημα κυττάρων πλένεται και φιλτράρεται μέσω ενός πλέγματος νάιλον. Η σπλήνα αποκόπηκε σε τεμάχια, συνθλίβονται και διηθείται μέσω ενός πλέγματος νάιλον. κύτταρα περιφερικού αίματος, το ήπαρ και σπλήνα καθαρίστηκαν σε μια κλίση πυκνότητας Ficoll Paque (GE Healthcare). Απομονωμένα μονοπύρηνα κύτταρα πλύθηκαν και μετρήθηκαν.

μικτή λεμφοκυτταρική αντίδραση και ELISA

Περιφερειακά και σπλήνα αλλογενή ανοσολογική ενεργοποιήσεις εξετάστηκαν χρησιμοποιώντας μικτές αντιδράσεις λεμφοκυττάρων. επωάσεις κυττάρων πραγματοποιήθηκαν σε 96 φρεατίων σε 200 μλ RPMI 1640 (Gibco), 10% FCS (Invitrogen), 1 Μ HEPES (Invitrogen) και 1 U /ml /1 μg /ml Πενικιλλίνη-Στρεπτομυκίνη και 0.29 mg /ml L -γλουταμίνη (Gibco). κύτταρα Lewis ανταπόκρισης (2.5 × 10

5) από τέσσερα αλλογενή και τέσσερις συγγενικούς αποδέκτες επωάστηκαν με 2,5 χ 10

5 ακτινοβολημένα διεγέρτη DA (ή τρίτο μέρος) σπληνοκύτταρα (5000 rad) στους 37 ° C /5% CO

2 για 24 ώρες.

Το επίπεδο της ιντερφερόνης γάμμα (ΙΡΝγ) ποσοτικοποιήθηκε με ELISA. Πλάκες πολυστυρενίου (Costar) επικαλύφθηκαν όλη τη νύκτα στους 4 ° C με καθαρισμένο αντι-αρουραίου γΙΡΝ (1:500, κλώνος DB-1, Biolegend) εντός ρυθμιστικού ανθρακικών. Οι πλάκες πλύθηκαν και κορεσμένο για 30 λεπτά με συμπληρωμένο μέσον RPMI 1640. υπερκείμενα καλλιέργειας κυττάρων προστέθηκαν για δύο ώρες, που ακολουθείται από βιοτίνη ΙΡΝγ αντι-αρουραίου (1:1000, Poly5109, Biolegend), στρεπταβιδίνη-υπεροξειδάση κρένου (1:1000, Biolegend) και το διάλυμα υποστρώματος (ΤΜΒ αντιδραστήριο, το R & amp? Dsystem). Το επίπεδο της ΙΡΝγ λήφθηκε σύμφωνα με μια καμπύλη αραίωσης.

Κυτταρομετρία Ροής Αντισώματα και κυτταροτοξικότητας Δοκιμασία

Ο φαινότυπος του αίματος, του ήπατος και του σπλήνα μονοπύρηνα κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος εκτιμήθηκε με κυτταρομετρία ροής. Η επισήμανση διεξήχθη χρησιμοποιώντας αντισώματα έναντι CD3 (1F4) (BD Pharmingen), CD4 (W3 /25) (Biolegend), CD8 (ΟΧ-8), CD172a (ΟΧ-41) για μονοκύτταρα /μακροφάγα και NKRP1 (CD161, 10/78 ) για τα κύτταρα ΝΚ. Ο φαινότυπος των κυττάρων αξιολογήθηκε σε εννέα ζώα ανά ομάδα.

υποδοχείς κυττάρων ΝΚ αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας αντι-NKG2D (11D5F4) (eBiosciences) και αντι-NKp30 (sc-33647) (SantaCruz) αντισώματα. Η παρουσία του NKG2D-συνδετήρων δοκιμάστηκε σε κυτταρικές σειρές JM-1 και MCA-RH7777 μετά από επώαση με το ποντίκι ανασυνδυασμένη NKG2D-Fc χίμαιρα (139-ΝΚ-050, R &? D Systems) (5 μg /φρεάτιο) και αντι-ανθρώπινη IgG Fc (HP6017, Biolegend).

το επίπεδο των αντι-καρκινικών κυττάρων κυτταροτοξικότητα εκτιμήθηκε με μονοπύρηνα κύτταρα περιφερικού αίματος (PBMC) και κύτταρα ΝΚ από το ήπαρ (έξι ζώα ανά ομάδα), το σπλήνα και το αίμα ( επτά ζώα ανά ομάδα). Αυτά επωάστηκαν με CFSE-σημασμένο καρκίνος Yac-1 κύτταρα στόχους (0,5 μΜ, Invitrogen) στη μείωση αναλογίες τελεστή /στόχου που κυμαίνεται από 40/1 έως 4/1 για τέσσερις ώρες στους 37 ° C. Αξίζει να σημειωθεί ότι τα κύτταρα Yac-1 δεν διαθέτουν το μείζον σύμπλεγμα ιστοσυμβατότητας τάξης Ι και χρησιμοποιούνται συνήθως για κυτταροτοξικά δοκιμασίες. Μετά την επισήμανση με AlexaFluor®647-Αηηβχίην (1,5 μΙ, Biolegend) και 7-AAD (1/1000, Invitrogen) σε ρυθμιστικό διάλυμα δέσμευσης αννεξίνης, τα νεκρά κύτταρα αξιολογήθηκαν με χρήση FACS Calibur (BD).

Σε επιλεγμένα πειράματα , η αναστολή της κυτταροτοξικότητα ελέγχθηκε μετά από επώαση με αντι-NKG2D και αντισώματα αντι-NKp30 (1 μg /φρεάτιο).

ΝΚ κυττάρων Μαγνητική Ταξινόμηση

για να δούμε συγκεκριμένα σε κύτταρα ΝΚ, μια αρνητική διαλογή έγινε από PBMC και σπλήνας. Μετά από επώαση με αντι-CD172a (ΟΧ-41, GeneTex), αντι-CD45RA (ΟΧ-33, Biolegend) και αντι-ΤΟΚ (R73, Biolegend) αντισώματα, τα κύτταρα πλύθηκαν με ρυθμιστικό (PBS 2% BSA 2 mM EDTA ), και προστέθηκαν Dynabeads® επικαλύφθηκαν κατσίκας αντι-ποντικού IgG (Invitrogen). Μετά την πλύση, το κυτταρικό εναιώρημα εφαρμόσθηκε σε έναν μαγνήτη ώστε να απομακρυνθούν τα κύτταρα μη-ΝΚ. Η καθαρότητα των κυττάρων ΝΚ αξιολογήθηκε με κυτταρομετρία ροής (85% στη σπλήνα και το 90% στο αίμα).

ηπατικά κύτταρα ΝΚ λήφθηκαν με μια δύο σταδίων αρνητική /θετική επιλογή. μονοπύρηνα κύτταρα του ήπατος επωάζονται με βιοτινυλιωμένο αντι-CD172a και αντι-βιοτίνης αντισώματα συζευγμένο με μικροσφαιρίδια (MiltenyiBiotec). Μετά την απομάκρυνση των κυττάρων + CD172a μέσω στήλης, η ροή διαμέσου επωάστηκε με αντι-CD161 FITC και αντι-FITC μικροσφαιρίδια που επιτρέπει την θετική επιλογή των κυττάρων ΝΚ. Η καθαρότητα των κυττάρων ΝΚ αξιολογήθηκε με κυτταρομετρία ροής (80% στο ήπαρ). Ταξινόμηση κύτταρα χρησιμοποιήθηκαν αμέσως για δοκιμασία φαινοτυπική ή κυτταροτοξική.

Real-Time Αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (qPCR)

Το ολικό RNA (κύτταρα ή βιοψίες ήπατος) παρασκευάστηκε και καθαρίστηκε χρησιμοποιώντας το RNeasy Mini Kit ( Qiagen, Germantown, MD) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Ένα μg cDNA συντέθηκε επεκτείνοντας ένα μείγμα τυχαίων εκκινητών με την υψηλής χωρητικότητας cDNA Reverse Transcription Kit παρουσία RNase αναστολέα (Applied Biosystems). Η σχετική ποσότητα κάθε μεταγράφημα κανονικοποιήθηκε σύμφωνα με την έκφραση του rplp1 (ριβοσωμικής πρωτεΐνης μεγάλο Ρ1). Αλληλουχίες εκκινητή για

rplp1

,

NKG2D

,

rrlt

,

rae1l

και

irp94

σχεδιάστηκαν με AmplifX και Primers3 λογισμικά και είναι διαθέσιμα κατόπιν αιτήματος. Οι αντιδράσεις ενίσχυσης εκτελέστηκαν σε έναν συνολικό όγκο 20 μΐ χρησιμοποιώντας έναν ανιχνευτή ακολουθία Thermocycler (BioRad CFX96) με κιτ qPCR Πυρήνα για SYBR Green Ι (Eurogentec).

Στατιστική ανάλυση

Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως διάμεση τιμή +/- IQR. Τα αποτελέσματα συγκρίθηκαν στατιστικώς χρησιμοποιώντας Mann-Whitney test. Επιβιώσεις χαράχθηκαν σε καμπύλες Kaplan-Meier και σε σύγκριση με την δοκιμασία log-rank. Η στατιστική σημαντικότητα ορίστηκε στο p & lt?. 0.05

Αποτελέσματα

Αξιολόγηση των Alloimmunity και Απόρριψη

Η παρουσία ενός αλλοαντιδραστικότητας ήταν ειδικά κοίταξε επειδή κάποια αλλογενή αρουραίος-to-αρουραίου μοντέλα μεταμόσχευση ήπατος προκαλούν μόνο χαμηλά επίπεδα alloimmunity χωρίς οξείας απόρριψης των κυττάρων [16]. Όπως περιγράφεται στη βιβλιογραφία, οι μελετήθηκαν DA-to-Lewis μεταμοσχεύσεις ήπατος ορθοτοπική αρουραίου συνδέεται με βραχύτερη επιβιώσεις σε σύγκριση με τα συγγενικά μεταμοσχεύσεις (διάμεση επιβίωση: 13 vs. & gt? 60 ημέρες, ρ = 0,0037, τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). εξετάσεων για τη λειτουργία του ορού του ήπατος (AST και ALT) αυξήθηκαν μετά από τρεις ημέρες στις αλλογενείς αποδέκτες (όλα τα p & lt? 0,01 έναντι συγγενικά τους ελέγχους, Σχήμα 1Α.). επίπεδο χολερυθρίνης αυξήθηκε μετά από 10 ημέρες στους αλλογενείς αποδέκτες (p = 0,026 έναντι συγγενικά τους ελέγχους, Εικ. 1Β).

(Α) Ορός ασπαρτική αμινοτρανσφεράση (AST) και της αμινοτρανσφεράσης της αλανίνης (ALT) τα επίπεδα μετά από αλλογενή Σκούρο agouti-to-Lewis (μαύρο) και συγγενικά Lewis-to-Lewis (λευκό) μεταμοσχεύσεις ήπατος αρουραίου. επίπεδα (Β) χολερυθρίνη μετά από αλλογενή (μαύρο) και συγγενικά (λευκό) μεταμόσχευση. (C) Αντιπροσωπευτική αιματοξυλίνη-εοσίνη χρωματισμένο βιοψίες την ημέρα 10 μετά από αλλογενή (δεξιά) και συγγενικά (αριστερά) μεταμόσχευση ήπατος αρουραίου. (D) CD4 στο αίμα μετά τη μεταμόσχευση /αναλογίες CD8 την ημέρα 7 (D7) και 11 (D11). έκκριση (Ε) ΙΡΝγ μετά μονοπύρηνα κύτταρα περιφερικού αίματος (PBMC) μικτή λεμφοκυτταρική αντίδραση κατά την ημέρα δέκα μετά την μεταμόσχευση με δότη (DA) και τρίτη διέγερση μέρος. * P & lt? 0,05, ** & lt?. 0.01

Η

Η παρουσία της απόρριψης των κυττάρων επιβεβαιώθηκε κατά την ημέρα 10 της ιστολογίας και βαθμολογήθηκε Banff 8 σε όλες τις σπούδασε αλλογενείς παραλήπτες. παραλήπτες ελέγχου συγγενικά βαθμολογήθηκαν Banff 0 (Εικ. 1Γ). Επιπλέον, η περιφερική αναλογία CD4 /CD8 την ημέρα 11 ήταν σημαντικά χαμηλότερη στα αλλογενή λήπτες συγκριτικά με συγγενικά παραλήπτες (2,9

vs

. 3.6, ρ = 0.0051, Σχ. 1D). Τέλος, η alloimmunity κατευθύνθηκε προς συγκεκριμένα αντιγόνα του δότη, όπως αποδεικνύεται από την ημέρα 10 μικτές αντιδράσεις λεμφοκυττάρων ενάντια DA σπλήνας (υπερκείμενο συγκέντρωση ΙΡΝγ: 410 pg /ml

vs

μη ανιχνεύσιμη.), Και η απουσία απόκρισης έναντι τρίτων αντιγόνα του αρουραίου Fisher (Εικ. 1 Ε).

Alloimmunity-Associated περιφερική κυτταροτοξικότητα

σε μια προσπάθεια να εκτιμήσει τις επιπτώσεις της απόρριψης στην ανοσία κατά του καρκίνου, η κυτταροτοξική δράση των περιφερικών κυττάρων του ανοσοποιητικού συστήματος ελέγχθηκε

ex vivo

εναντίον καρκινικών κυττάρων Yac-1. Κατά τη στιγμή της αλλοάνοση ενεργοποίησης (10 ημέρες), το επίπεδο των περιφερικών κυτταροτοξικότητα αυξήθηκε στα αλλογενή αποδέκτες σε σύγκριση με τα συγγενικά τους ελέγχους και αφελείς αρουραίοι (δράστου /στόχου 40/1: 25,2%

vs

14,7%. και 9,4% αντίστοιχα, p = 0,0025, Σχ. 2Α). Η τάση αυτή παρατηρείται σε όλες τις ελεγχόμενες αραιώσεις (4/1, 10/1, 40/1).

(Α)

Ex vivo

PBMC αντικαρκινική κυτταροτοξικότητα κατά την ημέρα δέκα μετά από αλλογενή και συγγενή μεταμοσχεύσεις και σε αφελή αρουραίους ελέγχου σε διάφορες αναλογίας δράστου /στόχου (Ε /Τ). (Β) Συχνότητα NKRP1

υψηλής κύτταρα (κύτταρα ΝΚ) μεταξύ των PBMCs την ημέρα 7 (D7) και 10 (D10) μετά τη μεταμόσχευση. Η κυτταρομετρία ροής dot-plot αξιολόγησε την στρατηγική της πύλης. (Γ) Η κυτταρομετρία ροής dot-πλοκή και ιστόγραμμα αξιολόγηση της στρατηγικής της πύλης για μονοκύτταρα /μακροφάγα (CD172 +) και το επίπεδο έκφρασης NKRP1 για CD172 + κύτταρα. (D) Συχνότητα μονοκυττάρων /μακροφάγων (CD172 + κύτταρα) μεταξύ των PBMCs. (Ε) επίπεδο ενεργοποίησης των μονοκυττάρων /μακροφάγων (επίπεδο έκφρασης NKRP1 (μέση ένταση φθορισμού (MFI)) μεταξύ CD172a + κύτταρα). * P & lt? 0,05, ** & lt?. 0.01

Η

Για να εκτιμηθεί κατά πόσον το τροποποιημένο κυτταροτοξικότητα που σχετίζονται με μια διακύμανση των κυττάρων υποσύνολα, κυτταρομετρία ροής αναλύσεις διεξήχθησαν σε PBMCs. NKRP1 (CD161), μια γλυκοπρωτεΐνη μεμβράνης λεκτίνη τύπου C, εκφράζεται έντονα σε κύτταρα ΝΚ και χρησιμοποιήθηκε ως δείκτη για ΝΚ κύτταρα αρουραίου [17]. Την ημέρα επτά, η συχνότητα ΝΚ κυττάρων. (CD3

– NKRP1

υψηλή) μειώθηκε σημαντικά κατά τα αλλογενή αποδέκτες σε σύγκριση με τα συγγενικά τους ελέγχους (2,1%

vs

3,4%, p = 0,028, Σχ. 2Β). Αυτή η μειωμένη συχνότητα των περιφερικών κυττάρων ΝΚ είναι σύμφωνη με την προηγουμένως παρατηρηθεί μετανάστευση των κυττάρων ΝΚ στο ήπαρ νωρίς μετά αλλογενή μεταμόσχευση [18]. Την ημέρα 10, η παρατηρούμενη αυξημένη περιφερειακή κυτταροτοξικότητα ήταν συνδεδεμένη με μια αυξημένη συχνότητα ΝΚ κυττάρων του αίματος (10,79% σε αλλογενή

vs

. 4,9% σε συγγενικούς, p = 0,048).

Τα μονοκύτταρα /μακροφάγα μπορούν επίσης να συμμετέχουν στην κυτταροτοξική εκδηλώσεις κατά των καρκινικών κυττάρων. Η 10η ημέρα του πληθυσμού μονοκυττάρων (CD172a

+) αυξήθηκε τόσο αλλογενών και συγγενικά τους δικαιούχους σε σύγκριση με τα αφελή μη-μεταμοσχευμένα ελέγχους, πιθανόν αντανακλώντας κάποιο βαθμό μη-ειδικής περι-εγχειρητική ενεργοποίηση του ανοσοποιητικού συστήματος (16,6%

vs

10,7%

vs

5,58%, αντίστοιχα? p = 0.1 για αλλογενή

vs

αφελής?.. p = 0,023 για συγγενικά

vs

αφελής, Εικ. 2D). Αυτό είπε, η υψηλότερη συχνότητα παρατηρήθηκε στις αλλογενείς παραλήπτες (ακόμη δεν φθάνει στατιστική σημασία, ρ = 0,455 για αλλογενείς

vs

. Συγγενικό). Επιπλέον, η συχνότητα των ενεργοποιημένων μονοκυττάρων εκφράζουν NKRP1 (CD161) ήταν υψηλότερη στις αλλογενείς αποδέκτες σε σύγκριση με τα συγγενικά τους ελέγχους και τα αφελή μη-μεταμοσχευμένα ζώα (μέση ένταση φθορισμού 1282

vs

. 568

vs

. 438, p = 0,0004, σχ. 2Ε) [19].

Απουσία Alloimmunity-Associated σπλήνας κυτταροτοξικότητα

για να χαρακτηριστεί καλύτερα την παρατηρήθηκε περιφερική κυτταροτοξικότητα, εκτιμήσαμε την αλλογενή και αντικαρκινική ανοσολογική γεγονότα στην σπλήνα. Οι ημέρες 10 σπληνοκύτταρα από αλλογενή αρουραίους διεγερμένα με κύτταρα δότη (DA) εκκρίνεται περισσότερο ΙΡΝγ από τα σπληνοκύτταρα από συγγενικά ποντίκια, επιβεβαιώνοντας την παρουσία ενός δότη-ειδική αλλογενή απόκριση στο σπλήνα (684

vs

. 99 pg /ml, ρ = 0,028, σχ. 3Α). Αντιστρόφως, ταξινομημένα σπλήνα ΝΚ κύτταρα δεν έδειξαν διαφορά της κυτταροτοξικότητας μεταξύ αλλογενών και συγγενικά παραλήπτες (αναλογία τελεστή /στόχου 10/1: 42,2 έναντι 48,3%, ρ = 0,30, Σχήμα 3Β.). Ομοίως, καμία μεταβολή στον αριθμό και ο φαινότυπος των κυττάρων σπλήνας θα μπορούσε να ανιχνευθεί (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

(Α) ΙΡΝγ έκκριση μετά σπληνοκυττάρων μικτή λεμφοκυτταρική αντίδραση κατά την ημέρα δέκα μετά την μεταμόσχευση με δότη και τρίτη διέγερση μέρος . (Β)

Ex vivo αντι-καρκινικών

σπλήνα ΝΚ κυττάρων κυτταροτοξικότητα κατά την ημέρα δέκα μετά από αλλογενή μεταμόσχευση και συγγενικά.

Η

Alloimmunity-Associated ήπατος μονοπύρηνων κυττάρων Ενεργοποίηση

Η ανοσοαπόκριση των μονοπύρηνων κυττάρων του ήπατος δοκιμάστηκε την ημέρα 10 μετά τη μεταμόσχευση. Μετά την απομόνωση, ο αριθμός των μονοπύρηνων κυττάρων του ήπατος αυξήθηκε στα αλλογενή αρουραίους σε σύγκριση με συγγενικά τους ομολόγους τους (16 × 10

6

vs

. 5,35 × 10

6 κύτταρα /ήπατος, ρ = 0.004 ).

Αυτή η αύξηση του αριθμού μονοπύρηνων κυττάρων σχετιζόταν με αυξημένο αριθμό κυττάρων ΝΚ στο αλλογενούς μοσχεύματος (19.5

vs

. 3 στο συγγενικό μόσχευμα, ρ = 0,006, σχ. 4Α) και σε αύξηση του αριθμού των μακροφάγων (131

vs

. 34.5 στο συγγενικό μόσχευμα, ρ = 0,0034, Σχ. 4Β). Αυτά τα δύο κύτταρα υποομάδες βρέθηκαν τόσο στο ηπατικό παρέγχυμα και σε κυτταρικές διηθήσεις του αλλογενούς μοσχεύματος. Η παρατηρούμενη μεταβολή του αριθμού των κυττάρων συνδέθηκε με μια αυξημένη ενεργοποίηση. Ταξινόμηση ηπατικά κύτταρα ΝΚ επέδειξε αυξημένη κυτταροτοξικότητα αντικαρκινικών στις αλλογενείς παραλήπτες (αναλογία τελεστή /στόχο 10/1:.. 58.8%

vs

32%, ρ = 0,030, σχ 4C). Αξίζει να σημειωθεί ότι, λήπτες μοσχεύματος αλλογενούς ήπατος σε αρουραίους έδειξε μια τάση προς μια υψηλότερη κυτταροτοξικότητα στο ήπαρ-ταξινομημένο ΝΚ σε σύγκριση με σπλήνα-ταξινομημένο ΝΚ κυττάρων (αναλογία τελεστή /στόχο 10/1: 58,8% έναντι 42,2%, p = 0,101). Αυτή η υψηλότερη δραστηριότητα του ήπατος ΝΚ κυττάρων πιθανόν σχετίζεται με την αλλογενή απόρριψη κατά κύριο λόγο βρίσκονται στο ήπαρ του μοσχεύματος [20].

(Α) Εκπρόσωπος εικόνες των τμημάτων του αλλογενούς (αριστερά) και συγγενικά (δεξιά) ηπατικού μοσχεύματος επισημαίνονται με αντισώματα αντι-NKRP1 (κόκκινο). Οι πυρήνες βάφτηκαν με Hoechst (μπλε). Αριθμός επισημασμένα-ΝΚ κύτταρα ανά εικόνα που υπολογίζονται σε πολλαπλά τμήματα του ήπατος. (Β) Αντιπροσωπευτικές εικόνες των τμημάτων του αλλογενούς (αριστερά) και συγγενικά (δεξιά) συκώτι μοσχεύματος επισημασμένα με αντισώματα αντι-Iba1 (κόκκινο). Αριθμός επισημανθεί μακροφάγων ανά εικόνα που υπολογίζονται σε πολλαπλά τμήματα του ήπατος. (C)

Ex vivo

ήπατος ΝΚ κυττάρων αντικαρκινική κυτταροτοξικότητα κατά την ημέρα δέκα μετά από αλλογενή και συγγενικά μεταμόσχευση. αναλογία /στόχου Δύο τελεστή (Ε /Τ) δοκιμάστηκαν. (Δ) το επίπεδο ενεργοποίησης του ήπατος μονοκυττάρων /μακροφάγων (επίπεδο έκφρασης NKRP1 (ΝΧΙ), μεταξύ CD172a + κύτταρα). * P & lt? 0,05, ** & lt? 0,01

Η

Το επίπεδο ενεργοποίησης του ήπατος μονοκυττάρων αυξήθηκε στους αλλογενείς αποδέκτες (ΝΧΙ:.. 1232

vs

590, p = 0,005, Εικ. 4D).

Alloimmunity-Associated κυτταροτοξικότητα μέσω του NKG2D υποδοχέα

για να ορίσετε το δυναμικό υποδοχέα ρίζας μονοπάτια /συμμετέχουν στην ανιχνεύεται κυτταροτοξικότητα, qPCR πραγματοποιήθηκαν κατά την ημέρα εννέα ήπαρ βιοψίες. Παρόμοια με μια προηγούμενη έκθεση, η έκφραση

NKG2D

, ένα από τα καλύτερα χαρακτηρισμένο όγκου που σχετίζονται με τον υποδοχέα ΝΚ, ήταν 6,9 φορές υψηλότερη στον αλλογενή μοσχεύματα ήπατος σε σύγκριση με τους συγγενικούς τους ελέγχους (ρ = 0,028, σχ. 5Α ) [21]. Όπως υποδοχέα NKG2D εκφράζεται συστατικώς σε κύτταρα ΝΚ, το αποτέλεσμα αυτό θα μπορούσε να έχει σχέση με την αύξηση του αριθμού των ΝΚ κυττάρων στην αλλογενή ήπαρ. Ωστόσο, τα επίπεδα έκφρασης των NKG2D στα κύτταρα ΝΚ αίματος (διάμεσος MFI:. 7694 vs. 4636, Σχήμα 5Β, αριστερά) και μονοκυττάρων (διάμεσος MFI:. 1180 vs. 666, Εικόνα 4Β, δεξιά) ήταν επίσης υψηλότερα σε αλλογενή παραλήπτες.

(Α) συκώτι έκφραση

NKG2D

την ημέρα δέκα μετά τη μεταμόσχευση ήπατος. Εκπρόσωπος NKG2D επίπεδα (Β) έκφραση στα κύτταρα ΝΚ αίματος (αριστερά) και μονοκυττάρων (δεξιά) του αλλογενούς (μαύρο) και συγγενικά (γκρι) αποδέκτες. Ισοτύπου χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος (διακεκομμένες γραμμές). (Γ) ταξινόμηση του αίματος ΝΚ αναστολή κυτταροτοξικότητα κυττάρων με αντι-NKG2D αντίσωμα ή με αντι-NKp30 αντίσωμα. (Δ) τα επίπεδα του συνδέτη NKG2D (

rae1l, rrlt

και

irp94

) έκφραση στο ήπαρ κατά την ημέρα δέκα μετά τη μεταμόσχευση. (Ε) Επίπεδα συνδέτη NKG2D (

rae1l

,

rrlt

και

irp94

) έκφραση σε κυτταρικές σειρές HCC αρουραίου. (F) Εκπρόσωπος επίπεδο της ανασυνδυασμένης NKG2D-Fc δέσμευση σε αρουραίου HCC κυτταρικές σειρές. * P & lt? 0,05, ** & lt?. 0.01

Η

Η επίπτωση της NKG2D υποδοχέα στην κυτταροτοξικότητα ελέγχθηκε με τη χρήση των αντι-NKG2D αντισώματος. Ταξινόμηση ΝΚ κυττάρων του αίματος κατέδειξαν υψηλότερα κυτταροτοξικά επίπεδα στα αλλογενή ζώα, και αυτή η επίδραση παρεμποδίστηκε από την προσθήκη του αντι-NKG2D αντίσωμα (30,1

vs

. 10.1, Σχ. 5C). Αυτή η αναστολή ήταν ειδική για υποδοχείς όπως καμία μείωση θα μπορούσε να παρατηρηθεί με τη χρήση αντι-NKp30 αντίσωμα.

Η έκφραση του NKG2D συνδετήρων αξιολογήθηκε περαιτέρω με qPCR την ημέρα εννέα ήπαρ βιοψιών. Σε αρουραίους, τρία NKG2D προσδέματα περιγράφηκαν: Rae1l, Rrlt (ρετινοϊκό οξύ νωρίς οικογένεια μεταγραφής) και Irp94 (ισχαιμία αποκρίνεται 94 kDa πρωτεΐνη, θερμικού σοκ οικογένεια πρωτεϊνών) [21], [22]. Η

rrlt

γονιδιακή έκφραση ήταν σημαντικά αυξημένη στα αλλογενή μοσχεύματα ήπατος σε σύγκριση με συγγενικά ήπαρ μοσχεύματα (2,93 φορές αύξηση, ρ = 0,028, σχ. 5D).

Σε μια προσπάθεια να καθορίσουν τον τρόπο το αυξημένη NKG2D κυτταροτοξικότητα συνέβαλε στην κάθαρση των κυττάρων HCC, η έκφραση προσδεμάτων NKG2D αξιολογήθηκε επίσης σε δύο κυτταρικές σειρές HCC αρουραίου, JM-1 και MCA.

Rrlt

εκφράστηκε σε κυτταρική γραμμή JM-1 (21.4 φορές αύξηση σε σύγκριση με το πρωτογενές σπληνοκύτταρα), αλλά όχι σε κύτταρα MCA.

Rae1l

δεν εκφράζεται σε κύτταρα HCC και

irp94

εκφράστηκε σε διάφορα επίπεδα και στις δύο κυτταρικές σειρές (JM-1: 2,63, MCA:. 3.68 φορές αύξηση, Σχήμα 5Ε). Τέλος, η παρουσία του NKG2D προσδεμάτων στην επιφάνεια των κυτταρικών σειρών HCC επιβεβαιώθηκε με τη χρήση ενός χιμαιρικό ανασυνδυασμένο NKG2D-Fc. Τόσο JM-1 και MCA εξέφρασαν υψηλά επίπεδα των γνωστών και δυνητικά ακόμα άγνωστο NKG2D συνδέτες (MFI, JM1:. 3.53.10

4

vs

01.02.10

4, MCA: 09/04/10

4

vs

1.83.10

4, Εικ. 5F).

σε γενικές γραμμές, NKG2D-συνδετήρες εκφράστηκαν σε όλες τις κυτταρικές σειρές HCC υποστηρίζοντας την ιδέα ότι ενεργοποιείται NKG2D εκφράζουν ΝΚ κύτταρα και μονοκύτταρα συμβάλλει στην κάθαρση των κυττάρων HCC.

Συζήτηση

Αυτή η μελέτη παρέχει νέες ιδέες για το ζήτημα της ισόρροπης ενεργοποίηση του ανοσοποιητικού συστήματος μετά από αλλογενή μεταμόσχευση ήπατος με την παρουσία του HCC, αποδεικνύοντας την παρουσία ενός αλλοάνοση εξαρτώμενη κυτταροτοξική αντικαρκινική δράση μετά από μεταμόσχευση ήπατος αρουραίου. Αυτή η κυτοτοξικότητα συνδέεται με αυξημένες συχνότητες και τα επίπεδα της ενεργοποίησης κυττάρων ΝΚ και μονοκύτταρα /μακροφάγα, και είναι τουλάχιστον εν μέρει προκαλείται μέσω της NKG2D υποδοχέα.

Ο μελετήθηκε μοντέλο μεταμόσχευσης ήπατος αρουραίου Dark Agouti-to-Lewis επαγόμενης μια ισχυρή ενεργοποίηση αλλοάνοσο κατευθύνεται ειδικά εναντίον αντιγόνων του δότη [23]. Αυτή η ανοσολογική προφίλ συσχετίστηκε με αυξημένη φαινότυπο και το επίπεδο ενεργοποίησης των κυττάρων ΝΚ και μονοκύτταρα /μακροφάγα. Αυτό είναι σύμφωνα με προηγούμενες μελέτες που αποδεικνύουν τις βλαβερές συνέπειες των μακροφάγων κατά τη διάρκεια μιας απόρριψης μοσχεύματος νεφρού αρουραίου και την προστατευτική δράση της καταστροφής του κυττάρου ΝΚ μετά ήπατος αλλογενή μεταμόσχευση αρουραίου [18], [24].

Το cross-talk μεταξύ των αλλογενών και αντικαρκινικά ασυλίες έχει μελετηθεί επαρκώς μέχρι τώρα, και τα παρόντα δεδομένα δείχνουν μια ενισχυμένη ήπατος και περιφερικού (αλλά όχι σπλήνα) αντικαρκινική κυτταροτοξικότητα κατά τη στιγμή της απόρριψης μοσχεύματος ήπατος. Σε μεταμόσχευση ανθρώπινων οργάνων, κυττάρων ΝΚ ήταν παρόντες σε ενδομυοκαρδιακής διηθήσεις των κυττάρων, αλλά αυτά τα κύτταρα D, αλλά o δεν εμφανίζονται ως σημαντικοί παράγοντες στην απόρριψη ηπατικού μοσχεύματος [25], [26]. Στην πραγματικότητα, ένας αυξημένος αλλοαντιδραστικότητας των ΝΚ κυττάρων μετά από μεταμόσχευση ήπατος έχει αναφερθεί και η δραστηριότητα αυτή δεν συσχετιζόταν με επεισόδια απόρριψης [26]. Ωστόσο, τα ανθρώπινα ηπατικά κύτταρα ΝΚ και δευτερογενή λεμφοειδή ιστό έχουν επιδείξει ισχυρή επίπεδα κυτταροτοξικότητας μετά από διέγερση με IL-2 ή με την παρουσία του ενεργοποιημένου APCs [27], [28].

Ενώ η αναμονή για

σε vivo

ή /και κλινικών δεδομένων, η παρούσα παρατήρηση υποστηρίζει τη χρήση ηπιότερων επιπέδων ανοσοκαταστολής σε ασθενείς μεταμοσχεύονται για HCC, προκειμένου να διατηρηθεί η κυτταροτοξικότητα αντικαρκινικών. Αξίζει να σημειωθεί ότι πολλοί αλλογενή αρουραίος-σε-αρουραίο μοντέλα μεταμόσχευσης ήπατος προκληθεί καμία οξεία απόρριψη των κυττάρων, και το τέλειο μοντέλο με συγγενικά -recipient κύτταρα τύπου HCC και οξεία αλλογενή ασυλία αυτή τη στιγμή λείπει (δεν κυτταρική σειρά Lewis HCC διαθέσιμη), αποτρέποντας έτσι το

in vivo

επικύρωση των δεδομένων που παρουσιάζονται. Επίσης, η περιγραφόμενη αντικαρκινική δράση παρατηρήθηκε μετά advanced γεγονότα απόρριψης, τα οποία είναι σπάνια κλινικά. Ωστόσο, υποθέτουμε ότι ηπιότερη επίπεδα απόρριψης προωθήσει επίσης κάθαρση των καρκινικών κυττάρων.

αντί να μειώνεται η ανοσοκαταστολή ως σύνολο, μια προσεκτική επιλογή φάρμακο μπορεί επίσης να επιχειρήσει να διαθέσει ΝΚ κύτταρα και μονοκύτταρα /μακροφάγα με σκοπό την καλύτερη κάθαρση των κυττάρων HCC. Η χρήση του αντισώματος εξάντλησης αντι-λεμφοκυττάρων έχει συσχετισθεί με αυξημένο κίνδυνο μετά τη μεταμόσχευση HCC επανάληψη [8]. Μη καταστρέφουν αντι-IL2-Κ αντισωμάτων μπορεί επίσης να έχει ένα αποτέλεσμα, δεν μεταβάλλεται το φαινότυπο και τη λειτουργία των πρόσφατα παραχθέντα ΝΚ κυττάρων [29] – [31]. Sirolimus και μυκοφαινολάτη μοφετίλ έχουν αποδειχθεί για να αλλάξει το φαινότυπο ΝΚ κυττάρων και τη λειτουργία

in vitro

, ενώ η κυκλοσπορίνη δεν φαίνεται να έχει επίδραση [32].

In vivo

, όλα τα φάρμακα συντήρησης έχουν αντίκτυπο σε διάφορα υποσύνολα του ανοσοποιητικού κυττάρων και τον ιδανικό συνδυασμό ανοσοκαταστολή απομένει να οριστεί στη ρύθμιση της μεταμόσχευσης ήπατος για ΗΚΚ [33], [34].

Η /NKG2D συνδέτες οδού του υποδοχέα NKG2D εμφανίστηκε ως βασικός παράγοντας στην αλλοάνοσο που σχετίζεται με κυτταροτοξικότητα. Είχε ήδη δημοσιεύσει ότι NKG2D επίπεδο έκφρασης αυξάνεται στο ήπαρ αλλογενούς μοσχεύματος [21]. Εδώ, έχουμε καταδείξει ότι η έκφραση του NKG2D είναι ειδικά αυξημένα σε περιφερειακά κύτταρα ΝΚ και των μακροφάγων κατά τη στιγμή της απόρριψης, και η

ex vivo

κυτταροτοξικότητα των ΝΚ κυττάρων ήπατος εμποδίζεται από τον αποκλεισμό του υποδοχέα NKG2D (αλλά όχι ο υποδοχέας NKp30). Επιπλέον, NKG2D συνδέτες θα μπορούσαν να βρεθούν σε κύτταρα HCC αρουραίου, επιβεβαιώνοντας τα ανθρώπινα δεδομένα με την έκφραση του UL16 πρωτεΐνη δέσμευσης (ULBP) 1, έναν άνθρωπο NKG2D συνδετήρα, σε όγκους HCC [10]. Αυτή η οδός έχει προηγουμένως εξερευνηθεί σε άλλα ογκολογικά ρυθμίσεις όπως ορθοκολικό καρκίνωμα, και το επίπεδο της έκφρασης NKG2D συνδέτη του όγκου έχει συσχετιστεί με την απόκριση HCC και την επιβίωση των ασθενών [10], [35]. NKG2D έκφραση στα κύτταρα ΝΚ αίματος αυξάνεται μετά ραδιοσυχνοτήτων HCC κατάλυση, και συνδέεται με υψηλότερα ποσοστά ελεύθερη νόσου επιβίωση [36]. Αυτή η αύξηση της NKG2D έκφραση παρατηρείται επίσης μετά διαρτηριακές χημειοεμβολισμός και συσχετίζεται με μία μείωση στην NKG2D-συνδέτη απόπτωση (διαλυτό MICA) [37]. NKG2D έκφραση μετά από μεταμόσχευση ήπατος μπορεί να βοηθήσει στην HCC κάθαρση κύτταρα. Τέλος, NKG2D έχει πρόσφατα εμπλακεί στην μακροφάγων-ΝΚ κυττάρων cross-talk που οδηγεί σε υψηλότερα επίπεδα ενεργοποίησης ΝΚ κυττάρων και κυτταροτοξικότητα κυττάρου αντι-όγκου [38]. Η παρατηρούμενη αυξημένη έκφραση του NKG2D σε μακροφάγα κατά τη στιγμή της αλλογενούς απόρριψης μοσχεύματος ήπατος μπορεί να συνεισφέρει έμμεσα στην κυτταροτοξικότητα μέσω της προώθησης της ενεργοποίησης κυττάρων ΝΚ και κυτταροτοξικότητα.

Πέρα NKG2D, ένα ευρύ πάνελ ενεργοποίησης και ανασταλτικών υποδοχέων εκφράζεται σε ΝΚ κύτταρα, τα οποία πρότυπο έκφρασης μπορούν να διαμορφώσουν το επίπεδο της ενεργοποίησης των κυττάρων ΝΚ [39]. Για να φανεί, ανασταλτικοί υποδοχείς μπορεί να αναγνωρίσει τάξης Ι μείζον σύμπλεγμα ιστοσυμβατότητας, και αναστέλλουν την κυτταροτοξικότητα κυττάρων ΝΚ [40]. Το προφίλ του υποδοχέα διαφέρει μεταξύ των οργάνων-ειδικά κύτταρα ΝΚ, όπως κάνουν η λειτουργία τους [41], και οι μεταβολές στην ισορροπία μεταξύ ενεργοποίησης και ανασταλτικών υποδοχέων θα μπορούσε να εξηγήσει, τουλάχιστον μερικά από τα εδώ περιγραφόμενα φαινοτυπικές και λειτουργικές διαφορές ΝΚ κυττάρων μεταξύ των θέσεων σε συγγενή και αλλογενή παραλήπτες. Περαιτέρω διερεύνηση είναι άξιζε.

Τα παρόντα δεδομένα αποδεικνύουν ότι η εμφάνιση μιας απόρριψης μοσχεύματος ήπατος αρουραίου προωθεί αντικαρκινική κυτταροτοξικότητα μέσω του υποδοχέα NKG2D.