Αφηρημένο

Decorin, ένα πολυλειτουργικό μικρό πλούσιες σε λευκίνη εξωκυττάρια μήτρα πρωτεογλυκάνης, έχει αποδειχθεί ότι διαθέτουν ισχυρή αντικαρκινική δραστηριότητα. Ωστόσο, υπάρχει κάποια αβεβαιότητα αν διάφορα καρκινικά κύτταρα εκφράζουν ντεκορίνη εκτός από μη κακοήθη στρωματικά κύτταρα. Σε αυτή τη μελέτη διευκρίνισε έκφρασης ντεκορίνης από ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα κύστης και

in vivo

και

in vitro

. Επιπλέον, η επίδραση του αδενοϊού μεσολάβηση έκφρασης ντεκορίνης σε ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα κύστης

in vitro

εξετάστηκε. Δείξαμε την πρώτη χρήση της τράπεζας δεδομένων διαθέσιμες στο κοινό GeneSapiens που ντεκορίνη γονιδιακή έκφραση είναι παρούσα σε φυσιολογικά και κακοήθη ανθρώπινων ιστών ουροδόχου κύστης. Ωστόσο, όταν εφαρμόζονται in situ υβριδισμό με RNA ανιχνευτές επισημασμένο με διγοξιγενίνη για ντεκορίνη σε δείγματα ανθρώπινου ιστού καρκινώματος κύστης προέρχεται από μια μεγάλη ομάδα ασθενών ριζική κυστεκτομή (n = 199), μπορούμε απερίφραστα απέδειξαν ότι επεμβατικές και μη επεμβατικές κύτταρα καρκινώματος της ουροδόχου κύστης εντελώς στερούνται ντεκορίνη mRNA. Τα καρκινικά κύτταρα ήταν επίσης αρνητικά για ντεκορίνη ανοσοαντιδραστικότητα. Αντ ‘αυτού, ντεκορίνη έκφραση εντοπίστηκε μόνο στο αρχικό μη κακοήθεις περιοχές στρωματικών ιστού της ουροδόχου κύστης. Σύμφωνα με τα πιο πάνω αποτελέσματα, τα ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα ουροδόχου κύστης

in vitro

ήταν επίσης αρνητικά για έκφραση ντεκορίνης όπως φαίνεται από RT-qPCR αναλύσεις. Η έλλειψη έκφρασης ντεκορίνης από τα καρκινικά κύτταρα κύστης αποδειχθεί ότι δεν είναι λόγω της μεθυλίωσης της περιοχής εγγύς υποκινητή του γονιδίου ντεκορίνης. Όταν τα καρκινικά κύτταρα της ουροδόχου κύστης επιμολύνθηκαν με ένα φορέα αδενοϊού ντεκορίνη, τον πολλαπλασιασμό τους μειώθηκε σημαντικά. Συμπερασματικά, έχουμε δείξει ότι τα ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα κύστης είναι εντελώς άνευ έκφρασης ντεκορίνης. Έχουμε δείξει επίσης ότι αδενοϊό μεσολαβούμενη μεταγωγή γονιδίου ντεκορίνης των ανθρώπινων κυτταρικών γραμμών καρκίνου της ουροδόχου κύστης αξιοσημείωτα αναστέλλει τον πολλαπλασιασμό τους. Έτσι, ντεκορίνη παράδοσης γονιδίου προσφέρει νέες δυνατότητες θεραπευτικά εργαλεία σε ουροφόρων κακοήθειες

Παράθεση:. Sainio Α, Nyman Μ, Lund R, Vuorikoski S, Bostrom P, Laato M, et al. (2013) Έλλειψη Decorin Έκφραση από ανθρώπινα κύτταρα του καρκίνου της ουροδόχου κύστης Προσφορές Νέα εργαλεία στη θεραπεία της ουροθηλιακά Κακοήθειες. PLoS ONE 8 (10): e76190. doi: 10.1371 /journal.pone.0076190

Επιμέλεια: Yves St-Pierre, INRS, Καναδάς

Ελήφθη: 13 του Ιούνη 2013? Αποδεκτές: 23 Αύγ. 2013? Δημοσιεύθηκε: 11, Οκτωβρίου, 2013

Copyright: © 2013 Sainio et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Οικονομικά αυτή μελέτη αυτή υποστηρίχθηκε από την Ιατρική Ταμείου Έρευνας (EVO) του Πανεπιστημιακού Νοσοκομείου Turku, Καρκίνος Ιδρύματα της Νοτιο-Δυτικής Φινλανδίας, Ίδρυμα Ida Montin, Oskar Öflunds Stiftelse, η φινλανδική Πολιτιστικό Ίδρυμα /Varsinais-Suomi Περιφερειακό Ταμείο, Biocenter Φινλανδία, Ακαδημία της Φινλανδίας, και το Πανεπιστήμιο του Turku. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Σήμερα αντιλαμβανόμαστε ότι εξωκυττάριας ουσίας (ECM) μακρομόρια δεν αποτελούν μόνο ένα αδρανές χώρο γεμίζοντας μικροπεριβάλλον γύρω από τα κύτταρα, αλλά δρουν ως μια δυναμική σήματα δημιουργίας δομής για τον έλεγχο της συμπεριφοράς των κυττάρων [1]. Πράγματι, η ECM και τα συστατικά του, συμπεριλαμβανομένου ενός μικρού πλούσιες σε λευκίνη πρωτεογλυκανών ντεκορίνης [2], [3] είναι τώρα γνωστό ότι παίζουν έναν κεντρικό ρόλο σε μία ποικιλία φυσιολογικών και παθολογικών διαδικασιών μέσω ικανότητά τους να ρυθμίζουν βασικά κυτταρικά γεγονότα, όπως πρόσφυσης, μετανάστευση, πολλαπλασιασμό και την απόπτωση [4].

Μικρές πλούσιες σε λευκίνη πρωτεογλυκάνες (SLRPs) σχηματίζουν ένα γονίδιο οικογένεια πέντε υποκατηγορίες που αποτελείται από 18 μέλη, συμπεριλαμβανομένων ντεκορίνη, το πρωτότυπο μέλος της οικογένειας, και στενός συγγενής του, διγλυκάνη [5] – [6]. Αναφορικά με ντεκορίνη, αρκετές παραλλαγές ματίσματος (Α1, Α2, Β-Ε) έχουν ταυτοποιηθεί στο επίπεδο του mRNA [7]. Decorin κανονικά αποτελείται από έναν πυρήνα γλυκοπρωτεΐνη με μοριακό βάρος περίπου 42 kDa και ένα ενιαίο χονδροϊτίνη /δερματάνης πλευρά θειική αλυσίδα. Στη βασική γλυκοπρωτεΐνη του υπάρχουν 10 πλούσιες σε λευκίνη επαναλήψεις (LRR), κάθε επανάληψη αποτελούμενη από 24 αμινοξέα και περιλαμβάνει μία α-έλικα και β-στροφή [2], [8]. Decorińs δομικά χαρακτηριστικά της επιτρέπουν να αλληλεπιδρά με έναν αριθμό άλλων πρωτεϊνών ECM, κυτοκίνες, αυξητικοί παράγοντες και οι υποδοχείς τους όπως ο υποδοχέας του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGFR), ΜΕΤ υποδοχέα (μεσεγχυματικά-επιθηλιακά μετάβαση), δηλαδή, ο υποδοχέας για παράγοντα ανάπτυξης ηπατοκυττάρου, υποδοχέα αυξητικού παράγοντα που μοιάζει με ινσουλίνη Ι (IGF-IR) και τα μέλη της οικογένειας υποδοχέα ErbB [8] – [10]. Μέσω αυτών των αλληλεπιδράσεων ντεκορίνη έχει ευέλικτο δράσεις τόσο για την υγεία και την ασθένεια

Ο ρόλος της ντεκορίνης στην εξέλιξη του καρκίνου και θεραπευτικές δυνατότητες του ως καταστολής όγκων των μεταστάσεων παράγοντα αποτέλεσε το επίκεντρο πολλών μελετών [10] – [11]. . Αρχικά, ντεκορίνη συνδέθηκε με τον καρκίνο όταν ανακαλύφθηκε ότι η ντεκορίνη /p53 ποντίκια διπλός knockout ανέπτυξαν όγκους ταχύτερα από τους ελέγχους [10]. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η διάσπαση του γονιδίου ντεκορίνης δεν οδηγεί σε αυθόρμητη ανάπτυξη των όγκων, αλλά η έλλειψη ντεκορίνης είναι ανεκτική για ογκογένεση [10]. Σε μετέπειτα μελέτες η έκφραση ντεκορίνης έχει βρεθεί να μειωθεί σε πολλές καρκίνων όπως του παχέος εντέρου [12], του προστάτη [13], και των ωοθηκών [14]. Επιπλέον, ο καρκίνος του μαστού χαμηλή έκφραση ντεκορίνης έχει αποδειχθεί ότι συνδέεται με μικρότερο χρόνο εξέλιξης και μια φτωχότερη επιβίωση [15]. Από την άλλη πλευρά, η παράδοση του γονιδίου ντεκορίνης ή πρωτεΐνη έχει αποδειχθεί ότι οδηγεί σε καθυστέρηση της ανάπτυξης διαφορετικών καρκίνων [16] – [18] μέσω διαφόρων μηχανισμών δράσης, όπως μέσω σύνδεσης σε υποδοχείς παράγοντα ανάπτυξης που αναφέρθηκαν παραπάνω και ρυθμίζοντας τους δραστηριότητα [11 ]. Πρόσφατα, έχουμε δείξει ότι οι διαφορετικοί τύποι των ανθρώπινων κυττάρων καρκίνου του μαστού στερούνται εντελώς mRNA ντεκορίνης [19]. Δείξαμε επίσης ότι η προσκόλληση, πολλαπλασιασμό και την απόπτωση των κυττάρων MCF-7 ανθρώπινα κύτταρα καρκίνου του μαστού μπορεί να επηρεαστεί από ντεκορίνη μεταγωγής [19].

Στον καρκίνο της ουροδόχου κύστης, η οποία είναι η 9

ου πιο κοινός καρκίνος διάγνωση παγκοσμίως [20], η έκφραση ντεκορίνης έχει προηγουμένως δειχθεί να μειωθεί [21] – [24]. Όπως ντεκορίνη δρα ως φυσικός ανταγωνιστής για IGF-IR σε νεοπλασίες, μειωμένη έκφραση του μπορεί να συμβάλλει στην αυξημένη δραστηριότητα του IGF-IR, οδηγώντας έτσι στην εξέλιξη της IGF-IR-εξαρτώμενων καρκίνων μέσω ενισχυμένης κυτταρικής κινητικότητα και εισβολή [23] – [24 ]. Είναι επίσης δυνατόν ότι η επίδραση κατά του όγκου ντεκορίνης επί καρκίνου της ουροδόχου κύστης διαμεσολαβείται μέσω ντεκορίνης που σχετίζεται ογκοκατασταλτικό γονίδιο mitostatin, των οποίων η δραστηριότητα είναι μειωμένη σε προχωρημένο καρκίνο της ουροδόχου κύστης ανακούφιση ανάπτυξη και εξάπλωση των νεοπλασματικών κυττάρων [25].

Αν και αρκετές μελέτες έχουν εξετάσει την έκφραση ντεκορίνης σε διάφορους καρκίνους συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου της ουροδόχου κύστης, υπάρχει κάποια αβεβαιότητα αν διαφορετικά καρκινικά κύτταρα που εκφράζουν ή όχι. Στην παρούσα μελέτη, εξετάσαμε την έκφραση ντεκορίνης από ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα κύστης και

in vivo

και

in vitro

. Εξετάσαμε επίσης την επίδραση των γονιδίων ντεκορίνης μεταγωγή στον πολλαπλασιασμό των ανθρώπινων καρκινικών κυττάρων κύστης

in vitro

.

Υλικά και Μέθοδοι

βάση δεδομένων

GeneSapiens

βάση δεδομένων που χρησιμοποιείται GeneSapiens να αξιολογήσει τα προηγουμένως δημοσιευθέντα αποτελέσματα όσον αφορά την έκφραση ντεκορίνης σε φυσιολογικούς και κακοήθεις ανθρώπινους ιστούς [26]. Αυτή η βάση δεδομένων (https://www.genesapiens.org/) καλύπτει τα σχετικά πρότυπα γονιδιακής έκφρασης για 17 330 γονίδια σε όλες τις σχολιασμένη φυσιολογικά και παθολογικά δείγματα 9783 ανθρώπινου ιστού από τις δημόσια διαθέσιμες πειράματα μικροσυστοιχιών Affymetrix. Στη βάση δεδομένων GeneSapiens υπάρχουν πληροφορίες για 35 διαφορετικές επιθηλιακά καρκινώματα

in vivo

. Για τη μελέτη αυτή, χρησιμοποιήσαμε την έκφραση ντεκορίνης από 174 δείγματα που αντιπροσωπεύουν την ανθρώπινη καρκίνο της ουροδόχου κύστης και σε σύγκριση με τα δεδομένα που προέρχονται από 20 δείγματα φυσιολογικού ανθρώπινου ιστού της ουροδόχου κύστης.

δείγματα όγκων

δεοντολογική έγκριση για τη χρήση της κλινικής το υλικό αυτής της μελέτης δόθηκε από την επιτροπή δεοντολογίας του νοσοκομείου περιοχή της νοτιοδυτικής Φινλανδίας. Η Επιτροπή Δεοντολογίας παραιτηθεί από την ανάγκη για γραπτή συγκατάθεση. δείγματα καρκινικού ιστού της ουροδόχου κύστης προήλθαν από 199 ασθενείς με ριζική κυστεκτομή λειτουργεί 1985-2005 στο Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο Turku, Turku, Φινλανδία. Τα παθολογικά χαρακτηριστικά των ασθενών παρουσιάζονται στον πίνακα 1. μικροσυστοιχίες ιστών (TMA) κατασκευάστηκαν με την απόκτηση 3 εκπρόσωπος πυρήνες από το δότη ριζική κυστεκτομή μπλοκ. Χρησιμοποιήσαμε 5 μm διαδοχικές τομές από τους κύβους ΤΜΑ για χρώση αιματοξυλίνης και ηωσίνης (ΗΕ), in situ υβριδισμού (ISH) και ανοσοϊστοχημεία (IHC). Η χρήση των δειγμάτων είχε την έγκριση της τοπικής επιτροπής δεοντολογίας.

Η

Decorin in situ υβριδισμού

Πραγματοποιήσαμε ντεκορίνη ISH σε όλα τα τμήματα TMA ανιχνεύοντας τα δείγματα με ανθρώπινη αντίθετης φοράς ντεκορίνη και νόημα μονόκλωνου RNA ριβοανιχνευτές, όπως περιγράφηκε προηγουμένως λεπτομερώς [27].

Ανοσοϊστοχημεία

Η IHC αναλύσεις έγιναν για ντεκορίνη με ένα αντίσωμα κουνελιού πολυκλωνικό (H-80, Santa Cruz Inc., Santa Cruz, CA, αραίωση 1:400) και για διγλυκάνη με κατσίκα πολυκλωνικό αντίσωμα (L-15, Santa Cruz Inc., Santa Cruz, CA, αραίωση 1:200) σε όλα τα τμήματα ΤΜΑ όπως περιγράφηκε προηγουμένως [27]. Η ανοσοχρώση για Ki-67 πραγματοποιήθηκε όπως περιγράφεται παρακάτω στο τμήμα για αδενοϊό μεσολαβούμενη μεταγωγή ντεκορίνη.

RT-qPCR για ντεκορίνη

Τρεις ανθρώπινο καρκίνο της ουροδόχου κύστεως κυτταρικές σειρές RT-4, 5637, και Τ24 αγοράστηκαν από την American Type Culture Collection (ATCC). Αυτές οι κυτταρικές σειρές χρησιμοποιήθηκαν για ανάλυση RT-qPCR για ντεκορίνη. Όλες οι κυτταρικές γραμμές διατηρήθηκαν σε τροποποιημένο μέσο Dulbecco Eagle (ϋΜΕΜ? Gibco, Paisley, Scotland) που περιέχει 10% ορό εμβρύου βοός (FBS? Biochrom AG, Βερολίνο, Γερμανία), πενικιλλίνη (100 IU /ml) και στρεπτομυκίνη (100 μg /ml) (Sigma, Saint Louis, Missouri, USA), και αναπτύχθηκαν στους 37 ° C με 5% CO

2. Τα κύτταρα τρυψινοποιήθηκαν, ενώνονται, και το RNA εκχυλίστηκε χρησιμοποιώντας NucleoSpin RNA II -kit (Macherey-Nagel, Düren, Germany) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.

συγκεντρώσεις RNA από τις εκχυλίσεις γραμμή καρκινικών κυττάρων προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας ένα φασματοφωτόμετρο NanoDrop (ThermoScientific, Waltham, ΜΑ, USA) και η ακεραιότητα του RNA επιβεβαιώθηκε με ηλεκτροφόρηση σε πήκτωμα αγαρόζης. Ένα μg RNA ήταν DNase κατεργασία με RQ1 RNase-Free DNase (Promega, Madison, WI, USA) και αντίστροφη μεταγραφή σε cDNA χρησιμοποιώντας M-MLV αντίστροφη μεταγραφάση και ολίγο (dT) 15 εκκινητή (Promega, Madison, WI, USA) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. RT-qPCR διεξήχθη όπως περιγράφηκε προηγουμένως [19].

DNA κατάσταση μεθυλίωσης του υποκινητή ντεκορίνης

ολικό DNA εκχυλίστηκε από κυτταρικές γραμμές καρκίνου ουροδόχου κύστης (RT-4, 5637 και Τ24) χρησιμοποιώντας QIAamp® γονιδιωματικής κιτ DNA (QIAGEN GmbH, Hilden, Γερμανία) μετά το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Μεθυλιωμένο ϋΝΑ εμπλουτίστηκε με δύο διαφορετικές δοκιμασίες, πρώτα με την αυτοματοποιημένη MethylCap και στη συνέχεια με την αυτοματοποιημένη δοκιμασία MeDIP χρησιμοποιώντας επιγενετικές ρομπότ παρασκευή δείγματος SX-8G IP-Star® (Diagenode). Εν συντομία, το γενωμικό ΟΝΑ πρώτα κατακερματισμένη με Covaris S2 συσκευή υπερήχων. Τα μεθυλιωμένα θραύσματα DNA εμπλουτίστηκε με την πρωτεΐνη συνδέσεως Methyl δοκιμασία αντισώματος τομέα (MBD) συγγένειας βασιζόμενη δοκιμασία MethylCap ή 5-μεθυλκυτοσίνη βάση MeDIP ανοσοκαταβύθιση όπως περιγράφεται από τον κατασκευαστή (Diagenode). Προκειμένου να εξεταστεί η κατάσταση μεθυλίωσης ντεκορίνης γονίδιο υποκινητή, το μεθυλιωμένο DNA θραύσματα καθαρίστηκαν (κιτ καθαρισμού MinElute PCR, Qiagen) και υποβάλλεται σε ποσοτική PCR (SybrGreenER qPCR Supermix Universal, Invitrogen) χρησιμοποιώντας 7900HT Fast σύστημα RT-PCR (Applied Biosystems ). Κάθε δείγμα τρέχει σε τέσσερα αντίγραφα και τρεις περιοχές προαγωγού που καλύπτουν διαφορετικές ισομορφές ντεκορίνη (Α1, Α2, Β-Ε) εξετάστηκαν. Τα ολιγονουκλεοτίδια qPCR που χρησιμοποιούνται στην ανάλυση RT-PCR ήταν: 5′-CAG DCN_A1_F GTG TGG ΑΑΑ GGA GGA GG -3 ‘? DCN_A1_R 5’-ΟΤΟ TCA GCC GGA TTG TGT TC-3 ‘? DCN_A2_F 5’-AGT ΚΔ CAC CTG AAC ΚΔ GA -3 ‘? DCN_A2_R 5’-GAA AGC AGC ATC TTG ΚΔ GG -3 ‘? DCN_B-Ε _F 5’-CTG CAT CCC ACT CAC CCA ΑΑ -3 ‘? DCN_B-E_R 5’-TTC CTG ΑΤΟ ACC GCG ACT TC-3 ‘. loci ελέγχου που συνδέεται με GAPDH και υποκινητές γονιδίων TSH2B (Diagenode) χρησιμοποιήθηκαν ως αρνητικοί και θετικοί έλεγχοι για μεθυλίωση του DNA, αντίστοιχα. Η% ανάκτηση του μεθυλιωμένου DNA υπολογίστηκε με τον τύπο:% ανάκτηση input = 2; ((Ct εισροών-log αραίωση εισόδου) – CtMeDIP) * 100

αδενοϊό-μεσολαβούμενη μεταγωγή ντεκορίνη

Για τα πειράματα μεταγωγής, ένα ανασυνδυασμένο ανεπαρκώς αντιγραφόμενου φορέα αδενοϊού DCN-pxc1c-1 ήταν. μεταχειρισμένα όπως περιγράφηκε προηγουμένως [19]. Αυτός ο φορέας φιλοξενεί το cDNA ανθρώπινης ντεκορίνης (DCN) υπό τον έλεγχο του κυτταρομεγαλοϊού (CMV). Για την παρασκευή του φορέα, πλήρους μήκους cDNA ανθρώπινης ντεκορίνης [28] σε pGEM πλασμίδια κλωνοποιήθηκε και εισήχθη στο πλασμίδιο μεταφοράς pxcJL-1. Οι ιοί παρασκευάστηκαν με συνεπιμόλυνση ΗΕΚ293-κυττάρων με πλασμίδιο ραχοκοκαλιά pBHG10. Ως φορέα ελέγχου RAdlacZ, που φιλοξενεί το γονίδιο coli β-γαλακτοσιδάσης Ε (lacZ) κάτω από τον έλεγχο του CMV ΙΕ προαγωγέα χρησιμοποιήθηκε. Ο φορέας αυτός αγοράστηκε από τον ιό Vector Διευκόλυνσης, Κέντρο Βιοτεχνολογίας του Πανεπιστημίου του Turku, Turku, Φινλανδία. Ανθρώπινα κύστη καρκινικές κυτταρικές γραμμές RT4 και T24 χρησιμοποιήθηκαν για μεταγωγή σύμφωνα με ένα πρωτόκολλο όπως περιγράφηκε προηγουμένως [19] με μικρές τροποποιήσεις. Εν συντομία, τα καρκινικά κύτταρα διατηρήθηκαν σε Μέσο Eagle Τροποποιημένο Medium (DMEM) που περιέχει 10% ορό εμβρύου βοός (FBS), πενικιλλίνη (100 IU /ml) και στρεπτομυκίνη (100 μg /mL) και αναπτύχθηκαν στους 37 ° C με 5% CO

2. Τα κύτταρα τοποθετήθηκαν σε ένα φορείο θαλάμου 8 φρεάτων (Thermo Scientific, Rochester, ΝΥ, USA), 30 000 κύτταρα ανά φρεάτιο. Την επόμενη ημέρα, τα κύτταρα μεταδιεγείρονται με 10, 100 και 1000 pfu /κύτταρο του DCN-pxc1c-1 ή RAdlacZ σε ϋΜΕΜ που περιέχει 10% FBS. 24 ώρες μετά την μεταγωγή, το μέσο απομακρύνθηκε και αντικαταστάθηκε με φρέσκο. Τα κύτταρα στη συνέχεια αναπτύχθηκαν μέχρι την επόμενη ημέρα, οπότε αυτοί σταθεροποιήθηκαν με 4% παραφορμαλδεϋδη σε αλατόνερο ρυθμισμένο με φωσφορικό (PBS). Τέλος, ο δείκτης πολλαπλασιασμού ντεκορίνης σε μεταγωγή κυτταρικές γραμμές προσδιορίστηκε με ένα μονοκλωνικό αντίσωμα Ki-67 κουνελιού (30-9, Ventana Medical Systems /Roche Diagnostics, Tucson, Αριζόνα, αραίωση 1:200) [19]. Ki-67 θετικά κύτταρα μετρήθηκαν σε δέκα διαφορετικά οπτικά πεδία (μεγέθυνση 10 Χ) σε ντεκορίνης και lacZ επιμολυσμένα κυτταροκαλλιέργειες καθώς και μη επεξεργασμένες καλλιέργειες ελέγχου. Επιπλέον, ο αριθμός των Ki-67 θετικών κυττάρων /100 κύτταρα ανά πεδίο σε δέκα διαφορετικά πεδία μετρήθηκε να αποκλειστεί η πιθανότητα ότι το τροποποιημένο αριθμός κυττάρων σε διαφορετικούς πολιτισμούς θα είχε προκαλέσει στρέβλωση στα αποτελέσματα πολλαπλασιασμού. Η επίδραση της μεταγωγής ντεκορίνης επί καταμέτρηση των κυττάρων μετρήθηκε επίσης χρησιμοποιώντας ένα αιμοκυτταρόμετρο. Εν συντομία, τα κύτταρα τοποθετήθηκαν σε πλάκα 12 φρεατίων (Thermo Scientific, Rochester, ΝΥ, USA), 170 000 κύτταρα ανά φρεάτιο. Η επιμόλυνση έγινε όπως περιγράφεται παραπάνω και τα κύτταρα μετρήθηκαν 24 ώρες μετά την αντικατάσταση του μέσου με φρέσκο. Ο αριθμός των κυττάρων σε κάθε θεραπεία (Ad-DCN, Ad-LacZ ελέγχου και αρνητικός μάρτυρας) μετρήθηκε τρεις επαναλήψεις.

Η στατιστική ανάλυση

Μονήρη Μαθητών

t

δοκιμή απασχολήθηκε σε στατιστικές αναλύσεις. Η

σ

τιμές & lt?. 0.05 θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές

Αποτελέσματα

Σχετική ντεκορίνη γονιδιακής έκφρασης στον ανθρώπινο καρκίνο της ουροδόχου κύστης με βάση τα GeneSapiens στα δεδομένα silico transcriptomics

Η βάση δεδομένων GeneSapiens αποκάλυψε ότι η ντεκορίνη εκφράζεται σε αξιοσημείωτη επίπεδα σε σχεδόν όλα τα διαφορετικά είδη δειγμάτων ανθρώπινου ιστού καρκινώματος επιθηλιακά

in vivo

(τα δεδομένα δεν φαίνονται) [26]. Αυτό ίσχυε επίσης για τον καρκίνο της ουροδόχου κύστης του ανθρώπου, αν και σε κακοήθη κύστη έκφρασης ντεκορίνης ιστού μειώθηκε σε σύγκριση με φυσιολογικό ιστό ουροδόχου κύστης (Σχήμα 1).

ανάλυση Θηκόγραμμα της σχετικής γονιδιακής έκφρασης ντεκορίνης σε δείγματα ιστού φυσιολογικών και κακοήθων ανθρώπινων ουροδόχου κύστης χρησιμοποιώντας GeneSapiens

in silico

βάση δεδομένων (https://www.genesapiens.org/). Οι συνεχείς γραμμές στις εικόνες Θηκόγραμμα αντιπροσωπεύουν το μέσο επίπεδο έκφρασης ντεκορίνης στους ιστούς της ουροδόχου κύστης. Σημειώστε ότι σχετική έκφραση ντεκορίνης σημειώνεται και σε φυσιολογικά και κακοήθη δείγματα ιστού της ουροδόχου κύστης και ότι η σχετική έκφραση ντεκορίνης μειώνεται σε καρκίνο της ουροδόχου κύστης σε σύγκριση με φυσιολογικό ιστό ουροδόχου κύστης. Ανώτατο όριο μπαρ στις εικόνες κηλίδα κουτί δείχνουν τυπικές αποκλίσεις των αποτελεσμάτων περιλαμβάνονται στην βάση δεδομένων.

Η

Εντοπισμός του mRNA ντεκορίνης και ανοσολογική αντίδραση σε κακοήθη ανθρώπινα δείγματα ιστού της ουροδόχου κύστης

Οι αναλύσεις ISH με DIG -επισημασμένο RNA ανιχνευτές για ντεκορίνης αποδεικνύεται σαφώς ότι τα κύτταρα καρκινώματος ουροδόχου κύστεως επεμβατική ήταν εντελώς άνευ ντεκορίνης mRNA σε όλα τα δείγματα καρκίνου της ουροδόχου κύστης ιστού (Σχήμα 2). Το ίδιο εύρημα ήταν επίσης αληθές για τα δείγματα που αντιπροσωπεύουν μη επεμβατική in situ ανθρώπινο καρκίνο της ουροδόχου κύστης (Σχήμα 3). Σε επεμβατική και σε καρκινώματα της ουροδόχου κύστης situ, όλα ανιχνεύονται mRNA ντεκορίνης βρέθηκε να εντοπίζεται μόνο στην αρχική, μη κακοήθεις περιοχές στρωματικών (Σχήμα 2 και 3). Η IHC αναλύσεις των δειγμάτων επαλήθευσε ότι ανοσολογική ντεκορίνη κατοικούσαν στις ίδιες περιοχές με mRNA ντεκορίνης (Σχήμα 2 και 3). Σε αντίθεση, IHC ανάλυση των δειγμάτων για ένα άλλο μικρό πλούσιες σε λευκίνη πρωτεογλυκανών, δηλαδή διγλυκάνη, αποκάλυψε ότι ντεκορίνη αρνητικές περιοχές στις επεμβατικές ιστό καρκίνου της ουροδόχου κύστης ήταν θετικές για διγλυκάνη ανοσοαντιδραστικότητα (Σχήμα 4). Αυτό το εύρημα ήταν αληθές για σε δείγματα καρκίνου της ουροδόχου κύστης ιστού situ, καθώς και (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Οι αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν σε ολόκληρο τον πληθυσμό της μελέτης και οι αντιπροσωπευτικές εικόνες. Οι αστερίσκοι υποδεικνύουν περιοχές που κατοικούνται αποκλειστικά από τον καρκίνο της ουροδόχου κύστης κύτταρα. Πάνελ Α, D, G είναι αντιπροσωπευτικές εικόνες των διαδοχικών τομών του ίδιου δείγματος ιστού που αντιπροσωπεύουν επεμβατικές ανθρώπινου καρκίνου της ουροδόχου κύστης. χρώση Α HE. Δ ISH για ντεκορίνη. Θετική αντίδραση DIG στην ISH δείχνει το mRNA εντοπισμού ντεκορίνη μπορεί να δει κανείς σε μωβ. Γ IHC για ντεκορίνη. Καφέ χρώμα δείχνει ντεκορίνη θετική καλοήθεις περιοχές στρωματικών κυττάρων. Τμήματα της κανονικής (Β, Ε, Η) και κακοήθη (C, F, I) περιοχές ιστού της ουροδόχου κύστης (αστερίσκοι) που φαίνεται μεγεθύνεται από κάτω. Σημειώστε ότι επεμβατική ανθρώπινα κύτταρα καρκινώματος της ουροδόχου κύστης είναι εντελώς άνευ τόσο mRNA ντεκορίνης και ντεκορίνης ανοσοαντιδραστικότητας και της εν λόγω έκφρασης ντεκορίνης έγκειται αποκλειστικά στις περιοχές του αρχικού, μη κακοήθη στρωματικό ιστό. Στα σχήματα Α, D και G, μπαρ κλίμακα 50 μm, και σε Β, C, E, F, H, και εγώ, γραμμή κλίμακας 20 μm.

Η

Οι αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν σε ολόκληρη την μελέτη πληθυσμού και αντιπροσωπευτικές εικόνες φαίνονται. Οι αστερίσκοι υποδεικνύουν περιοχές που κατοικούνται αποκλειστικά από τον καρκίνο της ουροδόχου κύστης κύτταρα. Πάνελ Α, D, G είναι αντιπροσωπευτικές εικόνες των διαδοχικών τομών του ίδιου δείγματος ιστού που αντιπροσωπεύουν in situ ανθρώπινου καρκίνου της ουροδόχου κύστης. Βέλη δείχνουν προς τα σύνορα της in situ καρκίνωμα και αστερίσκοι υποδεικνύουν περιοχές που κατοικούνται από μόνο του καρκίνου της ουροδόχου κύστης κύτταρα. χρώση Α HE. Δ ISH για ντεκορίνη. Θετική αντίδραση DIG στην ISH δείχνει το mRNA εντοπισμού ντεκορίνη μπορεί να δει κανείς σε μωβ. Γ IHC για ντεκορίνη. Καφέ χρώμα δείχνει ντεκορίνη θετική καλοήθεις περιοχές στρωματικών κυττάρων. Τμήματα της κανονικής (Β, Ε, Η) και κακοήθη (C, F, I) περιοχές ιστού της ουροδόχου κύστης (αστερίσκοι) που φαίνεται μεγεθύνεται από κάτω. Σημειώστε ότι in situ ανθρώπινα κύτταρα καρκινώματος της ουροδόχου κύστης είναι εντελώς άνευ τόσο mRNA ντεκορίνης και ντεκορίνης ανοσοαντιδραστικότητας και ότι η έκφραση ντεκορίνης κατοικεί μόνο στις περιοχές του αρχικού, μη κακοήθη στρωματικό ιστό. Στα σχήματα Α, D και G, μπαρ κλίμακα 50 μm, και σε Β, C, E, F, H, και εγώ, μπαρ κλίμακα 20 μm.

Η

Τα βέλη δείχνουν τα παραδείγματα των κακοήθων κυττάρων της ουροδόχου κύστης . Α αντιπροσωπευτική εικόνα των ΗΕ χρώση των χωροκατακτητικών ιστό καρκίνου της ουροδόχου κύστης. IHC για ντεκορίνη (Β) και διγλυκάνη (C) του ίδιου δείγματος όπως και στην Κλίμακα ράβδου Α σε Α-Ο, 20 μm.

Η

έκφρασης ντεκορίνης στον ανθρώπινο καρκίνο της ουροδόχου κύστης κυτταρικές σειρές

σε vitro

Η

Η παραπάνω

in vivo

αποτελέσματα έδειξαν ότι τα κακοήθη κύτταρα εντός δύο επεμβατικές και μη επεμβατικές δείγματα ανθρώπινου καρκίνου της ουροδόχου κύστης ιστού δεν εκφράζουν ντεκορίνη. Ως εκ τούτου, με τη χρήση RT-qPCR εξετάσαμε έπειτα αν κυτταρικές γραμμές που αντιπροσωπεύουν διαφορετικές ποιότητες της ανθρώπινης καρκίνου της ουροδόχου κύστης ρητή ντεκορίνη. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι κανένας από τους καρκίνο ουροδόχου κύστης κυτταρικές γραμμές, συμπεριλαμβανομένων των RT-4 (βαθμός Ι αρχικά ουροθηλιακό καρκίνο), 5637 (βαθμός II), και T24 (βαθμός III) που εκφράζεται ντεκορίνη. Προκειμένου να μελετήσουμε αν η έλλειψη έκφρασης ντεκορίνης οφειλόταν στο DNA μεθυλίωση του υποκινητή του γονιδίου ντεκορίνη, χρησιμοποιήσαμε δυο διαφορετικές δοκιμασίες, MeDIP και MethylCap, που ακολουθείται από ποσοτική RT-PCR για να εξετάσει την κατάσταση μεθυλίωσης του διαφορετικού γονιδίου ντεκορίνης υποκινητή ισομορφές που εξάγεται από τις καρκινικές κυτταρικές γραμμές. Με βάση αυτές τις δοκιμασίες δεν ήμασταν σε θέση να ανιχνεύσει το DNA μεθυλίωση στον προαγωγέα του γονιδίου ντεκορίνης σε οποιαδήποτε από τις κυτταρικές σειρές καρκίνου της ουροδόχου κύστης που εξετάστηκαν (Σχήμα 5). Ο υποκινητής έλεγχος του γονιδίου TSH2B ήταν μεθυλιωμένα και GAPDH δεν μεθυλιώθηκε όπως αναμενόταν.

Η έλλειψη έκφρασης ντεκορίνης στον ανθρώπινο καρκίνο της ουροδόχου κύστης κυτταρικές σειρές δεν οφείλεται σε DNA μεθυλίωση του υποκινητή του γονιδίου ντεκορίνης. κατάσταση μεθυλίωσης ντεκορίνης ισομορφές (DCN Α1, Α2, Β-Ε) σε κυτταρικές σειρές καρκίνου της κύστεως μελετήθηκε με δύο διαφορετικά αυτοματοποιημένες δοκιμασίες, MethylCap και MeDIP. Στο σχήμα είναι ποσοτικά αποτελέσματα RT-PCR για προσδιορισμό MethylCap δείχνει% του DNA εμπλουτισμού μεθυλίωσης έναντι DNA Εισόδου. Εκτός από ντεκορίνη υποκινητές γονιδίων, τα αποτελέσματα παρουσιάζονται για θετικές TSH2B ελέγχου και αρνητικός GAPDH ελέγχου.

Η

Επίδραση του αδενοϊού-μεσολαβούμενη μεταγωγή ντεκορίνη επί του πολλαπλασιασμού των ανθρώπινων καρκινικών κυτταρικών σειρών ουροδόχου κύστης

in vitro

η

Τόσο τα αποτελέσματα ISH και οι προσδιορισμοί RT-qPCR κατέδειξε σαφώς ότι τα ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα της ουροδόχου κύστης δεν είναι σε θέση να εκφράσουν ντεκορίνη είτε

in vivo

ή

in vitro

. Στη συνέχεια εξετάστηκε η επίδραση των στοχευμένων μεταγωγής ντεκορίνης στον πολλαπλασιασμό των ανθρώπινων καρκινικών κυττάρων κύστης

in vitro

. Χρησιμοποιήσαμε ανθρώπινες κυτταρικές σειρές καρκίνου της κύστεως RT4 και Τ24 και ένα ντεκορίνης αδενοϊικός φορέας για τον σκοπό αυτό. Τα κύτταρα σε μεταγωγή με ένα τίτλο 10-1000 pfu /κύτταρο του αδενοϊικού φορέα και ένα ιικό συγκέντρωση 1000 ρίυ /κύτταρο επιλέχθηκε για περαιτέρω πειράματα. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι αδενοϊικά-μεσολαβούμενη μεταγωγή ντεκορίνη μείωσε το δείκτη πολλαπλασιασμού των καρκινικών κυττάρων με στατιστική σημαντικότητα (Σχήμα 6). Επίσης ο αριθμός των κυττάρων μετά από μεταγωγή ντεκορίνη μειώθηκε σημαντικά (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

μεταγωγή γονίδιο Decorin μειώνει τον δείκτη πολλαπλασιασμού Τ24 καρκίνου της ουροδόχου κύστης κύτταρα. Α ουροδόχου κύστης καρκινικά κύτταρα μετάγονται με ντεκορίνη φορέα αδενοϊού (Ad-DCN). B. Η μεταγωγή των κυττάρων με τον φορέα LacZ (Ad-LacZ ελέγχου). C. Μη μετατραπέντα καρκινικά κύτταρα (αρνητικός έλεγχος). Καφέ χρώμα υποδεικνύει Ki-67 θετικών κυττάρων (παραδείγματα υποδεικνύονται με βέλη). Κλίμακα ράβδου σε Α-Ο, 50 μm. Καλυμμένο μπαρ στην κορυφή των στηλών στο D υποδεικνύουν τυπικές αποκλίσεις. *** P & lt? 0.001, του Student

t

τεστ

Η

Συζήτηση

Αν και decorińs ρόλο στην αναστολή της ανάπτυξης του όγκου αναγνωρίζεται σήμερα [18], η προέλευση του. έκφρασης ντεκορίνης σε καρκίνους έχει παραμείνει εν μέρει άλυτο [12], [13], [23], [29]. Ιδιαίτερα, υπήρξε κάποια αβεβαιότητα κατά πόσο διαφορετικά καρκινικά κύτταρα εκφράζουν ντεκορίνη εκτός από την μη κακοήθη στρωματικά κύτταρα. Πρόσφατα, έχουμε δείξει ότι σε διάφορες μορφές καρκίνου μαστού ανθρώπου, ντεκορίνη δεν εκφράζεται από τα καρκινικά κύτταρα [19]. Αναφορικά με ιστό της ουροδόχου κύστης, η έκφραση ντεκορίνης έχει δειχθεί ότι είναι εξέχοντα στην υποεπιθηλιακή στρώματα της ουροδόχου κύστης του ποντικού [30]. Έχει επίσης αποδειχθεί με ανάλυση IHC, ότι ντεκορίνη ανοσοαντιδραστικότητα μειώνεται σημαντικά στο στρώμα του όγκου και των δύο χαμηλής και υψηλής ποιότητας όγκους της ουροδόχου κύστης [23]. Σε αυτή τη μελέτη, εξετάσαμε την έκφραση ντεκορίνης από ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα κύστης και

in vivo

και

in vitro

. Κατ ‘αρχάς, θα αξιολογηθούν τα προηγούμενα δεδομένα σχετικά με τη γονιδιακή έκφραση ντεκορίνης σε διαφορετικούς καρκίνους, με ειδική αναφορά στον καρκίνο της ουροδόχου κύστης που χρησιμοποιούν τη δημόσια διαθέσιμη GeneSapiens τράπεζα δεδομένων [26]. Παρομοίως με προηγούμενες μελέτες [21] – [22], η έκφραση ντεκορίνης βρέθηκε να μειωθεί σε κακοήθη δείγματα ανθρώπινου ιστού της ουροδόχου κύστης σε σύγκριση με φυσιολογικούς ιστούς ουροδόχου κύστης. Στη συνέχεια, εντοπισμένη mRNA ντεκορίνης και ντεκορίνης ανοσοαντιδραστικότητα στο δικό μας εκτεταμένο κοόρτη ριζική κυστεκτομή ασθενής δειγμάτων ανθρώπινου καρκίνου της ουροδόχου κύστης ιστού χρησιμοποιώντας ISH με DIG-σημασμένων ανιχνευτών ντεκορίνη και ένα πολυκλωνικό αντίσωμα ντεκορίνη, αντίστοιχα. Όπως δείξαμε στον καρκίνο του ανθρώπινου στήθους [19], αυτές οι αναλύσεις έδειξαν σαφώς ότι επίσης στον καρκίνο της ουροδόχου κύστης του ανθρώπου σε όλους τους τομείς και νησίδες που κατοικείται από κακοήθη κύτταρα ήταν εντελώς άνευ ντεκορίνης mRNA και ανοσοαντιδραστικότητας. Αντ ‘αυτού, η έκφραση ντεκορίνης διαμείνει μόνο στους τομείς της αρχικής, μη-κακοήθεις στρώμα κύστης. Έτσι, τα αποτελέσματα που αφορούν GeneSapiens έκφρασης ντεκορίνης σε δείγματα ανθρώπινου καρκίνου της ουροδόχου κύστης αντανακλούν την ποιότητα του αρχικού ιστού δειγμάτων που περιλαμβάνονται στη βάση δεδομένων, δηλαδή, εκτός από τα καρκινικά κύτταρα τα δείγματα περιέχουν διάφορες ποσότητες στρωματικό ιστό.

μας

in vivo

αποτελέσματα έδειξαν ότι τα ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα της κύστης δεν εκφράζουν ντεκορίνη. Αυτό το ίδιο εύρημα καταδείχθηκε ως επίσης ισχύει και για ανθρώπινες καρκινικές κυτταρικές σειρές κύστης. Λόγω μεθυλίωση του γονιδίου ντεκορίνης έχει προηγουμένως αποδειχθεί ότι ρυθμίζει την έκφραση ντεκορίνης σε καρκίνο του παχέος εντέρου [29], αποφασίσαμε να εξεταστεί αν αυτή η επιγενετική μηχανισμός που επηρεάζουν την έκφραση ντεκορίνης σε ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα κύστης, καθώς και. Ωστόσο, τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι αναμφισβήτητα μεθυλίωση του γονιδίου ντεκορίνης υποκινητή δεν παίζει ρόλο στον καρκίνο του ανθρώπου της ουροδόχου κύστης. Έτσι, οι μηχανισμοί παρεμπόδισης έκφρασης ντεκορίνης από ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα κύστης παραμένουν να διευκρινισθούν.

Μελέτες που χρησιμοποιούν μεταγωγή ντεκορίνης έχουν προηγουμένως διεξαχθεί π.χ. με κύτταρα καρκίνου του μαστού και τα αποτελέσματα έχουν δείξει, τόσο μειώνεται πρωτογενή ανάπτυξη του όγκου και την πρόληψη των μεταστάσεων [17], [31]. Περαιτέρω, συστημική απελευθέρωση πρωτεΐνης πυρήνα ντεκορίνης να ξενομοσχεύματα καρκινώματος του μαστού έχει αναφερθεί ότι διαμορφώνουν την έκφραση αρκετών εκατοντάδων γονιδίων στρωματικά δημιουργώντας ένα δυσμενές μικροπεριβάλλον του όγκου για την εξέλιξη του όγκου και τη μετάσταση [32]. Επιπλέον, η καταστολή της ογκογόνο χρησιμοποιώντας μεταγωγή ντεκορίνης έχει επίσης καταδειχθεί με άνω και κάτω τελεία και πλακώδες καρκίνωμα ξενομοσχεύματα όγκου [16]. Πρόσφατα, έχουμε δείξει ότι μεσολαβεί αδενοϊό μεταγωγή ντεκορίνης να ντεκορίνη αρνητικά κύτταρα καρκίνου του μαστού (MCF-7) μείωση του πολλαπλασιασμού και αύξηση της απόπτωσης των κυττάρων [19]. Σε αυτή τη μελέτη, η ανθρώπινη κύστη καρκινικές κυτταρικές σειρές RT4 (Gradus Ι) και Τ24 (Gradus III) μετήχθησαν με ντεκορίνη αδενοϊικό φορέα που οδήγησε σε ένα πανομοιότυπο μείωση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων, ταυτόσημο με MCF-7 κύτταρα. Τα πιο πάνω αποτελέσματα μαζί με την παρατηρούμενη έλλειψη έκφρασης ντεκορίνης από τα καρκινικά κύτταρα παρέχει μια ενδιαφέρουσα δυνατότητα να εξετάσει την επίδραση της ντεκορίνης στη συμπεριφορά καρκίνου της ουροδόχου κύστης κύτταρο ως ένα θεραπευτικό εργαλείο. Αυτό θα μπορούσε να πραγματοποιηθεί

in vivo

π.χ. με ενδοκυστική θεραπεία, στην οποία καρκινικά κοιλότητα της ουροδόχου κύστης ξεπλένεται με ντεκορίνη αδενοϊό που περιέχει υγρό [33] – [34]

Για το καλύτερο της γνώσης μας, η παρούσα μελέτη είναι η πρώτη που εντοπίζεται ακριβώς mRNA ντεκορίνης στο. κυτταρικό επίπεδο στον ανθρώπινο καρκίνο της ουροδόχου κύστης

in vivo

. Όπως έχουμε έλεγχο των δειγμάτων για την ανοσολογική αντίδραση για ένα άλλο, πολύ παρόμοια SLRP με ντεκορίνη, δηλαδή διγλυκάνη, βρήκαμε ότι οι περιοχές του όγκου αρνητικά για ντεκορίνη ήταν θετικά για διγλυκάνης ανοσολογική αντίδραση. Αυτό δείχνει ότι παρόλο ντεκορίνης και διγλυκάνη αντιπροσωπεύουν εξαιρετικά παρόμοια μόρια που μοιράζονται επίσης παρόμοιες λειτουργίες συμπεριλαμβανομένης της ικανότητάς τους να δεσμεύουν ΤΟΡ-β [35] την έκφρασή τους σε ιστούς δεν είναι ταυτόσημος. Προηγουμένως, έχουν απόκλιση ντεκορίνη και διγλυκάνη έκφραση ομιλίες βρεθεί π.χ. στην ανάπτυξη σκελετικών και μη-σκελετικών ιστών [36], κατά τη διάρκεια της ανάπτυξης του κερατοειδούς [37] και παθολογικές καταστάσεις, όπως η ίνωση του μερική απόφραξη της εξόδου της κύστεως [38]. Επιπλέον, διγλυκάνη επίσης σταδιακά αποδειχθεί ότι ενεργεί ως βασικό μόριο στη ρύθμιση του ανοσοποιητικού συστήματος [38]. Με βάση τα αποτελέσματά μας, διγλυκάνη έκφραση ανιχνεύεται σε ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα κύστης που στερούνται έκφρασης ντεκορίνης. Η τελική ρόλος της διγλυκάνη έκφρασης στην εξέλιξη ή τον περιορισμό της ογκογένεσης θα απαιτηθούν περαιτέρω μελέτες.

Συμπεράσματα

Εν κατακλείδι, στην παρούσα μελέτη δείξαμε ότι τα ανθρώπινα κύστης καρκινικά κύτταρα δεν εκφράζουν ντεκορίνη είτε

in vivo

ή

in vitro

, και ότι η έκφραση ντεκορίνης σε κακοήθη ιστό ανθρώπινης κύστης κατοικεί απλώς στους τομείς της αρχικής, μη-κακοήθεις στρώμα. Δείξαμε επίσης ότι η έλλειψη έκφρασης ντεκορίνης από τα ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα κύστης δεν οφείλεται στη μεθυλίωση των εγγύς περιοχές προαγωγέα του γονιδίου ντεκορίνης. Επιπλέον, έχουμε δείξει ότι η μεταγωγή καλλιεργημένα ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα κύστης με ντεκορίνη αδενοϊικό φορέα προκαλεί σημαντική αναστολή στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων

in vitro

. Στο σύνολό τους, τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι η έλλειψη έκφρασης ντεκορίνης από τον καρκίνο της ουροδόχου κύστης κύτταρα προσφέρει τη δυνατότητα για τη χρήση ντεκορίνης θεραπείες που βασίζονται στην ανθρώπινη ουροφόρων κακοήθειες.

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε Bogata Fezazi και της Φινλανδίας μικροσυστοιχιών και αλληλουχίας Κέντρο στο Turku Κέντρο Βιοτεχνολογίας, Turku, Φινλανδία για τεχνική υποστήριξη. Ο εμπειρογνώμονας της τεχνικής βοήθειας της Sinikka Kollanus αναγνωρίζεται με ευγνωμοσύνη. Οι συγγραφείς εκφράζουν την ευγνωμοσύνη τους και να Jaakko Liippo για τη βοήθεια με τη φωτογράφηση.