Αφηρημένο

προηγούμενες μελέτες μας έχουν δείξει ότι η γενετική διαγραφή του

MUC2

γονίδιο προκαλεί παχέος εντέρου σε ποντίκια. Η παρούσα μελέτη έδειξε ότι ακόμη σε πρώιμο στάδιο (& lt? 3 μηνών), η

MUC2

knockout ποντικών αυθόρμητα αναπτύσσεται χρόνιας φλεγμονής στο παχύ έντερο και το ορθό, παρόμοια παθολογικά χαρακτηριστικά, όπως τα ανθρώπινα κολίτιδα? και κατά το τελικό στάδιο (& gt? 3 μήνες) τα ποντίκια εμφάνισαν καρκίνο του παχέος εντέρου, συμπεριλαμβανομένου ενός μοναδικού φαινότυπο του ορθού πρόπτωση (ορθού σοβαρή φλεγμονή και αδενοκαρκίνωμα). Έτσι, η ηλικία των 3 μηνών θα μπορούσε να είναι το βασικό σημείο της μετάβασης από χρόνια φλεγμονή σε καρκίνο. Να καθορίσει τους μηχανισμούς της κακοήθους εξαλλαγής, πραγματοποιήσαμε σειρά miRNA στα επιθηλιακά κύτταρα του κόλου από την 3-μηνών

MUC2

– /- και

+ /+ ποντίκια. MicroRNA προφίλ έδειξαν διαφορική έκφραση των miRNAs (δηλαδή χαμηλότερο ή υψηλότερο εμπλουτισμό έκφραση) στο

MUC2

– /- ποντίκια. 15 από αυτούς είχαν επικυρωθεί από ποσοτική PCR. Με βάση την συνάφεια με κυτοκίνη και τον καρκίνο, 4 miRNAs (miR-138, miR-145, miR-146a και miR-150) ήταν Επικύρωση και βρέθηκαν σημαντικά προς τα κάτω σε ανθρώπινο κολίτιδα και του παχέος καρκινικούς ιστούς. Το δίκτυο των στόχων αυτών των miRNAs χαρακτηρίστηκε, και interestedly, miRNA που σχετίζονται με κυτοκίνες ήταν σημαντικά αυξημένα σε

MUC2

– /- ποντίκια. Αυτό είναι το πρώτο για να αποκαλύψει τη σημασία της παρεκκλίνουσας έκφρασης miRNAs σε δυναμικά μεταμόρφωση από χρόνια κολίτιδα σε καρκίνο κολίτιδα σχετιζόμενη. Τα ευρήματα αυτά ρίχνουν φως στην αποκάλυψη των μηχανισμών της χρόνιας κολίτιδας κακοήθη μετασχηματισμό

Παράθεση:. Bao Υ, Guo Υ, Li Ζ, Fang W, Γιανγκ Υ, Λι Χ, et al. (2014) microRNA Profiling στο

MUC2

Knockout ποντίκια της Κολίτιδα-Associated Καρκίνος Μοντέλο αποκαλύπτει επιγενετικές διαταραχές κατά τη διάρκεια της χρόνια κολίτιδα κακοήθους εξαλλαγής. PLoS ONE 9 (6): e99132. doi: 10.1371 /journal.pone.0099132

Επιμέλεια: Σεργκέι Grivennikov, Αντικαρκινικού Κέντρου Fox Chase, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 25η Φεβρουαρίου του 2014? Αποδεκτές: 11 Μαΐου, 2014? Δημοσιεύθηκε: 18 του Ιούνη 2014

Copyright: © 2014 Bao et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε εν μέρει από την επιχορήγηση από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (επιχορήγηση # 91229115 και 81272251), επιχορήγηση για την πρωτοποριακή ομάδα της Επιστήμης και Τεχνολογίας από το Υπουργείο Παιδείας, επαρχία Henan, Κίνα, και διδάκτωρ του Ταμείου Έρευνας (# 100820 και 505011) και εκκίνηση Ταμείου από Xinxiang Ιατρικό Πανεπιστήμιο, Κίνα. Το έργο υποστηρίζεται επίσης εν μέρει από το Εθνικό Κολλέγιο Φοιτητής Καινοτόμα Σχέδια της Κίνας (# 201310472005 έως XL, 201310472012 προς BX, και 201.310.472.016 να ZL). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Καρκίνος του παχέος εντέρου (CRC) είναι η τρίτη κοινή κακοήθη νόσο και η δεύτερη κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο σχετίζονται [1]. Όπως και άλλες κακοήθειες, οι γενετικοί παράγοντες συνεισφέρουν πολλά στο σχηματισμό CRC, αλλά μόνο περίπου 20% των περιπτώσεων CRC μπορεί να είναι γενετικά αποδοθεί στην οικεία ιστορία [2] – [4]. Στην πραγματικότητα, οι περισσότεροι από σποραδικές CRC συνδέονται στενά με περιβαλλοντικούς παράγοντες, από τους οποίους οι πιο συχνά μεταλλάξεις σε αδενωματώδη πολυποδίαση coli (APC) ογκοκατασταλτικό γονίδιο να οδηγήσει σε καταστροφή του APC /ΟδΚ3β /Axin συγκρότημα και ενεργοποίηση των Wnt μονοπατιού /β-κατενίνης [ ,,,0],2], [5], [6] η παρεκκλίνουσα ενεργοποίηση της Wnt μονοπατιού /β-κατενίνης δεν προάγει μόνο τον πολλαπλασιασμό των εντερικών επιθηλιακών κυττάρων, αλλά επάγει επίσης τη σύλληψή τους καθώς κινούνται προς το τέλος της κρύπτης και να αποτρέψει απόπτωση ή απόπτωση των μετασχηματισμένων κυττάρων. Η κανονική «γενετικό μονοπάτι για καρκίνο του παχέος εντέρου» έχει καλά μελέτες. Οι αναδυόμενες μηχανισμοί σχηματισμού καρκίνου του παχέος εντέρου από περιβαλλοντικούς παράγοντες που σχετίζονται με τη χρόνια φλεγμονή, που ονομάζεται κολίτιδα σχετιζόμενη με τον καρκίνο του παχέος εντέρου (CAC) [7] – [10] Με τις αλλαγές της διατροφής και τρόπου ζωής στην Κίνα, CRC αυξάνει το ρυθμό εμφάνισης γρήγορα από ό, τι οι οποιεσδήποτε άλλες μορφές καρκίνου τα τελευταία χρόνια [11], και αρκετά ποσότητα του CRC υποθέσεων που συνδέονται με χρόνια φλεγμονώδη νόσο του εντέρου (IBD). Είναι αποδεκτό ότι προηγείται CAC είναι από κλινικά ανιχνεύσιμης IBD [8], [12], όπως η νόσος του Crohn (CD) ή ελκώδης κολίτιδα (UC). Επιδημιολογία και κλινικές μελέτες έχουν προτείνει ότι UC αυξάνει CAC κίνδυνο έως και 18-20%, ενώ το CD με έως και 8% μετά από 30 χρόνια ενεργού νόσου [13] – [15]. Σε μοντέλα ποντικού, μόνο ένεση καρκινογόνο αζοξυμεθάνιο (ΑΟΜ) οδηγεί σε πολλαπλές κολονική όγκους, μόνο όταν συνδυάζεται με χρόνια κολίτιδα που προκαλείται από δεξτράνη θειικού νατρίου (DSS), ενώ όταν η φλεγμονή είναι απούσα παίρνει πολλαπλές ενέσεις του ΑΟΜ και περισσότερο χρόνο για σχηματισμό όγκου [16], [17]. Αυτές οι κλινικές και πειραματικές παρατηρήσεις εντοπίσει σαφώς CAC ως κλασική φλεγμονή με γνώμονα τον καρκίνο. Ωστόσο, σε αντίθεση με Αρο /Wnt /β-κατενίνης οδού, των μηχανισμών που διέπουν κολίτιδα σχετιζόμενη με τον καρκίνο, και ιδιαίτερα, της κολίτιδας κακοήθους μετασχηματισμού, είναι σε μεγάλο βαθμό ασαφής, majorly λόγω της έλλειψης ενός κατάλληλου μοντέλου για την δυναμική της έρευνας.

οι εντερική επιθήλια προστατεύεται από ένα στρώμα βλεννίνης που εκκρίνεται από λαγηνοειδή κύτταρα έναντι μηχανικών και χημικών τραυματισμών, ισχυρός αιτίες της φλεγμονής, και η πιο άφθονη εκκρίνεται εντερική βλεννίνη κωδικοποιείται από το

MUC2

γονίδιο [18]. Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι μείωση του αριθμού των καλυκοειδών κυττάρων και μειωμένη

MUC2

έκφραση παρατηρείται συνήθως στην ελκώδη κολίτιδα και ορθοκολικό καρκίνωμα [19]. Η σημασία του

MUC2

στην εντερική ομοιοστασία αντανακλάται από μεταβολές του κυτταρικού πολλαπλασιασμού, της μετανάστευσης και της απόπτωσης στο έντερο ποντικού σε γενετικούς διαγραφή του

MUC2

γονίδιο [20], και το σημαντικότερο,

MUC2

-deficiency ποντικούς (

MUC2

– /- ποντίκια) αυθόρμητα αναπτύσσουν μικρές και μεγάλες εντερική, και πρωκτική, όγκους [20]. Μηχανιστικές μελέτες έχουν δείξει ότι η ογκογένεση συνδέεται με την ενεργοποίηση της χρόνιας φλεγμονής, και δεν συνδέεται με Wnt /β-κατενίνης σηματοδότηση [20]. Ωστόσο, η αυξημένη εντερική φλεγμονή ογκογένεση σε Αρο μεταλλαγμένα ποντίκια με εισαγωγή

MUC2

ανεπάρκεια στους ποντικούς [21], και η απώλεια των εξαρτώμενων από κυκλίνη αναστολέα κινάσης p21WAF1 ενισχυμένο σχηματισμό εντερικών όγκων σε

MUC2

– /- ποντίκια [22], η τρέχουσα μελέτη μας έδειξε ότι περαιτέρω

MUC2

ποντίκια ανεπάρκεια αναπτύσσουν αυθόρμητα χρόνια κολίτιδα σε νεαρή ηλικία τους (& lt? 3 σκώρους), του οποίου η ιστοπαθολογία ήταν παρόμοια με την ελκώδη κολίτιδα στους ασθενείς. Μετά από 3 μήνες, η

MUC2

– /- ποντίκια αναπτύσσουν παχέος εντέρου και του ορθού όγκων. Ως εκ τούτου, η ηλικία των 3 μηνών θα μπορούσε να είναι το βασικό σημείο στο οποίο η χρόνια κολίτιδα εξελίσσεται σε καρκίνο του παχέος εντέρου, δηλαδή κολίτιδα κακοήθη μετασχηματισμό, και το

MUC2

ποντίκια θα μπορούσε να είναι ένα από τα καλύτερα μηχανικής μοντέλα καρκίνου κολίτιδα σχετιζόμενη προς dynastically μελέτη του μηχανισμού της κακοήθη μετασχηματισμό της χρόνιας κολίτιδας

Για να αποκαλυφθεί των μοριακών μηχανισμών της κολίτιδας κακοήθους μετασχηματισμού, απομονώσαμε παχέος επιθηλιακά κύτταρα από το

MUC2

-. /- ποντίκια και διεξάγεται miRNA προφίλ. Βρήκαμε διαφορική έκφραση των miRNAs στο σημείο κλειδί της κακοήθους εξαλλαγής. Ορισμένες miRNAs χαρακτηρίστηκαν στο ανθρώπινο κολίτιδα και του παχέος καρκινικούς ιστούς. Είναι ενδιαφέρον, τα μειωτικά miRNAs ήταν συνεπείς με τις αλλαγές σε ποντίκια, και συνδέονται με τις αυξήσεις των κυτοκινών, υποδεικνύοντας τις επιγενετικές μεταβολές μπορεί να παίζουν κρίσιμο ρόλο κατά τη διάρκεια της κολίτιδας κακοήθους μετασχηματισμού.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθική δήλωση:

Η φροντίδα των ζώων και τη χρήση εγκρίθηκαν από την Επιτροπή Θεσμικών ζωικά φροντίδα και χρήση των Xinxiang Ιατρικό Πανεπιστήμιο και το Πανεπιστήμιο του Ιλινόις στο Σικάγο, και η συλλογή και χρήση ανθρώπινων δειγμάτων εγκρίθηκαν από το Διοικητικό συμβούλιο Institutional Review της Xinxiang Ιατρικό Πανεπιστήμιο. Όλοι οι ασθενείς έδωσαν πληροφορημένη συναίνεση σε γραπτή

MUC2

Mouse Μοντέλο και Παθολογίας Χαρακτηρισμός:.

Όπως έχει ήδη αναφερθεί [20] – [22], η

MUC2

+/- ποντίκια διασταυρώθηκαν για να δημιουργήσει

MUC2

– /- και

MUC2

+ /+ ποντίκια, και 10 ποντικοί ανά ομάδα τράφηκαν με τυπική δίαιτα τρωκτικών για 3 μήνες ή 6 μήνα. Στα τελικά σημεία, οι ποντικοί θανατώθηκαν, ολόκληρο το γαστρεντερικό σωλήνα ανοίχθηκε και πλύθηκε με ψυχρό PBS και σταθεροποιήθηκαν σε 10% ρυθμισμένη φορμαλίνη. Οι ιστοί εγκλείστηκαν σε παραφίνη, τεμαχίστηκαν και χρωματίστηκαν για το χαρακτηρισμό ιστοπαθολογική

MUC2

Ποντίκι Παχέος Επιθήλια κύτταρα Συλλογή, mRNA Ανάλυση και miRNA χαρακτηρισμού:.

Χρησιμοποιώντας το δημοσιευμένο πρωτόκολλο από εμάς [23] – [25], επιθηλιακά κύτταρα του κόλου ποντικού συλλέχθηκαν από 3-μηνών ηλικίας

MUC2

+ /+ και

MUC2

– /- ποντίκια, αντίστοιχα. Χρησιμοποιήθηκαν τέσσερις ποντικοί από κάθε ομάδα. Τα συνολικά RNAs εξήχθησαν χρησιμοποιώντας αντιδραστήριο ΤπζοΙ (Invitrogen, Carlsbad, CA) για ανάλυση mRNA κυτοκίνης και ανάλυση συστοιχίας miRNA. Η ποιότητα και η ποσότητα του RNA προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας Bioanalyzer και Gel ηλεκτροφόρηση. επίπεδα κυτοκίνης mRNA αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας Q-RT-PCR. Οι εκκινητές που χρησιμοποιήθηκαν για την ανάλυση κυτοκίνης ποντικού που παρατίθενται στον Πίνακα S1.

Η συστοιχία miRNA διεξήχθη στο γονιδιωματικό Facility του Πανεπιστημίου του Σικάγο (Chicago, Illinois). Affymetrix GeneChip miRNA Πίνακες έκδοση 3.0 χρησιμοποιήθηκε για το προφίλ miRNA. Εν συντομία, 200 ng ολικού RNA σημάνθηκαν χρησιμοποιώντας FlashTag Βιοτίνη HSR Labeling Kit σύμφωνα πρωτόκολλο του κατασκευαστή (Affymatrix), και περίπου 130 μΙ ρυθμιστικού Affymatrix κοκτέιλ υβριδισμού (FS450-002) χρησιμοποιήθηκαν για περίπου 18 ώρες σύμφωνα με το πρωτόκολλο (Affymatrix) . Η σειρά στη συνέχεια σαρώνονται χρησιμοποιώντας Affymatrix GeneChip Scanner 3000. Το ανεπεξέργαστα δεδομένα υποβλήθηκε σε επεξεργασία με Έκφραση Console 1.2.0.20, τιμή δεδομένων ορίστηκε χρησιμοποιώντας Έκφραση Είσοδος Σήματος – RMA-DABG. Τα miRNAs με μια πτυχή της αλλαγής & gt? 2.0 ή & lt? 0.5 και ένα t-test αξία & lt? Επιλέχθηκαν 0.01 ως διαφορικά εκφρασμένων miRNAs. Το λεπτομερές πειραματικό σχεδιασμό, λεπτομερές πρωτόκολλο και η ανάλυση των δεδομένων θα μπορούσε να έχει πρόσβαση στο Gene Expression Omnibus (GEO) (Access # GSE56577)

Ποντίκι miRNA Επικύρωση χρησιμοποιώντας ποσοτική αντίστροφη μεταγραφή αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (qRT-PCR):.

Με βάση τα πτυχία του άλλαξε τα επίπεδα miRNA από το προφίλ συστοιχία miRNA, 6 από τα πιο ρυθμίζεται προς τα πάνω και 9 από τις πιο μειωτικά miRNAs επικυρώθηκαν με τη χρήση qRT-PCR. Οι αντίστροφης μεταγραφής (RT) εκκινητών και εμπρόσθια εναύσματα και ανιχνευτές που χρησιμοποιούνται για την επικύρωση miRNA έχουν περιληφθεί στον πίνακα S2. Η καθολική καθετήρας Taqman και καθολική αντίστροφο εκκινητή για qRT-PCR αγοράστηκαν από Integrated DNA Technologies (IDT) (Πίνακας S2).

Ολικό RNA από ποντίκι του παχέος επιθήλια ήταν πολυαδενυλιωμένα με πολυ (Α) ουράς Polymerase Kit (Epicentre ). Εν συντομία, 10 μΐ αντίδρασης που περιλαμβάνει 1 μg του RNA, 1 μΐ 10Χ ρυθμιστικού αντίδρασης, 1 μΐ 10 mM ΑΤΡ και 1 μονάδα του πολυ (Α) πολυμεράση επωάστηκε στους 37 ° C για 30 λεπτά, ακολουθούμενη από απενεργοποίηση του ενζύμου στους 65 ° C για 5 λεπτά και στη συνέχεια θα τοποθετούνται σε πάγο. Μετά πολυαδενυλίωσης, αντίστροφη μεταγραφή εκτελέστηκε σε μια αντίδραση 10 μΙ που περιέχει 1 μΐ του προϊόντος της αντίδρασης πολυαδενυλίωσης, 1 μΙ 0,5 μΜ RT εκκινητή, 0,5 μΐ 10 mM dNTP, 1 μΙ ΑΜν 10χ ρυθμιστικού αντίδρασης, και 50 μονάδες AMV High Απόδοση ανάστροφης μεταγραφάσης (Promega, Madison, WI). Η αντίδραση επωάστηκε στους 42 ° C για 60 λεπτά, και στη συνέχεια τερματίζεται με θέρμανση στους 70 ° C για 10 λεπτά. προϊόντα RT ενισχύθηκαν και ανιχνεύτηκαν χρησιμοποιώντας μια μέθοδο S-πολυ (Τ), όπως αναφέρεται από εμάς [26]. Ένα 20 μΙ αντίδρασης PCR περιέχει 2 μΐ των προϊόντων RT (4-πλάσια αραίωση), 10 μΙ 2χ GoTaq® Hot Start Άχρωμο Master Mix (Promega, Madison, WI), 0.2 μΜ εμπρόσθιο εναρκτήρα, 0.2 μΜ καθολική αντίστροφο εκκινητή, και 0.25 μΜ ανιχνευτή καθολική Taqman. Η αντίδραση PCR διεξήχθη στους 95 ° C για 30 s, που ακολουθείται από 40 κύκλους των 95 ° C για 10 s και 60 ° C για 30 s. Τα αποτελέσματα qRT-PCR αναλύθηκαν όπως αναφέρεται από εμάς [27] – [29]. Η snoRNA202 χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός έλεγχος

Ανθρώπινα Δείγματα Συλλογή:.

Δεκαέξι paires του ανθρώπινου παχέος καρκινικούς ιστούς, κολίτιδα ιστούς, και γειτονικό φυσιολογικό βλεννογόνο του παχέος εντέρου τους, συλλέχθηκαν από το Νοέμβριο του 2012 μέχρι τον Οκτώβριο 2013, από την Πρώτη Ενταγμένο Νοσοκομείο και Ενταγμένο Xinxiang Κεντρικό Νοσοκομείο, Xinxiang Ιατρικό Πανεπιστήμιο. Μερίδα των δειγμάτων έσπασε σε υγρό άζωτο και στη συνέχεια αποθηκεύεται στους -80 ° C για την εκχύλιση RNA και για ανάλυση qRT-PCR. Όλοι οι ασθενείς έδωσαν πληροφορημένη συναίνεση στις γραπτές. Η συλλογή του δείγματος και η χρήση εγκρίθηκε από το Διοικητικό Συμβούλιο Institutional Review της Xinxiang Ιατρικό Πανεπιστήμιο.

εκχύλιση RNA και qRT-PCR για την ανάλυση mRNA για ανθρώπινα δείγματα ήταν παρόμοια, όπως περιγράφεται παραπάνω για την ανάλυση στα επιθηλιακά κύτταρα του κόλου ποντικιού. Οι εκκινητές και ανιχνευτές που χρησιμοποιούνται για την ανάλυση miRNA εισήχθηκαν Πίνακας S2. . SNORD 44 χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός έλεγχος

miRNA Στόχοι Αναγνώριση, Βιολογικές Λειτουργίες Κατηγοριοποίηση και Ανάλυση Δικτύου:

Για τον προσδιορισμό των στόχων των miRNAs, που χρησιμοποιούνται σε απευθείας σύνδεση λογισμικό – David (http: //david.abcc.ncifcrf.gov/) και μια προβλεπόμενη λίστα των συντηρημένων γονιδίων-στόχων των miRNAs προέρχονται από targetscan (https://www.targetscan.org/), starbase (https://starbase.sysu.edu.cn/) , Tarbase (https://microrna.gr/tarbase/), και miRbase (https://mirbase.org/index.shtml). Οι βιολογικές λειτουργίες των miRNAs σε κατηγορίες ανάλογα με Gene Ογκολογίας (GO). δίκτυο ισχυροί στόχοι και σηματοδότηση προτάθηκαν χρησιμοποιώντας KEGG (https://www.kegg.jp) και Ensembl (https://www.ensembl.org) εργαλεία web.

Αποτελέσματα

Παθολογικής Ανατομικής του

MUC2

ποντίκι μοντέλο κολίτιδας που σχετίζεται με τον καρκίνο:

Προηγούμενες εργασίες έχουν δείξει ότι η στοχευμένη γονιδίου νοκ-άουτ του

MUC2

γονίδιο προκάλεσε το σχηματισμό όγκων σε ολόκληρο το γαστρεντερικό σωλήνα, συμπεριλαμβανομένων δωδεκαδακτύλου, του παχέος εντέρου και του ορθού [20], και οι

MUC2

– /- ποντικοί είναι ευπαθή σε προκαλούμενη από ϋδδ φλεγμονωδών ασθενειών μπολ [30]. Σε αυτή τη μελέτη, βρήκαμε ότι στους 3 μήνες ή και νωρίτερα, το

MUC2

– /- ποντίκια αυθόρμητα αναπτυχθεί χρόνια φλεγμονή του παχέος εντέρου και του ορθού, που συνοδεύουν με λίγες όγκους σε αυτές τις τοποθεσίες (Σχήμα 1). Όπως φαίνεται στο Σχήμα 1Α, ο βλεννογόνος του κόλου στερούνταν των λαγηνοειδών κυττάρων και επέδειξε τα χαρακτηριστικά της ελκώδους κολίτιδας, όπως επιφανειακή διάβρωση και εντατική διεισδύσεις φλεγμονωδών κυττάρων σε όλο το βλεννογόνο, υποβλεννογόνο και ακόμη και της μυϊκής στιβάδας του παχέος εντέρου, η οποία ήταν παρόμοια με αυτή που παρατηρήθηκε σε ανθρώπινη ελκώδη κολίτιδα. Η χρόνια κολίτιδα συνοδεύεται από ένα αδένωμα. Στην ηλικία των 6 μηνών,

MUC2

– /- ποντίκια ανέπτυξαν όγκους στο κόλον και το ορθό, όπως αναφέρεται [20], αλλά σοβαρή φλεγμονή παρατηρήθηκε ακόμη στην ενδο-όγκους και εξω-όγκους (Σχήμα 1Β). Ένα μοναδικό φαινότυπο ήταν ότι

MUC2

– /- ποντίκια ανέπτυξαν ορθού κυστικός (σχήμα 1Γ), που δεν έχει ποτέ αναφερθεί προηγουμένως. Ιστοπαθολογικά, η πρόπτωση ήταν αδενοκαρκίνωμα με σοβαρή φλεγμονή στις ορθού (Σχήμα 1D), εμφανίζοντας επιφανειακή διάβρωση, φλεγμονώδη κύτταρα διήθηση και καρκινικών κυττάρων εισβολής. Επιπλέον, η σοβαρότητα της διήθηση φλεγμονωδών κυττάρων συνδέθηκε με τη σοβαρότητα της πρωκτικής Prolase, αλλά δεν συνδέονται με τον καρκίνο των κυττάρων εισβολή και τη διαφοροποίηση στο ορθό (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Α, κολίτιδα και μια αδενώματος στα του παχέος εντέρου του ποντικιού στην ηλικία των 3 μηνών. Γκρι βέλη επισήμανε σοβαρή διήθηση των φλεγμονωδών κυττάρων, λευκό βέλος επισήμανε ένα αδένωμα. Β, αδενοκαρκίνωμα του κόλου με διήθηση φλεγμονωδών κυττάρων στην ηλικία των 6 μηνών. C, πρωκτική πρόπτωση στους 6 μήνες. . Δ Παθολογικής Ανατομικής του πρόπτωση ορθού, δείχνει καρκινικών κυττάρων εισβολή και σοβαρή φλεγμονή στο ορθό (ηλικία των 6 μηνών)

Η

miRNA Profiling αποκάλυψε διαφορική έκφραση των miRNA σε

MUC2

– /-

Ποντίκια

Πρόσφατες μελέτες έχουν δείξει τον σημαντικό ρόλο των miRNAs στην καρκινογένεση. Για να διερευνηθεί αν ανώμαλη έκφραση του miRNAs εμπλέκονται στην κολίτιδα κακοήθη μετασχηματισμό, απομονώσαμε τα επιθηλιακά κύτταρα του κόλου από ποντικούς ηλικίας 3 μηνών (4

MUC2

– /- ποντίκια και 4

MUC2

+ /+ ποντίκια) και διεξάγεται miRNA προφίλ. Είναι γνωστό ότι η αλληλεπίδραση μεταξύ στρωματικών και επιθηλιακών κυττάρων παίζει σημαντικό ρόλο στην οδήγηση κολίτιδα σχετιζόμενη με ορθοκολικό καρκίνο (CAC).

MUC2

υπερεκφράστηκε σε επιθηλιακά κύτταρα του κόλου, και γενετική ανεπάρκεια αυτού του γονιδίου είναι αρκετή για να προκαλέσει κολίτιδα και του παχέος εντέρου, ασκώντας τη σημασία του

MUC2

στην ανάπτυξη της κολίτιδας και CAC. Να καθορίσει τους ρόλους των εκφράζονται ανώμαλα miRNAs προέκυψε από

MUC2

απουσία στην έναρξη κολίτιδα και τη διευκόλυνση του παχέος μετασχηματισμό του καρκίνου, χρησιμοποιήσαμε επιθηλιακά κύτταρα του κόλου, αντί των στρωματικών κυττάρων ή ολόκληρο το ιστούς του παχέος εντέρου για σειρά miRNA. Mirna προφίλ ανάλυση έδειξε απόκλιση επίπεδα των miRNAs, μεταξύ των οποίων 20 miRNAs ήταν σημαντικά μειωτικά και 71 miRNAs ήταν σημαντικά ρυθμισμένη προς τα πάνω (Πίνακας 1) στο

MUC2

– /- ποντίκια, σε σύγκριση με το

MUC2

+ /+ ποντίκια (αλλαγή φορές & gt? 2 ή & lt? 0.5? T & lt? 0,01, p αξία & lt? 0,05, q αξία & lt? 0,05). Όπως δείχνει στον Πίνακα S3 και S4 Πίνακα, οι περισσότερες από τις miRNAs έχουν αναφερθεί να ρυθμίσουν τους στόχους τους και παίζουν κρίσιμους ρόλους στον καρκίνο έναρξη, την εξέλιξη και τη μετάσταση, σε διαφορετικούς ιστούς και τα κύτταρα. Ενώ, βιολογικές λειτουργίες κάποιων miRNAs δεν είναι σαφείς και απαιτούν περαιτέρω διερεύνηση

Η

Ποντίκι miRNAs Επικύρωση από qRT-PCR:.

Για να αξιολογηθεί η ακρίβεια του προφίλ miRNAs αλλοίωση του παχέος ποντίκι επιθηλιακά κύτταρα, επιλέξαμε 15 πιο σχετικές miRNAs για την επικύρωση χρησιμοποιώντας qRT-PCR. Τα 6 απορυθμίζεται miRNAs (MMU-miR-5132-5p, MMU-miR-3104-5p, MMU-miR-669c-5P, MMU-miR-705, MMU-miR-760-3p, MMU-miR-1962) και οι 9 μειωτικά miRNAs (MMU-miR-146a, MMU-miR-138, MMU-miR-5123, MMU-miR-196β, MMU-miR-5099, MMU-miR-150, MMU-miR-145, MMU-miR -27a, MMU-miR-23a) έχει επιλεγεί για επικύρωση επίσης βασίζονται σε γονίδια στόχους τους μπορούν να προβλεφθούν, οι αρμοδιότητες της οποίας είναι καλά σχετίζονται με τη φλεγμονή και τον καρκίνο. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 2, οι μεταβολές των miRNA προσδιορίστηκε με qRT-PCR ήταν σύμφωνα με τις αλλαγές διατομής με ανάλυση συστοιχίας miRNA.

Τέσσερα ποντίκια στην ηλικία των 3 μηνών από κάθε ομάδα θυσιάστηκαν γονότυπο και επιθηλιακά κύτταρα του κόλου ήταν απομονώθηκε για εξαγωγή RNA και ανάλυση qRT-PCR. Οι στήλες στάθηκε για μέση τιμή +/- SD.

Η

ανώμαλη έκφραση των miRNAs στην Ανθρώπινη κολίτιδα, του παχέος όγκων και των γειτονικών φυσιολογικού βλεννογόνου

Για να προσδιοριστεί κατά πόσον οι εκφράζονται ανώμαλα miRNAs έχουν κλινική σημασία, εμείς επέλεξε 4 miRNAs για ανάλυση σε ανθρώπινο καρκίνο του παχέος εντέρου και κολίτιδα ιστούς. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 3, σε γενικές γραμμές, το επίπεδο έκφρασης του miR-138, miR-145, miR-146a και miR-150 ρυθμίστηκαν προς τα κάτω κατά περίπου 3,37, 3,39, 2,56 και 4,99 φορές σε παχέος εντέρου από εκείνες στην αντιστοιχισμένη παρακείμενο φυσιολογικό βλεννογόνου (

σ

& lt? 0,0001). Μεταξύ αυτών, το σύνολο των 16 παχέος εντέρου έδειξε μειωτικά miR-138 και miR-150 επίπεδα (Εικόνες 3Α και 3D), και 15 από τα 16 του παχέος εντέρου έδειξε χαμηλότερα επίπεδα έκφρασης του miR-145 και miR-146a από το κανονικό έλεγχο (Εικόνες 3Β και 3C). Μόνο ένας ασθενής (Δείγμα 6) έδειξε αυξητική ρύθμιση του miR-145, αλλά η προς τα πάνω ρύθμιση δεν ήταν σημαντική (Σχήμα 3Β, ρ & gt? 0,05). Είναι ενδιαφέρον ότι η προς τα κάτω ρύθμιση αυτών των miRNAs παρατηρήθηκαν επίσης σε ανθρώπινο χρόνιας ιστούς κολίτιδα (σχήματα 4, ρ & lt? 0,0001, σε σύγκριση με το κανονικό βλεννογόνο). Παρά το γεγονός ότι οι παρατηρήσεις ελήφθησαν από μικρού μεγέθους δείγματα, οι τάσεις των σημαντικών αρνητική ρύθμιση των miRNAs (miR-138, 145, 146α και miR-150) προτείνεται ανεπιφύλακτα κλινική σημασία τους για σύνδεση με χρόνιες κολίτιδα και κολίτιδα σχετιζόμενη με τον καρκίνο του παχέος εντέρου, έμμεσα αναφέροντας τους δυναμικό βιολογικές λειτουργίες που αφορούν στην κολίτιδα κακοήθη μετασχηματισμό. Στην πραγματικότητα, οι λειτουργίες αυτών των miRNAs στην καταστολή του όγκου είναι υπό έρευνα χρησιμοποιώντας χειραγωγείται σύστημα καλλιέργειας κυττάρων

in vitro

και φέροντες όγκο γυμνοί ποντικοί

in vivo

.

, miR-138 ήταν σημαντικά προς τα κάτω σε ορθοκολικού καρκίνου. Β, miR-145 ήταν σημαντικά προς τα κάτω σε ορθοκολικού καρκίνου. C, miR-146a ήταν σημαντικά προς τα κάτω σε ορθοκολικού καρκίνου. D, miR-150 ήταν σημαντικά προς τα κάτω σε ορθοκολικού καρκίνου. Κάθε στήλη στάθηκε για έναν ασθενή, συνολική 16 ασθενείς. Η συνολική στάθηκε για τη μέση τιμή των miRNAs σε όλους τους ασθενείς. (***

σ

& lt? 0,0001, σε σύγκριση με το γειτονικό φυσιολογικό βλεννογόνο).

Η

Α, miR-138 ήταν σημαντικά προς τα κάτω σε κολίτιδα. Β, miR-145 ήταν σημαντικά προς τα κάτω σε κολίτιδα. C, miR-146a ήταν σημαντικά προς τα κάτω σε κολίτιδα. D, miR-150 ήταν σημαντικά προς τα κάτω σε κολίτιδα. Κάθε στήλη στάθηκε για έναν ασθενή, σύνολο 6 ασθενείς. Η συνολική στάθηκε για τη μέση τιμή των miRNAs σε όλους τους ασθενείς. (***

σ

& lt? 0,0001, σε σύγκριση με το γειτονικό φυσιολογικό βλεννογόνο)

Η

miRNA Στόχος του Δικτύου Χαρακτηρισμός:.

Δεδομένου ότι οι αλλάξει miRNAs είχε μεγάλη σημασία στην

MUC2

– /- ποντίκια και τα ανθρώπινα κολίτιδα κακοήθη μετασχηματισμό, και η επιλεγμένη miRNA έδειξε αρνητική ρύθμιση στην κολίτιδα και του παχέος εντέρου, είμαστε δίπλα διευκρινιστεί αν υπήρχαν κοινοί στόχοι αυτών των miRNAs. Δυστυχώς, καμία κοινή φλεγμονοσυσχετιζόμενων και σχετίζονται με τον καρκίνο στόχους για το σύνολο των 4 miRNAs (MIR-138, 145, 146α και miR-150) ταυτοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας miRNA εργαλεία πρόβλεψης στόχου. Ωστόσο, βρήκαμε κάποια κοινά στόχους του κάθε 3 ή 2 από τα 4 miRNAs. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 5 και Πίνακας 2, υπήρχαν 21, 13 και 25 κοινούς στόχους μεταξύ miR-138 και miR-145, miR-146a και miR-150, αντίστοιχα? υπήρχαν 16 και 15 κοινά μεταξύ miR-145 και miR-146a και miR-150, αντίστοιχα? και υπήρχαν 7 κοινούς στόχους μεταξύ των miR-146a και miR-150. Παρακαλώ να σημειωθεί ότι CCT3 και ΠΑΠΠΑ ήταν οι κοινοί στόχοι για το miR-138, miR-146a και miR-150, και ZHX2 ήταν ο κοινός στόχος για το miR-138, miR-145 και miR-150. Είναι ενδιαφέρον ότι, οι περισσότεροι από αυτούς τους στόχους είναι ογκογονίδια. GO όρος σχολιασμό έδειξε ότι όλοι οι στόχοι που εμπλέκονται στην κυτταρική φυσιολογική διαδικασία και το μεταβολισμό, και η ρύθμιση της κυτταρικής διαδικασίας και ρύθμιση της φυσιολογικής διαδικασίας είναι τα πιο σημαντικά εμπλουτισμένη όρους GO. Έτσι, οποιαδήποτε απορύθμιση αυτών των miRNAs και τους στόχους τους θα μπορούσε να είναι επαρκής για να προκαλέσει την έναρξη της φλεγμονής και της χρόνιας φλεγμονής κακοήθη μετασχηματισμό, μελέτες για τυχόν κοινούς στόχους των δύο ή περισσότερα miRNAs στην καρκινογένεση είναι πιο σημαντική από κάθε στόχων μιας ενιαίας miRNA.

η

κυτοκίνες στο

MUC2

– /-

ποντίκι επιθηλιακά κύτταρα του κόλου ήταν Up-ρύθμιση:

Για να επικυρώσετε την ακρίβεια της ανάλυσης του miRNA και τη σχέση τους με τα mRNA κυτοκινών, το αργότερο θεωρούνται συχνά στον καρκίνο κολίτιδα σχετιζόμενη, καθορίζουμε τις μεταβολές των κυτοκινών στο παχύ έντερο του ποντικιού. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 6, σε σύγκριση με

MUC2

+ /+ ποντικό,

MUC2

– /- ποντίκια έδειξαν σημαντική αυξητική ρύθμιση των κυτοκινών (π.χ. IL-6, Cox2, TNF-a και IL-1β, κλπ) σε επιθηλιακά κύτταρα του κόλου από την κανονική εμφανίζεται βλεννογόνο του παχέος εντέρου (ρ & lt?. 0.01)

σε σύγκριση με

MUC2

+ ποντίκια /+,

MUC2

– /- ποντίκια παρουσίασαν σημαντική αυξητική ρύθμιση των κυτοκινών (** p & lt? 0,01, σε σύγκριση με το

MUC2

+ /+ ποντίκια). Τέσσερα ποντίκια στην ηλικία των 3 μηνών από κάθε ομάδα θυσιάστηκαν γονότυπο και του κόλου επιθηλιακά κύτταρα απομονώθηκαν για εξαγωγή RNA και ανάλυση qRT-PCR. Οι στήλες στάθηκε για μέση τιμή +/- SD.

Η

Συζήτηση

Η τρέχουσα μελέτη χαρακτηρίζεται περαιτέρω ένα μοντέλο κολίτιδας που σχετίζεται με τον καρκίνο του παχέος εντέρου (CAC) του

MUC2

– /- ποντίκια, παρέχοντας άμεση απόδειξη ότι η χρόνια φλεγμονή στο παχύ έντερο και το ορθό θα μπορούσε να μετατραπεί σε κακοήθη, και αποκαλύπτοντας τα ισχυρά μηχανισμούς, που ήταν η παρεκκλίνουσα έκφραση miRNA σε επιθηλιακά κύτταρα του κόλου συμμετείχαν σε και μπορεί να παίξει κρίσιμο ρόλο κατά τη διάρκεια της κακοήθους μετασχηματισμού του χρόνια κολίτιδα παρεμβαίνοντας γονιδίων στόχων.

Πολυάριθμες μελέτες βασίζονται σε στοιχεία έχουν δείξει ότι η χρόνια κολίτιδα είναι μία από τις σημαντικές αιτίες καρκίνου του παχέος εντέρου, αλλά οι υποκείμενοι μηχανισμοί δεν είναι σαφείς, ένας από τους βασικούς λόγους είναι η έλλειψη της αυθόρμητης κολίτιδα και κολίτιδα σχετιζόμενη με το μοντέλο του καρκίνου του παχέος εντέρου. Επί του παρόντος, μια ποικιλία από γενετικά μοντέλα ζώων είναι διαθέσιμοι και είναι πολύ χρήσιμα για την καλύτερη κατανόηση των μοριακών μηχανισμών που διέπουν τη παθογένεια της CAC [31], αλλά παθολογικά χαρακτηριστικά από αυτά τα μοντέλα δεν έχουν δυναμικά χαρακτηριστεί. Η παρούσα μελέτη χαρακτηρίζεται το

MUC2

μοντέλο ποντικού. Η

MUC2

– /- ποντίκια αναπτύσσουν αυθόρμητα χρόνια φλεγμονή στο παχύ έντερο και το ορθό σε πρώιμο στάδιο (& lt? 3 μήνες), και μετά από 3 μήνες, η χρόνια φλεγμονή πρόοδος προς ορθοκολικό καρκίνο. Το πιο σημαντικό, τα παθολογικά χαρακτηριστικά της χρόνιας φλεγμονής στο κόλον και το ορθό ήταν παρόμοια ως ανθρώπινα ελκώδη κολίτιδα, και οι παρεκκλίνοντα εκφράζονται miRNAs εμπλέκονται σε

MUC2

– /- ποντικό κολίτιδα κακοήθη μετασχηματισμό παρατηρήθηκαν σε ανθρώπινα κολίτιδα και του παχέος καρκινικούς ιστούς. Ένα άλλο μοναδικό χαρακτηριστικό ήταν οι ορθού κυστικός – καρκίνου του ορθού με σοβαρή φλεγμονή. Ως εκ τούτου, η

MUC2

– /- ποντίκι θα μπορούσε να είναι το κατάλληλο μοντέλο τρωκτικών του CAC, και θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί ως ένα από τα καλύτερα εργαλεία για τη διαλεύκανση της αιτίας της CAC και των υποκείμενων μοριακών μηχανισμών. Η

MUC2

– /-. Ποντίκι θα μπορούσε επίσης να χρησιμοποιηθεί ως ένα μοντέλο ποντικού για χημειοπροφύλαξη και θεραπεία για κολίτιδα που σχετίζεται με ορθοκολικό καρκίνο

miRNAs έχουν 19-22 νουκλεοτίδια, είναι μια νέα κατηγορία των μικρών RNAs μη κωδικεύουσας που καταστέλλουν τη μετάφραση και τη σταθερότητα του αγγελιοφόρου RNAs (mRNAs) μέσω σύνδεσης με στόχευση mRNAs «3′-αμετάφραστες περιοχές (3′-UTR) [32], miRNAs έχουν σημαντικές βιολογικές και pathophysical λειτουργίες που αφορούν στην ανάπτυξη, τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, τη διαφοροποίηση, την απόπτωση, φλεγμονή και αντίδραση στο στρες [33] – [35]. Αύξηση αποδείξεις έχουν προτείνει ότι οι miRNAs μειωτικά ή ρυθμίζεται προς τα πάνω σε καρκίνους, που ενεργεί ως καταστολείς όγκων ή ογκογονίδια [33], [35], [36], στο οποίο οι miRNAs παίζουν κρίσιμους ρόλους στην ογκογένεση, τη διαφοροποίηση, την εξέλιξη (π.χ. μετανάστευση, εισβολή, αγγειογένεση, και μετάσταση) [35] – [37], κυρίως παρεμβαίνοντας στην έκφραση των γονιδίων στόχων. Χρησιμοποιώντας μια συστοιχία miRNA, έχουμε προφίλ διαφορική έκφραση miRNAs σε επιθηλιακά κύτταρα του κόλου από το

MUC2

– /- ποντίκια, και αυτά τα miRNAs είτε απορυθμίζεται ως ογκογονίδια ή μειωτικά ως καταστολείς όγκων με στόχευση των γονιδίων στις κατηγορίες του μεταβολισμού, του κυτταρικού κύκλου, διαφοροποίηση, κυτταρικό θάνατο, την αντιγραφή του DNA, την ομοιόσταση, μεταγωγής σήματος, απόκριση σε διέγερση, και φλεγμονή, κτλ Μεταξύ των αισθητά αλλάξει miRNAs, τα μειωτικά miRNAs, miR-138, 145, 146α και 150 , επικυρώθηκαν στις δύο ιστούς ποντικού και ανθρώπου, ιδιαίτερα, στην ανθρώπινη κολίτιδα και του παχέος καρκινικούς ιστούς, γεγονός που υποδηλώνει την καταστολή ρόλοι των miR-138, 145, 146α και 150 σε κολίτιδα κακοήθη μετάβαση μέσω αλληλεπίδρασης με κυτοκίνες και φλεγμονώδεις παράγοντες.

Προηγούμενες μελέτες έχουν καταδείξει ρόλους ογκοκατασταλτικό του miR-138 στη βιολογία του καρκίνου. miR-138 κυτταρικής ανάπτυξης αναστέλλεται καρκίνου και ογκογένεση σε μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα και του καρκίνου του ρινοφαρυγγικού με τη στόχευση 3-φωσφοϊνοσιτιδίου εξαρτώμενη πρωτεϊνική κινάση-1 (ΡϋΚ1) και CCND1 [38] – [40]. Στην παχέος εντέρου και των ωοθηκών, miR-138 κατέστειλε τη μετανάστευση των καρκινικών κυττάρων και τη μετάσταση μέσω παρενέβαινε με TWIST2, SOX4 και HIF1-α [39], [41]. Πιο πρόσφατες μελέτες ανέφεραν ότι ρυθμίζεται προς τα κάτω miR-138 υπέστη φλεγμονώδους παράγοντα NF-kB ενεργοποίηση και προωθείται καρκίνο του οισοφάγου εξέλιξης [42], και ότι miR-138 απόκριση σε προ-φλεγμονώδεις κυτοκίνες εξαρτάται από την σταθεροποίηση του HIF1-α σε πρωτογενή ανθρώπινα μικροαγγειακά ενδοθηλιακά κύτταρα [43]. miR-145 είναι επίσης ένα ογκοκατασταλτικό γονίδιο. miR145 θα μπορούσε να στοχεύσει τον /άξονα ADAM17 SOX9 και αναστέλλουν τα καρκινικά κύτταρα-κίνηση και IL-6-μεσολάβηση παρακρινή αποτελέσματα σε καρκίνο κεφαλής και τραχήλου [44]. Επιπλέον, microRNA-145 προκαλεί απόπτωση με την επαγωγή του συνδέτη (TRAIL) έκφραση επάγει απόπτωση παράγοντα που σχετίζονται νέκρωσης όγκου, στοχευμένη ογκογονίδιο socs7 και ρυθμίζεται επαγωγή ιντερφερόνης-β μέσω STAT3 πυρηνική μετατόπιση σε καρκινικά κύτταρα κύστης [45]. Πρόσφατες μελέτες έχουν αναφέρει ότι TRAIL καταστέλλει (CXC μοτίβο) των υποδοχέων χημειοκίνης 4 (CXCR4) μεσολάβηση μετανάστευση ανθρώπινων καρκινικών κυττάρων του μαστού με up-ρύθμιση της έκφρασης miR-146a μέσω ΝΡ-κΒ σηματοδότηση [46], και ότι miR-146 ρυθμίζει επιγενετική ρυθμιστής UHRF1 και διαμορφώνει γαστρικό εισβολή καρκίνου και μετάσταση [47], που δείχνει τις σημαντικούς ρόλους του miR-146 στην αναστολή της μετάστασης του καρκίνου παρεμβαίνοντας χημειοκίνη και επιγενετικές ρυθμιστή. Ως προς το miR-150, ένα αρκετά πολλές αναφορές έδειξαν την ανασταλτική του όγκου του λειτουργία [48] – [51]. Ενώ, ότι miR-150 αλληλεπιδρά με κυτοκίνες στη διαφοροποίηση των λεμφοκυττάρων και τη φλεγμονή έχει μελετηθεί. Για παράδειγμα, σε κυτταροτοξικά Τ λεμφοκύτταρα (CTL), IL-2R και φλεγμονώδη σήματα δρουν μέσω Dicer και miRNAs να ελέγχουν το πρόγραμμα κυτταρολυτική και διαφοροποίηση CTL, στην οποία miR-139 και miR-150 είναι προς τα κάτω ρυθμισμένη με φλεγμονή σε CTLs, και ΜΙΚ 150 ρυθμίζει την έκφραση του IL-2 υποδοχέα α-αλυσίδας (CD25) [52]. Επιπλέον, η παραγωγή ΙΡΝ-γ είναι σημαντικά αυξημένη στο ΜΙΚ-150 knockout ποντικών [53]. Επιστροφή στην ευρήματά μας, η οποία ήταν, κυτοκίνες αυξήθηκαν σημαντικά (Σχήμα 6) και miR-138, 145, 146α και miR-150 μειώθηκαν σημαντικά σε

MUC2

– /- του παχέος εντέρου ποντικού και ανθρώπου κολίτιδα και του παχέος εντέρου, ενσωματώνοντας με τις δημοσιευμένες παρατηρήσεις, υποστηρίζουν σθεναρά την υπόθεση μας ότι οι κυτοκίνες που σχετίζονται miRNAs, miR-138, 145, 146α και miR-150, παίζουν σημαντικό ρόλο στην χρόνια κολίτιδα κακοήθη μετασχηματισμό μέσω παρεμβολής με κυτοκίνες και φλεγμονώδεις παράγοντες. Ωστόσο, παρόμοια με τις αλλαγές των κυτοκινών ως συνέπεια της κολίτιδας σε κόλον ποντικού, οι αλλαγές της miRNAs θα μπορούσε επίσης να είναι συνέπεια χρόνιας κολίτιδας και CAC σε ανθρώπινους ιστούς κόλου. Θα μπορούσε να είναι δυνατή, αλλά τα προκαταρκτικά στοιχεία από συνεχιζόμενες λειτουργικές μελέτες μας, χρησιμοποιώντας χειραγωγείται συστήματα καλλιέργειας κυττάρων και in vivo γυμνό μοντέλο ποντικού έχουν δείξει ατομικά ή συνεργιστικό δυναμικό αυτών των miRNA (Bao και Yang, αδημοσίευτα δεδομένα), επιβεβαιώνοντας καταστολής όγκων λειτουργίες αυτών των miRNAs . Επιπλέον, οι ισχυροί πόροι των αλλοιωμένων miRNAs σε ανθρώπινο κολίτιδα και ιστών CRC δεν είναι σαφείς και χρειάζονται περαιτέρω έρευνα, οι restults δημιουργούνται από τα οποία θα μπορούσε να αποσαφηνίσει τις λειτουργίες προκαλούν ή επίδραση αυτών των miRNAs στην ανάπτυξη της κολίτιδας και του παχέος εντέρου.