Αφηρημένο

Ιστορικό

Ο καρκίνος που σχετίζεται με ινοβλάστες (CAF) ενεργοποιούνται οι ινοβλάστες στο στρώμα του καρκίνου και να παίξουν ένα σημαντικό ρόλο στην εξέλιξη του καρκίνου. Μερικές αναφορές έχουν δείξει τη συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης των δεικτών CAF και κακή πρόγνωση σε πολλές μορφές καρκίνου. Ωστόσο, υπάρχουν αναφορές έχουν μελετήσει φαινότυπο CAF και κλινική σημασία της σε οισοφαγικό καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων (ESCC).

Μέθοδοι

Ερευνήσαμε CAF φαινότυπο ESCC με βάση την ιστολογική και ανοσοϊστοχημική έκφραση των πέντε CAF δεικτών όπως πρωτεΐνη ενεργοποίησης ινοβλαστών (FAP), ακτίνη λείων μυών (SMA), ινοβλαστών-ειδική πρωτεΐνη-1 (FSP1), υποδοχέα αυξητικού παράγοντα που προέρχεται από αιμοπετάλια (PDGFRα), και PDGFRβ σε 116 δείγματα ιστών ESCC. Εκτός αυτού, έχουμε εξέτασε επίσης τη συσχέτιση του φαινοτύπου CAF με κλινική σημασία, καθώς και άλλοι παράγοντες που συνδέονται με τον καρκίνο μικροπεριβάλλον

Αποτελέσματα

Ιστολογικά ανώριμο φαινότυπο CAF συσχετίστηκε με κακή πρόγνωση (p & lt?. 0.001 ) και σχετίζεται με αυξημένη πυκνότητα μικροαγγείων, αυξημένη μακροφάγα που σχετίζονται με όγκο, και επιθηλιακών να μεσεγχυματικά μετάβασης. δείκτες CAF ήταν χαρακτηριστικά εκφράζονται σε στρωματικά ινοβλαστών κοντά στα κύτταρα του όγκου και το πρότυπο έκφρασης της 5ης δεικτών CAF ήταν ιδιαίτερα ετερογενής σε κάθε επιμέρους περιπτώσεις. Πέντε CAF δείκτες, SMA, FSP1 και PDGFRα ήταν δυσμενείς προγνωστικοί δείκτες της ESCC. Ο αριθμός των θετικών CAF δεικτών ήταν μεγαλύτερη σε ESCC με CAFS ανώριμη από ό, τι σε εκείνες με ώριμα.

Συμπεράσματα

Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι ιστολογική κατάταξη των ΚΠΑ φαινότυπο είναι ένα αξιόπιστο και σημαντικό προγνωστικό παράγοντα πρόβλεψης σε ESCC. δείκτες CAF έχουν τη δυνατότητα να είναι διαγνωστικές και θεραπευτικές στόχων σε ESCC

Παράθεση:. Ha SY, Yeo S-Υ, Xuan Υ-h, Kim S-Η (2014) Η προγνωστική σημασία της σχετίζονται με τον καρκίνο Οι ινοβλάστες στο οισοφάγου πλακωδών κυττάρων καρκίνωμα. PLoS ONE 9 (6): e99955. doi: 10.1371 /journal.pone.0099955

Επιμέλεια: Jörg Δ Hoheisel, Deutsches Krebsforschungszentrum, Γερμανία

Ελήφθη: 7, Φεβρουαρίου 2014? Αποδεκτές: 20 Μαΐου, 2014? Δημοσιεύθηκε: 19 Ιουνίου 2014

Copyright: © 2014 Ha et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η έρευνα υποστηρίχθηκε από μια επιχορήγηση της Κορέας Υγεία Τεχνολογία R & amp? D έργου μέσω του Ινστιτούτου Βιομηχανίας Υγείας Ανάπτυξης Κορέα (KHIDI), που χρηματοδοτείται από το Υπουργείο Υγείας & amp? Πρόνοιας, Δημοκρατία της Κορέας (αριθμός επιχορήγησης: HI11C17620000), και η Samsung Ινστιτούτο Βιοϊατρικών Ερευνών SS1B30131 επιχορήγησης. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή οι

ινοβλάστες Cancer σχετιζόμενη (CAFS) ενεργοποιημένων ινοβλαστών στο στρώμα του καρκίνου και είναι στην αιχμή πολλών στερεών όγκων, συμπεριλαμβανομένου του μαστού, του παχέος εντέρου, και το μελάνωμα [1] – [5]. CAFS είναι οι πιο εξέχοντα τύπο κυττάρου εντός του στρώματος του όγκου των πολλών καρκίνων και ένα σημαντικό παίκτη στην καρκίνο μικροπεριβάλλον το οποίο αποτελείται από μια δυναμική μίγμα ινοβλαστών, μονοκυττάρων /μακροφάγων, ενδοθηλιακών κυττάρων, λεμφοκύτταρα και κοκκιοκύτταρα. [2], [6] CAFS οδήγησης όγκου εξέλιξη με την άμεση διέγερση του πολλαπλασιασμού των καρκινικών κυττάρων μέσω της έκκρισης των διαφόρων αυξητικούς παράγοντες και κυτοκίνες όπως ο αυξητικός παράγοντας ηπατοκυττάρων, ο αυξητικός παράγοντας μεταμόρφωσης β, στρωματικά παράγοντας προέρχεται από κύτταρα 1, και η ιντερλευκίνη-6, καθώς και από την αναδιαμόρφωση το μικροπεριβάλλον του καρκίνου μέσω απόθεσης εξωκυττάριας ουσίας και την πρόσληψη των άλλων παραγόντων, όπως διάφορα φλεγμονώδη κύτταρα και τα ενδοθηλιακά κύτταρα [1] – [3]. Επιπλέον, ενεργοποιείται CAFS συμβάλλουν στην εξέλιξη του καρκίνου με την πρόκληση αγγειογένεσης [1] – [3]. κατά τη διάρκεια της εξέλιξης του καρκίνου, CAFS συμβάλλουν στην επεμβατική ανάπτυξη του καρκίνου με την έκκριση αρκετών πρωτεασών όπως μεταλλοπρωτεϊνάση μήτρας ή καθεψίνες και επαγωγή της επιθηλιακής προς μεσεγχυματικά μετάβαση (ΕΜΤ) [1] – [3].

Αν και ινοβλάστες διανέμονται ευρέως και εύκολα αναγνωρίσιμη λόγω ατρακτοειδές τους ή ατράκτου όπως το σχήμα, ινοβλάστες παραμένουν ακαθόριστα σε μοριακούς όρους και δεν υπάρχει καμία γνωστή συγκεκριμένη και αξιόπιστη δεικτών μοριακού ινοβλαστών. [4] Ως εκ τούτου, η ταυτότητα του ΚΠΑ είναι επίσης ελάχιστα κατανοητή και δείκτη CAF με απόλυτη εξειδίκευση δεν έχει ταυτοποιηθεί. Υπάρχουν αρκετές καθιερωμένες δείκτες CAF όπως λείου μυός ακτίνη (SMA), ινοβλαστών διεγείροντας πρωτεΐνη-1 (FSP-1), προερχόμενο από αιμοπετάλια αυξητικό παράγοντα α (PDGFRα), και PDGFRβ. [4] Ωστόσο, κανένα από αυτά είναι τόσο αποκλειστικά για CAFS και παρούσα σε όλα τα CAFS. [4] Αντ ‘αυτού, κάθε μία από αυτές CAF δείκτες εκτιμάται ότι αντιπροσωπεύουν ένα συγκεκριμένο και διαφορετικό φαινότυπο CAFS. Επιπλέον, οι ινοβλάστες είναι πολύ ετερογενείς και ινοβλάστες από διαφορετικές ανατομικές περιοχές έχουν σημαντικά διαφορετικό προφίλ έκφρασης [7].

Σε γενικές γραμμές, CAFS έχουν γνωστό ότι έχουν διακριτή μορφολογία χαρακτηρίζεται ως μεγάλα και παχουλό κύτταρα διακρίνονται από φυσιολογικούς ινοβλάστες που είναι λεπτές, κυματιστό, και τα μικρά ατρακτοειδή κύτταρα. [4], [6], [8] Ωστόσο, έχουμε προκαταρκτικά ότι μερικοί ESCC είχε στρωματικών ινοβλαστών έχοντας ιστολογία του σχετικά κανονική ινοβλαστών, ενώ ορισμένοι είχαν διακριτή μορφολογία του CAF.

Η ταξινόμηση κατά ιστολογική μορφολογία των επιμέρους CAF και η κλινική σημασία του δεν έχουν μελετηθεί, αν και ορισμένες προηγούμενες εκθέσεις έδειξαν ότι η ιστολογική κατηγοριοποίηση των στρωματικών ίνωση σχετίζεται με την κλινική έκβαση του καρκίνου του παχέος εντέρου [9], ο καρκίνος του μαστού [10], και καρκίνο του πνεύμονα [11].

οισοφαγικό καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων (ESCC) είναι μία από τις πιο επιθετικές κακοήθεις όγκους, με ένα ποσοστό επιβίωσης 5 ετών μόνο το 10%. [12] CAF σπάνια έχουν συζητηθεί σε ESCC παρά τη σημασία του στην εξέλιξη του καρκίνου. Μόνο πολύ λίγες μελέτες έχουν διερευνήσει ο βιολογικός ρόλος του στρώματος του όγκου, συμπεριλαμβανομένης της αγγειογένεσης σε ESCC [13] – [18]. Επειδή οι ινοβλάστες σε διάφορα μέρη του σώματος είναι εγγενώς διαφορετικά, το αποτέλεσμα της μελέτης CAF στον καρκίνο των διαφόρων οργάνων μπορεί να μην είναι άμεσα εφαρμόζεται σε ESCC.

ως εκ τούτου, μελετήσαμε κλινική σημασία του ΚΠΑ στο ESCC από ιστολογική ταξινόμηση ανάλογα με τις ατομικές μορφολογία των κυττάρων και ανοσοϊστοχημικές μελέτες των πέντε CAF δεικτών όπως FAP, SMA, FSP-1, PDGFRα, PDGFRβ. Επιπλέον, αξιολογήσαμε τη συσχέτιση μεταξύ του ΚΠΑ και άλλοι παράγοντες που συνδέονται με τον καρκίνο μικροπεριβάλλον όπως μικροαγγειακή πυκνότητα (MVD) και σχετίζονται με όγκο μακροφάγων (TAM) διήθηση ή EMT φαινότυπο.

Υλικά και Μέθοδοι

ιστού δείγματα

Ένα σύνολο 116 φορμόλη-σταθερές και δείγματα όγκων παραφίνη-ενσωματωμένες από ασθενείς που υποβλήθηκαν σε θεραπευτική χειρουργική εκτομή για πρωτογενή ESCC στο Ιατρικό Κέντρο της Samsung, Σεούλ, Κορέα 1995-2008, είχαν συμπεριληφθεί. Η αναδρομική αυτή μελέτη εγκρίθηκε από την επιτροπή δεοντολογίας σε Samsung Medical Center, και ασκείται σύμφωνα με την Διακήρυξη του Ελσίνκι το 1996. Όλοι οι ασθενείς παρέχεται γραπτή συγκατάθεση, σύμφωνα με τις κατευθυντήριες οδηγίες. Κανένας ασθενής δεν λάβει προεγχειρητική χημειοθεραπεία ή ακτινοθεραπεία. Μετεγχειρητική επικουρική θεραπεία διεξήχθη σε 86,2% (100/116) των ασθενών: χημειοθεραπεία και ακτινοθεραπεία σε 31 ασθενείς, η χημειοθεραπεία μόνο σε 51 ασθενείς, και ακτινοθεραπεία μόνο σε 18 ασθενείς. Κλινικές και παθολογικές εκθέσεις επανεξετάστηκαν για την ηλικία, το φύλο, το μέγεθος του όγκου, η ιστολογική ποιότητα, το βάθος εισβολή (PT), κομβικό κατάσταση (PN), και μακρινή μετάσταση (pm). Η μέση περίοδος παρακολούθησης ήταν 30 μήνες (εύρος 0-108 μήνες). Η ταξινόμηση pTNM εφαρμόστηκε σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές από την αμερικανική μεικτής επιτροπής του 2010 για τον Καρκίνο στάσης εγχειρίδιο (AJCC 7

η έκδοση).

Ιστός μικροσυστοιχιών (TMA) Ανασυγκρότηση

αιματοξυλίνη και ηωσίνη ( HE) -stained ιστοί εξετάστηκαν για να επιβεβαιωθεί η ιστολογική διάγνωση και να επιλέξετε αντιπροσωπευτικές περιοχές για ανοσοχρώση. Μία ή δύο κυλινδρικό πυρήνα (2 mm σε διάμετρο) απομακρύνθηκε από τμήματα ιστού ενσωματωμένα σε παραφίνη σταθεροποιημένα με φορμαλίνη και αντιστοιχούν στη HE διαφάνειες να κατασκευάσει την μικροσυστοιχία ιστού. Κάθε πυρήνας επελέγη ώστε να περιέχει και τα δύο όγκων (20-50%) και στρωματικά συστατικό (50-80%). Για να ελαχιστοποιηθεί η μεροληψία επιλογής, κάθε πυρήνας ιστού επιλέχθηκε προσεκτικά ώστε να περιέχει τουλάχιστον ένα ή περισσότερα «hot spot» CAF είναι γεμάτο με CAFS και στρωματικά κύτταρα. Τομή των μπλοκ μικροσυστοιχιών παράγεται πάχους 4 mm τμήματα μετά την ολοκλήρωση της σειράς των ιστών.

Η κατάταξη των CAFS από Ιστολογίας σε αιματοξυλίνη και ηωσίνη (ΗΕ) Διαφάνειες

CAFS χωρίστηκαν σε δύο ομάδες ανάλογα με τους μορφολογία στις διαφάνειες, από δύο πεπειραμένους παθολόγους (YHX και ΚΕΔΑ) χωρίς προηγούμενη γνώση των κλινικοπαθολογοανατομικών αποτελέσματα, όπως παρακάτω: 1. ώριμη όταν ινοβλάστες έδειξε λεπτό, κυματιστό, και τα μικρά ατράκτου μορφολογία των κυττάρων ως κανονική ινοβλάστες? 2. ανώριμα όταν ινοβλάστες έδειξε μεγάλο, παχουλό ατρακτοειδή κυττάρων με εξέχοντα πυρήνια (Σχήμα 1). Όταν η αναλογία των ανώριμων ινοβλάστες ήταν περισσότερο από 50%, η υπόθεση θεωρείται ότι έχει ανώριμο φαινότυπο CAF. Σε λίγες περιπτώσεις με τη διαφωνία, την τελική ερμηνεία καθορίστηκε με κοινή συναίνεση με τη χρήση του μικροσκοπίου πολλαπλών κεφαλών.

Α. Ζευγάρι τύπου όταν ινοβλάστες δείξει λεπτό, κυματιστό, και τα μικρά ατράκτου μορφολογία των κυττάρων? φυσιολογικούς ινοβλάστες? τύπου Β ανώριμα, όταν ινοβλάστες δείχνουν μεγάλο, παχουλό ατρακτοειδή μορφολογία? CD. Οι καμπύλες επιβίωσης χρησιμοποιώντας τη μέθοδο Kaplan-Meier από δοκιμασία log-rank για ιστολογική υπότυπο του καρκίνου που σχετίζονται ινοβλαστών.

Η

Ανοσοϊστοχημική διαδικασία χρώσης

Τμήματα για microslides αποπαραφινοποιήθηκαν με ξυλόλιο, ενυδατωμένο, χρησιμοποιώντας ένα αραιωμένο σειρά αλκοόλης και βυθίζεται σε 0,3% Η

2O

2 σε μεθανόλη για να αποσβεστεί η ενδογενής δράση υπεροξειδάσης. Τα τμήματα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με ρυθμιστικό διάλυμα ΤΕ (10 mM Tris και 1 mM EDTA, ρΗ 9.3) στους 98 ° C για 30 λεπτά. Για να μειωθεί η μη ειδική χρώση, κάθε τμήμα μπλοκαρίστηκε με 4% λευκωματίνη βόειου ορού σε PBS με 0,1% Tween 20 για 30 λεπτά. Οι τομές στη συνέχεια επωάστηκαν με αντι-SMA (1:100, Millipore, Billerica, ΜΑ, USA), αντι-FAP (1:100, Abcam), αντι-FSP1 (1:100, Millipore), αντι-PDGFRα (1 :100, Cell Signaling Technology), αντι-PDGFRβ (1:100, Abcam), αντι-CD34 (1:100, Dako, Glostrup, Denmark) και αντι-CD68 (1:1000, Dako) σε PBST που περιείχε 3 mg /ml κατσίκα σφαιρίνη (Sigma, St. Louis, ΜΟ, USA) για 60 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου, που ακολουθείται από τρεις διαδοχικές εκπλύσεις με ρυθμιστικό διάλυμα. Οι τομές στη συνέχεια επωάστηκαν με ένα αντίσωμα αντι-ποντικού /λαγού (Envision συν, Dako) για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Το χρωμογόνο που χρησιμοποιήθηκε ήταν 3,3′-διαμινοβενζιδίνη (Dako). Οι τομές με αιματοξυλίνη Meyer. Παραλείποντας το πρωτογενές αντίσωμα που προβλέπονται αρνητικοί έλεγχοι για ανοσοχρώση.

Αξιολόγηση της Ανοσοϊστοχημική Ανάλυση

Δύο παθολόγους (YHX και ΚΕΔΑ) αξιολόγησε τα ανοσοϊστοχημική αποτελέσματα χωρίς προηγούμενη γνώση των κλινικοπαθολογοανατομικών αποτελέσματα, και να συζητηθούν τυχόν αποκλίσεις στο σκορ μέχρι επιτεύχθηκε συναίνεση. Σύμφωνα με την ένταση χρώσης και το ποσοστό των θετικών στρωματικά κύτταρα, ανοσοϊστοχημικές βαθμολογίες για SMA, FAP, FSP1, PDGFRα, και PDGFRβ μετρήθηκαν από δύο παθολόγους (YHX και SHK) χωρίς προηγούμενη γνώση της κλινικοπαθολογοανατομικών αποτελεσμάτων, ως εξής: 1, αδύναμος χρώση σε & lt? 50% ή μέτρια χρώση σε & lt? 20% των στρωματικών κυττάρων? 2, ασθενής χρώση σε ≥50%, μέτρια χρώση σε 20-50% ή ισχυρή χρώση στο & lt? 20%? 3, μέτρια χρώση σε ≥50% ή ισχυρή χρώση σε ≥20% (που συνοψίζονται στο Σχήμα 2). Περιπτώσεις με σκορ 2 και 3 θεωρήθηκαν ως θετικότητα για κάθε έκφραση της πρωτεΐνης. MVD αξιολογήθηκε με τη μέθοδο του Weidner et al. [19] Εν συντομία, όλες οι CD34 θετικό άτομο μετρήσεις μικροαγγείων έγιναν πάνω σε ένα πεδίο 200 × μετά το υψηλότερο περιοχή ταυτοποιήθηκε με σάρωση σε χαμηλή μεγέθυνση (40-100 Χ). MVD ταξινομήθηκε σε τρεις ομάδες: χαμηλή όταν MVD ήταν & lt? 40? ενδιάμεσο όταν MVD ήταν 40-60? και υψηλό όταν MVD ήταν & gt? 60. TAM ταυτοποιήθηκε με θετικότητα του CD68 και του βαθμού διείσδυσης TAM προσδιορίστηκε από το ποσοστό των CD68 θετικών κυττάρων μεταξύ όλων των στρωματικών κυττάρων: χαμηλή, όταν το ποσοστό ήταν & lt? 20%? υψηλή όταν ≥20% [20]

Α:. Ανάλυση ανοσοϊστοχημική χρώση που εκτελούνται με βάση τόσο την ένταση και χρώση περιοχή. Β:. Επίδειξη της ανοσοϊστοχημική χρώση του λείου μυός ακτίνη (SMA), ινοβλαστών-ειδική πρωτεΐνη-1 (FSP-1), πρωτεΐνη ενεργοποιητή ινοβλαστών (FAP), προερχόμενο από αιμοπετάλια υποδοχέα αυξητικού παράγοντα (PDGFR) α, και PDGFRβ

Στατιστική Ανάλυση

οι συσχετίσεις εξετάστηκαν με τη χρήση τεστ chi-square Pearson ή ακριβές τεστ του Fisher ανάλογα με την περίπτωση. Η συνολική επιβίωση (OS) και απαλλαγμένα από ασθένειες επιβίωση (DFS) προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας τη μέθοδο Kaplan-Meier και συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία log-rank. Η επιβίωση μετρήθηκε από την ημερομηνία της χειρουργικής επέμβασης. Η Cox μοντέλο αναλογικών κινδύνων χρησιμοποιήθηκε για πολυπαραγοντική ανάλυση. Cinicopathologic παράγοντες, που ήταν στατιστικά σημαντικό σε univariated ανάλυση, συμπεριλήφθηκαν ως covariables στην πολυπαραγοντική ανάλυση. Οι αναλογίες κινδύνου (HR) και τα διαστήματα εμπιστοσύνης 95% (CI) αξιολογήθηκαν για κάθε παράγοντα. Όλες οι δοκιμασίες ήταν δύο όψεων, και

P

≤0.05 θεωρήθηκε σημαντική. Η στατιστική ανάλυση έγινε με τη χρήση SPSS στατιστικού λογισμικού (SPSS Inc, Chicago, IL, USA).

Αποτελέσματα

Η ιστολογική κατάταξη των CAF συσχετίζεται με πρόγνωση ESCC

Πενήντα δύο περιπτώσεις (44,8%) είχαν ταξινομηθεί ως ώριμος φαινότυπος CAF και 64 όνες (55,2%) ως ανώριμο φαινότυπο (Σχήμα 1Α-Β). Οι συσχετίσεις μεταξύ αυτών των κατηγοριών και των κλινικοπαθολογική χαρακτηριστικά συνοψίζονται στον Πίνακα 1. Τα ανώριμα φαινότυποι CAF ήταν σημαντικά σχετίζονται με αυξημένη MVD (ρ & lt? 0.001) και την ενισχυμένη διείσδυση του ΤΑΜ (p = 0,003) σε σύγκριση με την ώριμη φαινότυπο στρωματικών. Τόσο η αύξηση της MVD και της διείσδυσης της TAM συσχετίζονται με κακή πρόγνωση της ESCC (Σχήμα S1). Αυτή η ιστολογική κατηγοριοποίηση συσχετίστηκε επίσης με τον φαινότυπο EMT του ESCC (p = 0,002), η οποία ορίστηκε σε προηγούμενη μελέτη μας με ανοσοϊστοχημική έκφραση του δείκτη μεσεγχυματικών και Ε-καδερίνης. [21] Η πλήρης φαινότυπος ΕΜΤ, η οποία χαρακτηρίζεται από απώλεια της Ε- καντερίνη έκφραση με απόκτηση της έκφρασης μεσεγχυματικών δείκτη, ήταν σημαντικά συχνότερη στα άωρα φαινοτύπους CAF από ότι στις άλλες φαινοτύπους. Το ανώριμο φαινότυπο CAF έντονα συσχετίζεται με μειωμένο λειτουργικό σύστημα και DFS (p & lt? 0.001) (Σχήμα 1 C-D), και ήταν ένας ισχυρός ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας για το OS (HR: 5,23 (95% CI: 2,57 – 10,65), σ & lt? 0.001 ) και DFS (HR: 3,05 (95% CI: 1,66 – 5,59), σελ. & lt? 0.001) (Πίνακας 2)

η

Εκφράσεις του ΚΠΑ Δείκτες όπως η SMA, FSP1, FAP, PDGFRα, και PDGFRβ σε στρωματικά ινοβλάστες είναι συχνή σε ESCC και SMA & amp? FSP1 συνδέονται στενά με κακή έκβαση

επικυρωθεί αντίσωμα έναντι FSP1, FAP, PDGFRα, και PDGFRβ, εκτός από την SMA, που χρησιμοποιούνται ευρέως στην καθημερινή πρακτική (Εικόνα S2 και Κείμενο S1) και εκτελείται επακόλουθη διαδικασία IHC. Η συσχέτιση της έκφρασης των πέντε δεικτών CAF με τις κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά συνοψίζονται στον Πίνακα S1. SMA, FSP1, FAP, PDGFRα, και PDGFRβ εκφράστηκαν σε 82,8%, 72,4%, 61,2%, 88,8% και 54,3% των ινοβλαστών στρωματικών σε ασθενείς με ESCC, αντίστοιχα (Σχήμα 2). έκφραση SMA σε καρκινικά στρωματικά ινοβλαστών παρατηρήθηκε πιο συχνά σε όγκους των οποίων το μέγεθος είναι μεγαλύτερο από 4 cm (ρ & lt? 0.001), το στάδιο advanced Τ (ρ & lt? 0.001) και Ν στάδιο (ρ & lt? 0.001), αλλά λιγότερο συχνά σε αυτούς με καλά διαφοροποιημένο όγκους (ρ & lt? 0.001). Επίσης σχετίζεται με EMT φαινότυπο (ρ = 0,005). έκφραση FSP1 ήταν πιο συχνά σε ηλικιωμένους ασθενείς (≥65 ετών) (p = 0.037). έκφραση PDGFRβ συνδέθηκε με πτωχά διαφοροποιημένο όγκους (ρ = 0.010). Ωστόσο, δεν υπάρχουν σημαντικές συσχετίσεις μεταξύ των FAP, PDGFRα και κλινικοπαθολογική παραμέτρους.

Οι καμπύλες επιβίωσης Kaplan Meier σύμφωνα με το πρότυπο έκφρασης των 5 δεικτών CAF παρέχονται στην Εικόνα 3. Η έκφραση της SMA και FSP1 συσχετίστηκε σημαντικά με μικρότερη ποσοστά OS και DFS των ασθενών. Ειδικότερα, η 5-ετή OS και DFS συντελεστής του στρωματικών SMA-θετική ομάδα (41% και 34% αντίστοιχα) ήταν σημαντικά χαμηλότερα από εκείνα του SMA-αρνητική ομάδα (88% και 75%) (OS: p = 0,005 ? DFS: p = 0,004). Οι 5-ετή OS και DFS ποσοστά στην FSP1-θετική ομάδα στρωματικά (39% και 35% αντίστοιχα) ήταν επίσης σημαντικά χαμηλότερες από εκείνες του από FSP1-αρνητικών ομάδα (79% και 58%) (OS: p = 0,002? DFS: p = 0,044). Επιπλέον, ο ρυθμός OS 5 ετών σε στρωματικά PDGFRα-θετική ομάδα (43%) ήταν σημαντικά χαμηλότερη από ότι στο PDGFRα-αρνητική ομάδα (100%) (ρ = 0,003). Οι ασθενείς με έκφραση FAP έδειξε μικρότερο συνολικό ποσοστό επιβίωσης 5-ετών (41% έναντι 63%) χωρίς στατιστική σημασία (ρ = 0.070). Και δεν υπάρχει σημαντική συσχέτιση παρατηρήθηκε μεταξύ της έκφρασης PDGFRβ και τα ποσοστά OS ή DFS. Στην πολυπαραγοντική ανάλυση, η έκφραση FSP1 ήταν ένας ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας για OS (HR: 4,86 ​​(95% CI: 1,90 – 12,40), p = 0,001) και DFS (HR: 2,77 (95% CI: 1,37 – 5,51), p = 0,004 ).

Η

Η Συσχέτιση της CAF δείκτης έκφρασης με ταξινόμηση ιστολογική

Πέντε δείκτες ΚΠΑ, όπως η SMA, FSP1, FAP, PDGFRα, και PDGFRβ ήταν ετερογενώς εκφράζεται σε στρωματικά κύτταρα των 116 ESCCs (Σχήμα 4). Ωστόσο, από αυτές τις πέντε CAF δείκτες, ο αριθμός των δεικτών που δείχνει θετικότητα στο ΚΠΑ ήταν μεγαλύτερη σε ESCC με ανώριμα CAFS από αυτούς με ώριμα (μέση τιμή 3,89 ± 1,09 έναντι 3,21 ± 1,23, p = 0,002). Συγκεκριμένα, η έκφραση FSP1, PDGFRα ή PDGFRβ ήταν πιο συχνά σε ESCCs με CAFS ανώριμα από αυτούς με ώριμα (Πίνακας S2).

Η

Συζήτηση

Στην παρούσα μελέτη, εξετάσαμε την πρώτη το πρότυπο έκφρασης και η κλινική σημασία των δεικτών CAF, καθώς και τα ιστολογικά κατηγορίες και άλλα καρκίνο μικροπεριβάλλοντα σε ESCC. Ιστολογικά ανώριμα CAF, ορίζεται ως ένα μεγάλο, παχουλό ατρακτοειδή μορφολογία, συσχετίστηκε με αυξημένο MVD, σημειώνονται TAM και πλήρη φαινότυπο EMT. Ήταν επίσης ένας ισχυρός ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας. Πέντε CAF δείκτες είχαν ετερογενώς εκφράζεται σε μεμονωμένη περίπτωση, αλλά ο συνολικός αριθμός των εντόνως εκφρασμένο δεικτών CAF ήταν μεγαλύτερη σε ανώριμα τύπου CAF ό, τι στην ώριμη ένα.

Οι ινοβλάστες φαίνεται να είναι το πιο ευέλικτο από κύτταρα συνδετικού ιστού, εμφανίζοντας μια αξιοσημείωτη ικανότητα να διαφοροποιούνται σε άλλα μέλη της οικογένειας, όπως τα λιπαρά κύτταρα, κύτταρα χόνδρου, και τα κύτταρα των οστών. «Ώριμο» ινοβλάστες με μικρότερο ικανότητα για μετασχηματισμό μπορεί, για παράδειγμα, συνυπάρχουν με το «ανώριμα» ινοβλαστών (που συχνά αποκαλείται μεσεγχυματικά κύτταρα) που μπορεί να εξελιχθεί σε μία ποικιλία ώριμων κυτταρικών τύπων. Γενικά, τα ανώριμα ινοβλάστες γνωστό ότι συνήθως παρουσιάζουν ένα μεγάλο παχουλό και ευχρωματινικούς πυρήνα με ένα ή δύο πυρήνια και τραχύ ενδοπλασματικό δίκτυο και εμφανή συσκευή Golgi επί υπερδομικές ευρήματα. Σε αυτή τη μελέτη, που ταξινομούνται CAF του ESCC ως ώριμα και ανώριμα τύπος με βάση ιστολογικά χαρακτηριστικά. Ως αποτέλεσμα, ανώριμα τύπος παρατηρήθηκε στο 55,2% των ESCC και συνδέθηκε με δυσμενή κλινική έκβαση. Επίσης συνδέθηκε με αυξημένο MVD και την πλήρη φαινότυπο EMT, οι οποίες είναι γνωστό ότι είναι ο μηχανισμός της εξέλιξης του καρκίνου [1] -. [6], [22] Επιπλέον, σημείωσε την ΤΑΜ, όπως υποδεικνύεται από την έκφραση CD68 ήταν σημαντικά πιο συχνή σε ESCC με ανώριμα τύπου CAF. Γενικά ΤΑΜ θεωρείται ως η φαινότυπος Μ2 των μακροφάγων που προάγουν την αγγειογένεση, την ανάπτυξη, την εισβολή, τη μετανάστευση και τη μετάσταση [23] – [25]. Τα διηθητικά ΤΑΜ συσχετίζονται με κακή πρόγνωση στον καρκίνο του μαστού [23] Σε συμφωνία με την παρούσα έκθεση,. ενισχυμένη διείσδυση του ΤΑΜ στο ESCC επίσης συσχετίστηκε με κακή έκβαση. Ωστόσο, απαιτείται περαιτέρω μελέτη για να καθοριστεί πιο συγκεκριμένη σχέση μεταξύ των ΚΠΑ φαινότυπο και Μ2 φαινότυπος του ΤΑΜ στο ESCC. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι η ιστολογική κατάταξη μας στρωματικών ινοβλαστών είναι αξιόπιστη και κλινικά σχετική παρά την έλλειψη λεπτομερή κατανόηση του μοριακού μηχανισμού της.

Εμείς επιλέξαμε SMA, FSP-1, FAP, PDGFRα, και PDGFRβ ως δείκτες CAF με βάση σε προηγούμενες μελέτες. [1], [2], [4] Αυτή είναι η πρώτη μελέτη για τη διερεύνηση της έκφρασης και τη σημασία της SMA, FSP-1, FAP, PDGFRα, και PDGFRβ σε ESCC όσο γνωρίζουμε. Εκτός SMA, το οποίο χρησιμοποιείται ευρέως στην καθημερινή πρακτική, τα υπόλοιπα τέσσερα αντισώματα είναι σχετικά νέα και έχουν χρησιμοποιηθεί κυρίως για ερευνητικούς σκοπούς. Ως εκ τούτου, προσπαθήσαμε να επικυρώσει αυτά τα τέσσερα αντισώματα και διαπίστωσε ότι και οι τέσσερις αντισώματα ήταν ειδικά σε τόσο Western και ανοσοϊστοχημεία σε φορμόλη σταθερό και ενσωματωμένα σε παραφίνη ιστό (Εικόνα S2).

Τα αποτελέσματα αποκάλυψαν ότι η έκφραση της SMA στην ESCC ινοβλάστες στρωματικά συσχετίστηκε με μεγαλύτερο μέγεθος, προχωρημένο στάδιο Τ, λεμφικό μετάσταση στους λεμφαδένες, και κακή πρόγνωση. Παρά τη διαφορά σε όργανα και τύπους καρκίνου, αυτό το αποτέλεσμα είναι εξαιρετικά συνεπής με προηγούμενες μελέτες στις οποίες οι ασθενείς με άφθονη μυοϊνοβλάστες στρωματικά εκφράζουν SMA έδειξε μια χειρότερη πρόγνωση σε από του στόματος, του παχέος εντέρου και του μαστού [26] – [29]. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν επίσης ότι ασθενείς που εκφράζουν FSP1 ήταν μεγαλύτερα και είχαν μικρότερη ποσοστά επιβίωσης, το οποίο ήταν επίσης συνεπής με προηγούμενες μελέτες που έχουν διεξαχθεί σχετικά με τον καρκίνο του μαστού. [30] PDGFRβ έκφραση συσχετίστηκε με χαμηλή διαφοροποίηση όγκους (ρ = 0.010), αλλά δεν συνδέθηκε με την πρόγνωση. έκφραση PDGFRα στο ΚΠΑ αποτελεί ουσιαστικό παράγοντα για την εξέλιξη του καρκίνου του πνεύμονα [31] και το αποτέλεσμα αυτό ήταν εν μέρει σύμφωνες με αποτέλεσμα μας. Οι ασθενείς με την έκφραση FAP έδειξε ελαφρώς μειωμένη OS (p = 0,070) και έκφραση FAP συσχετίστηκε με πιο συχνή θανάτου (p = 0,030). Αυτά τα αποτελέσματα είναι εν μέρει σύμφωνα με προηγούμενες μελέτες που πραγματοποιήθηκαν στην παγκρέατος και του παχέος εντέρου. [32], [33] Σχετικά με την προγνωστική αξία της PDGFRβ, υπάρχει κάποια διαφωνία μεταξύ αποτέλεσμα μας και αυτά των δύο προηγούμενων μελετών που παρατήρησε τη σύνδεση των στρωματικών PDGFRβ έκφραση και κακή πρόγνωση σε προστάτη και καρκίνο του παγκρέατος, αντίστοιχα. [34], [35] Αυτή η διαφορά μπορεί να οφείλεται σε διαφορετικούς τύπους ή όργανα καρκίνου. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι ορισμένα από τα επιμέρους CAF δεικτών ήταν σημαντικοί προγνωστικοί παράγοντες πρόβλεψης ESCC. Ωστόσο, το πρότυπο έκφρασης των δεικτών CAF ήταν εξαιρετικά ετερογενής σε κάθε μεμονωμένη περίπτωση, αντικατοπτρίζοντας την ετερογένεια του πληθυσμού CAF. Λαμβάνοντας υπόψη την ποικιλομορφία των κυτταρικών προέλευσης των ΚΠΑ και τεράστια ετερογένεια των CAF φαινοτύπων, οι πρόσθετες δείκτες CAF με μια καλή εξειδίκευση που απαιτείται [2].

Λόγω της ετερογένειας των CAF φαινότυπο, την αξιολόγηση των δεικτών CAF με μικροσυστοιχίες ιστού ( TMA) μπορεί να έχει ένα δυνητικό περιορισμό σε σχέση με την αξιολόγηση από όλη την ανοσοχρώση μπλοκ-βάση. Ωστόσο, βρήκαμε ότι CAFS κατανεμήθηκαν ομοιόμορφα, ανεξάρτητα από την ετερογένεια των CAF φαινοτύπου σε περισσότερο από το ήμισυ των περιπτώσεων ESCC (Σχήμα S3A-Β) στην προκαταρκτική μελέτη εξετάζοντας την έκφραση FSP1, έναν εκπρόσωπο CAF δείκτη, στο σύνολο μπλοκ 10 υποθέσεις ESCC. Στις υπόλοιπες περιπτώσεις, η διανομή CAF έδειξε περιφερειακή συγκέντρωση γύρω από ποικίλες θέση, όπως εισβολή μπροστά, νέκρωση επιφάνεια ή στρώμα μυών (Εικόνα S3C-Ε), χωρίς συγκεκριμένη συσχέτιση με την ανατομική θέση ή το βάθος της εισβολής. Και το «hot spot» CAF είναι έντονα γεμάτο με CAFS και στρωματικά κύτταρα ήταν εύκολα αναγνωρίζονται H & amp? Ενότητα Ε. Για να ελαχιστοποιηθεί η μεροληψία επιλογής, χρησιμοποιήσαμε μεγάλου μεγέθους πυρήνα ιστού (2,0 mm σε διάμετρο) για την κατασκευή TMA και επιλέχθηκε κάθε πυρήνας ιστού να περιέχει τουλάχιστον ένα ή περισσότερα «hot spot» CAF του.

Σε ESCCs, πρόσφατα αρκετές αναφορές έχουν δείξει την κλινική σημασία και το ρόλο του στρώματος του όγκου, συμπεριλαμβανομένων CAF στην πρόοδο του καρκίνου. Wang et al. ανέφερε ότι η αναλογία όγκου-στρώματος καθορίζεται με μικροσκοπική αξιολόγηση ήταν ανεξάρτητος προγνωστικός δείκτης επιβίωσης στην ESCC. [13] Liu et al. έδειξε ότι οι πυκνότητες των μυοϊνοβλαστών, λεμφοκύτταρα, μακροφάγα και μικροαγγεία αυξήθηκαν χαρακτηριστικά στο στρώμα του όγκου του ESCC και συνήθως συνδέονται με την εμπλοκή των λεμφαδένων. [14] Zhang et al. σε σύγκριση προφίλ γονιδιακής έκφρασης ινοβλαστών όγκου από ESCC με εκείνη των κανονικών ινοβλαστών και διαπίστωσε ότι τα γονίδια που σχετίζονται με τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό, την εξωκυτταρική μήτρα, και της ανοσολογικής απόκρισης εκφράζονται διαφορικά. [16] Τα αποτελέσματα αυτά είναι γενικά σύμφωνα με τα αποτελέσματά μας σε αυτό το παρουσία ενεργοποιημένων CAFS συνδέθηκε με μια δυσμενή έκβαση της ESCC. Ωστόσο, αυτή είναι η πρώτη μελέτη που αξιολόγησε την ακριβή κλινικοπαθολογοανατομικών ενδιαφέρον κάθε CAF δεικτών, χρησιμοποιώντας μια μεγάλη σειρά ασθενών με ESCC. Επιπλέον, αυτή είναι η πρώτη μελέτη για την ανάλυση ινοβλάστες στρωματικά στο ESCC βασίζεται στην ιστολογία και δείχνουν προγνωστική ισχύ της σε μια μεγάλη ομάδα ασθενών με ESCC.

Εν κατακλείδι, τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι η ιστολογική κατάταξη των ΚΠΑ είναι ένα ισχυρό προγνωστικό παράγοντα πρόβλεψης για ESCC και σχετίζεται με αυξημένη MVD και TAM καθώς και πλήρη φαινότυπο EMT. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν επίσης ότι CAF δείκτες έχουν δυνατότητες να είναι διαγνωστικές και θεραπευτικές στόχων σε ESCC.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Εικόνα S1. καμπύλες

επιβίωσης χρησιμοποιώντας τη μέθοδο Kaplan-Meier από δοκιμασία log-rank για τους παράγοντες που σχετίζονται με τον καρκίνο-μικροπεριβάλλον. . (Α-Β) μικροαγγειακή πυκνότητα (Γ-Δ) που συνδέονται όγκων μακροφάγων

doi: 10.1371 /journal.pone.0099955.s001

(ΔΕΘ)

Εικόνα S2.

Επικύρωση πρωτεΐνης ενεργοποιητή ινοβλαστών (FAP), ινοβλαστών-ειδική πρωτεΐνη-1 (FSP-1), υποδοχέα αυξητικού παράγοντα από αιμοπετάλια (PDGFR) α και αντισώματα PDGFRβ. Α, Β: Τα αποτελέσματα της στύπωσης Western και το επίπεδο mRNA με αντίστροφη μεταγραφή αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης. Όλα τα αντισώματα αναγνώρισαν τις πρωτεΐνες με τα αναμενόμενα μοριακά βάρη (Α) και αυτά τα αποτελέσματα ήταν εξαιρετικά συνεπής με τα επίπεδα του mRNA των πρωτεϊνών αυτών (Β). C: Τα αποτελέσματα της ανοσοϊστοχημική χρώση των κυτταρικών τετράγωνα από 293Τ, ΝΙΗ3Τ3, HeLa και κύτταρα. Αντισώματα προς FSP1, PDGFRα, και PDGFRβ χρώση σε κύτταρα ΝΙΗ3Τ3 (θετικός έλεγχος), αλλά όχι σε κύτταρα 293Τ και HeLa (αρνητικός έλεγχος). Αντίσωμα για FAP βάφονται επίσης σε κύτταρα HeLa (θετικός έλεγχος), αλλά όχι σε 293Τ ή κύτταρα ΝΙΗ3Τ3 (αρνητικός έλεγχος)

doi:. 10.1371 /journal.pone.0099955.s002

(TIF)

Σχήμα S3.

Το αποτέλεσμα της προκαταρκτικής μελέτης εξετάζει έκφραση FSP1, έναν εκπρόσωπο του καρκίνου που σχετίζεται ινοβλαστών (CAF) δείκτης, στα ολόκληρα οικοδομικά τετράγωνα των 10 οισοφαγικό καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων (ESCC) περιπτώσεις. (Α-Β) CAFS κατανέμονται ομοιόμορφα, ανεξάρτητα από την ετερογένεια των CAF φαινοτύπου σε περισσότερο από το ήμισυ των περιπτώσεων ESCC. (Γ-Ε) Οι υπόλοιπες περιπτώσεις δείχνουν κατανομή CAF με περιφερειακή συγκέντρωση γύρω από ποικίλες θέση, όπως η εισβολή μπροστά (C), νέκρωση της επιφάνειας (D) ή το στρώμα μυών (Ε)

doi:. 10.1371 /journal.pone.0099955 .s003

(ΔΕΘ)

πίνακα S1.

Σύγκριση κλινικοπαθολογική χαρακτηριστικά σύμφωνα με το πρότυπο έκφρασης της SMA, FSP1, FAP, PDGFRA και PDGRB

doi:. 10.1371 /journal.pone.0099955.s004

(DOCX)

Πίνακας S2. .

Συσχέτιση των ιστολογικών υποτύπου και της έκφρασης των 5 καρκίνο που σχετίζεται δείκτες ινοβλαστών

doi: 10.1371 /journal.pone.0099955.s005

(DOCX)

Κείμενο S1.

Επικύρωση της FAP, FSP1, PDGFRα και αντισώματα PDGFRβ

doi:. 10.1371 /journal.pone.0099955.s006

(DOCX)