Αφηρημένο

Σκοπός

Παρά τις έντονες ερευνητικές προσπάθειες, παγκρεατικού πόρου αδενοκαρκίνωμα παραμένει μία από τις πιο θανατηφόρες κακοήθειες του κόσμου. Εμείς και άλλοι έχουν αναγνωρίσει προηγουμένως έναν υποπληθυσμό παγκρεατικού καρκίνου βλαστικών κυττάρων εντός του όγκου ως ένα κρίσιμο θεραπευτικό στόχο και επιπροσθέτως δείξει ότι η στρώματος του όγκου δεν αντιπροσωπεύει μόνο μια περιοριστική εμπόδιο για την επιτυχή χορήγηση φαρμάκων, αλλά επίσης χρησιμεύει ως παρακρινείς θέση για καρκινικά βλαστικά κύτταρα . Ως εκ τούτου, έχουμε ξεκινήσει μια έρευνα μεγάλης κλίμακας σχετικά με τις επιδράσεις του συνδυασμού χημειοθεραπείας, σκαντζόχοιρος αναστολή της οδού, και η αναστολή του mTOR σε προκλινικό μοντέλο ποντικού καρκίνου του παγκρέατος.

Πειραματικός Σχεδιασμός

Υποψήφιοι και τυχαιοποιήθηκαν δοκιμή σε ένα σύνολο περίπου 200 υποδόρια και ορθοτοπικά εμφυτευμένων σε ολόκληρο ιστό πρωτοβάθμια ξενομοσχευμάτων ανθρώπινου όγκου.

Αποτελέσματα

Η συνδυασμένη στόχευση άκρως στη χημειοθεραπεία του καρκίνου βλαστικών κυττάρων, καθώς και πιο διαφοροποιημένη απογόνους τους, μαζί με την κατάργηση της μικροπεριβάλλον του όγκου με στόχευση του στρώματος και την ενίσχυση της διείσδυσης του ιστού του χημειοθεραπευτικού παράγοντα μεταφράζεται σε σημαντικά παρατεταμένη επιβίωση σε προκλινικά μοντέλα ανθρώπινου καρκίνου του παγκρέατος. Πιο έντονες θεραπευτικά αποτελέσματα παρατηρήθηκαν σε όγκους ασθενών που προέρχονται από gemcitabine ανθεκτικά. Περιέργως, η προτεινόμενη τριπλή προσέγγιση της θεραπείας θα μπορούσε να ενισχυθεί περαιτέρω με τη χρήση ενός σκευάσματος ΡΕΟυλιωμένο της γεμσιταβίνης, η οποία αύξησε σημαντικά τη διείσδυση βιοδιαθεσιμότητα και των ιστών του, με αποτέλεσμα την περαιτέρω βελτίωση της συνολικής αποτέλεσμα.

Συμπεράσματα

Αυτή η πολυτροπικών θεραπευτική στρατηγική θα πρέπει να διερευνηθεί περαιτέρω στο κλινικό περιβάλλον, καθώς η επιτυχία του μπορεί τελικά να βελτιωθεί η κακή πρόγνωση των ασθενών με αδενοκαρκίνωμα του πόρου του παγκρέατος

Παράθεση:. Hermann PC, Trabulo SM, Sainz Jr Β, Balic Α, Γκαρσία Ε , Hahn Α.Ε., et al. (2013) πολυτροπικές μεταχείριση εξαλείφει καρκινικά βλαστικά κύτταρα και οδηγεί σε μακροχρόνια επιβίωση στην Πρωτοβάθμια Ανθρωπίνων καρκίνο του παγκρέατος ξενομοσχευμάτων ιστών. PLoS ONE 8 (6): e66371. doi: 10.1371 /journal.pone.0066371

Επιμέλεια: Hana Algul, Τεχνικό Πανεπιστήμιο του Μονάχου, Γερμανία

Ελήφθη: 13 του Νοέμβρη, 2012? Δεκτές: 7, Μάη 2013? Δημοσιεύθηκε: 18 Ιουνίου 2013

Copyright: © 2013 Hermann et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Η παρούσα εργασία υποστηρίχθηκε από απεριόριστης επιχορήγησης της έρευνας από την Σιένα Biotech, μιας προηγμένης έρευνας του ΕΣΕ Investigator Grant (Pa-CSC 233.460), το Subdirección General de Evaluación y Fomento de la Investigación, Fondo de Investigación Sanitaria (PS09 /02129, Ministerio Επιστημών e Innovación, Ισπανία ) και η Programa Nacional de Internacionalización de la I + D, Subprogramma: FCCI 2009 (Modalidad ACI-PLAN E Células Madre Proyectos PLE2009-0105 και Modalidad ACI-Colobra Ινδία, τόσο Ministerio Επιστημών e Innovación). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Δύο από τους συγγραφείς είναι σήμερα (Patrizia Tunici) ή ήταν μέχρι πρόσφατα (Annette Bakker ) που απασχολούνται από την εμπορική χρηματοδότης αυτής της έρευνας »Σιένα Biotech SpA». Patrizia Tunici και Annette Bakker αναπτυχθεί και επικυρωθεί SIBI-C1, αλλά δεν είχαν εμπλακεί στο σχεδιασμό και την ανάλυση των δεδομένων της παρούσας μελέτης. Οι συγγραφείς επιβεβαιώνουν επίσης ότι αυτό δεν μεταβάλλει την προσκόλλησή τους σε όλες τις PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών. Δεν άλλες σχετικές δηλώσεις σχετικά με την απασχόληση, παροχή συμβουλών, διπλώματα ευρεσιτεχνίας, τα προϊόντα στην ανάπτυξη ή εμπορία των προϊόντων, κλπ

Εισαγωγή

παγκρεατικού πόρου αδενοκαρκίνωμα (εφεξής «καρκίνο του παγκρέατος» ή PDAC ) είναι η τέταρτη συχνότερη αιτία καρκίνου σχετίζονται με το θάνατο παγκοσμίως [1], [2], [3] και χαρακτηρίζεται από ένα υψηλό ποσοστό της μετάστασης και έντονη αντίσταση στη χημειοθεραπεία και ακτινοβολία. Παρά τις εκτεταμένες ερευνητικές προσπάθειες τις τελευταίες δεκαετίες, μικρή ουσιαστική πρόοδος στη βελτίωση των κλινικών παραμέτρων [4]. Παρά το γεγονός ότι η εισαγωγή του αντι-μεταβολίτη γεμσιταβίνης το 2007 έχει βελτιωθεί η κλινική ανταπόκριση μειώνοντας τον πόνο και την απώλεια βάρους [5], την πρόγνωση της νόσου παραμένει εξαιρετικά φτωχή με ένα ποσοστό επιβίωσης πέντε χρόνια από -3-4% και μια μέση περίοδο επιβίωσης 4 -6 μήνες [1], [6]. Πράγματι, αρκετές μελέτες έχουν δείξει ότι η θεραπεία με συνέπεια γεμσιταβίνη κυρίως στόχοι διαφοροποιημένα καρκινικά κύτταρα με αποτέλεσμα μια σχετική εμπλουτισμό των καρκινικών βλαστικών κυττάρων [7], [8], [9]. Για τους ασθενείς με μεταστατική νόσο, αλλά το καθεστώς καλή απόδοση, η πρόσφατη θεραπεία συνδυασμού FOLFIRINOX (οξαλιπλατίνη, ιρινοτεκάνη, φθοριοουρακίλη και λευκοβορίνη) έδειξε ένα σημαντικό πλεονέκτημα επιβίωσης, αλλά με αυξημένη τοξικές παρενέργειες [10]. Εναλλακτικά, το δοσολογικό σχήμα της ΝΑΒ-πακλιταξέλη συν γεμσιταβίνη έδειξαν σημαντική δράση κατά των όγκων με πιο ανεκτό αρνητικές επιπτώσεις σε μια φάσης Ι /ΙΙ μελέτη, που δικαιολογούν III αξιολόγηση φάσης [11]. Ωστόσο, σε όλες αυτές τις δοκιμές, η πλειονότητα των ασθενών τελικά υπέκυψαν από την εξέλιξη της νόσου. Έτσι, η ανάπτυξη νέων θεραπευτικών αντι-καρκίνου και /ή νέων τρόπων θεραπείας παραμένει υψηλή προτεραιότητα της υγειονομικής περίθαλψης.

Με την αύξηση των αποδεικτικών στοιχείων που υποστηρίζουν την ύπαρξη καρκίνου βλαστικών κυττάρων, ένα νέο ορίζοντα αναδύεται στην ανάπτυξη θεραπευτικών στρατηγικών κατά του καρκίνου του παγκρέατος. Καρκίνος βλαστικά κύτταρα αντιπροσωπεύουν ένα υποπληθυσμό κυττάρων διακρίνονται από τον όγκο του όγκου με βάση την αποκλειστική ικανότητά τους να οδηγούν την ογκογένεση και τη μετάσταση. Αυτά τα κύτταρα παίζουν επίσης κρίσιμο και οδήγηση ρόλο στην υποτροπή της νόσου [12], [13], [14], [15], [16]? Ως εκ τούτου, η διαλεύκανση των μηχανισμών που διέπουν παγκρεατικών ογκογένεσης και ιδιαίτερα του καρκίνου του παγκρέατος βλαστικά κύτταρα είναι ζωτικής σημασίας για την ανάπτυξη πιο αποτελεσματικών κλινικά διαθέσιμες θεραπείες. Πράγματι, έχουμε αναπτύξει πρόσφατα νεωτεριστικές προσεγγίσεις που αμφότερα τα βλαστικά κύτταρα του καρκίνου του στόχου και να ξεπεράσουν τους μηχανισμούς χημειο-αντίστασης [9], [17], [18]. Για παράδειγμα, έχουμε δείξει ότι η ικανότητα αυτο-ανανέωσης των παγκρεατικού καρκίνου βλαστικών κυττάρων εξαρτάται τόσο

Hedgehog

και

mTOR

σηματοδότηση, και ταυτόχρονη στόχευση των δύο αυτών οδών, σε συνδυασμό με γεμσιταβίνη , αντιπροσωπεύει μία νέα στρατηγική για την θεραπεία επιθηλιακών καρκίνων όπως παγκρεατικού καρκίνου [9]. Με βάση αυτές τις μελέτες, είμαστε εδώ για να διερευνήσει τη δυνατότητα εφαρμογής, ασφάλειας, και δυνατότητες για περαιτέρω βελτιστοποίηση αυτής της προσέγγισης θεραπείας συνδυασμού σε ένα μεγάλο σύνολο των πρωτογενών όγκων προερχόμενων από ασθενή.

Αποτελέσματα

τριπλή θεραπεία Σημαντικά μειώνει όγκων μέγεθος και αυξάνει την επιβίωση

Έχουμε δείξει στο παρελθόν ότι οι καλλιέργειες σφαίρα καρκινικά κύτταρα του παγκρέατος εμπλουτίσουν για καρκινικά βλαστικά κύτταρα [8], [9], [17], και ότι η συνδυασμένη στόχευση του Sonic Hedgehog (ΕΛΕΡΠΕ ) και τα μονοπάτια του mTOR μπορεί να προσφέρει μια νέα θεραπευτική επιλογή. Εδώ επαληθεύει σε τέσσερις διακριτές πρωτογενούς παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές που προέρχονται από όγκους ασθενών που καρκινικά βλαστικά καλλιέργειες σφαίρα κυττάρων εμπλουτισμένο πράγματι δείχνουν σημειώνονται υπερέκφραση SHH και τα Hedgehog γονίδια στόχους GLI-1 και GLI-2 (Εικ. 1Α), καθώς επίσης και αυξημένη δραστηριότητα mTOR μονοπάτι (Εικ. 1Β). Η επακόλουθη

in vivo

αξιολόγηση της θεραπείας συνδυασμού διεξήχθη σε κλινικά πιο σχετικές μοντέλα ξενομοσχευμάτων καρκίνου του παγκρέατος ολόκληρο ιστών που λαμβάνονται από ασθενή (βλέπε Εικ. 1C για το σχεδιασμό της μελέτης). Κομμάτια συντομία

in vivo

επεκτάθηκε πρωτογενών ανθρώπινων παγκρεατικών όγκων που περιέχουν ετερογενείς πληθυσμοί κυττάρων καρκίνου, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου βλαστικών κυττάρων [9], καθώς και τα στρωματικά κύτταρα [7], παγκρεατικό αστεροειδή κύτταρα, φλεγμονώδη κύτταρα, και εξωκυτταρική μήτρα εμφυτεύθηκαν υποδόρια και ορθοτοπικά σε ανοσοκατεσταλμένα ποντίκια. απορρόφηση του όγκου επιβεβαιώθηκε με την ανάπτυξη του όγκου κατά τη διάρκεια δύο διαδοχικών μετρήσεων μέγεθος, και τα ποντίκια που φέρουν όγκο τυχαιοποιήθηκαν για θεραπεία. Στη συνέχεια, οι όγκοι μετρήθηκαν μία φορά την εβδομάδα είτε με παχύμετρο (υποδόριων όγκων) ή με ένα σύστημα απεικόνισης υπερήχων μικρών ζώων (ορθοτοπική όγκους). Όπως Γεμσιταβίνη (Gem) αντιπροσωπεύει την τρέχουσα πρότυπη θεραπεία για τον καρκίνο του παγκρέατος, χρησιμοποιήσαμε Gem-ποντίκια με αγωγή ως ομάδα αναφοράς.

(Α) Διπλώστε αυξάνουν τα επίπεδα έκφρασης του mRNA της ΕΛΕΡΠΕ, GLI-1, και GLI-2 της σφαίρας που προέρχονται εναντίον κυττάρων προσκολλημένη. (Β) Ανάλυση Western blot της δραστηριότητας μονοπατιού mTOR μέσω της αξιολόγησης της έκφρασης S6 κινάσης (άνω πάνελ) και φωσφορυλίωση (κάτω πίνακας) σε προσκολλημένα πρωτογενή κύτταρα έναντι των βλαστικών κυττάρων-εμπλουτισμένα κύτταρα σφαίρα προέλευσης. (C) Απεικόνιση της πειραματικής διάταξης. Διάρκεια της τριπλής θεραπείας χαρακτηρίζεται από ένα σκούρο γκρι πλαίσιο (ημέρα 21 έως 48), η μονοθεραπεία Gem με ένα ελαφρύ γκρι πλαίσιο (ημέρα 48-81).

Η

Ένα σύνολο των αντιπροσωπευτικών όγκων επιλέγονται με βάση ποικίλες ανταπόκρισή τους στη θεραπεία Gem [7]. PDAC-265 και 185 ήταν πολύ ανθεκτικά στη θεραπεία Gem, δείχνοντας την ταχεία ανάπτυξη του όγκου έτσι ώστε η πρώτη ποντικοί έπρεπε να αφαιρεθεί από τη μελέτη εντός 3 εβδομάδων από την έναρξη της θεραπείας (Σχ. 2Α-Ε) λόγω της υπερβολικής αύξησης του όγκου. Αντίθετα, σε όγκους PDAC-JH051, 247, και Pax22, η θεραπεία Gem οδήγησε στην αρχική ανταπόκριση στη θεραπεία και σταθεροποίηση της νόσου? Ωστόσο, μετά την απομάκρυνση της χημειοθεραπείας, οι όγκοι αναπαραγώγιμα άρχισαν να αναπτυχθούν εκ νέου (Σχ. 2C-E). Από όλες τις όγκους που ερευνήθηκαν, μόνο PDAC-354, το οποίο δεν φέρει

Kras

μεταλλάξεων [19], έδειξε σημαντική απόκριση σε θεραπεία Gem μέχρι το τέλος της περιόδου παρατήρησης (Εικ. 2F) και μιμήθηκε στενά τη θεραπεία ανταπόκριση που παρατηρήθηκε στο πραγματικό ασθενή (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα).

(Α-ρ) καμπύλες ανάπτυξης όγκου για πρωτογενή ξενομοσχεύματα ολόκληρους ιστούς PDAC-265, PDAC-185, JH051, 247, Pax22, και 354 εμφυτεύεται υποδορίως και ορθοτοπικώς. Η συνεχής γραμμή απεικονίζει Gem + οχήματος, διακεκομμένη γραμμή απεικονίζει Gem + SIBI, διακεκομμένη γραμμή απεικονίζει Gem + SIBI + Rapa (n≥6 ανά ομάδα). (G) Kaplan-Meier καμπύλη που απεικονίζει συσσωρευμένος χρόνος επιβίωση όλων των ποντικών συγκεντρώθηκαν ανά ομάδα θεραπείας.

Η

Είναι σημαντικό, ήμασταν σε θέση να βελτιώσει την ανταπόκριση στη θεραπεία με συνδυασμό χημειοθεραπείας με το νέο αναστολέα της οδού σκαντζόχοιρος SIBI-C1 ( SIBI? Siena Biotech) [20]. SIBI αναστέλλει ισχυρά γονιδιακή έκφραση της ΕΛΕΡΠΕ και κατάντη γονιδίων-στόχων, όπως GLI2 στην πρωτοβάθμια παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα

in vitro

(Εικ. S1 Α στο αρχείο S1). SIBI χορηγήθηκε μόνο για 3 εβδομάδες για να μειώσει δυνητικά επιβλαβή αποτελέσματα. Gem δόθηκε για συνολικό χρονικό διάστημα 60 ημερών, σύμφωνα με την κοινή κλινική πρακτική (Εικ. 1Γ). Λόγω της ισχυρής ανταπόκρισης στη χημειοθεραπεία μόνη της, συν-θεραπεία των ποντικών που φέρουν PDAC-354 ξενομοσχεύματα είτε με SIBI δεν έδειξαν μία πρόσθετη επίδραση στο επίπεδο του μεγέθους του όγκου (Σχ. 2F) ή επιβίωση (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Για όλα τα άλλα καρκινώματα, ωστόσο, διπλή επεξεργασία με Gem + SIBI οδήγησε σε αξιοσημείωτη μείωση στο μέγεθος του όγκου (διακεκομμένη γραμμή, Σχήμα 1 &?. 2), σημαντική καθυστέρηση στην ανάπτυξη του όγκου, και έτσι σημαντικά παρατεταμένη επιβίωση σε σύγκριση με τα ποντίκια που έλαβαν είτε καμία θεραπεία ή Gem + οχημάτων (Σχ. 2G). Είναι σημαντικό, ωστόσο, οι όγκοι τελικά υποτροπή περιορίζοντας την επιβίωση σε ποντικούς που λαμβάνουν αυτό το διπλό θεραπεία. Αυτά τα δεδομένα είναι σύμφωνα με βελτιωμένη παροχή γεμσιταβίνης ακόλουθες εξάντλησης των προστατευτικών ιστού στρωματικών [21]. Όπως παρουσιάζεται προηγουμένως, η αναστολή της σηματοδότησης hedgehog μόνο δεν καταργεί πλήρως τον πληθυσμό του καρκίνου των βλαστικών κυττάρων (σχήμα 3Α & amp?. Β) [9]

(Α) Αντιπροσωπευτική κυτταρομετρίας ροής οικόπεδα και (Β) ποσοτικός προσδιορισμός του καρκίνου. βλαστοκυττάρων (EpCAM

+ CD133

+ CD44

+) περιεχόμενο των όγκων στην αντίστοιχη ομάδα θεραπείας (σωρευτικά αποτελέσματα των κυττάρων που λαμβάνονται από διαφορετικές ξενομοσχεύματα). (C) Εκπρόσωπος εικόνες και ποσοτικοποίηση του δευτερογενούς σχηματισμού σφαίρας των επεξεργασμένων PDAC-Pax22 όγκους εκφυτευμένη στο τέλος του πειράματος (D200).

Η

Δεδομένου ότι έχουμε δείξει στην ολοκληρωμένη

in vitro

μελέτες που καρκινικά βλαστικά κύτταρα μπορούν πράγματι να εξαλειφθεί με την προσθήκη ενός αναστολέα των οδών mTOR [9], μπορούμε επόμενη διερευνήθηκε η επίδραση του θεραπευτικού σχήματος που περιλαμβάνει Gem, SIBI, και καθορίστηκε αναστολέας mTOR ραπαμυκίνη (Rapa) στις αντιπροσωπευτικές πάνελ μας του πρωτογενούς παγκρεατικού καρκίνου ξενομοσχευμάτων ιστού. Είναι ενδιαφέρον, παρατηρήσαμε μια πολύ ισχυρή απάντηση σε αυτήν την τριπλή θεραπεία, με αποτέλεσμα τη σταθεροποίηση της νόσου ή ακόμη και οπισθοδρόμηση σε όλες σχεδόν τις όγκους διερευνηθεί (διακεκομμένη γραμμή, Σχήμα 1 &?. 2). Αυτό μεταφράζεται σε σημαντικά βελτιωμένη αθροιστική επιβίωση σε σύγκριση με όλες τις άλλες ομάδες θεραπείας (Σχ. 2Ε).

Συνδυαστική θεραπεία καταστρέφει καρκινικά βλαστικά Περιεχόμενο κυττάρων και αλλάζει όγκου Σύνθεση

Για να αξιολογηθεί η

in vivo

επιδράσεις της θεραπείας συνδυασμού για τον καρκίνο βλαστικών κυτταρικών πληθυσμών, μπορούμε εκφυτευτεί και πέψη εκπρόσωπος όγκων από κάθε ομάδα μετά την ολοκλήρωση των 3 εβδομάδων τριπλής θεραπείας, και αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής της έκφρασης των δεικτών επιφάνειας προηγουμένως συνδεθεί με ένα φαινότυπο του καρκίνου των βλαστικών κυττάρων [8], [9], [13]. Το ποσοστό των EpCAM

+ CD133

+ CD44

+ κυττάρων σε όγκους Gem-αγωγή ήταν τακτικά 2-3 φορές υψηλότερη σε σύγκριση με τα μη επεξεργασμένα όγκους [τα δεδομένα δεν εμφανίζονται και [8]]. Σε αντίθεση, Gem + SIBI ήδη έδειξαν μία μικρή μείωση στον αριθμό του καρκίνου των βλαστικών κυττάρων σε σύγκριση με Gem μόνο (Σχήμα 3Α & amp?. Β). Σημαντικό είναι μόνο η προσθήκη του Rapa στη θεραπευτική αγωγή του καρκίνου σχεδόν εξαλειφθεί βλαστικά κύτταρα από τον όγκο. Επιπλέον, κατά τη λήξη της περιόδου μελέτης (ημέρα 200) ερευνήσαμε το σχηματισμό δευτερογενούς τομέα ως μια λειτουργική δοκιμασία για τον καρκίνο δραστηριότητα βλαστικών κυττάρων σε όγκους PDAC-Pax22 και παρατήρησε ότι η ικανότητα σχηματισμού σφαίρας ήταν ελαφρώς μειωμένη για καλλιέργειες που προέρχονται από όγκους αντιμετωπίζεται με Gem + SIBI σε σύγκριση με Gem μόνο. Είναι ενδιαφέρον, ωστόσο, ήταν μόνο μετά την τριπλή θεραπεία που θα μπορούσαμε να παρατηρήσουμε την πλήρη κατάργηση της δραστηριότητας σχηματισμού σφαίρας (Σχ. 3C), γεγονός που υποδηλώνει ότι η θεραπεία τριπλού συνδυασμού είχε εξαντληθεί αποτελεσματικά την πισίνα καρκινικό κύτταρο στέλεχος στον όγκο.

Περισσότερα λεπτομερής ιστολογική εξέταση των όγκων έδειξε ότι τα διάφορα θεραπευτικά σχήματα τροποποιημένων επίσης την κυτταρική σύνθεση του όγκου. Ενώ ο πρωτογενής όγκος που προέρχεται από ξενομοσχεύματα χρησιμοποιήθηκαν για αυτή τη μελέτη εμφάνισαν λογικά υψηλή ποσότητα στρώμα (35-70%) στις ομάδες που έλαβαν θεραπεία με Gem μόνο (Σχ. 4Α, αριστερά πάνελ), η προσθήκη ενός αναστολέα οδού hedgehog μειώθηκε αισθητά το στρώμα περιεχόμενο (Εικ. 4Α, μεσαίο πάνελ), μια παρατήρηση που είναι καλά σύμφωνα με τις προηγούμενες δημοσιευμένες αναφορές [21]. Αυτή η επίδραση ήταν ελαφρώς πιο έντονη μετά την προσθήκη του Ράπα (Σχ. 4Α, δεξιά πάνελ) και ήταν στατιστικά σημαντική σε σύγκριση με τους όγκους που έλαβαν θεραπεία με Gem μόνο (Σχ. 4Β). Όπως ήταν αναμενόμενο, παρατηρήσαμε τα ίδια αποτελέσματα μετά τη θεραπεία της Gem-ευαίσθητων όγκων (Σχ. S1B στο αρχείο S1). Είναι ενδιαφέρον, παρατηρήσαμε παρόμοια αποτελέσματα σε ορθοτοπική όγκους (Σχ. 4Α) και σε υποδόριων όγκων (Σχ. S1B στο αρχείο S1).

(Α) Εκπρόσωπος ιστολογικές εικόνες που δείχνουν το περιεχόμενο του στρώματος στις αντίστοιχες ομάδες θεραπείας σε ανθεκτικούς γεμσιταβίνη ορθοτοπική όγκους (PDAC-185, άνω πάνελ), (Pax22, κάτω πίνακα). (Β) Ποσοτικοποίηση της περιεκτικότητας σε στρώμα σε όλα τα διαφορετικά ξενομοσχεύματα αντιμετωπίζονται.

Η

ΡΕΟυλίωση γεμσιταβίνη Ενισχύει περαιτέρω οι επιδράσεις της θεραπείας συνδυασμού

Από προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι η τροποποίηση της χημικής δομής της Gem με ΡΕΟυλίωση οδηγεί σε σημαντική αύξηση του χρόνου κυκλοφορίας και διείσδυση ιστού

in vivo

και μπορεί επομένως να είναι μία νέα επιλογή για την βελτιωμένη θεραπεία ασθενών με (παγκρεατική) καρκίνος [22], [23], αποφασίσαμε ως επόμενο βήμα για τον προσδιορισμό των επιπτώσεων της πολυαιθυλενογλυκόλη-δεσμεύεται Gem (PEG-Gem), όπως η εκτεταμένη

in vivo

χρόνο κυκλοφορίας και υψηλότερη διείσδυση ιστού της PEG-Gem μπορεί να παράγει ανώτερα αποτελέσματα σε σύγκριση με το πρότυπο Gem. Κατ ‘αρχάς, θα αξιολογηθεί η

in vitro

επιδράσεις της PEG-Gem σε σύγκριση με Gem σε προσφάτως απομονωμένα πρωτογενή ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα του παγκρέατος. Για το σκοπό αυτό, τέσσερα ταιριάζουν πρωτογενείς καλλιέργειες κυττάρων που προέρχονται από

in vivo

-επεκταθούν παγκρεατικό καρκινικούς ιστούς υποβλήθηκαν σε θεραπεία για 48 ώρες με είτε το πρότυπο Gem ή PEG-Gem και στη συνέχεια αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής για την επαγωγή της απόπτωσης ή κυτταρικό θάνατο, όπως επίσης και για το περιεχόμενο του καρκίνου βλαστικών κυττάρων τους. Όσον αφορά το ποσοστό των αποπτωτικών και τα νεκρά κύτταρα, μπορούσαν να παρατηρηθούν διαφορές μεταξύ των ομάδων θεραπείας (Εικ. 5Α αριστερό πάνελ, και τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Επιπλέον, δεν παρατηρήσαμε διαφορές μεταξύ των τυποποιημένων Gem και θεραπεία με PEG-Gem σχετικά με το περιεχόμενο της CD133

+ κυττάρων

in vitro

(Εικ. 5Α δεξιά πλευρά).

(Α )

In vitro

επιπτώσεις της Gem και PEG-Gem σε απόπτωση και κυτταρικό θάνατο καθώς και την έκφραση CD133 (σωρευτικά αποτελέσματα των κυττάρων που λαμβάνονται από διαφορετικές ξενομοσχεύματα). (Β) κατά Kaplan-Meier καμπύλη που απεικονίζει συσσωρευμένος χρόνος επιβίωση όλων των ποντικών συγκεντρώθηκαν ανά ομάδα θεραπείας. Για επεξηγηματικούς σκοπούς, οι οποίοι επιλέγονται καμπύλες επιβίωσης του Σχ. 2D απεικονίζονται και πάλι. καμπύλες (Γ) Η ανάπτυξη του όγκου για την πρωτογενή ξενομοσχεύματα ολόκληρους ιστός εμφυτεύεται υποδορίως και ορθοτοπικά, αντίστοιχα. Η συνεχής γραμμή απεικονίζει Gem + οχήματος, διακεκομμένη γραμμή απεικονίζει Gem + SIBI, διακεκομμένη γραμμή απεικονίζει Gem + SIBI + Ράπα. (Δ) κατά Kaplan-Meier καμπύλη που απεικονίζει συσσωρευμένος χρόνος επιβίωση όλων των ποντικών συγκεντρώθηκαν ανά ομάδα θεραπείας. Για επεξηγηματικούς σκοπούς, οι οποίοι επιλέγονται καμπύλες επιβίωσης του Σχ. 2D απεικονίζονται και πάλι.

Η

Στη συνέχεια, αντιμετωπίζονται ποντίκια που φέρουν ορθοτοπική ή υποδόρια όγκου που προέρχονται από ξενομοσχεύματα πρωτογενούς ολικής ιστού με PEG-Gem, ανάλογη με την θεραπευτική αγωγή για τις τυπικές Gem. Επιλέξαμε όγκους που παρουσίασαν ανεπαρκή ανταπόκριση με Gem. Ενώ δεν παρατηρήσαμε σημαντική διαφορά για διάμεση επιβίωση μεταξύ PEG-Gem και πρότυπο Gem για τους όγκους αυτούς (Εικ. 5Β), είναι σημαντικό να σημειωθεί ότι η έναρξη του θανάτου καρκινικών σχετίζονται σε ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με PEG-Gem στιγμής ήταν αργότερα από ό, τι με το πρότυπο Gem (Χρόνος έως την εξέλιξη: PEG-Gem 91δ εναντίον Gem 19δ). Ενθαρρυμένοι από αυτά τα ελπιδοφόρα αποτελέσματα, είμαστε δίπλα αντικατασταθεί τυπική θεραπεία Gem με PEG-Gem στην προσέγγιση τριπλή θεραπεία (PEG-Gem + SIBI + Rapa) και αξιολογούνται οι επιπτώσεις στην ανάπτυξη των όγκων και της επιβίωσης σε ποντίκια που φέρουν PDAC-185 ξενομοσχεύματα ασθενή που προέρχεται. Ενώ στην αρχική

in vivo

μελέτες θεραπείας Gem + SIBI + Rapa μας οδήγησε σε σημαντικά μειωμένη ανάπτυξη του όγκου και των βραχυπρόθεσμων υπέστη νόσο σε σύγκριση με την καθιερωμένη θεραπεία Gem (Σχ. 2D), πολλοί όγκοι τελικά υποτροπίασαν. Σε απάντηση στη θεραπεία με PEG-Gem + SIBI + Rapa, ωστόσο, παρατηρήσαμε σχεδόν πλήρη υποχώρηση των όγκων (Σχ. 5C), η οποία κατέληξε σε 100% επιβίωση μέχρι το τέλος της περιόδου παρατήρησης (ημέρα 125) (Σχ. 5D ).

θεραπεία συνδυασμού δεν παρουσιάζει σημαντική τοξικότητα

πιθανή τοξικότητα παραμένει μια σημαντική ανησυχία για προσεγγίσεις θεραπεία συνδυασμού. Για την εκτίμηση αθροιστική τοξικότητα των χορηγούμενων θεραπειών και των αντίστοιχων συνδυασμών τους, ηχογραφήσαμε το σωματικό βάρος για όλα τα ποντίκια που έλαβαν θεραπεία σε εβδομαδιαία βάση, αρχής γενομένης από την ημέρα της τυχαιοποίησης μέχρι την ημέρα 100. ΧΩΡΙΣ καχεξία ως πιθανή θεραπεία που προκαλείται από παρενέργεια, χωρίς σημαντικές διαφορές σε σωματικά βάρη που παρατηρήθηκαν μεταξύ των ομάδων θεραπείας (Εικ. 6Α), Επιπλέον, προκειμένου να αποκλείσει δυνητικά επιβλαβείς επιδράσεις επί της λειτουργίας των φυσιολογικών αρχέγονων κυττάρων (π.χ. στο αιμοποιητικό σύστημα), έχουμε παρακολουθούνται επιπλέον αριθμού των λευκών κυττάρων του αίματος στα ποντίκια που έλαβαν κατά την ολοκλήρωση των 3 εβδομάδων από απλές συνδυασμένες θεραπείες. Ενώ σε αυτό το σημείο της μελέτης, η αναμενόμενη αθροιστική τοξικότητα θα είναι η υψηλότερη, καμία σημαντική μείωση στα λευκά αιμοκυττάρων παρατηρήθηκε σε οποιαδήποτε από τις ομάδες θεραπείας σε σύγκριση με την καθιερωμένη θεραπεία Gem (p = 0,792) (Σχ. 6Β), υποδηλώνοντας αριθ εκτεταμένη αλλοιώσεις των αιμοποιητικών βλαστικών κυττάρων με την κατεργασία τριπλού συνδυασμού. Είναι ενδιαφέρον, ακόμη και ο αυξημένος χρόνος κυκλοφορίας και βελτιωμένη διείσδυση του ιστού των PEG-Gem δεν αυξάνουν σημαντικά αναμένονται ανεπιθύμητες παρενέργειες σε σύγκριση με πρότυπο θεραπεία Gem (Εικ 6Α & amp?. Β).

(Α) σωματικά βάρη καταγράφονται για όλα τα ποντίκια σε όλη τις πρώτες 100 ημέρες του πειράματος. (Β) λευκών αιμοσφαιρίων από όλα τα ποντίκια αξιολογήθηκαν στο τέλος της περιόδου χορήγησης του τριπλού συνδυασμού.

Η

Συζήτηση

Εδώ θα επικυρώνει την έννοια ενός πολυτροπικού θεραπεία για περιεκτικά στόχευση των ποικίλων διαμερισμάτων κυττάρων σε καρκίνο του παγκρέατος χρησιμοποιώντας ένα αντιπροσωπευτικό σύνολο σχεδόν 200 υποδόριας και ορθοτοπική ολόκληρους ιστούς πρωτογενούς ξενομοσχευμάτων όγκου, καθιστώντας αυτό ένα από τα μεγαλύτερα έρευνες στον τομέα του καρκίνου των βλαστικών κυττάρων. επιλεγμένα όγκοι βασίζονται σε περιγράφηκε προηγουμένως ποικίλες απόκρισή τους σε gemcitabine θεραπεία [7]. Η χημειοθεραπεία και η ακτινοβολία στοχεύουν κυρίως διαφοροποιημένα καρκινικά κύτταρα, και ενώ αυτές οι θεραπείες προκαλούν απόπτωση και κυτταρικό θάνατο σε καρκινικά κύτταρα, ένας πληθυσμός των καρκινικών βλαστικών κυττάρων είναι ιδιαίτερα ανθεκτικό [8], [9], [18], [24], επιβιώνει το πρότυπο θεραπείας, και διατηρεί τη δυνατότητα να επανεξετάσει τη συμπλήρωση ενός όγκου σε όλα τα ετερογένεια της. Διπλή θεραπεία συνδυασμού Gem και το νέο λειαίνονται αναστολέα SIBI σταθερά παρατεταμένη επιβίωση σε ποντίκια μεταμοσχεύονται με όγκους. Είναι σημαντικό, ωστόσο, μόνο σε ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με τριπλή θεραπεία του καρκίνου βλαστικά κύτταρα ουσιαστικά πλήρως καταργηθεί, και παρατηρήσαμε μια μακροπρόθεσμη σταθεροποίηση της νόσου ή παλινδρόμηση, και επακόλουθη μακροπρόθεσμη επιβίωση. Σε αυτό το σχήμα συνδυασμού, το αποτέλεσμα της θεραπείας των συμβατικών Gem θα μπορούσε να ενισχυθεί περαιτέρω με τη χρήση πολυαιθυλενογλυκολιωμένης Gem μέσω ενισχύοντας τη βιοδιαθεσιμότητά της.

Στο ιστολογικό επίπεδο, παγκρεατικό καρκίνο χαρακτηρίζεται από πολύ πυκνή στρώμα και την κακή αγγείωση. Olive et al. έδειξαν σε ένα γενετικά μοντέλο ποντικού καρκίνου του παγκρέατος που το στρώμα εξαρτάται ισχυρά από σηματοδότηση hedgehog, και η αναστολή της hedgehog οδού με smoothened αναστολείς οδηγεί σε «προνομιακή» θανάτωση στρωματικών κυττάρων και αυξημένη πυκνότητα σκάφος [21], καθιστώντας έτσι τα κύτταρα όγκου πιο προσιτή για θεραπευτική παρέμβαση. Αν και αυτές οι παρατηρήσεις λήφθηκαν σε ένα μοντέλο ποντικού του καρκίνου του παγκρέατος, δείξαμε πιο πρόσφατα ότι επίσης σε ξενομοσχεύματα ολόκληρους ιστούς που λαμβάνονται από ασθενή συν-θεραπεία με έναν smoothened αναστολέα αυξάνει σημαντικά χορήγησης φαρμάκου [17] και μειώνει σημαντικά το σχηματισμό στρώματος του όγκου που σχετίζεται . Είναι σημαντικό, τώρα εκτιμούν ότι το στρώμα εμποδίζει όχι μόνο την παράδοση των ναρκωτικών [21], αλλά παρέχει επίσης μια υποστηρικτική θέση για τον καρκίνο βλαστικών κυττάρων στην προώθηση της ικανότητας αυτο-ανανέωση τους και εισβολής [25]. Έτσι, την εξάλειψη ή την κατάργηση του στρώματος έχει βελτιωθεί σημαντικά θεραπευτικά σχήματα από διακριτά μηχανισμό, αλλά είναι ικανή μόνο για την εξάλειψη του καρκίνου βλαστικών κυττάρων αν συνδυαστεί με Gem.

Ωστόσο, παρά τη μάλλον μέτρια ανταπόκριση των καρκινικών βλαστικών κυττάρων σε hedgehog αναστολή της οδού ως μονοθεραπεία, ήμασταν σε θέση να αποδείξουν ότι λειανθούν οι αναστολείς είναι ακόμη απαραίτητη, προκειμένου να εξαλειφθεί επιτυχώς στη χημειοθεραπεία του καρκίνου του παγκρέατος βλαστικών κυττάρων αν συνδυαστεί με άλλους παράγοντες βλαστοκυττάρων στόχευση [9], [17]. Συγκεκριμένα, έχουμε δείξει προηγουμένως για τον καρκίνο του παγκρέατος που ένας συνδυασμός χημειοθεραπείας και αναστολείς mTOR τόσο και σηματοδότηση hedgehog εξαλείφει διαφοροποιημένα κύτταρα καθώς και καρκίνο βλαστικών κυττάρων

in vitro

[9], και ότι αυτό μεταφράζεται σε μακροχρόνια όρος επιβίωσης

in vivo

. Πρόσφατα, Wang et al. παρέχεται ένα σημαντικό μηχανιστική σύνδεσμο για τη συνδυασμένη αναστολή του σκαντζόχοιρου και mTOR μονοπάτι. Ειδικότερα, οι συγγραφείς αποδεικνύουν ότι mTOR /S6K1 αποτέλεσμα φωσφορυλίωση του Gli και επακόλουθη έκφραση των κατάντη στόχων σηματοδότησης. Αναστολή αμφοτέρων των οδών ενισχύεται σε μεγάλο βαθμό το αποτέλεσμα απόπτωση των αναστολή είτε μόνη της αναστολής [26]. Στην παρούσα μελέτη, είδαμε τώρα μια σχεδόν πλήρη εξάλειψη των καρκινικών βλαστοκυττάρων για την παρούσα θεραπεία συνδυασμού σε ένα μεγάλο και αντιπροσωπευτικό σύνολο των πρωτογενών ξενομοσχεύματα. Ενώ κυτταρομετρίας ροής με τη χρήση των δεικτών επιφανείας CD133, EpCAM, και CD44 ήδη προταθεί ότι η περιεκτικότητα καρκίνος των βλαστικών κυττάρων μειώθηκε ισχυρά, λειτουργικές δοκιμασίες (π.χ. δοκιμασία σχηματισμού σφαίρα) επικυρωμένη ότι τα κύτταρα απομονώθηκαν από τα εξαχθέντα καρκινώματα πράγματι δεν ήταν σε θέση να σχηματίσει σφαίρες όγκου

in vitro,

γεγονός που δείχνει ότι ο πληθυσμός των κυττάρων του καρκίνου του στελέχους ως τη ρίζα της ασθένειας, είχε στόχο αποτελεσματικά από τον τριπλό συνδυασμό.

Ακόμα κι αν τα αποτελέσματα χρησιμοποιώντας Gem-SIBI-Rapa ήταν άκρως συνεπείς και ενθαρρύνει σε ένα πάνελ από όγκους ασθενών που προέρχεται, κάναμε παρατηρούμε όγκου εκ νέου ανάπτυξη σε ορισμένες ποντίκια (π.χ. PDAC-185 ξενομοσχεύματα) και, στη συνέχεια, μία μείωση στην επιβίωση αυτών των ζώων που φέρουν ξενομόσχευμα. Δεδομένου ότι αυτό ενδέχεται να σχετίζεται με την περιορισμένη βιοδιαθεσιμότητα του χημειοθεραπευτικού παράγοντα ως ουσιώδες μέρος αυτής της θεραπείας συνδυασμού, προχωρήσαμε περαιτέρω θεραπευτική στρατηγική μας, τροποποιώντας το χημειοθεραπεία. Συγκεκριμένα, Vandana et al. έδειξαν πρόσφατα ότι η τροποποίηση gemcitabine μέσω ΡΕΟυλίωσης οδηγεί σε ενισχυμένη βιοδιαθεσιμότητα στην κυκλοφορία σε σύγκριση με εγγενή γεμσιταβίνης. Αν και έχουν επίσης δείξει καλύτερα

in vitro

απόκριση των καθιερωμένων παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα χρησιμοποιώντας ΡΕΟυλιωμένης γεμσιταβίνη σε σύγκριση με το κανονικό σκεύασμα [22], παρατηρήσαμε σημαντικές διαφορές μεταξύ Gem και PEG-Gem

in vitro

στο επίπεδο του περιεχομένου των κυττάρων καρκίνου του στελέχους ή επαγωγή απόπτωσης ή κυτταρικό θάνατο χρησιμοποιώντας πρωτογενή κύτταρα ξενομοσχεύματος προέλευσης. Αν και τα στοιχεία αυτά δεν είναι έκπληξη το γεγονός ως χορήγησης φαρμάκων και η διαθεσιμότητα δεν είναι ένα κρίσιμο ζήτημα

in vitro

, τα αποτελέσματα υπογραμμίζουν με σαφήνεια τη σημασία της αξιοποίησης πρωτογενών καρκινικού ιστού για περαιτέρω

in vivo

αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας του φαρμάκου .

Μάλιστα, ήμασταν τότε σε θέση να επικυρώσει και να διευρυνθεί η έννοια αυτή με την

in vivo

ρύθμιση, δείχνοντας ότι η θεραπεία με PEG-Gem καθυστέρησε σημαντικά τον χρόνο της εξέλιξης του όγκου κατά 72 ημέρες. Αυτή η βελτιωμένη ανταπόκριση στη θεραπεία είναι σίγουρα εντυπωσιακό, δεδομένου ότι αντιπροσωπεύει περισσότερο από το ήμισυ της περιόδου της μελέτης. Όπως αναμενόταν, ωστόσο, οι όγκοι τελικά προχώρησε με αποτέλεσμα ουσιαστικά καμία διαφορά στην μέση επιβίωση των ποντικών που έλαβαν PEG-Gem συγκριτικά με τα ποντίκια που έλαβαν μόνο τις παραδοσιακές Gem. Ενώ αυτά τα δεδομένα επιβεβαιώνουν ότι ΡΕΟυλίωση Gem δεν βελτιωθεί πράγματι διαθεσιμότητα του φαρμάκου και την παράδοση, αντίστοιχα, με την ενίσχυση του χρόνου κυκλοφορίας και τη διείσδυση ιστού, όπως αναμενόταν, PEG-Gem μόνη της προφανώς δεν επαρκεί για να υπερνικήσει την χημειοαντίσταση των καρκινικών βλαστικών κυττάρων. Ως εκ τούτου, ερευνήσαμε την επόμενη τις συνέπειες της αντικατάστασης των τακτικών Gem με PEG-Gem στην πολυτροπική προσέγγιση μας για τη στόχευση όγκων του παγκρέατος, η οποία είχε αρχικά ανταποκρίθηκαν στη θεραπεία Gem + SIBI + Rapa, αλλά τελικά υποτροπίασαν πλαίσιο της παρούσας ειδικής θεραπευτική αγωγή. Περιέργως, χρησιμοποιώντας το συνδυασμό PEG-Gem + SIBI + Rapa παρατηρήσαμε όχι μόνο σχεδόν πλήρη υποχώρηση του όγκου, αλλά πιο σημαντικό λάβαμε 100% επιβίωση καθ ‘όλη τη διάρκεια της περιόδου μελέτης 125δ σε αυτό το εξαιρετικά ανθεκτική στη θεραπεία όγκου. Αν και η παρατήρηση αυτή δεν αποκλείει αργότερα την εκ νέου ανάπτυξη όπως φαίνεται στο PDAC-Pax22, τα στοιχεία αυτά είναι πολύ ελπιδοφόρα και συνάδουν με την έννοια ότι η περαιτέρω βελτίωση της διαμόρφωσης των συνδυασμένων φαρμάκων είναι υποχρεωτική για την επέκταση

in vitro

ευρήματα με το πολύ πιο σύνθετο

in vivo

ρύθμιση.

η χρησιμοποιούμενη νέο εξομαλυνθεί αναστολέας SIBI-C1 (Σιένα Biotech, Ιταλία) ήταν επίσης ιδιαίτερα αποτελεσματική

in vivo

, όπως μπορεί να δει κανείς από την μειωμένη ανάπτυξη του όγκου σε συνδυασμό με Gem και, συνεπώς, σημαντικά ενισχυμένη χρόνο επιβίωσης. Επιπλέον, SIBI μπορεί να χορηγηθεί με ασφάλεια

in vivo

, όπως είδαμε υπάρχουν δυσμενείς επιπτώσεις για το συνολικό σωματικό βάρος ή λευκών αιμοσφαιρίων. Είναι σημαντικό, αυτό είναι επίσης σύμφωνη με προηγούμενες παρατηρήσεις που χρησιμοποιούν άλλα λειανθούν αναστολείς [9], [15]. Η θεραπεία συνδυασμού Gem + SIBI + Rapa έδειξε επίσης καμία σημαντική τοξικότητα σε σύγκριση με μόνη θεραπεία Gem κατά τη διάρκεια των πειραμάτων. PEG-Gem + SIBI + Rapa θεραπεία συνδυασμού, ενώ πολύ πιο αποτελεσματικό

in vivo

, μόνο ελαφρώς, αλλά μη σημαντικά μειωμένες απαριθμήσεις λευκών αιμοσφαιρίων και δεν είχε καμία επίδραση στο σωματικό βάρος των ζώων σε σύγκριση με τους αντίστοιχους ελέγχους. Είναι σημαντικό να σημειωθεί, ωστόσο, ότι τα υγιή και σχετικά νεαρά ποντίκια χρησιμοποιήθηκαν για αυτή τη μελέτη είναι πιθανόν περισσότερο μπορεί να αντισταθμίσει υποθετικών δυσμενείς επιδράσεις στις κανονικές διαμερίσματα βλαστοκυττάρων κατά τη διάρκεια της τριπλής θεραπείας θεραπείας. Ως εκ τούτου, θα είναι σημαντικό για την επικύρωση περαιτέρω την ασφάλεια των αυτό το θεραπευτικό σχήμα σε ασθενείς ανθρώπους με σκοπό να την εφαρμόσει τελικά στα κυρίως ηλικιωμένους και ετοιμοθάνατα ασθενείς που πάσχουν από καρκίνο του παγκρέατος.

Εν κατακλείδι, εδώ παρέχουν πειστικές αποδείξεις για την αποτελεσματικότητα της θεραπείας πολυτροπικού στόχευσης διαφοροποιημένα κύτταρα καθώς και καρκίνο βλαστικών κυττάρων σε καρκίνο του παγκρέατος, με αποτέλεσμα μακροχρόνια επιβίωση σε ποντικούς. Έτσι, αυτά τα δεδομένα επιβεβαιώνουν και επεκτείνουν τα προηγούμενα ευρήματα από το εργαστήριο μας σε μια πολύ μεγάλη ομάδα των ζώων με ασθενή προερχόμενο παγκρεατικό ξενομοσχεύματα καρκίνου [9], [15], [17]. Επιπλέον, προσφέρουμε επίσης ένα νέο και νέα προοπτική για το πώς να βελτιώσουν περαιτέρω τις τρέχουσες θεραπευτικές προσεγγίσεις με την τροποποίηση της μοριακής δομής των υποχρεωτικών χημειοθεραπευτικών παραγόντων χρησιμοποιώντας ΡΕΟυλίωσης. Στο σύνολό τους, τα ευρήματα αυτά θα πρέπει να επηρεάσουν σημαντικά την μελλοντική ανάπτυξη νέων αντι-παγκρέατος θεραπευτικές του καρκίνου και /ή τρόπους θεραπείας.

Υλικά και Μέθοδοι

όγκου δείγματα

Μετά ασθενών ενημερωμένη συγκατάθεση είχε αποκτηθεί, η περίσσεια ιστών από εκτομή του παγκρέατος καρκινώματα ήταν ξενομοσχεύτηκε στο Johns Hopkins Ιατρικών Ιδρυμάτων (JHMIRB: 05-04-14-02 «μια μελέτη σκοπιμότητας για την εξατομικευμένη θεραπεία των ασθενών με προχωρημένο καρκίνο του παγκρέατος») και το Νοσοκομείο de Madrid – Centro αναπόσπαστο Oncológico Clara Campal (FHM.06.10 «Ίδρυση τράπεζας για τους όγκους και τους υγιείς ιστούς σε ασθενείς με καρκίνο»), αντίστοιχα, σύμφωνα με τις αναφερόμενες Institutional Review Board-εγκεκριμένα πρωτόκολλα [7]. Εν συντομία, η περίσσεια ιστούς όγκων που δεν απαιτούνται για την κλινική διάγνωση κατά τη διάρκεια της ρουτίνας εκτομές Whipple εκτελείται από χειρουργούς που δεν συμμετείχαν στην παρούσα μελέτη στη συνέχεια εμφυτεύτηκαν σε ανοσοκατεσταλμένα ποντίκια. Όλες οι πληροφορίες ασθενούς έγινε ανώνυμα από την αφαίρεση οποιασδήποτε πληροφορίας, η οποία προσδιορίζει, ή θα μπορούσε να οδηγήσει στην ταυτοποίηση του ασθενούς. Κανένας από τους ασθενείς που είχαν υποβληθεί σε εισαγωγική ακτινοβολία ή χημειοθεραπεία πριν από την εκτομή του όγκου.

Πειράματα σε ζώα

Όλα τα ζωικά πειράματα διεξήχθησαν σύμφωνα με τις θεσμικές κατευθυντήριες γραμμές και εγκρίθηκαν από το Φροντίδα Ζώων θεσμικές και χρήση επιτροπή του CNIO (πρωτόκολλο PA34 /2012- «ξενομοσχεύματος μοντέλο για την ανθρώπινη καρκίνο του παγκρέατος»). Τα ζώα στεγάστηκαν και διατηρήθηκαν σε στρωτή ροή ντουλάπια κάτω από ειδικές συνθήκες ελεύθερες παθογόνων. GAPDH χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης.