Αφηρημένο

Γενιστεΐνη είναι ένα ισοφλαβόνες που βρέθηκαν στη σόγια, και της χημειο-προληπτικών και Θεραπευτικές επιδράσεις έχουν καθιερωθεί από

in vitro

μελέτες. Πρόσφατα, ωστόσο, οι θεραπευτικές δράσεις του

in vivo

έχουν αμφισβητηθεί λόγω αντιφατικές αναφορές από μελέτες σε ζώα, οι οποίες βασίζονται σε μοντέλα ή την εμφύτευση των κυτταρικών σειρών σε ζώα τρωκτικών. Για να διευκρινιστεί

in vivo

επιδράσεις της γενιστεΐνης σε ασθενείς με προχωρημένο καρκίνο του προστάτη, έχουμε αναπτύξει μια καρκίνου του προστάτη ξενομοσχεύματος μοντέλο που λαμβάνονται από ασθενή, στο οποίο ένα δείγμα κλινική προστατεκτομή μεταμοσχεύθηκε σε ανοσοανεπαρκή ποντίκια. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν αυξημένη λεμφαδένων (LN) και μεταστάσεις δευτερεύον όργανο σε ποντίκια genistein σε σύγκριση με το χωρίς θεραπεία ελέγχους. Είναι ενδιαφέρον ότι, επεμβατική κακοήθη κύτταρα συναθροίζονται για να σχηματίσουν νησιά /μικρομεταστάσεων μόνο στη δευτερογενή όργανα των ομάδων genistein-θεραπεία, όχι στην ομάδα ελέγχου χωρίς θεραπεία. Για να κατανοήσουμε τον υποκείμενο μηχανισμό για τη μεταστατική εξέλιξη, εξετάσαμε πολλαπλασιασμό των κυττάρων και την απόπτωση σε παραφίνη τομές. Ανοσοϊστολογική δεδομένα δείχνουν ότι οι όγκοι των ομάδων genistein επεξεργασμένου έχουν περισσότερα πολλαπλασιαζόμενα και λιγότερα αποπτωτικά καρκινικά κύτταρα από αυτά του μη επεξεργασμένου ομάδα. δεδομένα ανοσοκηλίδωσης μας υποδηλώνουν ότι αυξημένο πολλαπλασιασμό και μετάσταση συνδέονται με αυξημένη δραστηριότητα των κινασών τυροσίνης, EGFR και κατάντη Src του, σε ομάδες genistein-θεραπεία. Παρά τις χημειοπροληπτικές επιπτώσεις προτείνει νωρίτερα

in vitro

μελέτες, ο καρκίνος αποτέλεσμα προαγωγής της genistein που παρατηρείται εδώ υποδηλώνει την ανάγκη για προσεκτική επιλογή των ασθενών και ασφαλέστερη σχεδιασμό των κλινικών δοκιμών

Παράθεση:. Nakamura Η , Wang Υ, Kurita Τ, Adomat Η Cunha GR, Wang Υ (2011) γενιστεΐνη Αυξάνει υποδοχέα επιδερμικού αυξητικού παράγοντα Σηματοδοσίας και προωθεί την εξέλιξη του όγκου σε προχωρημένους ανθρώπινου καρκίνου του προστάτη. PLoS ONE 6 (5): e20034. doi: 10.1371 /journal.pone.0020034

Συντάκτης: Robert Z. Qi, το Χονγκ Κονγκ Πανεπιστήμιο Επιστήμης και Τεχνολογίας, το Χονγκ Κονγκ

Ελήφθη: 7 Φεβρουαρίου, 2011? Αποδεκτές: 10η Απριλίου του 2011? Δημοσιεύθηκε: May 16, 2011

Copyright: © 2011 Nakamura et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η έρευνα υποστηρίχθηκε από το καναδικό Ινστιτούτο Έρευνας Υγείας (MOP-86730: YZW). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του προστάτη (PCA) είναι η πιο συχνά διαγιγνώσκεται noncutaneous κακοήθεια μεταξύ της Βόρειας Αμερικής άνδρες [1]. Το 2009, περίπου 192, 280 νέες περιπτώσεις καρκίνου του προστάτη διαγνώστηκε, και 27, 360 θάνατοι αναφέρθηκαν στις Ηνωμένες Πολιτείες, καταλαμβάνοντας την δεύτερη υψηλότερη θνησιμότητα μετά τον καρκίνο του πνεύμονα [2]. Σε σύγκριση με τις ΗΠΑ, τα ποσοστά επίπτωσης και θνησιμότητας του καρκίνου του προστάτη είναι σημαντικά χαμηλότερες στην Ασία [3], [4], [5]. μελέτες της μετανάστευσης έχουν δείξει ότι οι Ασιάτες, οι οποίοι έχουν υιοθετήσει το δυτικό τρόπο διατροφής, μετά τη μετανάστευση προς τις ΗΠΑ, είχαν σημαντικά υψηλότερη συχνότητα εμφάνισης καρκίνου του προστάτη από τους ντόπιους στις ασιατικές χώρες [6], [7]. Μεταξύ πολλών διατροφικών διαφορές μεταξύ της Βόρειας Αμερικής και της Ασίας, η διαφορά στην κατανάλωση σόγιας είναι εξαιρετική. Εκτιμάται ότι οι Ασιάτες καταναλώνουν 20-50 φορές περισσότερα τρόφιμα με βάση τη σόγια κατά κεφαλήν σε σύγκριση με τη Βόρεια Αμερικανοί [8]. Προηγούμενες επιδημιολογικές αναφορές έχουν δείξει μια αντίστροφη συσχέτιση μεταξύ της κατανάλωσης σόγιας και τον κίνδυνο του προστάτη, γεγονός που υποδηλώνει χημειοπροληπτικές επιπτώσεις της σόγιας [9]. Το κύριο δραστικό συστατικό σόγιας είναι μια ισοφλαβόνη που ονομάζεται genistein (4,5,7-τριυδροξυισοφλαβόνη) [10], [11], [12], [13]. Λόγω παρόμοια μοριακή δομή με οιστραδιόλη, γενιστεΐνη είναι γνωστό ότι παρουσιάζει ασθενή οιστρογονική δραστικότητα με σύνδεση προς τον υποδοχέα οιστρογόνου (ER) και διαμορφώνοντας έτσι οιστρογόνο-ελεγχόμενα μεταγραφή γονιδίου σε όργανα στόχους [14], [15].

Οι αντικαρκινικές επιδράσεις της γενιστεΐνης έχουν μελετηθεί καλά

in vitro

και αναφέρθηκαν σε αρκετές καρκινικές κυτταρικές σειρές συμπεριλαμβανομένης της λευχαιμίας, του πνεύμονα, του προστάτη και του μαστού [16], [17], [18], [19]. Τα δεδομένα από προηγούμενες μελέτες δείχνουν ότι η genistein έχει ένα ευρύ φάσμα βιολογικών αποτελεσμάτων, τα οποία περιλαμβάνουν: επαγωγή κυτταρικής διαφοροποίησης και της απόπτωσης [17], [18], [19], [20], αναστολή της κυτταρικής ανάπτυξης [19], [21 ], [22], [23], [24], και κατάργηση των οδών μεταγωγής σήματος [25], [26], [27]. Genistein, έτσι, έχει προσελκύσει ένα σημαντικό ποσό της προσοχής στην έρευνα για τον καρκίνο, ιδίως ως προς την ανασταλτική δράση της επί της πρωτεϊνικής κινάσης της τυροσίνης (ΡΤΚ) δραστηριότητες που είναι σημαντικές στην κυτταρική επιβίωση και τον πολλαπλασιασμό [25], [26], [27].

Παρά τις πολλά υποσχόμενες

in vitro

αντικαρκινική δεδομένων, τα τελευταία

in vivo

μελέτες έχουν αναφέρει αντιφατικά αποτελέσματα σχετικά με τις επιδράσεις genistein για μετάσταση. Μελέτες που χρησιμοποιούν TRAMP και PC-3 ζωικά μοντέλα έχουν δείξει ότι η genistein απροσδόκητα αυξημένη μετάσταση [28], [29], ενώ μια άλλη μελέτη που χρησιμοποιεί ένα PC-3M

in vivo

μοντέλο έδειξε το αντίθετο αποτέλεσμα [30]. Οι εκθέσεις αυτές, σε συνδυασμό με ασαφή προκαταρκτικά αποτελέσματα από κλινικές δοκιμές φάσης ΙΙ [31], [32] υποδεικνύουν την ανάγκη για πιο προσεκτική εξέταση των επιπτώσεων της genistein

in vivo

χρησιμοποιώντας μοντέλα που είναι πιο κλινικά σχετικές σχέση με άλλα συμβατικά

in vivo

μοντέλα που βασίζονται στη χρήση των κυτταρικών σειρών.

στη μελέτη μας, έχουμε χρησιμοποιείται ένα υπονεφρικάς τεχνική ξενομόσχευμα χρησιμοποιώντας ένα χαμηλό πέρασμα των ασθενών που προέρχονται από δείγμα PCA σε μη-παχύσαρκους διαβητικούς, σοβαρή συνδυασμένη ανοσολογική ανεπάρκεια (NOD-SCID). Τα ανθρώπινα ξενομοσχεύματα καρκίνου διατηρήσει πιστά τις ιστοπαθολογικές και γονοτυπικής χαρακτηριστικά του αρχικού κλινικού δείγματος [33], [34]. Χρησιμοποιώντας τον ασθενή προερχόμενο μας σύστημα ξενομοσχεύματος PCa, έχουμε βρει ότι η γενιστεΐνη σε φαρμακολογικές δοσολογία αυξάνει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, μειώνει την απόπτωση και προωθεί μετάσταση σε προχωρημένο ανθρώπινο PCa. Τέτοια αποτελέσματα προαγωγής του καρκίνου της genistein σχετίζεται με αυξημένη φωσφορυλίωση του EGFR και Src κινασών τυροσίνης.

Μέθοδοι

1. Υλικά και τα ζώα

Η γραμμή όγκου LTL163a (www.livingtumorlab.com) προέρχεται από ένα δείγμα καρκίνο του προστάτη υψηλής ποιότητας που λαμβάνεται από έναν ασθενή, και η γραμμή μεταμόσχευση ξενομοσχεύματος όγκου αναπτύχθηκε από αυτό το δείγμα ιστού κλινικές όπως προηγουμένως περιγράφεται [33], [34]. Γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από τον ασθενή, καθώς και την έγκριση της δεοντολογίας από το Πανεπιστήμιο της Βρετανικής Κολούμπια Διοικητικού-British Columbia Cancer Agency του Δεοντολογίας Έρευνας (UBC BCCA REB), Βανκούβερ του Καναδά. φροντίδα των ζώων και τα πειράματα διεξήχθησαν σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές του Καναδικού Συμβουλίου Φροντίδας Ζώων (CCAC), και τη χρησιμοποίηση των ζώων για πειράματα μας εξετάστηκε και εγκρίθηκε από την Επιτροπή Φροντίδας Ζώων του Πανεπιστημίου της Βρετανικής Κολομβίας (άδεια #: A10 -0100).

σε συντομία, ιστός όγκου κόπηκε ομοιόμορφα σε πολλά μικρά κομμάτια, 1 × 3 × 3 mm, και μπολιασμένα κάτω από τη νεφρική κάψα αρσενικών ποντικών NOD-SCID που ήταν ηλικίας 6-8 εβδομάδων [33 ], [34]. Δύο κομμάτια του όγκου ανά νεφρό τοποθετήθηκαν κάτω από τη νεφρική κάψα. ποντίκια υποδοχής συμπληρώθηκαν με σφαιρίδια τεστοστερόνης (10 mg /ποντικό), που παρασκευάστηκαν με μία πρέσα PARR σφαιρίδιο (PARR Instrument Co., Moline, Illinois) και εμφυτεύεται υποδορίως για την προώθηση της ανάπτυξης των κυττάρων. Τα μοσχεύματα αναπτύχθηκαν στην νεφρική περιοχή για 60~90 ημέρες, συλλέχθηκαν, και τα τμήματα των μοσχευμάτων σταθεροποιήθηκαν για ιστοπαθολογική ανάλυση. Να αναπτύξει μια γραμμή μεταμόσχευση όγκου, που συγκομίζονται μοσχεύματα όγκων που παρουσιάζουν ταχεία ανάπτυξη κόπηκαν σε μικρά κομμάτια και εκ νέου μπολιάζονται με το νεφρό της νέας οικοδεσπότες. Μετά από τρεις γενιές μεταμόσχευση, παρατηρήθηκαν λεμφαδενοπάθεια, που διχοτομείται και ιστολογικά εξετάζονται για μετάσταση. Μόλις μετάσταση επιβεβαιώθηκε, φρέσκα ιστούς λεμφαδένων που περιέχουν μεταστατικό καταθέσεις έγιναν εκ νέου μεταμοσχεύεται στο νεφρό για να αναπτύξουν μια μεταστατική γραμμή όγκου και ορίζεται LTL163a. ​​

2. επεξεργασία genistein

Για να μελετήσουμε τις φαρμακολογικές επιδράσεις της genistein στη μετάσταση του ανθρώπινου καρκίνου του προστάτη, επιλέξαμε να χρησιμοποιήσετε μεταστατικό γραμμή όγκου LTL163a, τα οποία προήλθαν από το 10

ης γενιάς μεταμόσχευση. Οι όγκοι κόπηκαν σε κομμάτια 1 × 3 × 3 mm και μεταμοσχεύονται εντός δεκαοκτώ αρσενικούς ποντικούς NOD-SCID με κάθε νεφρό που έχει ένα μόσχευμα του όγκου (2 μοσχεύματα /ποντικό). σφαιρίδια τεστοστερόνη (10 mg) εμφυτεύτηκαν υποδορίως όπως περιγράφεται παραπάνω σε όλα τα ζώα κατά το χρόνο της μεταμόσχευσης για να διατηρηθεί ένα ικανοποιητικό επίπεδο τεστοστερόνης ορού επειδή genistein-θεραπεία έχει αποδειχθεί ότι μειώνουν τα επίπεδα της τεστοστερόνης του ορού μέσω του υποθαλάμου /υπόφυσης /άξονα γονάδων [35] . Επτά ημέρες μετά τη μεταμόσχευση, τα ζώα διαιρέθηκαν τυχαία σε τρεις ομάδες? ελέγχου (χωρίς θεραπεία), χαμηλής δόσης και υψηλής δόσης της γενιστεΐνης (καθαρότητα & gt? 99%, LC Laboratories, Woburn, ΜΑ). Οι ποντικοί στην ομάδα χαμηλής δόσης δόθηκαν genistein διαλύθηκαν σε φυστικέλαιο με καθετηριασμό σε 2 mg /ημέρα (80 mg /kg βάρους σώματος /ημέρα). Οι ποντικοί στην ομάδα υψηλής δόσης δόθηκαν 10 mg /ημέρα (400 mg /kg /ημέρα) της genistein. Τα ποντίκια ελέγχου έλαβαν 0,1 ml από μόνο λάδι-όχημα. Όλες οι ομάδες τράφηκαν με τον ίδιο τρωκτικό δίαιτα (Δίαιτα PicoLab Rodent 20) και δεδομένου αυτόκαυστο πόσιμο νερό. θεραπεία γενιστεΐνη άρχισε μία εβδομάδα μετά τη μεταμόσχευση και συνεχίστηκε για τρεις εβδομάδες. Τα μοσχεύματα αναπτύχθηκαν στο νεφρό για ένα σύνολο 4 εβδομάδων. Στο τέλος της 4

ου εβδομάδες, τα δείγματα αίματος και οργάνων (νεφρών με μοσχεύματα όγκου, ήπατος, πνεύμονα, σπλήνα και λεμφαδένες) συλλέχθηκαν για αναλύσεις.

3. Μέτρηση των επιπέδων ορού genistein

LC-MS (φασματομετρία μάζας χρωματογραφία-υγρό) χρησιμοποιήθηκε για να μετρηθεί το επίπεδο της genistein ορού. Πρώτον, τα κατεψυγμένα δείγματα ορού αποψύχθηκαν σε πάγο, και 5 μΙ 1 μg /ml λουτεολίνη σε αιθανόλη προστέθηκε σε 25 μl ορού ως εσωτερικό πρότυπο (IS). Η εκχύλιση πραγματοποιήθηκε με περιδίνηση με 80 μΙ ακετονιτριλίου και 5 μΐ 0,2 Μ HCI. Το εκχύλισμα διαυγάστηκε με φυγοκέντρηση για 5 λεπτά στα 20.000 χ g, και το υπερκείμενο συλλέγεται, αραιώνεται 1:01 με απεσταγμένο νερό, και φυγοκεντρήθηκε για άλλα 5 λεπτά. Τα προκύπτοντα υπερκείμενα αναλύθηκαν. Μια Acquity UPLC με 2,1 Χ 100 mm στήλη ΒΕΗ C18 1.7 μΜ συζευγμένο με έναν ανιχνευτή PDA σε γραμμή με ένα Quattro Premier XE (Waters, Milford, ΜΑ) χρησιμοποιήθηκε με νερό και ακετονιτρίλιο που περιείχε 0.1% μυρμηκικό οξύ ως κινητές φάσεις. Ένα ακετονιτριλίου 25-100%, από 0.2-2.0 λεπτά χρησιμοποιήθηκε, που ακολουθείται από επανα-ισορρόπηση να συνθηκών εκκίνησης για ένα συνολικό χρόνο εκτέλεσης του 4,5 min. Η MS διεξήχθη σε ανάλυση μονάδα με 3 kV τριχοειδή, 120 ° C και 350 ° πηγή και αποδιαλύτωσης θερμοκρασίες C, 50 και 1000 L /hr κώνου και αποδιαλύτωσης N

2 ροές αερίου και Ar αέριο σύγκρουσης που να 5.0e

-3 mbar. Μ /ζ 287 & gt? 89 και 287 & gt? 153 χρησιμοποιήθηκαν για την ανίχνευση luteolin IS, και m /z 271 & gt? 91 και 271 & gt? 153 χρησιμοποιήθηκαν για γενιστεΐνη με τάση κώνου και σύγκρουσης ενέργειες βελτιστοποιημένη για το καθένα. δεδομένα OD από 210-600 nm συλλέχθηκε με τον ανιχνευτή PDA και OD260 χρησιμοποιήθηκε επίσης ως τελικό σημείο. Μια καμπύλη βαθμονόμησης γραμμικές 5 σημείο από το 1-800 ng /ml με 218 ng /ml είναι χρησιμοποιήθηκε για ποσοτικοποίηση (R2 & gt? 0,99? Προκατάληψη & lt? 10%). Η γενιστεΐνη-γλυκουρονική θεωρήθηκε ότι είναι η πιο κοινή μορφή του συζυγούς, και τα επίπεδα υπολογίστηκαν από τα δεδομένα OD260 με την υπόθεση ότι ο συντελεστής απόσβεσης είναι παρόμοια με εκείνη γενιστεΐνης.

4. Ιστοπαθολογία και ανοσοϊστοχημεία

Συγκομιδής μοσχεύματα όγκου κόπηκαν στο μισό στο παχύτερο σημείο του όγκου. Το ένα μισό σταθεροποιήθηκε σε 10% ουδέτερη ρυθμισμένη φορμαλίνη για ιστολογικές /ανοσοϊστολογικές (IHC) αναλύσεις. Το άλλο μισό ήταν snap-κατεψυγμένα για ανάλυση πρωτεΐνης. Το σταθερό ιστός υποβλήθηκε σε επεξεργασία με παραφίνη και ενσωματωμένο με την επιφάνεια της τομής μέσης γραμμής προς τα κάτω στο μπλοκ παραφίνης, έτσι ώστε τα τμήματα ξεκίνησε στην αρχική επιφάνεια κοπής μεσαία γραμμή. Παρασκευή ιστούς παραφίνης και αναλύσεις IHC διεξήχθησαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [34]. Τα πρωτογενή αντισώματα που χρησιμοποιήθηκαν στη μελέτη αυτή είναι Ki67 (Dako, Carpinteria, CA), κασπάσης-3 (Cell Signaling Technology, Danvers, ΜΑ), ΕΡα (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA), και ΕΚβ (Biogenex Laboratories, San Ramon , CA). Όλα τα τμήματα του ιστού βάφτηκαν αντίθετα με 5% (w /v) Harris αιματοξυλίνη και καλυπτρίδα με Permount (Fisher /Thermo Scientific, Waltham, ΜΑ).

5. Τοπικές εισβολή και μετάσταση αναλύσεις

Για να εξεταστεί μεταστατικό επίπτωση, του πνεύμονα, του ήπατος, της νεφρικής, παγκρέατος, οσφυϊκών και των θωρακικών λεμφαδένες συλλέχθηκαν από το κάθε ποντίκι. Κάθε ένα από αυτά τα όργανα ήταν σταθερό και σε επεξεργασία όπως παραπάνω για την ανάλυση IHC. Οι τομές χρωματίστηκαν με ένα αντι-ανθρώπινο αντίσωμα ειδικό μιτοχόνδρια (Millipore, Billerica, ΜΑ) και υποβλήθηκαν σε διαλογή για την παρουσία των μεταστατικών κυττάρων. Εικόνες της IHC-τομές από κάθε όργανο συνελήφθησαν χρησιμοποιώντας ένα CCD AxioCam ΥΕ τοποθετημένα σε ένα Αχίορίαπ 2 μικροσκόπιο και Axiovision 3.1 του λογισμικού (Carl Zeiss, Toronto, ON), με τελικό μεγεθύνσεις × 400. Ποσοστά των ζώων που περιέχουν ανθρώπινη μεταστατικά κύτταρα είτε οσφυϊκή ή θωρακική λεμφαδένες υπολογίστηκαν. (Σε νεφρική και του παγκρέατος λεμφαδένες, όλα τα ζώα σε τρεις ομάδες παρουσίασαν αποδείξεις ανθρώπινων καρκινικών κυττάρων ανεξάρτητα από τη θεραπεία έτσι παραλείπεται κατά τον υπολογισμό). Για πνεύμονα και το ήπαρ, ο αριθμός των θετικώς χρωματισμένων κυττάρων μετρήθηκε εντός τυχαία επιλεγμένη μικροσκοπικά πεδία ανά δείγμα .

6. κυτταρικό πολλαπλασιασμό και την απόπτωση αναλύει

δείκτης πολλαπλασιασμού (ΡΙ) εκτιμήθηκε από την IHC χρησιμοποιώντας ένα ανθρώπινο ειδικό δείκτη πολλαπλασιασμού, Κί67. Εικόνες της IHC-τομές από κάθε μόσχευμα συνελήφθησαν ως ανωτέρω. Το μεσαίο τμήμα του μοσχεύματος με τις πιο πυκνοκατοικημένες ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα επιλέχθηκε για την απεικόνιση όλων των όγκων. Οι αριθμοί των Κί67 θετικών και αρνητικών ανθρώπινα κύτταρα μετρήθηκαν μέσα σε ολόκληρο το μικροσκοπικό πεδίο για κάθε μόσχευμα όλων των ζώων και ο μέσος όρος. Με βάση το μέσο όρο αριθμού των κυττάρων για κάθε ομάδα θεραπείας, ΡΙ υπολογίστηκε ως εξής: α. PI (%) = (καταμέτρηση θετική κυτταρική Κί67 /αριθμός του συνόλου των κυττάρων του ανθρώπου) × 100

Ομοίως, αποπτωτικό δείκτη (ΑΙ) ήταν υπολογίζεται από διασπαστεί-κασπάσης-3 χρωματισμένο τμήματα IHC μοσχευμάτων όγκου. Ο αριθμός των αποπτωτικών κυττάρων ανά 10.000 ανθρώπινα κύτταρα μετρήθηκε για κάθε μόσχευμα όγκου και ο μέσος όρος. AI υπολογίστηκε ως ανωτέρω.

7. Ανάλυση κηλίδος Western

Τα υπόλοιπα μισά της εσοδείας ιστών όγκου καταψύχθηκαν για ανάλυση πρωτεϊνών, από τις οποίες νεφρό ποντικού ιστοί αφαιρέθηκαν χειρουργικά χρησιμοποιώντας ένα ανατομικό μικροσκόπιο πριν από την κατάψυξη. Αυτές οι κατεψυγμένοι ιστοί ομογενοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα γουδί και γουδοχέρι σε ΝΡ-40 ρυθμιστικό διάλυμα λύσης (150 mM χλωριούχο νάτριο, 1,0% ΝΡ40, και 50 mM Tris-HCl ρΗ 8,0) επί πάγου, φυγοκεντρήθηκαν στις 12.000 rpm για 20 λεπτά στους 4 βαθμούς Κελσίου σε μικροφυγόκεντρο και το υπερκείμενο συλλέχθηκε. Η δικιγχονινικού οξέος (BCA) δοκιμασία (Thermo Scientific, Waltham, ΜΑ) πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με τις οδηγίες της εταιρίας για τη μέτρηση της συγκέντρωσης πρωτεΐνης για κάθε δείγμα όγκου, και η απορρόφηση μετρήθηκε στα 562 nm. Για ηλεκτροφόρηση πηκτής, τα δείγματα πρωτεΐνης βράσθηκαν επί 5 λεπτά, και 20 μg πρωτεΐνης διαχωρίστηκαν σε SDS-PAGE (ηλεκτροφόρηση πηκτής πολυακρυλαμιδίου) πηκτή και ηλεκτρομεταφορά σε μεμβράνη PVDF. Η μεμβράνη μπλοκαρίστηκε με 5% αλβουμίνη βόειου ορού (Sigma-Aldrich, St. Louis, ΜΟ) ή 5% μη λιπαρά γάλα σε αλατόνερο ρυθμισμένο με Tris (ρΗ 7.4) που περιέχει 0.1% Tween 20 (TBST) και επωάζονται με πρωτεύοντα αντισώματα σε άλφα ακτίνη, φωσφο (p) -τυροσίνη (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA), το σύνολο των EGFR, ρ-EGFR (tyr1068), ρ-Src (tyr416) ​​και τη συνολική Src (Cell Signaling Technology, Danvers, ΜΑ). Μετά την αρχική επώαση αντισώματος, οι μεμβράνες πλύθηκαν με TBST και ανιχνεύθηκε με κατάλληλα συζευγμένο με HRP δευτερογενούς αντι-ποντικού (Pierce, Rockford, IL) ή αντι-κουνελιού (Fisher /Thermo Scientific, Waltham, ΜΑ) αντισώματα. Για την ανίχνευση πρωτεϊνών που παρουσιάζουν ενδιαφέρον, ένα ενισχυμένο χημιφωταύγειας κιτ Western Blotting χρησιμοποιήθηκε (Pierce, Rockford, IL).

8. Στατιστική Ανάλυση

Ο μεταστατικός Συχνότητα, η σύγκριση των επιπέδων στον ορό, PI και AI αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας δύο-ουρά unpaired Student του

t-test

. Οι διαφορές θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές εάν

σ

τιμές ήταν μικρότερες από 0.05.

Αποτελέσματα

επίπεδο στον ορό της genistein

Για να εξασφαλιστεί ότι genistein επεξεργασμένο ομάδες έλαβαν μια φαρμακολογική δόση της ένωσης, η συγκέντρωση της γενιστεΐνης στον ορό μετρήθηκε με τη χρήση υψηλής απόδοσης υγρή χρω- ματογραφία φασματομετρία μάζας (HPLC-MS). Μας ανάλυση HPLC-MS έδειξε ότι η ομάδα ελέγχου χωρίς θεραπεία είχαν πολύ χαμηλό ίχνος της γενιστεΐνης ορού (0.002 μg /ml), των οποίων η πιο πιθανή πηγή είναι chow τους (PicoLab Rodent Diet 20, Delta, BC). Σε σύγκριση, χαμηλή δόση και υψηλής δόσης θεραπεία ζώα είχαν 1,30 μg /ml έως 6,63 μg /ml της ελεύθερης genistein, αντίστοιχα. Σε ποντικούς μας αγωγή, προσλαμβάνεται συζυγή γλυκουρονίδης genistein που σχηματίζεται, και μόνο ένα μικρό τμήμα της γενιστεΐνης παρέμεινε ως ελεύθερο αγλυκόνες στο αίμα. Τα επίπεδα του ελεύθερου και συζευγμένου genistein ήταν σημαντικά υψηλότερη σε χαμηλές (

σ

& lt? 0,04) και τα ποντίκια υψηλής δόσης θεραπεία (

σ

& lt? 0,0006) σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου (Σχήμα 1).

Για τη θεραπεία, έξι ζώα στην ομάδα χαμηλής δόσης δόθηκαν genistein διαλύθηκαν σε φυστικέλαιο με καθετηριασμό σε 2 mg /ημέρα (80 mg /kg βάρους σώματος /ημέρα). Έξι ποντικοί στην ομάδα υψηλής δόσης δόθηκαν 10 mg /ημέρα (400 mg /kg /ημέρα) της genistein. Πέντε ποντικοί ελέγχου (ένα πέθανε πριν από το τέλος της θεραπείας) έλαβαν 0,1 ml φορέα μόνο. Αίμα συλλέχθηκε στο τέλος της θεραπείας 3 εβδομάδων.

Στήλες

:. Μέση συγκέντρωση της genistein ± SD ορού

Η

Η αύξηση του όγκου των ασθενών που προέρχονται προστάτη ξενομόσχευμα μετά genistein θεραπεία

Επιδράσεις της genistein για μετάσταση της προηγμένης του ανθρώπου προστάτη εξετάστηκαν χρησιμοποιώντας τη γραμμή μας ασθενή που προέρχεται προστάτη ξενομόσχευμα όγκου μεταμόσχευση, LTL163a, το οποίο αναπτύχθηκε από ένα δείγμα προστατεκτομή σε προχωρημένο στάδιο και έχουν επιλεγεί για μεταστατική δραστηριότητα. Όγκοι από το 10

ης γενιάς μεταμόσχευση γραμμή όγκου LTL163a κόπηκαν σε ομοιόμορφα κομμάτια μεγέθους (1 × 3 × 3 mm) και καλλιεργούνται υπό κάψουλες των νεφρών (ένα κομμάτι του όγκου /νεφρό, δύο μοσχεύματα όγκου /ποντίκι) δεκαοκτώ αρσενικό NOD SCID ποντίκια συμπληρωμένο με 10 mg σφαιρίδιο υποδόρια τεστοστερόνης. Επτά ημέρες μετά τη μεταμόσχευση, τα ζώα-ξενιστές τοποθετήθηκαν τυχαία σε τρεις ομάδες θεραπείας? χωρίς θεραπεία ελέγχου, χαμηλής δόσης και genistein υψηλής δόσης. Από του στόματος χορήγηση genistein ή λάδι (για την ομάδα ελέγχου) συνεχίστηκε για τρεις εβδομάδες. Κατά τη στιγμή της συγκομιδής, διογκωμένους νεφρούς με καλά αναπτύχθηκαν όγκοι παρατηρήθηκαν για τις τρεις ομάδες. Ο μέσος όγκος των όγκων για τις ομάδες ελέγχου, χαμηλής δόσης και υψηλής δόσης είναι? 650 χιλιοστά

3, 655 χιλιοστά

3 και 670 mm

3, αντίστοιχα. Παρά την αύξηση του όγκου τάσης όγκου για genistein θεραπεία, δεν υπήρχε στατιστικά σημαντική μεταξύ των ομάδων. Εκτός από την ανοδική ανάπτυξη επεκτατική όγκου από την επιφάνεια του νεφρού, όγκων και από τις τρεις ομάδες εισέβαλαν τοπικά στο νεφρό (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα).

γενιστεΐνη προωθεί λεμφαδένα και δευτερεύοντα όργανο μετάστασης

προκειμένου να εκτιμηθεί το μακρινό εξάπλωση των καρκινικών κυττάρων, συλλέξαμε του παγκρέατος, του θώρακα, οσφυϊκή και νεφρικών λεμφογαγγλίων, καθώς και τα εσωτερικά όργανα. Όλες οι ομάδες έδειξαν απόδειξη ανθρώπινων καρκινικών κυττάρων στη νεφρική και παγκρεατικών γαγγλίων ανεξάρτητα από τη θεραπεία (τα δεδομένα δεν απεικονίζονται). Ωστόσο, στην οσφυϊκή και θωρακική κόμβους, η ομάδα ελέγχου δεν είχε καμία ή χαμηλή συχνότητα μετάστασης (0% στην οσφυϊκή μοίρα και το 17% στο θώρακα). Σε αντίθεση, και οι δύο χαμηλής και υψηλής δόσης θεραπείες genistein έδειξε υψηλότερη μεταστατική επίπτωση σε αυτά τα δύο κόμβους σε σύγκριση με την ομάδα χωρίς θεραπεία ελέγχου (Σχήμα 2α)? (17% για χαμηλή δόση και 50% για υψηλή δόση της οσφυϊκής κόμβο. 50% για χαμηλή δόση και 83% για υψηλή δόση σε θωρακική κόμβο). Ομοίως, οι αριθμοί των μεταστατικών καρκινικών κυττάρων σε δευτερογενή όργανα όπως πνεύμονα και το ήπαρ ήταν σημαντικά υψηλότερα σε ομάδες που έλαβαν genistein από τον έλεγχο (Σχήμα 2β). Αν και διάσπαρτα καρκινικά κύτταρα παρατηρήθηκαν σε δευτερογενή όργανα όλων των ποντικών (Σχήμα 2c), μόνο genistein αγωγή ποντικοί έδειξαν συσσωμάτωση των καρκινικών κυττάρων (& gt? 75 κυτταρικών συσσωματωμάτων) σε αυτά τα όργανα για να σχηματίσουν νησιά /μικρομεταστάσεων όπως φαίνεται στο Σχήμα 2d. Έτσι, με διάφορα κριτήρια, γενιστεΐνη είχε μια δοσοεξαρτώμενη μετάσταση αποτέλεσμα προαγωγής επί LN και δευτερεύοντα όργανα στο μοντέλο μας.

Κατά τη στιγμή της συγκομιδής, του πνεύμονα, του ήπατος και τέσσερα λεμφαδένες συμπεριλαμβανομένης της νεφρικής, του παγκρέατος, της οσφυϊκής και θώρακα κόμβοι συλλέχθηκαν από όλα τα ζώα. Κάθε ένα από αυτά τα όργανα ήταν σταθερό, επεξεργασία, χρωματίστηκαν με ένα αντι-ανθρώπινο αντίσωμα ειδικό μιτοχόνδρια και σε διαλογή για την παρουσία της ανθρώπινης μεταστατικών κυττάρων. Εικόνες της IHC-τομές από κάθε όργανο συνελήφθησαν χρησιμοποιώντας ένα CCD AxioCam ΥΕ τοποθετημένα σε ένα Αχίορίαπ 2 μικροσκόπιο με τελικό μεγεθύνσεις × 400. α) υπολογίστηκαν ποσοστά των ζώων που περιέχουν ανθρώπινη μεταστατικά κύτταρα είτε οσφυϊκή ή θωρακική λεμφαδένες. Σε νεφρική και του παγκρέατος λεμφαδένες, όλα τα ζώα σε όλες τις τρεις ομάδες έδειξαν απόδειξη των ανθρώπινων καρκινικών κυττάρων ανεξάρτητα από τη θεραπεία (τα δεδομένα δεν φαίνονται) έτσι παραλείπεται κατά τον υπολογισμό. Ωστόσο, οι ομάδες που έλαβαν genistein έδειξε αυξημένη συχνότητα εμφάνισης μετάστασης σε οσφυϊκών και των θωρακικών κόμβους σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου χωρίς θεραπεία. Η μεταστατική εξάπλωση σε οσφυϊκών και των θωρακικών λεμφαδένες παρουσιάζονται ως μέση ποσοστιαία σε ποντίκια που φέρουν μοσχεύματα όγκου LTL163A από τρεις ομάδες (χωρίς θεραπεία ελέγχου, χαμηλής δόσης και genistein υψηλής δόσης).

Μαύρη στήλη: μεταστατικό συχνότητα της θωρακικής λεμφαδένων. Λευκή στήλη: μεταστατικό συχνότητα της οσφυϊκής λεμφαδένων

. β) Για πνεύμονα και το ήπαρ, ο αριθμός των θετικώς χρωματισμένων κυττάρων μετρήθηκε εντός τυχαία επιλεγμένη μικροσκοπικά πεδία.

Στήλη

: μέσος αριθμός της εισβολής καρκινικών κυττάρων ανά μικροσκοπικό πεδίο παρατηρήθηκε σε πνεύμονα και ήπαρ των τριών ομάδων ± SD. Τα αποτελέσματα αναλύθηκαν στατιστικά με δοκιμασία t κατά το διάστημα εμπιστοσύνης 95%. γ) Ki67-IHC χρώση των αντιπροσωπευτικών τμημάτων των δευτερευόντων οργάνων (ήπαρ και τους πνεύμονες) από μη επεξεργασμένο έλεγχο και ποντίκια genistein-θεραπεία. Κί67 αντίσωμα που χρησιμοποιήθηκε σε αυτή τη μελέτη είναι η ανθρώπινη ειδική. Όλες οι μεγεθύνσεις είναι × 400. δ) Ki67-IHC χρώση του ήπατος από genistein-θεραπεία ζώο δείχνει συνάθροιση της εισβολής καρκινικών κυττάρων. Κόκκινος κύκλος υποδεικνύει μια εστίαση μικρό νησί /μικρομεταστάσεων που περιέχουν & gt? 75 ανθρώπινων καρκινικών κυττάρων, η οποία παρατηρήθηκε μόνο σε ποντίκια genistein-θεραπεία. Η μεγέθυνση είναι 400 ×.

Η

γενιστεΐνη επηρεάζει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων και την απόπτωση

Επειδή τα δεδομένα μας έδειξαν ότι η genistein προωθείται εξάπλωση των ανθρώπινων καρκινικών κυττάρων στους ξενιστές ποντίκι, ερευνήσαμε τα αποτελέσματά της επί των κυτταρικών καρκινικών πολλαπλασιασμό και την απόπτωση. Η ανοσοϊστοχημεία χρησιμοποιώντας ένα ανθρώπινο αντίσωμα ειδικό Ki67 διεξήχθη για να μετρηθεί ο ρυθμός του πολλαπλασιασμού των κυττάρων του όγκου. Το αποτέλεσμα έδειξε ισχυρή θετική ένταση εντός μοσχευμάτων όγκου όλων των ομάδων, καθώς και στην τοπική εισέβαλαν περιοχή του νεφρού ποντικού (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). δείκτης πολλαπλασιασμού (ΡΙ) μετρήθηκε από το μεσαίο τμήμα της περιοχής του μοσχεύματος όγκου. Η σύγκριση μεταξύ των δύο ομάδων έδειξε ότι και οι δύο χαμηλής και υψηλής δόσης ομάδες είχαν υψηλότερα αναστολείς πρωτεάσης (77,3% και 86,1%, αντίστοιχα) από ό, τι χωρίς θεραπεία ελέγχου (70,0%), αλλά μόνο στην ομάδα υψηλής δόσης ήταν σημαντικά διαφορετική από την ομάδα ελέγχου χωρίς θεραπεία (

p = 0,004

), όπως φαίνεται στο Σχήμα 3.

δείκτης πολλαπλασιασμού (ΡΙ) εκτιμήθηκε από την IHC χρησιμοποιώντας ένα ανθρώπινο ειδικό δείκτη πολλαπλασιασμού, Κί67. Οι αριθμοί των Κί67 θετικών και αρνητικών ανθρώπινα κύτταρα μετρήθηκαν εντός τυχαία επιλεγμένα μικροσκοπικό πεδίο για κάθε μόσχευμα όγκου όλων των ζώων και ο μέσος όρος. Πολλαπλασιασμό Δείκτης (%):. (Μέτρηση θετική κυτταρική Ki67 συνολικός αριθμός /ανθρώπινου κυττάρου) × 100

Η

Επίσης, διερευνήθηκε κατά πόσον η genistein επηρεάζονται τα ποσοστά του προγραμματισμένου κυτταρικού θανάτου, την απόπτωση. Ανοσοϊστοχημική ανάλυση με ένα αντίσωμα αντι-κασπάσης 3 αποκάλυψε ότι οι όγκοι στα ποντίκια που έλαβαν genistein είχαν λιγότερες κασπάσης-3 θετικών κυττάρων από εκείνες στην ομάδα ελέγχου (Σχήμα 4). Η ομάδα ελέγχου είχε το υψηλότερο αποπτωτικό δείκτη (ΑΙ) 0,18%, ενώ τόσο χαμηλής και υψηλής δόσης ομάδες είχαν μια AI από μόνο 0,07% (

p = 0,05

: Σχήμα 4α), υποδεικνύοντας ένα σημαντικά μειωμένο ρυθμός κυτταρικού θανάτου σε όγκους genistein φάρμακο.

αποπτωτικό δείκτη (ΑΙ) υπολογίστηκε από την κασπάση-3 τομές IHC μοσχευμάτων όγκου από όλους τους ποντικούς. Ο αριθμός των αποπτωτικών κυττάρων ανά 10.000 ανθρώπινα κύτταρα μετρήθηκε για κάθε μόσχευμα όγκου και ο μέσος όρος. α) αποπτωτικό δείκτη (%) = (κασπάση-3 καταμέτρηση θετικού κυττάρου /αριθμός του συνόλου των κυττάρων του ανθρώπου) × 100. β) Κασπάση-3 ανοσοϊστολογική χρώση των μοσχευμάτων όγκου από μη επεξεργασμένων και επεξεργασμένων ζώων. Κόκκινα βέλη δείχνουν θετικά /αποπτωτικών κυττάρων. Όλες οι μεγεθύνσεις είναι × 400. Ένθετο είναι μια μεγεθυμένη εικόνα των θετικών κυττάρων.

Η

γενιστεΐνη αυξάνει φωσφορυλίωση των κινασών τυροσίνης πρωτεΐνης

Προηγούμενη

in vitro

μελέτες έχουν δείξει ότι η genistein διαμορφώνει τυροσίνης μονοπατιών σηματοδότησης με μεταβάλλοντας κινάσης δραστηριότητες [25], [26], [27]. Για να προσδιοριστεί εάν ενισχυμένη μετάσταση παρατηρήθηκε σε ποντικούς που έλαβαν genistein συνδέθηκε με αλλοιωθεί μοτίβα φωσφορυλίωση, ανάλυση στυπώματος Western εκτελέστηκε σε πρωτεΐνη λύματα που προέρχονται από όγκους χρησιμοποιώντας ένα αντίσωμα αντι-φωσφοτυροσίνης. Η ανοσοκηλίδωση έδειξε ότι οι όγκοι genistein ασθενείς είχαν υψηλότερα επίπεδα φωσφορυλίωσης σε μια ζώνη σχετική 60 KDa πρωτεΐνη με την ομάδα ελέγχου χωρίς θεραπεία. Είναι ενδιαφέρον ότι, σε μεγαλύτερες ανοιγμάτων του φιλμ ακτίνων Χ, παρατηρήθηκαν πιο έντονο μοτίβα μπάντα για υψηλότερες πρωτεΐνες μοριακού βάρους στην ομάδα genistein σε σύγκριση με το μάρτυρα (Εικόνα S1). Ιδιαίτερο ενδιαφέρον ήταν μια μπάντα σε 170 kDa. Μεγαλύτερη έκθεση αποκάλυψε ζώνες στην ομάδα genistein αγωγή ενώ δεν φωσφορυλίωσης παρατηρήθηκε στην ομάδα ελέγχου σε αυτή τη συγκεκριμένη πρωτεΐνη μεγέθους.

Για να διερευνηθεί περαιτέρω, εκτελέσαμε ανοσοστύπωση με αντισώματα που στοχεύουν ειδικές κινάσες τυροσίνης. Οι πιθανοί υποψήφιοι για την 60 KDa και 170 kDa πρωτεϊνών (βέλη στο Σχήμα 5 και το Σχήμα S1) είναι Src και το δυναμικό ανάντη μόριο του υποδοχέα του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGFR). Όπως φαίνεται στο Σχήμα 6α, γενιστεΐνη αύξησε τον συνολικό έκφραση της πρωτεΐνης EGFR ελαφρώς σε σύγκριση με τον έλεγχο. Ενώ σχεδόν όλα τα μη επεξεργασμένα όγκους ελέγχου (εκτός από έναν) έδειξαν πολύ μικρή έως καμία φωσφορυλίωση αυτής της πρωτεΐνης, οι περισσότεροι όγκοι genistein αγωγή έδειξαν υψηλή ζώνη έντασης (Σχήμα 6α). Ομοίως, Src, ένας στόχος του EGFR, έδειξε ελαφρά αυξητική ρύθμιση του συνολικού έκφρασης πρωτεΐνης σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου. Και πάλι, δεν φωσφορυλίωση της Src παρατηρήθηκε στην ομάδα ελέγχου (πλην ενός όγκου σε ένα μεγαλύτερο έκθεση), ενώ παρατηρήθηκε ένα σημαντικά υψηλότερο επίπεδο φωσφορυλίωσης στα δείγματα όγκων genistein-αγωγή (Σχήμα 6β). Αυτά τα σχέδια ανοσοκηλίδος μπάντα συγκεκριμένες EGFR και Src (Σχήμα 6) επιβεβαιώνουν τις γενικές τάσεις χρώσης ρ-τυροσίνη παρατηρήθηκε νωρίτερα (Σχήμα 5).

Μετά την θεραπεία τριών εβδομάδων genistein, οι όγκοι συλλέχθηκαν, και η πρωτεΐνη εκχυλίστηκε από έξι genistein-θεραπεία και χωρίς θεραπεία πέντε ποντικούς ελέγχου (ένα από τα ποντίκια ελέγχου πέθανε κατά τη διάρκεια της θεραπείας). Η ανάλυση στυπώματος Western εκτελέστηκε σε όγκο προερχόμενο πρωτεΐνη προϊόντα λύσης για φωσφοτυροσίνη όπως περιγράφεται στο Υλικά και Μέθοδοι. Η ίδια κηλίδα βάφτηκε με ένα αντίσωμα αντι-ακτίνης άλφα για την αξιολόγηση πρωτεΐνη φόρτωσης. Λωρίδες αντιπροσωπεύουν πρωτεΐνες από μεμονωμένους όγκους.

Η

α) Γενιστεΐνη αυξάνει φωσφορυλίωση του EGFR σε τυροσίνη 1068 υπόλειμμα. Παρακάτω είναι η ποσοτικοποίηση της έντασης ζώνης για φωσφορυλιωμένη EGFR από λύματα πρωτεΐνη 5 ανεπεξέργαστων ελέγχου και 6 όγκων genistein-θεραπεία.

Στήλες

: μέση αναλογία φωσφορυλιωμένη EGFR /συνολική ένταση πρωτεϊνική ζώνη EGFR ± SD. β) Γενιστεΐνη επηρεάζει τη φωσφορυλίωση της Src στην τυροσίνη 416 υπόλειμμα. Ενεργοποιείται η έκφραση της Src είναι σημαντικά υψηλότερη σε όγκους genistein που έλαβαν από εκείνο στο μάρτυρα. Λωρίδες αντιπροσωπεύουν πρωτεΐνες από μεμονωμένους όγκους.

Η

Συζήτηση

Ο καρκίνος του προστάτη είναι η δεύτερη κύρια αιτία του καρκίνου που σχετίζονται με θανάτους στη Βόρεια Αμερική. Από την εισαγωγή των ανδρογόνων θεραπείας κατάλυσης από Huggins και Hodges στη δεκαετία του 1940, χειραγώγηση της ορμόνης έχει χρησιμοποιηθεί ως η κύρια θεραπεία για προχωρημένη προστάτη [36]. Παρά την αρχική υποχώρηση του όγκου μετά από ορμονική θεραπεία, μερικά υπόλοιπα κύτταρα του προστάτη μπορεί να επιβιώσει αυτή τη θεραπεία, αποκτούν ανδρογόνων ανεξαρτησία και να γίνει ορμονοάντοχο [37]. Μόλις η νόσος εξελίσσεται προς το ορμονοάντοχου κατάσταση, δεν υπάρχει αποτελεσματική θεραπεία είναι διαθέσιμα σήμερα [38]. Ως εκ τούτου, ένα σημαντικό ποσό της προσπάθειας που έχει επενδυθεί σε στρατηγικές για την αντιμετώπιση του προχωρημένου της ΣΕΣΣ. Προηγούμενη

in vitro

μελέτες έχουν δείξει ότι η γενιστεΐνη έχει χημειοθεραπευτικό δυναμικό για ορμονοεξαρτώμενου καρκινικές κυτταρικές σειρές. Ωστόσο, genistein του

in vivo

ενέργειες έχουν πρόσφατα αμφισβητηθεί από αντιφατικές εκθέσεις [28], [29], [30], [39], [40], [41], [42]. Για παράδειγμα, μια μελέτη ανέφερε ότι η γενιστεΐνη ανέστειλε την ανάπτυξη του όγκου των οστών PC3 σε ποντίκια SCID [43], και ένα άλλο έδειξε ότι η genistein μειωμένη μετάσταση πνεύμονα σε ανδρογόνο PC3-M εμφυτευθεί ποντικούς υποδοχέα αρνητική, η οποία τροφοδοτήθηκαν genistein εμπλουτισμένο chow [30]. Σε αντίθεση, Raffoul

et al.

Διαπίστωσε ότι genistein κατάποση οδηγούν σε αύξηση λεμφαδένα μετάστασης σε PC3 τους εμφυτεύτηκαν ζωικό μοντέλο [29]. Το 2009, TOUNY και Banerjee αποδειχθεί διφασική επιπτώσεις της genistein χρησιμοποιώντας το ποντίκι TRAMP (διαγονιδιακά προστάτη αδενοκαρκινώματος ποντικιού) μοντέλο. Genistein ανέστειλε ελάχιστα διαφοροποιημένο PCA σε αυτά τα ποντίκια όταν ενσωματώνονται στη διατροφή τους πριν από την έναρξη του όγκου (δηλαδή, όταν τα ποντίκια ταΐστηκαν genistein-διατροφή μεταξύ 4~12 εβδομάδων). Ωστόσο, εάν η genistein-δίαιτα δόθηκε στους ηλικιωμένους ποντικούς TRAMP στις ηλικίες των 12~20 εβδομάδα, όταν προστατική ενδοεπιθηλιακή νεοπλασία (ΡΙΝ) ήταν ήδη παρούσα, προώθησε PCa εξέλιξης και επάγεται λεμφαδένα μετάσταση [28]. Από τα εν λόγω δεδομένα, μπορεί να συναχθεί ότι η ζωή χρόνο μέτρια κατανάλωση (ή πρώιμη έκθεση σε) γενιστεΐνης είναι σημαντική στην πρόληψη της νόσου, αλλά ότι η genistein μπορεί να μην εμφανίζουν χημειοθεραπευτικά επιδράσεις

in vivo

άπαξ PCa έχει ήδη έχουν συσταθεί ή προχωρήσει σε προχωρημένο στάδιο.

για να επιλύσετε τη διαμάχη των επιπτώσεων genistein του

in vivo

, έχουμε αναπτύξει ένα κλινικά σχετικό μοντέλο ξενομοσχεύματος που έχει δημιουργηθεί από έναν ασθενή δείγμα προστατεκτομή. Το προκύπτον γραμμή όγκου του προστάτη που λαμβάνονται από ασθενή που χρησιμοποιείται στη μελέτη μας, LTL163a, έχει περάστηκαν μόνο το 10 γενιές σε ανοσο-ανεπαρκή ποντίκια και έχει διατηρήσει τα αρχικά ιστοπαθολογικές και γονοτυπικής χαρακτηριστικά του αρχικού κλινικού δείγματος [33], [34]. Τα στοιχεία μας δείχνουν ότι τόσο χαμηλές και υψηλές θεραπείες genistein δόση προώθηση της μετάστασης σε αυτή την προηγμένη ανθρώπινη γραμμή μεταμόσχευση του προστάτη. Αν και το μέγεθος του όγκου δεν ήταν σημαντικά διαφορετική μεταξύ του ελέγχου και των ομάδων genistein που έλαβαν μετά από 3 εβδομάδες θεραπείας, μεταστατικού επίπτωση ήταν μεγαλύτερη σε genistein αγωγή έναντι μη κατεργασμένους ελέγχους. Η μεταστατική εξέλιξη που παρατηρείται στο μοντέλο μας χαρακτηρίζεται από αυξημένο πολλαπλασιασμό των κυττάρων και μειωμένη απόπτωση.