Αφηρημένο

Στόχος

Στοματική ακανθοκυτταρικό καρκίνωμα (OSCC) είναι μια διαδεδομένη καρκίνος, ειδικά στις αναπτυσσόμενες χώρες. Οι ανθρακυκλίνες και τα παράγωγα ανθρακινόνης τους, όπως δοξορουβικίνη, επιδεικνύουν ένα ανασταλτικό αποτέλεσμα της κυτταρικής ανάπτυξης και έχουν χρησιμοποιηθεί ως αντικαρκινικά φάρμακα για πολλά χρόνια. Ωστόσο, η καρδιοτοξικότητα των αντιβιοτικών ανθρακυκλίνης είναι μια σημαντική ανησυχία στην κλινική εφαρμογή τους. NSC745885 είναι μία νέα ένωση συντέθηκε από 1,2-διαμινο, το οποίο στη συνέχεια αντιδρά με θειονυλοχλωρίδιο και τριαιθυλαμίνη. Η παρούσα μελέτη είχε ως στόχο να διερευνήσει την αντι-καρκίνο του στόματος δυναμικού και της ασφάλειας των NSC745885.

Μέθοδοι

Εμείς ερεύνησε τη δυνητική αντικαρκινική NSC745885 στην προφορική πλακωδών κυττάρων καρκινώματος γραμμές και σε μια

in vivo

καρκίνο του στόματος μοντέλο ξενομοσχεύματος ποντικού. Η έκφραση των αποπτωτικών γονιδίων σχετικών αξιολογήθηκαν με πραγματικού χρόνου RT-PCR και τη δυτική bloting, και το

in vivo

εκτίμηση των αποπτωτικών δείκτη μετρήθηκαν με ανοσοϊστοχημική χρώση. Η αποτελεσματικότητα κατά των όγκων και την ασφάλεια μεταξύ δοξορουβικίνη και NSC745885 συγκρίθηκαν επίσης.

Αποτελέσματα

Τα αποτελέσματα μας έδειξαν ότι NSC745885 εμφανίζει δραστικότητα κατά του καρκίνου του στόματος μέσω της επαγωγής απόπτωσης σε καρκινικά κύτταρα και σε όγκο οποία φέρουν το ποντικούς, και αυτή η θεραπεία δεν προκάλεσε αξιοσημείωτη τοξικότητα σε πειραματικά ποντίκια. Αυτή η ένωση εμφανίζει επίσης συγκρίσιμη αποτελεσματικότητα κατά του όγκου και υψηλότερη ασφάλεια σε πειραματικά ποντίκια σε σύγκριση με τη δοξορουβικίνη.

Συμπεράσματα

Τα δεδομένα αυτής της μελέτης παρέχουν ενδείξεις για NSC745885 ως δυνητικό νέο θεραπευτικό φάρμακο για τη θεραπεία της ανθρώπινης OSCC

Παράθεση:. Chen YW, Huang ΕΣ, Shieh YS, Ma KH, Huang SH, Hueng DY, et al. (2014) μία νέα ένωση NSC745885 εξασκεί αντικαρκινική επίδραση στη γλώσσα του καρκίνου SAS κυττάρων in vitro και in vivo. PLoS ONE 9 (8): e104703. doi: 10.1371 /journal.pone.0104703

Επιμέλεια: Αριάννα L. Kim, Πανεπιστήμιο Κολούμπια Medical Center, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 20 Γενάρη του 2014? Αποδεκτές: 16 Ιουλίου 2014? Δημοσιεύθηκε: 15 του Αυγούστου, 2014

Copyright: © 2014 Chen et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε από ερευνητικές επιχορηγήσεις από το Εθνικό Επιστημονικό Συμβούλιο, την Ταϊβάν, ROC (NSC101-2320-B-016-016 με G.-J. Lin και NSC102-2314-B-016-018-my3 να Υ.-νν. Chen), Tri-Service Γενικό Νοσοκομείο, Δημοκρατία της Κίνας (Grant Όχι . TSGH-C102-019, TSGH-C100-034 και TSGH- C101-009-S06) και εν μέρει από την Κύπρο Ίδρυμα για την Πρόοδο της Παιδείας, Επιστημών και της Ιατρικής. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Μεταξύ προφορική ακανθοκυτταρικό καρκίνωμα (OSCCs), η μεγαλύτερη πλειοψηφία των κακοηθειών είναι κεφαλής και του τραχήλου από πλακώδες επιθήλιο καρκινώματα (HNSCCs). OSCC είναι η έκτη πιο διαδεδομένη καρκίνου παγκοσμίως [1], και η τρίτη πιο κοινή μορφή καρκίνου στις αναπτυσσόμενες χώρες [2] – [4]. Παραδοσιακές θεραπείες για OSCC περιλαμβάνουν χειρουργική επέμβαση, ακτινοθεραπεία, και χημειοθεραπεία. Ωστόσο, η επανορθωτική επίδραση τέτοιων θεραπειών σε τελικού σταδίου καρκίνο του στόματος είναι ομοιόμορφα κακή. Επιπλέον, ακόμη και μετά από επιτυχή εκτομή του όγκου, περίπου 20% των ασθενών μπορεί να έχουν υποτροπή όγκων σε άλλα site [5]. Ως εκ τούτου, η ανάπτυξη νέων θεραπευτικών στρατηγικών για κακοήθεις όγκους του στόματος είναι ένα επείγον θέμα.

ανθρακυκλίνες και τα παράγωγα ανθρακινόνης παρουσιάζουν ανασταλτικά αποτελέσματα κυτταρικής ανάπτυξης τους και έχουν χρησιμοποιηθεί ως αντικαρκινικά φάρμακα για περισσότερα από 30 χρόνια [6]. Νταουνορουμπικίνη και δοξορουβικίνη, δύο ανθρακυκλίνης antibotics, χρησιμοποιούνται συχνά για τη θεραπεία της οξείας μυελοειδούς λευχαιμίας, καθώς και ποικίλες στερεούς όγκους [7]. Προηγούμενες μελέτες έχουν αναφέρει ότι αυτά τα φάρμακα διεγείρουν απόπτωση σε κύτταρα όγκου [8], [9]. Τα κυτταροστατικά και κυτταροτοξικά δράσεις αυτών των φαρμάκων έχουν παρατηρηθεί μέσω της αναστολής της τοποϊσομεράσης II και, στη συνέχεια, την έναρξη της βλάβης του DNA [10]. Η οξειδωτική βλάβη έχει θεωρηθεί μια κρίσιμη μηχανισμός στην αντικαρκινική δραστικότητα του ανθρακυκλίνης [11]. Αντιβιοτικά ανθρακυκλίνης επιδεικνύουν επίσης τη δυνατότητα να μειώσει τη δράση της τελομεράσης και της έκφρασης hTERT. θεραπεία Doxorubicin επάγει γήρανση στην κυτταρική σειρά καρκίνου του μαστού MCF-7 κύτταρο μέσω αυξημένη δραστηριότητα της ρ53, και μειώνει τη δραστηριότητα της δράσης της τελομεράσης σε αυτό το καρκινικό κύτταρο [12]. Μια προηγούμενη μελέτη ανέφερε ότι η δραστηριότητα της τελομεράσης και η έκφραση του mRNA hTERT ανεστάλησαν από δοξορουβικίνη κατεργασία σε κυτταρικές γραμμές καρκινώματος μητρική γαστρικό αλλά όχι σε δοξορουβικίνη-ανθεκτικές κυτταρικές γραμμές [13]. Τα αποτελέσματα αυτών των μελετών πρότεινε ένα αποτέλεσμα ανθρακυκλίνες στην αναστολή της δράσης της τελομεράσης, και αυτό το αποτέλεσμα συνέβαλαν στην αντικαρκινική δραστικότητα αυτών των φαρμάκων.

Αν και έχουν αντιβιοτικά ανθρακυκλίνης έχουν χρησιμοποιηθεί ως αντικαρκινικά φάρμακα για πολλούς χρόνια, καρδιοτοξικότητα τους δημιουργεί μια κλινική θεραπεία ανησυχία [14]. Τα χαρακτηριστικά προάγεται από τις ανθρακυκλίνες μυοκαρδιοπάθεια στους βιοψίες ασθενών θεραπεύονται περιλαμβάνουν απώλεια μυϊκών ινών, σαρκοπλασματικό διαστολή δίκτυο, κυτταροπλασματική σχηματισμό κενοτοπίων, αυξημένο αριθμό λυσοσώματα, και πρήξιμο των μιτοχονδρίων σε καρδιομυοκύτταρα [15]. Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι η ανάπτυξη μυοκαρδιοπάθειας σε δοξορουβικίνη θεραπεία σχετίζεται με τη χορηγούμενη δόση [16]. Αυτή η παρενέργεια συμβαίνει συνήθως μέσα σε 1 χρόνο? Ωστόσο, μπορεί επίσης να συμβεί αρκετά χρόνια αργότερα κατά τη διάρκεια χορήγησης του φαρμάκου. Επιπλέον, ανθρακυκλίνες μπορεί επίσης να οδηγήσει σε σπάνιες (λιγότερο από 1%) οξείας καρδιοτοξικότητα (γενικά συμβαίνουν μέσα σε 1 εβδομάδα) [17]. Ως εκ τούτου, η ανάπτυξη ενός νέου φαρμάκου ασκώντας μια αποτελεσματική αντι επίδραση του όγκου, αλλά παρουσιάζει ένα ελάσσονα παρενέργεια όπως καρδιοτοξικότητα, είναι εξακολουθεί να αναζητείται θεραπεία του καρκίνου.

NSC745885 είναι μία νέα ένωση που αναπτύχθηκε το 2009. Αυτή η ένωση συντέθηκε από 1,2-διαμινο, το οποίο στη συνέχεια αντιδρά με θειονυλοχλωρίδιο και τριαιθυλαμίνη [18]. Μια προηγούμενη μελέτη διαπίστωσε ότι NSC745885 επιδεικνύει ένα αντικαρκινικό αποτέλεσμα όταν χρησιμοποιήθηκε το 60 κυτταρική γραμμή πρωτογενή διαλογή του Εθνικού Ινστιτούτου Καρκίνου (NCI). Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η λευχαιμία, μελάνωμα, και των ωοθηκών σειρές καρκίνου ήταν ιδιαίτερα ευαίσθητα σε NSC745885. Μη μικροκυτταρικός καρκίνος του πνεύμονα, καρκίνος του παχέος εντέρου, νευροβλάστωμα, καρκίνο του προστάτη, και του καρκίνου του μαστού κυτταρικές γραμμές είναι επίσης ευαίσθητα σε αυτή την ένωση. Επιπλέον, αυτή η προηγούμενη μελέτη ανέφερε επίσης ότι NSC745885 είναι αποτελεσματική στην καταστολή της ανάπτυξης των κυττάρων σε διάφορες καρκινικές κυτταρικές γραμμές, η οποία επιτυγχάνεται εν μέρει από την ανασταλτική ικανότητα στη δράση της τελομεράσης σε αυτά τα κύτταρα [18]. Ωστόσο, η

in vitro

αντικαρκινικά δυναμικό και το

in vivo

δραστηριότητα αυτής της νέας ένωσης με τον καρκίνο του στόματος δεν έχει διερευνηθεί.

Στην παρούσα μελέτη, ερευνήσαμε το δυναμικό αντικαρκινική NSC745885 σε στοματική πλακωδών κυττάρων καρκίνωμα γραμμές και σε μια

in vivo

καρκίνο του στόματος μοντέλο ξενομοσχεύματος ποντικού. Επιπλέον, αξιολογήσαμε επίσης την τοξικότητα του NSC745885 σε άλλα όργανα των ποντικών που έλαβαν. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι αυτή η νέα ένωση απόπτωση που επάγεται από το στόμα καρκινικά κύτταρα είτε στο

in vitro

κυτταρικής καλλιέργειας ή στο

in vivo

ξενομοσχεύματος μοντέλο ποντικού όγκου. Επιπλέον, βρήκαμε επίσης ότι

in vivo

θεραπεία του NSC745885 προκάλεσε καμία κυτταροτοξικότητα στο σπλήνα, τους πνεύμονες, το ήπαρ ή την καρδιά των πειραματόζωων. Το εύρημα της μελέτης μας πρότεινε ότι NSC745885 θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί ως ένα αποτελεσματικό φάρμακο για στοματική θεραπεία του καρκίνου, και αυτή η θεραπεία μπορεί να εμφανίζουν ένα υψηλότερο επίπεδο ασφάλειας από ό, τι τα παραδοσιακά αντιβιοτικά ανθρακυκλίνης.

Υλικά και Μέθοδοι

Cells and Chemicals

SAS ελήφθη από μια κακώς διαφοροποιημένο καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων ανθρώπου [19]. Αυτή η κυτταρική γραμμή που παρέχεται από τον Δρ Jeng-Fan Lo του Ινστιτούτου Βιολογίας Στόματος, Τμήμα Οδοντιατρικής, Εθνικό Πανεπιστήμιο Yang-Ming, την Ταϊβάν [20]. OECM-1 ελήφθη από ουλικό επιδερμοειδές καρκίνωμα του ασθενούς της Ταϊβάν. SCC4 και SCC25 ελήφθησαν από τη γλώσσα πλακώδη καρκινικά κύτταρα. Όλες οι κυτταρικές γραμμές διατηρήθηκαν σε ένα μέσον RPMI 1640 συμπληρωμένο με 10% εμβρυϊκό βόειο ορό, 2 mM L-γλουταμίνη, 25 mM HEPES του, και 1% πενικιλίνη /στρεπτομυκίνη. MRC-5 κυττάρων είναι ένα φυσιολογικό ανθρώπινο εμβρυϊκό πνεύμονα κυτταρική γραμμή ινοβλαστών (ATCC Νο: CCL-171) διατηρούνται σε Ελάχιστο Βασικό Μέσο (ΜΕΜ) συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου μόσχου, 2 mM L-γλουταμίνη, 25 mM από HEPES, και 1% πενικιλίνη /στρεπτομυκίνη. NSC745885 [18] παρασχέθηκε από τον Dr. Hsu-Σαν Χουάνγκ του Τμήματος Φαρμακευτικής, Εθνικής Άμυνας Ιατρικό Κέντρο, Ταϊβάν.

Ανάπτυξη Δοκιμασία Αναστολή

Τα κύτταρα στη λογαριθμική φάση ανάπτυξης καλλιεργήθηκαν σε μια πυκνότητα 5000 κύτταρα /φρεάτιο σε πλάκες 96 φρεατίων. Τα κύτταρα εκτέθηκαν σε διάφορες συγκεντρώσεις NSC745885 για 24, 48, ή 72 ώρες. Μία δοκιμασία 3- (4,5-διμεθυλθειαζολ-2-υλ) -2,5-διφαινυλτετραζολίου (ΜΤΤ) (Sigma, St Louis, ΜΟ, USA) χρησιμοποιήθηκε για να αξιολογηθεί η επίδραση της NSC745885 στην κυτταρική ανάπτυξη, όπως περιγράφηκε προηγουμένως. Το

50 τιμή IC προέκυψε από 50% αναστολή της κυτταρικής ανάπτυξης, η οποία γραφικά υπολογίστηκε ως μια σύγκριση με την αύξηση του ελέγχου.

αννεξίνης V χρώση

Τα κύτταρα πλύθηκαν με PBS και επαναιωρήθηκαν σε 1 Χ Ρυθμιστικό Σύνδεσης (BD Pharmingen, San Diego, CA, USA). Τα επαναιωρημένα κύτταρα χρωματίστηκαν με ΡΙΤΟ-συζευγμένο αννεξίνης V (BD Pharmingen, San Diego, CA, USA) και το ποσοστό της αννεξίνης V-θετικών κυττάρων αναλύθηκε με κυτταρομετρία ροής.

ποσοτική πραγματικού χρόνου PCR

Ολικό RNA απομονώθηκε χρησιμοποιώντας την μέθοδο ΤπζοΙ (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) και την ομογενοποίηση των καρκινικών κυττάρων σε ρυθμιστικό διάλυμα λύσης ΤπζοΙ ακολουθήθηκε από εκχύλιση με χλωροφόρμιο (Life Technologies). Για τη σύνθεση cDNA, 5 μg ολικού RNA μεταγράφηκε αντίστροφα στους 50 ° C για 60 λεπτά χρησιμοποιώντας 200 μονάδες Superscript αντίστροφης μεταγραφάσης III (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Primer ζεύγη για κασπάσης-3 (νόημα 5′-CTG GAC TGT GGC ΑΤΤ GAG AC-3 ‘? Αντιπληροφοριακό 5′-ACA AAG CGA CTG GAT GAA CC-3′), ΧΙΑΡ (αίσθηση 5’-GAC AGT ATG CAA GAT GAG TCA AGT CA-3 ‘? αντιπληροφοριακό 5′-GCA AAG CTT CTC CTC TTG CAG-3′), και GAPDH (αίσθηση 5’-GGA ΑΓΓ TGA ΑΓΓ TCG GAG TCA-3 ‘? αντιπληροφοριακό 5’-GTC ΑΤΤ GAT GGC AAC ΑΑΤ ATC CAC Τ-3 ‘) χρησιμοποιήθηκαν για ενίσχυση γονιδίου. Το κιτ κύριου μείγματος SYBR Green /ROX qPCR (Fermentas, Glen Burnie, Maryland, USA) χρησιμοποιήθηκε για όλες τις αντιδράσεις με μια αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης σε πραγματικό χρόνο (PCR). Εν συντομία, η PCR διεξήχθη ως εξής: ένας κύκλος στους 50 ° C για 2 λεπτά, ένας κύκλος 95 ° C για 10 λεπτά, ακολουθούμενη από 40 κύκλους των 15 δευτερολέπτων έκαστος στους 95 ° C, και 1 λεπτό στους 60 ° C. Τα στοιχεία συλλέχθηκαν εις τριπλούν και κανονικοποιήθηκαν με έκφραση GAPDH.

Protein Εκχύλιση και Ανάλυση Western Blot

Η πρωτεΐνη εκχυλίστηκε από ένα καλλιεργημένο κύτταρο (SAS) λύθηκαν σε ένα κύτταρο λύσης που περιέχει αναστολείς πρωτεάσης (50 mmol /L Tris (ρΗ 7.5), 30 mmol /L θειικό μαγνήσιο

4, 8 mmol /L EDTA, 2 mmol /L ϋΤΤ, και 2% Triton Χ-100). Τα κυτταρολύματα διαυγάστηκαν με φυγοκέντρηση στα 13.000 rpm, στους 4 ° C για 15 λεπτά. Οι συγκεντρώσεις πρωτεΐνης των κυτταρολυμάτων μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας μία δοκιμασία BCA (Thermo Scientific, Rockford, IL, USA). Η ανάλυση στυπώματος Western πραγματοποιήθηκε με τη χρήση 50 μg πρωτεΐνης εκχυλίσματα από τον έλεγχο του καρκίνου κύτταρα, και φορτώθηκαν κύτταρα επεξεργασμένα με NSC745885 και διαχωρίστηκαν με χρήση ηλεκτροφόρησης πηκτής πολυακρυλαμιδίου δωδεκυλ θειικού νατρίου 8%. Μετά την ηλεκτροφόρηση, οι πρωτεΐνες ηλεκτρομεταφέρθηκαν σε μεμβράνη πολυβινυλοδιφθοριδίου (PVDF) (Millipore, Billerica, ΜΑ, USA), το οποίο στη συνέχεια μπλοκαρίστηκε με ένα διάλυμα δέσμευσης που περιέχει 5% άπαχο γάλα σε σκόνη σε PBS συν Tween 20 0,2% (PBST) για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου. Μετά την ολοκλήρωση της φραγής, η μεμβράνη πλύθηκε 3 φορές με PBST. Η μεμβράνη PVDF κηλιδώθηκε με τα ακόλουθα πρωτογενή αντισώματα σε PBS: αντι-ΧΙΑΡ? κασπάσης-3 (Cell Signaling Technology, Danvers, ΜΑ, USA)? και αντι-ακτίνης (Sigma, St Louis, ΜΟ, USA). Μετά από 2 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου, η μεμβράνη πλύθηκε και πάλι σε PBST. Η μεμβράνη PVDF κατόπιν επωάστηκαν με IgG αντισώματα αντι-ποντικού ή αντι-κουνελιού υπεροξειδάσης-συνδεδεμένο για 1 ώρα, που αναπτύχθηκε χρησιμοποιώντας ένα κιτ ενισχυμένης ανίχνευσης χημειοφωταύγειας (Millipore, Billerica, ΜΑ, USA), και αναλύθηκαν με ένα σύστημα Las-3000 απεικόνισης ( Fujifilm, Tokyo, Japan).

ξενομοσχεύματος όγκου ποντίκι Μοντέλο

Οκτώ εβδομάδων NOD /SCID (NOD.CB17

Prkdc

scid /J, Εθνική Εργαστήριο Κέντρο ζώων, Ταϊβάν) ποντικοί διατηρήθηκαν σε μικρο-απομονωτές υπό ειδικές συνθήκες ελεύθερες παθογόνων και τρέφονται στείρα τροφή και χλωριωμένο αποστειρωμένο νερό. Δεκαοκτώ ποντίκια χωρίστηκαν σε 2 ομάδες και κάθε ομάδα ποντικών υποδορίως με 3 × 10

6 SAS. Εννέα ποντικοί σε κάθε ομάδα περαιτέρω σε επεξεργασία με NSC745885 ή δοξορουβικίνη (2,0 mg /kg bw /d /ί.ρ.), Και 9 ποντικοί σε κάθε ομάδα ενέθηκαν καθημερινά με ένα όχημα ελέγχου. NSC745885 αρχικά εγχέεται σε κάθε ομάδα ποντικών την ημέρα 3, προτού ψηλαφήθηκε κάθε όγκου και συνεχώς διαχειριζόμενη μέχρι την ημέρα 10 σε SAS φέρουν ποντικούς. Το μέγεθος των μεταμοσχευμένων όγκων μετρήθηκε κάθε τρίτη μέρα με τη χρήση εκτιμηθεί δαγκάνες, και ο όγκος του όγκου υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας τον ακόλουθο τύπο: όγκος (V) = 1/2 χ (μήκος Χ πλάτος

2). Στο τέλος της θεραπείας, τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε ευθανασία και οι όγκοι αφαιρέθηκαν, ζυγίστηκαν, και φωτογραφήθηκαν.

Ηθική δήλωση

Όλα τα ζωικά πειράματα διεξήχθησαν σύμφωνα με τις θεσμικές κατευθυντήριες γραμμές και εγκρίθηκαν από Θεσμική Φροντίδα ζώων NDMC και Επιτροπή Χρήσης. Όλες οι προσπάθειες έγιναν για να ελαχιστοποιηθεί η ταλαιπωρία των πειραματόζωων. (Αριθμός έγκρισης: IACUC-11-044)

ανοσοϊστοχημική χρώση

Η ανοσοϊστοχημική χρώση πραγματοποιήθηκε με τη χρήση της μεθόδου αβιδίνης-βιοτίνης περιγράφεται ως εξής. Τομές ιστού αποκηρώθηκαν σε ξυλόλιο και επανυδατώθηκαν σε αλκοόλη. Το αντιγόνο ανάκτηση πραγματοποιήθηκε με επώαση σε 0,01 mol /L κιτρικού ρυθμιστικού διαλύματος (ρΗ 6,0) στους 95 ° C για 40 λεπτά σε λουτρό ύδατος. Η ενδογενής υπεροξειδάση αποκλείσθηκε με υπεροξείδιο του υδρογόνου 0,3% για 30 λεπτά. Οι τομές στη συνέχεια επωάστηκαν με 5% κανονικό ορό αλόγου σε PBS για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου για να εμποδίσει μια μη ειδική αντίδραση αντισώματος. Μετά από πλύση με TBS και 0.1% Tween 20, τα πλακίδια επωάστηκαν όλη τη νύχτα στους 4 ° C με αντι-ανθρώπινη κασπάση-3 και ενός αντισώματος ΧΙΑΡ (ϋΑΚΟ, Osaka, Japan). Αφού ξεπλύθηκαν σε TBS και 0.1% Tween 20, οι τομές ιστών επωάστηκαν για 40 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου με IgG βιοτινυλιωμένο αντι-ποντικού που ακολουθείται από μια αβιδίνης-βιοτίνης-υπεροξειδάσης (κιτ Vecstatin Elite ABC, Vector Laboratories, Inc., Burlingame , CA) για 40 λεπτά. Στη συνέχεια, οι τομές ιστών χρωματίστηκαν με 0,003% 3,3-diaminobenzide τετραϋδροχλωρική και 0,005% υπεροξείδιο του υδρογόνου σε 0.05 mol /L Tris-HCl (ρΗ 7.2), με αιματοξυλίνη Mayer, το αφυδατωμένο και τοποθετημένα.

Αξιολόγηση των ανοσοϊστοχημική χρώση

μία ανοσοϊστοχημική διαδικασία χωρίς την προσθήκη του πρωτογενούς αντισώματος χρησιμοποιήθηκε ως αρνητικός μάρτυρας σε κάθε περίπτωση. Η ένταση της κασπάσης-3 και ΧΙΑΡ ανοσοαντιδραστικότητα των καρκινικών κυττάρων βαθμολογήθηκαν σε 3 ομάδες, και τυποποιείται σύμφωνα με το επίπεδο χρώσης ως θετικός εσωτερικός έλεγχος σε μια κλίμακα από το 0 (καμία χρώση), 1 (ασθενής χρώση), 2 (μέτρια χρώση), και 3 (ισχυρότερη ένταση). Η κατανομή της κασπάσης-3 και την επισήμανση ΧΙΑΡ μετρήθηκε επίσης ως σύμφωνα με το ποσοστό των θετικώς χρωματισμένων κυττάρων όγκου (από 0 έως 100) στο συνολικό όγκο του όγκου σε κάθε τμήμα. Για την αξιολόγηση των περιοχών διανομής της κασπάσης-3 και εκφράσεις ΧΙΑΡ πιο εύκολα και αποτελεσματικά, το 50% θεωρήθηκε το σημείο αποκοπής. Για τη σύγκριση του ελέγχου και της ομάδας NSC745885 αγωγή, το ποσοστό της κασπάσης-3 και ΧΙΑΡ-θετικών κυττάρων σε κάθε ένταση, πολλαπλασιάστηκε με την αντίστοιχη ένταση (από 0 έως 3) για να ληφθεί ένα σκορ ανοσοχρώση που κυμαίνεται από 0 έως 300.

Στατιστική ανάλυση

Η Στατιστική πακέτο για την Κοινωνικές Επιστήμες (SPSS έκδοση 10.0 για τα Microsoft Windows, Chicago, IL, USA) χρησιμοποιήθηκε για να ολοκληρωθεί η ανάλυση των δεδομένων που συλλέγονται. Ένα

t-test

και μονόδρομη ανάλυση διακύμανσης (ANOVA) με δοκιμή post-hoc Scheffe είχαν χρησιμοποιηθεί για να προσδιοριστεί εάν οποιεσδήποτε σημαντικές σχέσεις υπήρχαν μεταξύ των ποσοτικών αποτελεσμάτων. Οι τιμές των

P

& lt? 0.05 θεωρήθηκαν σημαντικές.

Αποτελέσματα

Ανάπτυξη ανασταλτική επίδραση της NSC745885 για τον καρκίνο του στόματος κυτταρικές γραμμές

Για να εξεταστεί η επίδραση της θεραπείας NSC745885 στο στοματικό καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων, που αντιμετωπίζονται SAS καρκίνος του στόματος κυττάρων με διάφορες συγκεντρώσεις NSC745885 για 24 ώρες και παρατηρήθηκαν μορφολογικές αλλαγές τους με τη χρήση ενός μικροσκοπίου αντίθεσης φάσης. Η επεξεργασία των NSC745885 στις συγκεντρώσεις από 3 μΜ έως 5 μΜ μειώθηκαν σημαντικά τις πυκνότητες των καλλιεργημένων κυττάρων σε σύγκριση με τα μη επεξεργασμένα κύτταρα (Σχ. 1Α). Για να αξιολογηθεί το αποτέλεσμα αναστολής αύξησης του NSC745885, τα κύτταρα SAS διεξήχθησαν με διάφορες δόσεις NSC745885, και μετρήθηκαν οι αριθμοί των κυττάρων που επιβιώνουν σε διαφορετικά χρονικά σημεία και σε σύγκριση με εκείνες των μη επεξεργασμένων κυττάρων με δοκιμασία ΜΤΤ. Οι αριθμοί των κυττάρων που επιβιώνουν SAS είχαν μειωθεί σημαντικά μετά την αγωγή NSC745885 σε χρόνο- και δοσο-εξαρτώμενο τρόπους (Σχ. 1Β-1ϋ). Το IC

50 NSC745885 ήταν 0.85 μΜ στα κύτταρα SAS μετά από 72 ώρες αγωγής (Σχ. 1D). Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι NSC745885 επέδειξε αναστολής αύξησης ή θάνατο δράση προαγωγής επί των κυττάρων της SAS. Για την ανίχνευση αποπτωτικών κυττάρων SAS, εκτελέσαμε χρώση αννεξίνης V για την αξιολόγηση των αναλογιών των αννεξίνης V θετική υπό διάφορες δόσεις της θεραπείας NSC745885 στις 24 ώρες. Τα ποσοστά αννεξίνης V θετικών κυττάρων αυξήθηκε με δοσοεξαρτώμενο τρόπο (Σχ. 2Α-2Ε). Υπάρχουν σημαντικές διαφορές όταν δοσολογία θεραπείας ήταν υψηλότερο από 0,5 μΜ (Σχ. 2F). Αυτό το αποτέλεσμα έδειξε ότι η θεραπεία NSC745885 που προκαλείται πρώιμη απόπτωση στο SAS κυττάρων.

(Α) μορφολογικές αλλαγές στα κύτταρα SAS. Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με υποδεικνυόμενη δοσολογίες NSC745885 για 24 ώρες. Δοσολογίες υψηλότερες από 3 μΜ προκάλεσε κυτταρικό θάνατο σε κύτταρα SAS. Η επιβίωση των NSC745885 κατεργασμένων κυττάρων SAS αξιολογήθηκε με ανάλυση ΜΤΤ σε διάφορους χρόνους και δοσολογίες. (Β) 24 ώρες μετά τη θεραπεία, η επιβίωση των κυττάρων SAS έδειξαν σημαντική διαφορά στις δοσολογίες υψηλότερες από 1 μΜ. (Γ) Στις 48 ώρες, η θεραπεία σε 1 μΜ ή υψηλότερη από εκείνη δοσολογίες NSC745885 παρουσίασαν σημαντική αντικαρκινική δράση. (Δ) Μετά από 72 ώρες επεξεργασίας, η IC50 του NSC745885 ήταν 0,85 μΜ σε κύτταρα SAS. Επιβίωση ποσοστό (%) ανέφερε τη σχετική αξία σε σύγκριση με τις ομάδες ελέγχου του οχήματος σε SAS (n = 3? *, Ρ & lt? 0,05? **, Ρ & lt? 0,01? ***, Ρ & lt? 0.001?. Ns, μη σημαντική).

Η

κύτταρα SAS υποβλήθηκαν σε θεραπεία με (Α έως Ε) αναφέρεται δόσεις NSC745885 για 24 ώρες. Τα συλλεγμένα κύτταρα βάφτηκαν με ΡΙΤΟ-συζευγμένο αννεξίνη V και αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής. (F) Τα ποσοστά των αννεξίνη V θετικών κυττάρων υπό θεραπεία NSC745885 συγκρίθηκαν με τους ελέγχους οχήματος (0 μΜ) (η = 3? **, Ρ & lt? 0,01? ***, Ρ & lt? 0,001? Ns, μη σημαντικές.).

η

επίσης, εξετάσαμε επίσης την επίδραση ανασταλτική ανάπτυξης σε άλλες στοματικές καρκινικές κυτταρικές σειρές, συμπεριλαμβανομένων OECM-1, SCC25, και SCC4. Βρήκαμε ότι NSC745885 παρουσίασαν επίσης σημαντική επίδραση αναστολής της ανάπτυξης σε κύτταρα OECM-1 στις δοσολογίες του 1 μΜ ή υψηλότερη, είτε 24 ή 48 ώρες μετά την φαρμακευτική αγωγή (Σχ. 3Α και 3Β). Αυτή η ένωση επέδειξε ακόμη μεγαλύτερη ανασταλτική αποτελεσματικότητα σε κύτταρα SCC4 (Σχ. 3C και 3D). Αντίθετα, υπάρχουν σημαντικές διαφορές μόνο σε 4 μΜ επί SCC25 κύτταρα σε είτε 24 ή 48 ώρες (Σχ. 3Ε και 3F). Προκειμένου να διερευνηθεί η επίδραση του NSC745885 σε φυσιολογικούς ιστούς, αξιολογήσαμε επίσης την κυτταροτοξική δράση αυτού του φαρμάκου σε κύτταρα MRC-5 (ένα φυσιολογικό ανθρώπινο εμβρυϊκό κυτταρική σειρά ινοβλαστών πνεύμονος) [21]. Τα αποτελέσματά μας διαπίστωσε ότι μόνο υψηλές συγκεντρώσεις NSC745885 (4 μΜ) επηρεάζουν σημαντικά την ανάπτυξη του MRC-5 κύτταρα (Σχ. 3G και 3Η), υποδεικνύοντας ότι NSC745885 επιδεικνύει μια ειδικότητα για καρκινικά κύτταρα.

Στοματική καρκινικά κύτταρα ( OECM-1, SCC4, και SCC25) και φυσιολογικό πνεύμονα ινοβλαστών MRC-5 κυττάρων υποβλήθηκαν σε θεραπεία με NSC745885 για 24 ή 48 ώρες με υποδεικνυόμενες συγκεντρώσεις. Η βιωσιμότητα αυτών των κυτταρικών σειρών εκτιμήθηκαν από τα αποτελέσματα ΜΤΤ assay.The έδειξαν ότι χαμηλές συγκεντρώσεις micromolar του NSC745885 επάγεται θάνατος των κυττάρων (Α) SAS αλλά δεν επηρέασε την ανάπτυξη των κυττάρων MRC-5 (G και Η) (η = 3? * , P & lt? 0,05? **, Ρ & lt? 0,01? ***, Ρ & lt? 0.001? ns, μη σημαντική)

Η

NSC745885 Θεραπεία επάγει την απόπτωση των SAS κύτταρα

.. για να εξεταστεί η επίδραση του NSC745885 στην επαγωγή απόπτωσης σε κύτταρα SAS, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με διάφορες δόσεις NSC745885 για 24 ώρες, και τα επίπεδα έκφρασης του mRNA της κασπάσης-3 μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας πραγματικού χρόνου RT-PCR. Το αποτέλεσμά μας έδειξαν ότι η έκφραση της κασπάσης-3 ήταν σημαντικά αυξημένη με τη θεραπεία NSC745885 με δοσο-εξαρτώμενο τρόπο (εικ. 4Α). Τα επίπεδα πρωτεΐνης της κασπάσης-3 και κασπάσης-διασπάστηκε 3 στα κύτταρα SAS επίσης προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας κηλίδα western. Υπήρξαν σημαντικές αυξήσεις στην κασπάσης-3 και κασπάσης-διασπάστηκε 3 υπό θεραπεία με συγκεντρώσεις υψηλότερες από 1 μΜ (Σχ. 4Β). Τα σχετικά επίπεδα πρωτεΐνης μεταξύ διαφόρων δόσεων συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας ένα μετρητή πυκνότητας, εμφανίζοντας συνεπή αποτελέσματα με άμεση παρατήρηση σε κηλίδα western (Σχ. 4C και 4D). Αυτά τα δεδομένα έδειξαν ότι η θεραπεία NSC745885 προκάλεσε την απόπτωση των κυττάρων SAS.

(Α) Το σχετικό επίπεδο έκφρασης RNA της κασπάσης-3 σε SAS κύτταρο υποβάλλεται σε επεξεργασία με ενδεικνυόμενη δοσολογίες NSC745885 για 24 ώρες αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας πραγματικού χρόνου RT-PCR. Η έκφραση της κασπάσης-3 αυξάνεται σημαντικά με τη θεραπεία NSC745885 σε μία δόση-εξαρτώμενο τρόπο. (Β) Η σχάση επίπεδα πρωτεΐνης κασπάσης-3 κασπάση-3 και στο κύτταρο SAS κατεργάζεται με NSC745885 για 48 ώρες ποσοτικοποιήθηκε χρησιμοποιώντας western blot. (Γ) Τα αποτελέσματα του δυτικού στυπώματος σε κασπάση-3 αξιολογήθηκε σε 3 ανεξάρτητα πειράματα και κανονικοποιούνται με β-ακτίνη (*, Ρ & lt? 0,05? **, Ρ & lt? 0,01? ***, Ρ & lt? 0,001? ns., μη σημαντική). Το επίπεδο της πρωτεΐνης της κασπάσης-3 ήταν υψηλότερα σε 1,5 μΜ θεραπείας NSC745885. (D) Τα αποτελέσματα του δυτικού στυπώματος σε διασπασμένη κασπάση 3 αξιολογήθηκαν σε 3 ανεξάρτητα πειράματα (*, Ρ & lt? 0,05?. Ns, μη-σημαντική).

Η

NSC745885 Μειώνει την RNA και η πρωτεΐνη Έκφραση ΧΙΑΡ σε SAS κύτταρα

ο αναστολέας φυλοσύνδετη πρωτεΐνης απόπτωσης (ΧΙΑΡ) έχει αναγνωριστεί ως ένα αντι-αποπτωτική πρωτεΐνη σε κύτταρα θηλαστικών [22]. Παίζει σημαντικό ρόλο στην αναστολή της απόπτωσης στα δύο θάνατο μεσολάβηση υποδοχέα και μονοπάτια μιτοχόνδρια μεσολάβηση [23], [24]. Μια πρόσφατη μελέτη έδειξε επίσης ότι ΧΙΑΡ αποτελεί προγνωστικό παράγοντα απόκρισης χημειοθεραπεία και πρόγνωση για τους ασθενείς προχωρημένο καρκίνο κεφαλής και τραχήλου [25]. Ως εκ τούτου, εξετάζουμε επίσης την επίδραση της NSC745885 στο γονίδιο ΧΙΑΡ και η έκφραση πρωτεΐνης σε στοματική καρκινικά κύτταρα, θα αντιμετωπίζονται τα καρκινικά κύτταρα SAS με διαφορετικές συγκεντρώσεις (0 μΜ, 0.5 μΜ, 1.0 μΜ, 1.5 μΜ, και 2,0 μΜ) επί 24 ώρες , και στη συνέχεια προσδιορίζεται η αλλαγή τους στη γονιδιακή έκφραση με τη χρήση του Q-PCR. Σε σύγκριση με τα κύτταρα ελέγχου, η έκφραση του γονιδίου ΧΙΑΡ μειώθηκε σημαντικά με θεραπεία NSC745885 με δοσο-εξαρτώμενο τρόπο (εικ. 5Α). Έχουμε αντιμετωπίζονται επίσης τα καρκινικά κύτταρα SAS με διαφορετικές συγκεντρώσεις (0 μΜ, 0.5 μΜ, 1.0 μΜ, 1.5 μΜ, και 2,0 μΜ) για 48 ώρες, και στη συνέχεια προσδιορίζεται αλλαγές πρωτεϊνική έκφραση τους, χρησιμοποιώντας κηλίδα western. Μια σημαντική μείωση του ΧΙΑΡ παρατηρείται υπό αγωγή με συγκεντρώσεις υψηλότερες από 1 μΜ (Σχ. 5Β). Τα σχετικά επίπεδα πρωτεΐνης μεταξύ διαφόρων δόσεων συγκρίθηκαν επίσης χρησιμοποιώντας ένα μετρητή πυκνότητας, εμφανίζοντας συνεπή αποτελέσματα με άμεση παρατήρηση σε κηλίδα western (Σχ. 5C). Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η NSC745885 παρουσίασαν απόπτωση αποτέλεσμα προαγωγής στα κύτταρα SAS.

Το σχετικό επίπεδο έκφρασης RNA του ΧΙΑΡ σε κύτταρα SAS σε επεξεργασία με ενδεικνυόμενη δοσολογίες NSC745885 αξιολογήθηκε στις 24 ώρες με τη χρήση πραγματικού χρόνου RT- PCR. Η έκφραση του ΧΙΑΡ μειώθηκε σημαντικά με θεραπεία NSC745885 με δοσο-εξαρτώμενο τρόπο. (Β) Η έκφραση του ΧΙΑΡ σε κύτταρα SAS σε επεξεργασία με NSC745885 ποσοτικοποιήθηκε χρησιμοποιώντας κηλίδα western στις 48 ώρες της θεραπείας. (Γ) Τα αποτελέσματα κηλίδος Western αξιολογήθηκαν σε 3 ανεξάρτητα πειράματα και κανονικοποιούνται με β-ακτίνη (*, Ρ & lt? 0,05? **, Ρ & lt? 0,01? ***, Ρ & lt? 0.001). Το επίπεδο πρωτεΐνης ΧΙΑΡ μειώθηκε κατά δοσοεξαρτώμενο τρόπο.

Η

NSC745885 Αναστέλλει SAS ανάπτυξη κυττάρων

in vivo

Η

Για να αξιολογηθεί η δυνατότητα αντι-όγκου των NSC745885 για τον καρκίνο του στόματος

in vivo

, πραγματοποιήσαμε αυτή τη θεραπεία σε ένα μοντέλο ποντικού που φέρει όγκο ξένου μοσχεύματος. Τα κύτταρα SAS εμβολιάσθηκαν σε NOD ποντίκια /SCID και NSC745885 εγχύθηκε την ημέρα 3 σε κάθε ομάδα ποντικών, πριν από την ψηλάφηση κάθε όγκου, και χορηγούνται καθημερινά μέχρι την ημέρα 10 σε ποντικούς που φέρουν. Το μέγεθος του όγκου μειώθηκε στα ποντίκια που έλαβαν αγωγή σε σύγκριση με τους ποντικούς ελέγχου που φέρουν όγκο, που υποβλήθηκαν σε αγωγή με το φορέα μόνο (Σχ. 6Α). Τα ξενομοσχεύματα SAS μειωμένη σε βάρος κατά 23 ± 10,39% με τη θεραπεία NSC745885 (Εικ. 6Β). Τα βάρη σώματος του ελέγχου και NSC745885 αγωγή ποντικοί αξιολογήθηκαν επίσης την ημέρα 1 και 10 μετά τη χορήγηση του φαρμάκου. Δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές υπήρχαν στο σωματικό βάρος του ελέγχου ή NSC745885 αγωγή ποντίκια (Σχ. 6C). Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η θεραπεία NSC745885 στα 2 mg /kg εμφάνισε μια αντι-στόματος αποτέλεσμα του καρκίνου, και αυτή η θεραπεία δεν οδήγησε σε σημαντική τοξικότητα σε πειραματικά ποντίκια.

(Α) το καρκινικό κύτταρο εμφυτεύεται NOD /SCID ποντίκια χορηγήθηκαν με NSC745885 (2 mg /kg /d). Τα μεταμοσχευμένα όγκοι απομονώθηκαν κατά την Ημέρα 10 μετά την χορήγηση του φαρμάκου. θεραπεία NSC745885 μείωσε σημαντικά το μέγεθος του όγκου σε σύγκριση με τον έλεγχο του οχήματος. (Β) Το μέσο βάρος του όγκου συγκρίθηκε μεταξύ των NSC745885 αγωγή και αγωγή με PBS ποντικούς που φέρουν όγκο την Ημέρα 10 (n = 9? *, Ρ & lt? 0,01). (Γ) Το σωματικό βάρος των πειραματικών ποντικιών δεν μειώνεται σημαντικά με τη θεραπεία NSC745885 σε σύγκριση με αγωγή με PBS ελέγχους.

Η

NSC745885 επάγει απόπτωση στα καρκινικά κύτταρα ξενομοσχεύτηκε

Για να παρατηρήσουμε άμεσα την αποπτωτικό αποτέλεσμα NSC745885 επί κυττάρων όγκου

in vivo

, εκτελέσαμε ανοσοϊστοχημική χρώση για να αξιολογηθεί η κατάσταση της αποπτωτικής πρωτεΐνης κασπάσης-3 σε ξενομοσχεύματα. Μετά από 10 ημερών μετά τη μεταμόσχευση, τα ξενομοσχεύματα αφαιρέθηκαν, μετρήθηκαν για το μέγεθος, και εξετάστηκαν με HE και ανοσοϊστοχημική χρώση. Οι όγκοι από τους ποντικούς NSC745885 αγωγή παρουσίασαν βλάβη ιστού στο μέρος του όγκου (Σχ. 7Α) και μια αξιοσημείωτα υψηλότερη αρίθμηση των αποπτωτικών κυττάρων (κασπάση-3 θετικού κυττάρου) σε σύγκριση με τους όγκους ελέγχου (Σχ. 7Β). Αξιολογήσαμε επίσης την έκφραση του ΧΙΑΡ στα ξενομοσχεύματα. Το αποτέλεσμα αποκάλυψε ότι τα NSC745885 ποντίκια με αγωγή παρουσίασαν σημαντικά χαμηλότερη καταμέτρηση των αντι-αποπτωτικών κυττάρων (ΧΙΑΡ θετική κυτταρική) σε σύγκριση με τους όγκους ελέγχου (Σχ. 7C). Οι βαθμολογίες έκφραση των κασπάσης-3 θετικά κύτταρα ήταν 1.21 ± 0.04 και 2.87 ± 0.03 στην ομάδα ελέγχου και την ομάδα NSC745885 αγωγή, αντιστοίχως (Εικ. 7d). Οι βαθμολογίες έκφραση των θετικών κυττάρων ΧΙΑΡ ήταν 2,24 ± 0,03 και 1,16 ± 0,02 στην ομάδα ελέγχου και την ομάδα NSC745885 αγωγή, αντιστοίχως (Εικ. 7Ε). Κατά συνέπεια, τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι NSC745885 μειώνει τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων SAS, και εξασκείται αντικαρκινική δράση

in vivo

μέσω της επαγωγής της απόπτωσης.

(Α) Οι ιστολογικές μεταβολές σε μοσχεύματα όγκου αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας χρώση HE. Συγκρίνοντας τον έλεγχο PBS με τις NSC745885-αγωγή ομάδες αποκάλυψε μια αξιοσημείωτη νέκρωση όγκου στην ομάδα NSC745885 αγωγή. (Β) Το επίπεδο έκφρασης της κασπάσης-3 στις απομονωμένες μοσχεύματα όγκων αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας ανοσοϊστοχημική χρώση. (Γ) Το επίπεδο έκφρασης του ΧΙΑΡ σε απομονωμένες μοσχεύματα όγκων αξιολογήθηκαν επίσης χρησιμοποιώντας βαφή ανοσο-ιστοχημικές. Οι βαθμολογίες για έκφραση κασπάσης-3 (D) και ΧΙΑΡ (Ε) προσδιορίστηκαν ποσοτικά, αποκαλύπτοντας μια αύξηση στην έκφραση της κασπάσης-3 με θεραπεία NSC745885 (Ρ & lt? 0,05). Αντίθετα, η έκφραση του ΧΙΑΡ σε μοσχεύματα όγκων μειώθηκε με αυτή τη θεραπεία (P & lt? 0,05).

Η

Επιδράσεις της NSC745885 στο σωματικό βάρος σε ποντίκια

Για να προσδιορίσετε αν τα αίτια της θεραπείας NSC745885 απώλεια σωματικού βάρους, παρακολουθήσαμε την αλλοίωση του σωματικού βάρους στην πειραματική ποντίκια. Ένα σημαντικό κυτταροτοξικό αποτέλεσμα του NSC745885 αποκαλύφθηκε με την ημερήσια χορήγηση NOD /SCID σε δοσολογία 40 mg /kg /d (Σχ. 8Α). Το σωματικό βάρος των ποντικών που έλαβαν θεραπεία με την υψηλότερη δόση ήταν σημαντικά μειωμένη, και όλα τα ποντίκια πέθαναν κατά την ημέρα 14. Σε αυτή τη μελέτη, διαπιστώσαμε ότι η μέγιστη ανεκτή δόση του NSC745885 σε ποντικούς ήταν 40 mg /kg /d. Για να καθοριστεί εάν θεραπεία NSC745885 δημιουργούνται κυτταροτοξικότητα στα όργανα των πειραματικών ποντικών, οι σπλήνες, οι πνεύμονες, το συκώτι, και οι καρδιές συλλέχθηκαν από τις αγωγή με PBS και NSC745885-ποντίκια με αγωγή την ημέρα 14 και εκτιμήθηκαν χρησιμοποιώντας μια ιστολογική δοκιμασία. Δεν υπήρχαν προφανείς διαφορές στα όργανα του PBS-αγωγή ή NSC745885 αγωγή ποντίκια (Σχ. 8Β-8Ε). Αυτό το αποτέλεσμα έδειξε ότι η καθημερινή θεραπεία των NSC745885 σε 2,0 mg /kg /d ε.π. προκάλεσε κανένα αξιοσημείωτη δυσμενή αποτελέσματα στα ποντίκια.

(Α) NOD /SCID ποντίκια υποβλήθηκαν σε αγωγή με PBS ή υποδεικνύεται ημερήσιες δοσολογίες NSC745885, και μετρήθηκαν τα σωματικά βάρη αυτών των ποντικών. Η επίδραση της θεραπείας NSC745885 στα όργανα του πειραματικού ποντικών αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας μία ιστολογική δοκιμασία και ΗΕ χρώση για την Ημέρα υπήρχε 14. Δεν προφανείς διαφορές στο (Β) σπλήνα, (Γ) του πνεύμονα, (D) του ήπατος, ή (Ε) καρδιά του PBS-θεραπεία και NSC745885-ποντίκια με αγωγή.

η

συγκρίσεις την ασφάλεια και την Αποτελεσματικότητα αντι-όγκου μεταξύ NSC745885 και δοξορουβικίνη

Για να συγκρίνει την ασφάλεια των NSC745885 με δοξορουβικίνη, εμείς αγωγή NOD /SCID ποντίκια με αυτές τις δύο ενώσεις σε 2 mg /kg /d ip για 10 ημέρες. Το βάρος και το σώμα επιβίωση των πειραματικών ποντικών παρακολουθούνται καθημερινά. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι το 50% των ποντικών που έλαβαν doxorubicin ήταν νεκρά κατά την ημέρα 11 (Σχ. 9Α). Αντιθέτως, όλα τα ποντίκια που έλαβαν NSC745885 επιβιώνουν κατά την ημέρα 11 (Σχ. 9Α). Υπάρχουν σημαντικές μειώθηκε στα βάρη σώματος των ποντικών που έλαβαν δοξορουβικίνης σε σύγκριση με τις ομάδες που έλαβαν NSC745885 (Σχ. 9Β). Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι NSC745885 εμφάνισαν υψηλότερη ασφάλεια από δοξορουβικίνη. Επιπλέον, συγκρίναμε επίσης την αποδοτικότητα κατά του όγκου μεταξύ αυτών των δύο φαρμάκων με μέτρηση των βαρών όγκου σε μοντέλο ξενομοσχεύματος όγκου που φέρει. NOD /SCID ποντίκια εμβολιάστηκαν με κύτταρα SAS και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με 2 mg /kg /d ε.π. δοξορουβικίνης ή NSC745885 από την ημέρα 3 έως την ημέρα 10 μετά τον ενοφθαλμισμό των κυττάρων. Οι όγκοι συλλέχθηκαν την ημέρα 11 (Σχ. 9Γ, η = 9) και τα βάρη των όγκων μετρήθηκαν.