Abstract

Ανθρώπινο επιδιδυμίδα εκκριτική πρωτεΐνη 4 (HE4) είναι μία εκκρινόμενη γλυκοζυλιωμένη πρωτεΐνη που κωδικοποιείται από το WAP τεσσάρων δισουλφίδιο πεδίο πυρήνα 2 (

WFDC2

) γονίδιο, που βρίσκεται σε ένα τμήμα του χρωμοσώματος 20 που συχνά ενισχύεται σε πολλούς καρκίνους. Η μελέτη αυτή αποσκοπεί στον προσδιορισμό του ορού προγνωστική αξία HE4 σε μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC), ακολουθώντας τις κατευθυντήριες γραμμές για παρατήρηση. δείγματα ορού από 346 διαδοχικούς ασθενείς με ιστολογικά αποδεδειγμένη και είχαν λάβει προηγουμένως θεραπεία των ασθενών με NSCLC και 41 με καλοήθη πνευμονοπάθεια συλλέχθηκαν στο Μονπελιέ-Νιμ Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο. έρευνες επεξεργασία εκτελείται για να καθορίσει τα χαρακτηριστικά της νόσου και αλγόριθμους επεξεργασίας ήταν σύμφωνες με τις διεθνείς οδηγίες. επίπεδα HE4 στον ορό μετρήθηκαν με μια δοκιμασία ELISA (Fujirebio Diagnostics) που χρησιμοποιεί δύο μονοκλωνικά αντισώματα, 2Η5 και 3D8, ενάντια στην περιοχή C-WFDC της HE4. Η περιοχή κάτω από την καμπύλη ROC (δηλαδή, η συνολική ικανότητα της HE4 να διακρίνουν μεταξύ των ελέγχων και των ασθενών) ήταν 0,78 (95% διάστημα εμπιστοσύνης [CI], 0,738 έως 0,821? Τεστ z

P

& lt? 0,0001). επίπεδα ορού HE4 ήταν σημαντικά υψηλότερη στους ασθενείς με χειρότερη κατάσταση απόδοσης, προχωρημένο στάδιο TNM και θετική κομβικό κατάσταση. Στο μοντέλο Cox, η συνολική επιβίωση ήταν μικρότερη σε ασθενείς με υψηλή προεπεξεργασίας HE4 στον ορό (πάνω από 140 pmol /L) από ό, τι σε ασθενείς με επίπεδο Η4 ορό ≤ 140 pmol /L [διάμεση επιβίωση: 17,7 εβδομάδες (95% CI, 11,9 έως 24,9) και 46,4 εβδομάδες (95% CI, 38,6 έως 56,3), αντίστοιχα? αναλογία κινδύνου: 1.48 (95% CI, 1,12 έως 1,95) για την υψηλή HE4? ρυθμίζεται

P

= 0,0057]. επίπεδο HE4 υψηλής ορού κατά τη διάγνωση είναι μια ανεξάρτητη καθοριστικός παράγοντας κακής πρόγνωσης σε NSCLC

Παράθεση:. Lamy P-J, Plassot C, Pujol J-L (2015) Ορός HE4: Ένα ανεξάρτητο προγνωστικό παράγοντα στον μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα. PLoS ONE 10 (6): e0128836. doi: 10.1371 /journal.pone.0128836

Ακαδημαϊκό Επιμέλεια: Ramon Andrade de Mello, Πανεπιστήμιο του Algarve, Πορτογαλία

Ελήφθη: 28, Νοεμβρίου του 2014? Αποδεκτές: 30 του Απρίλη, 2015? Δημοσιεύθηκε: 1 Ιούν 2015

Copyright: © 2015 Lamy et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. Η μελέτη χρηματοδοτήθηκε από την Fujirebio Diagnostics. HE4 δοκιμασίες κιτ δόθηκαν από Fujirebio Diagnostics. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Pierre-Jean Lamy έχει λάβει αμοιβές από την Fujirebio Diagnostics. Η μελέτη χρηματοδοτήθηκε από την Fujirebio Diagnostics. HE4 δοκιμασίες κιτ δόθηκαν από Fujirebio Diagnostics. Δεν υπάρχουν περαιτέρω διπλώματα ευρεσιτεχνίας, τα προϊόντα για την ανάπτυξη ή την εμπορία προϊόντων που να δηλώνουν. Αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων σε όλες τις PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών, όπως περιγράφεται λεπτομερώς σε απευθείας σύνδεση στον οδηγό για τους συγγραφείς.

Εισαγωγή

Ο εντοπισμός των προγνωστικών καθοριστικούς παράγοντες της μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC) είναι ένας σημαντικός στόχος και στις δύο κλινικές δοκιμές και καθημερινή πρακτική [1,2,3,4]. Σε κλινικές δοκιμές, θα πρέπει να ληφθούν υπόψη προγνωστικές συν-μεταβλητές στον αναλύσεις επιβίωσης. Για παράδειγμα, σε μια τυχαιοποιημένη μελέτη, η δήλωση ότι μια διαφορά στην επιβίωση σχετίζεται με την επίδραση της θεραπείας υπό μελέτη πρέπει να υποστηρίζεται από ένα μοντέλο αναλογικού κινδύνου που αποδεικνύουν ότι αυτή η επίδραση δεν εξαρτάται από γνωστούς προγνωστικούς καθοριστικούς παράγοντες, όπως η νόσος στάδιο ή την απόδοση καθεστώτος [5,6]. Στην καθημερινή πρακτική, θεραπευτική διαδικασία λήψης αποφάσεων μπορεί να επηρεαστεί από προγνωστικές μεταβλητές [4]. Οι πιο ευρέως αποδεκτή προγνωστικό καθοριστικούς παράγοντες στον NSCLC είναι το στάδιο της νόσου, κομβική θέση και κατάσταση απόδοσης [7]. Αρκετά άλλα χαρακτηριστικά, ιδιαίτερα αρσενικό φύλο, την ηλικία, μη πλακώδη ιστολογία, έχουν ποικιλοτρόπως αναφερθεί ως αρνητικοί προγνωστικοί παράγοντες [2,8]. Πρόσφατα, μοριακοί βιοδείκτες, όπως οι μεταλλάξεις του EGFR και μετατοπίσεων ALK, έχουν εισαχθεί ως theragnostic δείκτες του αδενοκαρκινώματος του πνεύμονα.

Ανθρώπινο επιδιδυμίδα εκκριτική πρωτεΐνη 4 (HE4) είναι μια εκκρινόμενη γλυκοζυλιωμένη πρωτεΐνη που ανήκει στην WFDC (που ονομάζεται προηγουμένως WAP ) οικογένεια. WAP τομέα τέσσερις-δισουλφίδιο πυρήνα 2 (

WFDC2

), το γονίδιο που κωδικοποιεί HE4, βρίσκεται στο χρωμόσωμα 20, σε ένα τμήμα συχνά ενισχύεται σε πολλούς καρκίνους (μαστού, των ωοθηκών, του παχέος εντέρου, του παγκρέατος, και πνεύμονες) [9 ]. Άλλες πρωτεΐνες σε αυτήν την οικογένεια περιλαμβάνουν εκκριτικά Leukocyte πεπτιδάση Inhibitor, Elafin, και PS20 [10]. Τα μέλη της οικογένειας WFDC χαρακτηρίζονται από την παρουσία ενός ή περισσοτέρων WFDC περιοχές περίπου 50 αμινοξέα σε μήκος τα οποία περιέχουν οκτώ εντόνως διατηρημένα υπολείμματα κυστεϊνης συνδεδεμένα με τέσσερις δισουλφιδικούς δεσμούς [11]. HE4 είναι ένας αναστολέας πρωτεάσης, που ταυτοποιήθηκε στο επιθήλιο της επιδιδυμίδας και εμπλέκεται στην ωρίμανση του σπέρματος [12]. Η πρωτεΐνη εμφανίζει χαρακτηριστικά μιας εκκριτική πρωτεΐνη, με ένα πεπτίδιο σήματος που ακολουθείται από ένα μικρό (περίπου 10 kDa), όξινη (ρΐ 4.3), και πλούσια σε κυστεΐνη πολυπεπτίδιο [12]. Ο ρόλος του σε άλλους ιστούς παραμένει ασαφής. Έχει προταθεί ότι μπορεί να συμμετέχουν στις έμφυτη ανοσία άμυνες της αναπνευστικής οδού, της ρινικής και της στοματικής κοιλότητας και στην ανάπτυξη του αδενοκαρκινώματος του πνεύμονα [13]. Επιπλέον, HE4 υπερεκφράζεται στον καρκίνο των ωοθηκών, ιδιαίτερα σε ορώδες, σαφείς κυττάρων και endometroid επιθηλιακών καρκινωμάτων των ωοθηκών [14], και εκκρίνεται νωρίς στον ορό των ασθενών με καρκίνο των ωοθηκών [15]. Αρκετές προσπάθειες έχουν γίνει για να χαρακτηρίσει τον καρκίνο των ωοθηκών χρησιμοποιώντας πολυ-παραμετρικά μοντέλα γονιδιακής έκφρασης, συμπεριλαμβανομένων HE4 mRNA [16] [17]. Πολλές δημοσιεύσεις έχουν δείξει ότι τα επίπεδα του HE4 και CA125 στον ορό μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την έγκαιρη ανίχνευση υποτροπής του καρκίνου των ωοθηκών και την ταξινόμηση των ασθενών με πυελική μάζα όπως σε υψηλές ή χαμηλές κίνδυνο των ωοθηκών κακοήθειας [18,19]. ειδικότητα της είναι υψηλότερη από εκείνη του CA125, ειδικά σε αρχικό στάδιο της νόσου και σε προεμμηνοπαυσιακές γυναίκες [20]. επίπεδο στον ορό HE4 συσχετίζεται με το στάδιο του όγκου [21], η ηλικία και το κάπνισμα [22]. Σημαντικά, δεν είναι αυξημένα σε καλοήθεις γυναικολογικές παθήσεις και στην ενδομητρίωση [23]. Ωστόσο, HE4 δεν είναι ειδική για τον καρκίνο των ωοθηκών. Πράγματι,

WFDC2

εκφράζεται ισχυρά σε κανονικό ανθρώπινο τραχεία και τους σιελογόνους αδένες και, σε μικρότερο βαθμό, σε πνεύμονα, του προστάτη, της υπόφυσης, του θυρεοειδούς και των νεφρών. Μέτρια έως υψηλά επίπεδα έχουν επίσης ανιχνευθεί σε αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα και, περιστασιακά, στο στήθος, των μεταβατικών κυττάρων και του παγκρέατος [24]. Ιδιαίτερα, HE4 εκφράζεται στα περισσότερα αδενοκαρκινώματα πνεύμονα και σε σημαντικό αριθμό πλακώδους, μικρών κυττάρων και μεγάλου κυττάρου καρκινώματα του πνεύμονα, γεγονός που υποδηλώνει ότι μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως διαγνωστικό ή /και προγνωστικός παράγοντας να τελειοποιηθεί η τυπική παθολογική ανάλυση [13] . Πράγματι, σε αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα, κομβικών κατάσταση και η έκφραση HE4 είναι ανεξάρτητες προγνωστικοί παράγοντες ελεύθερη νόσου και συνολική επιβίωση [25]. Επιπλέον, οι συγκεντρώσεις της HE4 υψηλής ορού και υπεζωκοτική συλλογή προηγουμένως παρατηρηθεί σε NSCLC [26,27] και τρεις μελέτες πρότειναν ότι HE4 θα μπορούσε να είναι μια πιθανή διαγνωστική και προγνωστική δείκτη σε NSCLC [28,29,30].

ο σκοπός της μελέτης μας ήταν, επομένως να καθοριστεί η διαγνωστική και προγνωστική αξία του επιπέδου HE4 στον ορό χρησιμοποιώντας 346 δείγματα από μία βιοτράπεζα ορό αφιερωμένη στην επικύρωση των βιοδεικτών στον καρκίνο του πνεύμονα και μετά από την παρατήρηση (Αναφορά Συστάσεις για Tumor Marker Πρόγνωσης Σπουδών) κατευθυντήριες γραμμές [31 ].

Υλικά και Μέθοδοι

ασθενείς

Τα δείγματα ορού από 346 διαδοχικούς ασθενείς με ΜΜΚΠ που αναφέρονται στο Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο του Montpellier-Nîmes, Γαλλία, μεταξύ Ιανουαρίου 1995 και Δεκεμβρίου 1997 το χρησιμοποιήθηκαν για αυτή τη μελέτη. Αυτά τα δείγματα είναι μέρος ενός μεγάλου βιοτράπεζας (αριθμός Βιοτράπεζα BB-0033-00059-Certified AFNOR 96-900) που ξεκίνησε το 1990 για να συλλέξει δείγματα ορού από ασθενείς με ΜΜΚΠ με στόχο τον καθορισμό προοπτικά την προγνωστική επίδραση των νέων καρκινικών δεικτών ορού . Συγκεκριμένα, το πρωτόκολλο βιοτράπεζα ορίζεται τις κλινικές μεταβλητές που πρέπει να καταγράφονται, τα κριτήρια επιλεξιμότητας και οι στατιστικές μέθοδοι που πρέπει να χρησιμοποιούνται. Η μεθοδολογία δεν αλλάζουν με την πάροδο του χρόνου. Όλα τα δείγματα βιοτράπεζα συνδέονται με εκτενή κλινικά δεδομένα που καταγράφονται και προοπτικά τα δείγματα αποθηκεύονται στους-180 ° C (εις τριπλούν). Ωστόσο, αυτή η μελέτη ήταν αναδρομική, επειδή η απόφαση για τη δοκιμή HE4 έχει ληφθεί μόλις πρόσφατα. Αυτή η μελέτη αναθεωρήθηκε και εγκρίθηκε από το Διοικητικό κριτική ΜΠΕ Θεσμικών ονομάζεται «Comité d’Οργάνωση de la Recherche Translationnelle» (CORT). Σύμφωνα με τη γαλλική ρύθμιση, η συναίνεση για δευτερεύουσα χρήση ανθρώπινου βιολογικού υλικού είναι υπό νομικό καθεστώς της «μη διατύπωση αντιρρήσεων» (opt-out): Μετά τις πληροφορίες για νέα χρήση από τους ερευνητές, τα ανθρώπινα βιολογικά δείγματα μπορεί να χρησιμοποιηθεί εκτός από την περίπτωση της αντιπολίτευσης από τον δότη. Στη συνέχεια, ενημερώνουν συναίνεση αυτή δεν ελήφθη από τους ασθενείς, αλλά τους φακέλους των ασθενών /πληροφορίες ανώνυμα και de-εντοπίστηκαν πριν από την ανάλυση.

Μόνο δείγματα ορού από ασθενείς με ΜΜΚΠ ιστολογικά αποδεδειγμένη και είχαν λάβει προηγουμένως θεραπεία NSCLC χρησιμοποιήθηκαν για αυτή τη μελέτη. NSCLC καρκίνοι ταξινομήθηκαν σύμφωνα με την ιστολογική κατάταξη ΠΟΥ? Ωστόσο, η τελευταία αναθεώρηση σχετικά με τη νέα ταξινόμηση των αδενοκαρκινώματα δεν ελήφθη υπόψη [32] και το αδενοκαρκίνωμα θεωρήθηκε ως ένας γενικός υπο-ιστολογικός τύπος. κατάσταση απόδοσης εκτιμήθηκε με τη χρήση της Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG) βαθμολογία και το ποσοστό της απώλειας βάρους κατά τη διάρκεια των προηγούμενων τεσσάρων μήνες καταγράφηκε. Σταδιοποίηση διεξήχθη σύμφωνα με το

Ένωσης για

Διεθνούς Ελέγχου του Καρκίνου (UICC) μετάσταση στους λεμφαδένες όγκου (TNM) ταξινόμηση σε χρήση κατά τη στιγμή της διάγνωσης [33] και τον χάρτη Αμερικανικής Θωρακικής Εταιρείας της περιφερειακής πνευμονικής κόμβων [34 ]. Οι ακόλουθες έρευνες διεξήχθησαν: κλινική εξέταση, πρότυπο θώρακα Ακτινογραφία, αξονική τομογραφία (CT) του θώρακα, άνω κοιλιακή χώρα και τον εγκέφαλο, βρογχοσκόπηση, του ήπατος υπερηχογράφημα και σπινθηρογράφημα οστών. Mediastinoscopy διεξήχθη για να διαπιστωθεί η ιδιότητα κόμβου σε ασθενείς με μη μεταστατικό NSCLC, αλλά τα στοιχεία του μεσοθωρακίου διεύρυνση των λεμφαδένων στο στήθος CT εικόνες.

Έλεγχοι

Τα δείγματα ορού συλλέχθηκαν από 41 διαδοχικούς ασθενείς με μη κακοήθεις πνευμονικές ασθένειες (μολυσματικές ασθένειες, χρόνιες αποφρακτικές πνευμονοπάθειες και διάφορα). Οι ασθενείς στην ομάδα ελέγχου έχουν παρόμοια ηλικία μεσαίο (60 ετών) και φύλο σιτηρέσιο από τους ασθενείς στην ομάδα του καρκίνου του πνεύμονα.

Θεραπεία

Μια ιατρική επιτροπή αποτελούμενη από Χειρουργοί Θώρακα, οι γιατροί στο στήθος, ακτινολόγους, ακτινοθεραπευτές και ογκολόγων συζητηθεί ιατρικό ιστορικό του κάθε ασθενούς. Οι ασθενείς με σταδίου Ι-ΙΙ NSCLC ή χειρουργήσιμη νόσο ΙΙΙα υποβλήθηκε σε χειρουργική επέμβαση, με στόχο την επίτευξη πλήρους εκτομής. Οι ασθενείς με κατάσταση απόδοσης 2 και απομακρυσμένες μεταστάσεις (στάδιο IV) ή μεικτό μεσοθωρακίου συμμετοχή (φάση ΙΙΙΒ και ανεγχείρητο όγκο φάση ΙΙΙΑ) ήταν επιλέξιμες για την εγγραφή σε μια από τις δοκιμές της χημειοθεραπείας με σισπλατίνη-based (σισπλατίνη και ένα τρίτο φάρμακο γενιάς) που διεξάγεται στο Μονπελιέ Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο. Ταυτόχρονη ακτινοθεραπεία προτάθηκε σε ασθενείς με τοπικά προχωρημένη νόσο [5]. Ενεργό υποστηρικτική φροντίδα, συμπεριλαμβανομένης της παρηγορητικής θεραπείας με ακτινοβολία όταν χρειάζεται, δόθηκε σε ασθενείς με προχωρημένο στάδιο και η κακή κατάσταση απόδοσης. Η θεραπεία αποφασίστηκε με βάση την κλινική και βιολογική ρουτίνα ευρήματα και χωρίς γνώση του επιπέδου των δεικτών ορού. Ως εκ τούτου, η θεραπεία δεν θεωρήθηκε ως προγνωστικός μεταβλητή σε αυτή τη μελέτη.

Εργαστηριακές μέθοδοι

Ένα δείγμα αίματος συλλέχθηκε από κάθε ασθενή κατά τη διάγνωση και ο ορός διαχωρίστηκε και αποθηκεύτηκε στους -180 ° C έως ότου δοκιμαστεί. HE4 μετρήθηκε χρησιμοποιώντας την εμπορική ΕΙΑ μέθοδο (Fujirebio Diagnostics, Malvern, ΡΑ). Η παρούσα δοκιμή προορίζεται για χρήση με ορό και είναι ένα στερεάς φάσης, ανοσολογική μη-ανταγωνιστική με βάση την τεχνική της άμεσης σάντουιτς χρησιμοποιώντας δύο μονοκλωνικά αντισώματα ποντικού, 2Η5 και 3D8, έναντι δύο επιτόπων στον τομέα C-WFDC του HE4. HE4 παρούσα σε βαθμονομητές ή δείγματα προσροφάται σε επικαλυμμένα με στρεπταβιδίνη μικροπηγές με το βιοτινυλιωμένο αντίσωμα αντι-HE4 2Η5 κατά την διάρκεια της επώασης. Οι ταινίες στη συνέχεια πλύθηκαν και επωάστηκαν με HRP-σημασμένο αντι-HE4 mAB 3D8. Μετά την πλύση, ένα ρυθμισμένο /αντιδραστήριο υποστρώματος χρωμογόνου (υπεροξείδιο του υδρογόνου και 3, 3 ‘, 5, 5’ τετρα-μεθυλ-βενζιδίνης) προστίθεται σε κάθε φρεάτιο. Κατά την αντίδραση ενζύμου, εμφανίζεται μπλε χρώμα θα αναπτυχθεί εάν το αντιγόνο είναι παρόν. Η ένταση του χρώματος είναι ανάλογη προς την ποσότητα του HE4 στο δείγμα και προσδιορίζεται χρησιμοποιώντας ένα φασματοφωτόμετρο μικροπλάκας στα 405 nm μετά την προσθήκη του διαλύματος τερματισμού. Οι καμπύλες βαθμονόμησης (Cubic Spline) κατασκευάστηκαν για κάθε δοκιμή με τη γραφική αναπαράσταση της τιμής απορρόφησης έναντι της συγκέντρωσης για κάθε βαθμονομητή. Οι συγκεντρώσεις HE4 σε δείγματα ασθενών στη συνέχεια υπολογίζεται με βάση την καμπύλη βαθμονόμησης. Η δοκιμασία HE4 EIA μετράει συγκεντρώσεις Η4 μεταξύ 15 και 900 pM. Έχουμε ήδη επικυρωθεί το τεστ στο εργαστήριο μας ακολουθώντας τη μεθοδολογία COFRAC LAB GTA 04. Το όριο ανίχνευσης ήταν 4 pmol /L και το όριο ποσοτικού προσδιορισμού ήταν 8 pmol /L. Οι συντελεστές ενδο- και δια-δοκιμασίας διακύμανσης ήταν κάτω από 10%. Ορός νευρώνα-ειδική ενολάση (NSE) μετρήθηκε με τη χρήση της στερεάς φάσης δύο θέσεων ανοσοραδιομετρική δοκιμασία ELSA NSE (CIS bio international, Gif-sur-Yvette, Γαλλία) και ορό Cyfra 21-1 προσδιορίστηκε με τη μέθοδο της IRMA (βιο CIS International, Gif-sur-Yvette, France), όπως περιγράφηκε προηγουμένως [35]. Άλλες βιολογικές μεταβλητές που δοκιμάστηκαν σε αυτή τη μελέτη μετρήθηκαν πριν από οποιαδήποτε θεραπεία και ταυτόχρονα με τις τιτλοδοτήσεις των καρκινικών δεικτών (αλλά για HE4) σε ένα εργαστήριο που υλοποιούνται ορθής εργαστηριακής πρακτικής. Το ανώτερο όριο των φυσιολογικών τιμών ήταν 10 000 /ml για λευκοκύτταρα. Τα κατώτερα όρια των φυσιολογικών τιμών ήταν 32 g /l για τη λευκωματίνη και 135 mmol /L για το νάτριο του ορού.

Η στατιστική ανάλυση

λειτουργικού χαρακτηριστικού δέκτη (ROC) καμπύλες κατασκευάστηκαν χρησιμοποιώντας δύο ασθενών και επίπεδα ορού δείκτη ελέγχους »σε μια προσπάθεια να καθοριστεί η σχέση ευαισθησίας-ειδικότητας για κάθε δείκτη. Οι περιοχές κάτω από τις καμπύλες ROC υπολογίστηκαν [28]. ανάλυση της καμπύλης ROC πραγματοποιήθηκε με τη χρήση του στατιστικού λογισμικού MedCalc (Οστάνδη, Βέλγιο). Η σχέση ευαισθησία-εξειδίκευση προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας δείκτη Youden το J, που είναι η διαφορά μεταξύ της πραγματικής θετικού ποσοστού και του ποσοστό ψευδώς θετικών. Η κανονική (Gaussian) κατανομή των επιπέδων HE4 ορού ελέγχθηκε με τη χρήση της μη παραμετρικής δοκιμής Shapiro-Wilk για την ισότητα της συνεχούς, μονοδιάστατων μεταβλητών. Για HE4 στα δοκιμάζονται πληθυσμούς, η δοκιμή ήταν σημαντική, απορρίπτοντας έτσι την υπόθεση H0 (δηλαδή, αποδεικνύοντας ότι το επίπεδο HE4 στον ορό δεν διανεμήθηκε σύμφωνα με την Gaussian νόμο). Ως εκ τούτου, για να αναλυθεί η κατανομή των καρκινικών δεικτών σε υποομάδες ασθενών, τα αποτελέσματα εκφράστηκαν ως διάμεσοι και παραλλαγές που διατεταρτημοριακό εύρος [IR]. Μη παραμετρική στατιστική ανάλυση χρησιμοποιήθηκαν: οι διαφορές μεταξύ δύο ανεξάρτητες ομάδες προσδιορίστηκαν με τη χρήση της δοκιμής Mann Whitney U με τη διόρθωση Bonferroni για πολλαπλές συγκρίσεις? διαφορές σε περισσότερες από δύο ομάδες προσδιορίστηκαν με τη χρήση του Kruskal Wallis μονόδρομη ανάλυση της διακύμανσης. Η επιβίωση ορίζεται ως το διάστημα μεταξύ ημερομηνία δειγματοληψίας και την ημερομηνία θανάτου από καρκίνο (ειδική για τον καρκίνο επιβίωση). Οι ασθενείς στη ζωή και των ασθενών που πέθαναν από αιτίες που σχετίζονται με μη-καρκίνου είχαν λογοκριθεί. δεδομένα επιβίωσης επικαιροποιήθηκαν τον Φεβρουάριο του 2008. Η πιθανότητα επιβίωσης εκτιμήθηκε με τη μέθοδο Kaplan-Meier [30]. αναλύσεις μονής μεταβλητής επιβίωσης έγιναν με τη χρήση του Wilcoxon και log-rank τεστ και πολυμεταβλητή παλινδρόμηση με το μοντέλο του Cox, [31]. Ανάλυση μοντέλο του Cox, γράφτηκε από τον κωδικοποίησης ως Boolean δεδομένα όλων των μεταβλητών που έχει φθάσει σε επίπεδο 0,20 p με βάση τα αποτελέσματα της μονοπαραγοντική ανάλυση. Για κάθε μεταβλητή, η ανάλογη υπόθεση κινδύνου δοκιμάστηκε γραφικά. Επιβίωση αναλύθηκε χρησιμοποιώντας το πακέτο λογισμικού SAS.

Αποτελέσματα

Ορός HE4 σε ασθενείς με NSCLC και καλοήθη νόσο των πνευμόνων

Τα στοιχεία σχετικά με τα χαρακτηριστικά του πληθυσμού της δημογραφίας και της νόσου παρουσιάζονται στον Πίνακα 1. Ορός HE4 κυμάνθηκαν 26 356 pmol /L (μέση τιμή = 50 pmol /L) σε ασθενείς με καλοήθη νόσο των πνευμόνων (μάρτυρες) καθώς και από 33 να 861 (διάμεσος = 98 pmol /L) σε ασθενείς με NSCLC (Πίνακας 2) . Η περιοχή κάτω από την καμπύλη ROC (AUC), η οποία ποσοτικοποιεί την συνολική ικανότητα ενός δείκτη για τη διάκριση μεταξύ των ελέγχων και των ασθενών, ήταν 0,78 (95% διάστημα εμπιστοσύνης (CI) [0.74-0.82]) και ήταν στατιστικά διαφορετική από την μη διακριτική διχοτόμος (δοκιμή z:

P

& lt? 0,0001? Σχήμα 1). Εκτιμώμενη ευαισθησία HE4 vs ειδικότητας ανάλογα διαφορετικές cut-off παρουσιάζεται στην υποστήριξη των πληροφοριών (S1 πίνακα). Ο δείκτης Youden του J (διαφορά μεταξύ της πραγματικής θετικών και ψευδώς θετικό ποσοστό) ήταν 0,52 και συνδέθηκε με μια τιμή αποκοπής 53 pmol /L (95% CI [50-67]), που αντιστοιχεί σε μία ιδιαιτερότητα του 91% και ευαισθησία 61%. Το όριο αυτό έδειξε την καλύτερη σχέση ευαισθησία-εξειδίκευση σε ένα διαγνωστικό περιβάλλον.

Στατιστικά χρησιμοποιώντας δύο-ουρά Ζ-τεστ.

Η

Η

Συσχέτιση με χαρακτηριστικά κλινικο-παθολογικές επίπεδα

Ο ορός HE4 διέφερε σημαντικά ανάλογα με την κατάσταση απόδοσης (p & lt? 0,0001), το στάδιο TNM (p & lt? 0,0001), κομβικό κατάσταση (p = 0,047) και απώλεια βάρους (p = 0.0001) (Σχήμα 2). επίπεδα ορού HE4 και Cyfra 21-1 ήταν ασθενώς συσχετίζονται (συντελεστής r του Spearman = 0,31, ρ & lt? 0.0001) Δεν παρατηρήθηκε διαφορά στις τιμές HE4 βρέθηκε στις τρεις ιστο-παθολογική υποομάδες (p = 0,1325, τα δεδομένα δεν φαίνονται)

Τα επίπεδα ορού HE4 διέφερε σημαντικά ανάλογα με την κατάσταση απόδοσης (Α), το στάδιο TNM (Β) και κομβικά κατάσταση (C) και απώλεια βάρους (D)

Η

HE4 και την επιβίωση

Κατά το χρόνο της ανάλυσης, με ελάχιστη παρακολούθηση τεσσάρων ετών και δύο μήνες, 320 θάνατοι (92%) είχαν καταγραφεί από τα οποία 302 (87,3%) έχουν καρκίνο. Επτά ασθενείς (2,0%) χάθηκαν κατά την παρακολούθηση και τη διάμεση επιβίωση του συνόλου του πληθυσμού ήταν 36,4 εβδομάδες (30 έως 45,6 εβδομάδες). στάδιο TNM και κομβικά κατάσταση διαχωρίστηκαν μεταξύ τους (T1-2 έναντι T3-4 και N0-1 έναντι N2-3 αντίστοιχα) για να συμμορφωθούν με την υπόθεση αναλογικών κινδύνων. Τα βιολογικά και κλινικά χαρακτηριστικά με σημαντική προγνωστική ισχύ, με βάση τις μονοδιάστατες αναλύσεις, παρατίθενται στον Πίνακα 3. Μεταξύ αυτών, υπήρχαν πολλά γνωστά προγνωστικών καθοριστικούς παράγοντες, συμπεριλαμβανομένων Cyfra 21-1 [36]. Ορός HE4 αναλύθηκε χρησιμοποιώντας δύο διαφορετικά κατώτατα όρια: το 53 pmol /L διαγνωστική αποκοπής και 140 pmol /L, διότι αυτό είναι το πιο ευρέως χρησιμοποιούμενο cut-off στη βιβλιογραφία. Η πολυπαραγοντική ανάλυση παρουσιάζεται στην υποστήριξη των πληροφοριών S2 πίνακα. Στο μοντέλο αναλογικών κινδύνων Cox, οι ανεξάρτητοι καθοριστικούς παράγοντες μιας κακής έκβασης ήταν προχωρημένο στάδιο, κακή φυσική κατάσταση, απώλεια βάρους, υψηλή λευκοκύτταρα μετράνε και το επίπεδο της NSE, Cyfra 21-1 ή HE4 (Σχήμα 3) υψηλής ορό. Ασθενείς με επίπεδο προ-επεξεργασίας HE4 ορού μεγαλύτερη από 140 pmol /L είχαν μικρότερη συνολική επιβίωση σε σύγκριση με τους ασθενείς με το επίπεδο προ-επεξεργασίας ≤ 140 pmol /L. Συγκεκριμένα, η διάμεση επιβίωση ήταν 17,7 εβδομάδες (95% CI, 11,9 να 24.9) για ασθενείς με HE4 στον ορό υψηλότερο από 140 pmol /L και 46,4 εβδομάδες (95% CI, 38,6 να 56,3) για ασθενείς με ορό HE4 ≤ 140 pmol /L [HR: 1,48 (95% CI, 1,12 έως 1,95) για την υψηλή HE4? προσαρμοσμένη

P

= 0,0057] (Σχήμα 4)

HR:. αναλογία κινδύνου? NSE: νευρώνα ενολάση? PS: κατάσταση απόδοσης

Η

Καμπύλες κατά Kaplan Meier κατασκευάστηκαν λαμβάνοντας υπόψη το σύνολο της επιβίωσης του πληθυσμού. MOS: διάμεση συνολική επιβίωση? CI: διάστημα εμπιστοσύνης

Η

Συζήτηση

Αυτή η μελέτη δείχνει ότι τα υψηλά επίπεδα HE4 στον ορό σχετίζονται με κακή πρόγνωση NSCLC καθώς οι ασθενείς με υψηλό επίπεδο στον ορό της HE4 πριν από τη θεραπεία είχε μικρότερη επιβίωση. Γνωστά δυσμενή κλινικά χαρακτηριστικά, όπως προχωρημένο στάδιο, κακή φυσική κατάσταση και θετική κομβική θέση, συνδέθηκαν με υψηλό επίπεδο HE4. Δεδομένου ότι αυτά τα χαρακτηριστικά της νόσου είναι επίσης σημαντικοί προγνωστικοί καθοριστικούς παράγοντες, θα μπορούσε κανείς να υποθέσει ότι η HE4 δρα ως υποκατάστατο μεταβλητή όταν η επιβίωση αναλύεται. Ωστόσο, στο μοντέλο Cox, υψηλό επίπεδο HE4 ήταν ανεξάρτητος προγνωστικός καθοριστικός. Εκτός από το γεγονός ότι η HE4 θα μπορούσε να διαχωρίζουν μια υπο-ομάδα των ασθενών με μικρότερη επιβίωση, προγνωστική αξία του δείχνει ότι η έκκριση HE4 μπορεί να παίζουν ρόλο στην εξέλιξη NSCLC, όπως στον καρκίνο των ωοθηκών [37].

HE4 είναι ένας όγκος δείκτης διερευνηθεί κυρίως σε ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών. Αυτή η γλυκοπρωτεΐνη είναι επίσης ένα συστατικό του έμφυτου ανοσοποιητικού συστήματος των πνευμόνων και της αναπνευστικής οδού και προηγούμενες έρευνες πρότεινε ότι HE4 στον ορό θα μπορούσε να είναι ένας δείκτης της NSCLC [27,28,29,38].

Είμαστε σε σύγκριση επίπεδο HE4 σε διάγνωση σε ασθενείς με ΜΜΚΠ ή των πνευμόνων καλοήθεις παθήσεις. Η καμπύλη ROC, κατασκευάζεται χρησιμοποιώντας τη σχέση ευαισθησίας-ειδικότητας, έδειξε μια καλή ακρίβεια. Στο βέλτιστο σημείο αποκοπής των 53 pmol /L, η οποία καθορίζεται με το δείκτη J του Youden, η HE4 στον ορό παρουσίασε ευαισθησία 91% και ειδικότητα 61%. Τα αποτελέσματά μας είναι λίγο διαφορετικά από εκείνα που αναφέρονται στη μελέτη από Iwahori et al. [28] ο οποίος βρήκε ένα ROC-AUC του 0,988. Η διαφορά αυτή εξηγείται από διάφορους πληθυσμούς ελέγχου που χρησιμοποιούνται στις δύο μελέτες (υγιούς πληθυσμού στο έργο με Iwahori κ.ά. και ασθενείς με καλοήθη πνευμονοπάθεια στη μελέτη μας). Το ROC-AUC 0,78 σε μεγάλο μέρος του πληθυσμού μας θα μπορούσε να θεωρηθεί ως πιο πιθανή σε ένα διαγνωστικό περιβάλλον. Η υποτιθέμενη χρησιμότητα της HE4 στον ορό για την επιλογή των υποψηφίων για προγράμματα προσυμπτωματικού ελέγχου υπολογίζονται-τομογραφία χαμηλής δόσης αξίζει περαιτέρω μελέτης.

Έχει ήδη προταθεί ότι η ευαισθησία HE4 στον ορό διαφέρει μεταξύ των δύο φύλων [38]. Η υπερ-εκπροσώπηση των αρρένων ασθενών στη μελέτη μας (89,9%) αποκλείει οποιαδήποτε επιβεβαίωση αυτής της παρατήρησης. Η αναλογία των SQC προς μη-SQC στη μελέτη μας αντικατοπτρίζει την ταξινόμηση του καρκίνου του πνεύμονα σε μη επιλεγμένες ευρωπαϊκές Καυκάσιο πληθυσμό. Επιπρόσθετες μελέτες σε άλλους πληθυσμούς που αντανακλά με μεγαλύτερη ακρίβεια το ρεύμα επιδημιολογία NSCLC (δηλαδή, η αυξανόμενη συχνότητα εμφάνισης αδενοκαρκινώματος και του καρκίνου του πνεύμονα στις γυναίκες) απαιτούνται. Προσοχή πρέπει να δοθεί στην επίδραση της ηλικίας και η νεφρική λειτουργία στα επίπεδα ορού HE4 σε μελλοντικές μελέτες.

Η μελέτη μας προοπτικά ανέλυσε τις βιολογικές και κλινικές μεταβλητές σε 346 ασθενείς με ΜΜΚΠ που αναφέρονται στο ίδρυμα μας με μια ελάχιστη παρακολούθηση της τέσσερα χρόνια και δύο μήνες. Αυτά τα αποτελέσματα να ενισχύσει την υποτιθέμενη χρησιμότητα αυτής της νέας προγνωστικός δείκτης και η σχετική θέση του σε σχέση με το κλειδί και χρησιμοποιούνται σήμερα μεταβλητών (δηλαδή, κατάσταση απόδοσης, το στάδιο TNM και άλλους δείκτες, όπως Cyfra 21-1 και NSE). Cyfra 21-1, ένα περιγραφεί εκτενώς δείκτη NSCLC, ήταν ταυτόχρονα αξιολογήθηκε σε αυτή τη μελέτη και τα υψηλά προ-επεξεργασίας επίπεδο Cyfra 21-1 θεωρήθηκε ένας ανεξάρτητος προγνωστικός δείκτης. Οι σύμφωνες αναλογίες κινδύνου για το υψηλό επίπεδο Cyfra 21-1 σε αυτό το έργο (1.646? 95% CI, 1,283 – 2,113) και στο μεγαλύτερο πληθυσμό (1,41) μιας μελέτης που δημοσιεύθηκε στο παρελθόν υποστηρίξει την αξιοπιστία αυτών επιβίωσης αναλύσεις [39].

Εν κατακλείδι, ένα επίπεδο HE4 υψηλής ορού κατά τη διάγνωση είναι μια ανεξάρτητη καθοριστικός παράγοντας κακής πρόγνωσης με NSCLC.

Υποστήριξη Πληροφορίες

πίνακα S1. Εκτιμώμενη ευαισθησία HE4 vs ειδικότητα

doi:. 10.1371 /journal.pone.0128836.s001

(DOC)

S2 πίνακα. Πολυπαραγοντική ανάλυση

doi:. 10.1371 /journal.pone.0128836.s002

(DOC)

Ευχαριστίες

Η μελέτη χρηματοδοτήθηκε από την Fujirebio Diagnostics. Οι συγγραφείς ήθελα να ευχαριστήσω τον καθηγητή Jean Pierre Daurès, ανώτερος στατιστικολόγος, για τις χρήσιμες συζητήσεις και είμαστε ευγνώμονες στην κ Viglianti που πραγματοποίησε την ανάλυση.