Αφηρημένο

Η πακλιταξέλη παίζει σημαντικό ρόλο στη θεραπεία του καρκίνου των ωοθηκών? Ωστόσο, η αντίσταση στην πακλιταξέλη συχνά παρατηρείται. Έτσι, τα νέα θεραπεία που μπορεί να ξεπεράσει την αντίσταση πακλιταξέλη θα είναι σημαντικής κλινικής σημασίας. Αξιολογήσαμε αντιπολλαπλασιαστικές επιδράσεις ενός αντιμιτωτικού και αντιαγγειακή παράγοντα BPR0L075 σε καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών paclitaxel ανθεκτικά. BPR0L075 εμφανίζει ισχυρή και ευρέως φάσματος κυτταροτοξικότητα σε χαμηλές συγκεντρώσεις nanomolar (IC

50 = 2-7 ​​ηΜ) έναντι και των δύο γονικών καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών (OVCAR-3, SKOV-3, και A2780-1A9) και paclitaxel ανθεκτικά υποσειρές ( OVCAR-3-TR, SKOV-3-TR, 1Α9-ΡΤΧ10), ανεξάρτητα από τα επίπεδα έκφρασης του πολυφαρμάκου αντίστασης μεταφορέα Ρ-gp και κατηγορίας III β-τουμπουλίνης ή μετάλλαξη του β-τουμπουλίνης. BPR0L075 μπλοκ κύκλου κυττάρου στο G2 φάση /Μ σε πακλιταξέλη ανθεκτικά κύτταρα ενώ ίση συγκέντρωση αγωγή με πακλιταξέλη ήταν αναποτελεσματική. BPR0L075 επάγει κυτταρικό θάνατο με ένα διπλό μηχανισμό στην γονική και πακλιταξέλη ανθεκτικά καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών. Στα γονικών κυττάρων (OVCAR-3 και SKOV-3), BPR0L075 απόπτωση, αποδεικνύεται από πολυ (ADP-ριβόζη) πολυμεράσης (PARP) διάσπαση και σχηματισμός σκάλας ϋΝΑ. BPR0L075 επάγεται κυτταρικό θάνατο σε κύτταρα ωοθηκών καρκίνο paclitaxel ανθεκτικά (OVCAR-3-TR και SKOV-3-TR) οφείλεται κυρίως στην μιτωτική καταστροφή, αποδεικνύεται από το σχηματισμό γιγαντιαίων, πολυπύρηνα κύτταρα και απουσία διάσπασης PARP. Ανάλυση ανοσοκηλίδωσης δείχνει ότι η επεξεργασία BPR0L075 επάγεται πάνω ρύθμιση της κυκλίνης Β1, BubR1, ΜΡΜ-2, και τα επίπεδα πρωτεΐνης survivin και Bcl-XL φωσφορυλίωση σε γονικά κύτταρα? Ωστόσο, σε ανθεκτικά κύτταρα, τα ενδογενή εκφράσεις BubR1 και survivin εξαντλήθηκαν, η θεραπεία BPR0L075 απέτυχε να επάγει MPM-2 έκφρασης και φωσφορυλίωσης του Bcl-XL. BPR0L075 που προκαλείται από τον κυτταρικό θάνατο, τόσο των γονέων και πακλιταξέλη ανθεκτικά καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών προχωρήσει μέσω της κασπάσης-3 ανεξάρτητους μηχανισμούς. Εν κατακλείδι, BPR0L075 εμφανίζει ισχυρή κυτταροτοξική δράση σε ωοθηκών καρκινικά κύτταρα με δυνατότητα να ξεπεράσει την αντίσταση πακλιταξέλη παρακάμπτοντας τους μεταφορείς εκροής και προκαλώντας μιτωτική καταστροφή. BPR0L075 αντιπροσωπεύει μια νέα θεραπευτική μικροσωληνίσκων για να ξεπεράσει την αντίσταση σε πολλά φάρμακα και να προκαλέσει εναλλακτική κυτταρικό θάνατο από μιτωτική καταστροφή στη ωοθηκών καρκινικά κύτταρα που είναι απόπτωση ανθεκτικά

Παράθεση:. Wang Χ, Wu E, Wu J, Wang TL, Hsieh HP , Liu X (2013) ένας αντιμιτωτικός και αντιαγγειακός Agent BPR0L075 Προσπερνάει πολυφαρμακευτική αντίσταση και προκαλεί μιτωτική καταστροφή στην πακλιταξέλη-Resistant ωοθηκών καρκινικά κύτταρα. PLoS ONE 8 (6): e65686. doi: 10.1371 /journal.pone.0065686

Επιμέλεια: Qiang Wang, Cedars-Sinai Medical Center, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 21 Νοεμβρίου, 2012? Αποδεκτές: 24 Απριλίου, 2013? Δημοσιεύθηκε: 6 του Ιούνη 2013

Copyright: © 2013 Wang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο χρηματοδοτήθηκε από το Texas Tech University Κέντρο Επιστημών Υγείας (TTUHSC) Τμήμα Φαρμακευτικής (Χ Liu). Ο χρηματοδότης δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος των ωοθηκών, ο πιο θανατηφόρα κακοήθεια του γυναικολογικό καρκίνο, οδηγεί κάθε χρόνο σε πάνω από 14.000 ΗΠΑ και 114.000 σε όλο τον κόσμο θανάτους. Παρά τις προόδους στη διάγνωση και τη θεραπεία, το ποσοστό πενταετούς επιβίωσης για τους ασθενείς σταδίου IV είναι περίπου 18% [1], [2]. Η ανικανότητα να ξεπεράσει την αντίσταση του φαρμάκου και αναστέλλουν τη μετάσταση αποτελεί την κύρια αιτία της αποτυχίας [3] θεραπείας. Καινοτόμων και αποτελεσματικών νέων θεραπευτικών που υπερνικούν αντοχή φαρμάκου είναι κρίσιμα για τη βελτίωση της επιβίωσης και την ποιότητα ζωής των ασθενών με την ασθένεια αυτή.

μικροσωληνίσκων σταθεροποιητικούς παράγοντες όπως οι ταξάνες, τις εποθιλόνες, και παράγοντες μικροσωληνίσκων αποσταθεροποίησης όπως

βίνκα

αλκαλοειδή είναι μεταξύ των πλέον αποτελεσματικών χημειοθεραπευτικά που χρησιμοποιούνται στην κλινική [4]. Ωστόσο, ένα από τα μεγαλύτερα εμπόδια εξελίχθηκε στην κλινική είναι πολυφαρμακευτική αντίσταση (MDR). Ειδικά για την πακλιταξέλη, παρά τις σημαντικές αρχική απόκριση για προχωρημένο καρκίνο των ωοθηκών χρησιμοποιώντας πακλιταξέλη και συνδυαστική θεραπεία που βασίζεται σισπλατίνη, η συντριπτική πλειοψηφία των ασθενών υποτροπιάζουν και την ανάπτυξη της ανθεκτικότητας στα φάρμακα [5], [6]. αντίσταση πακλιταξέλη είναι πολυπαραγοντική, συμπεριλαμβανομένων πάνω ρύθμιση της μεμβράνης φαρμάκου μεταφορέα εκροής Ρ-γλυκοπρωτεΐνης (P-gp) [7], [8], μεταλλάξεις στο γονίδιο β-τουβουλίνης [9], [10], [11], [12 ], οι μεταβολές στην έκφραση του β-τουμπουλίνης ισοτύπων [13], [14], ανώμαλα μονοπάτια μεταγωγής σήματος [15], [16], και οι αλλαγές στα αποπτωτικά ρυθμιστικές πρωτεΐνες όπως Bcl-2 [17], [18] και αναστολέας της πρωτεΐνης survivin απόπτωσης [19]. Η ταυτοποίηση νέων αντιμιτωτικό παράγοντα που μπορεί να ξεπεράσει την αντίσταση ταξάνης, εμφανίζουν υποφερτή δραστικότητα σε ταξάνη πυρίμαχων όγκων θα μπορούσαν δυνητικά να κλινικά οφέλη για τους ασθενείς με προχωρημένο καρκίνο των ωοθηκών.

BPR0L075 [6-μεθοξυ-3- (3 ‘, 4 ‘, 5’-τριμεθοξυ-βενζοϋλο) -1 η-ινδόλη] είναι μία νέα ένωση συνθετικό ινδόλη που αναστέλλει τον πολυμερισμό της τουμπουλίνης μέσω σύνδεσης με την κολχικίνη-θέση δέσμευσης της τουμπουλίνης [20]. BPR0L075 σχετίζεται δομικά με την κλασική κομπρεταστατίνη παράγοντα σύνδεσης τουμπουλίνης και αγγειακές διαταραχές. BPR0L075 έχει δείξει αντιμιτωτική και αντιαγγειογόνο δράση

in vitro

και

in vivo

[20], [21]. Έχουμε αναφερθεί ότι BPR0L075 εμφανίζεται δραστικότητα αγγειακής διαταραχής επάγοντας ταχεία, αν και προσωρινή όγκου αγγειακό κλείσιμο και οδηγούν σε μείωση της αιμάτωσης όγκου σε ορθοτοπική ξενομοσχευμάτων ανθρώπινου καρκίνου του μαστού [22]. BPR0L075 συλλαμβάνει ανθρώπινου τραχηλικού καρκινώματος ΚΒ κυττάρων σε G2 /M σημείο ελέγχου μιτωτικού, και επάγει την απόπτωση των κυττάρων (IC

50 = 3,6 ηΜ) με διατάραξης δυναμικό μιτοχονδριακής μεμβράνης και την ενεργοποίηση της κασπάσης-3 καταρράκτη [20]. BPR0L075 διαθέτει καλή επιλεκτικότητα μεταξύ φυσιολογικών και καρκινικών κυττάρων, με IC

50 τιμή σε φυσιολογικά κύτταρα ινοβλαστών Detroit 551 μεγαλύτερη από 1 μΜ [20]. BPR0L075 παρουσιάζει δραστικότητα κατά των όγκων ενιαίου παράγοντα κατά της ανάπτυξης των ξενομοσχευμάτων ανθρώπινου γαστρικού και του τραχήλου της μήτρας καρκίνωμα [20]. Επίσης ενισχύει συνεργικά αντικαρκινική δραστικότητα έναντι του ανθρώπινου πνεύμονα, του παχέος εντέρου, και ξενομοσχεύματα όγκων του τραχήλου της μήτρας, όταν συνδυάζονται με σισπλατίνη [21].

Στην παρούσα μελέτη, παρατηρήσαμε ότι BPR0L075 ήταν ιδιαίτερα ενεργός σε καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών paclitaxel ανθεκτικά και γονικών κυττάρων τους με IC

50 τιμές σε μονοψήφια χαμηλές συγκεντρώσεις nanomolar. BPR0L075 επαγόμενη απόπτωση σε γονικών καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών. Αντίθετα, αυτό που προκαλείται από μιτωτική καταστροφή στα καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών paclitaxel ανθεκτικά αποδεικνύεται από το σχηματισμό μεγάλων, πολυπύρηνων πολυπλοειδών κυττάρων. BPR0L075 αντιπροσωπεύει μια νέα και πολλά υποσχόμενη θεραπευτική μικροσωληνίσκων να ξεπεράσει την αντίσταση ταξάνης και ενεργοποιούν εναλλακτική κυτταρικό θάνατο από μιτωτική καταστροφή σε κύτταρα τα οποία είναι ανθεκτικά απόπτωση.

Αποτελέσματα

BPR0L075 Εμφανίζει ισχυρή κυτταροτοξικότητα σε Paclitaxel ανθεκτικά Ανθρώπου Καρκίνωμα ωοθηκών κύτταρα

Ελέγξαμε την κυτταροτοξικότητα του BPR0L075 σε ανθρώπινες κυτταρικές γραμμές καρκίνου των ωοθηκών SKOV-3, OVCAR-3, και A2780-1A9 καθώς και τα πακλιταξέλη ανθεκτικά υποσειρές SKOV-3-TR, OVCAR-3 -TR, και 1Α9-ΡΤΧ10, τα οποία επελέγησαν υπό συνεχή έκθεση του 0.25 μΜ paclitaxel (SKOV-3-TR), 0.5 μΜ πακλιταξέλη (OVCAR-3-TR), και 15 ng /mL πακλιταξέλης και 5 mg /mL verapamil ( 1Α9-ΡΤΧ10), αντίστοιχα. Το Σχήμα 1Α δείχνει ότι, όπως και η πακλιταξέλη, BPR0L075 εμφάνισε συγκρίσιμη αντινεοπλασματική δράση στη θανάτωση γονικών καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών σε χαμηλές συγκεντρώσεις nanomolar. Ωστόσο, BPR0L075 ήταν πιο αποτελεσματικό από το paclitaxel έναντι καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών paclitaxel ανθεκτικά, σχεδόν διατηρώντας εντελώς κυτταροτοξική δραστικότητα της κατά των ανθεκτικών αυτών υποσειρές, όπου η πακλιταξέλη ήταν ουσιαστικά αναποτελεσματική. Σχήμα 1Β συνοψίζει την IC

50 τιμές του BPR0L075, πακλιταξέλη, και δοξορουβικίνη ενάντια στην ανάπτυξη αυτών των ανθρώπινων καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών και ανθεκτικά υποσειρές τους μετά από 4 ημέρες συνεχούς έκθεσης. Το SKOV-3-TR και τα κύτταρα OVCAR-3-TR έδειξε υψηλά ποσοστά αντοχής (& gt? 400 φορές) για την πακλιταξέλη σε σύγκριση με τα αντίστοιχα γονικά κύτταρα. κύτταρα 1Α9-ΡΤΧ10 εμφανίζεται μέτρια αναλογία αντίσταση (98 φορές) για την πακλιταξέλη. Αυτά paclitaxel ανθεκτικά κύτταρα έδειξαν επίσης διασταυρούμενη αντίσταση σε δοξορουβικίνη (1,8 έως 12 φορές). BPR0L075 εμφανίζονται παρόμοια ευαισθησία σε όλες ζεύγη γονικών και πακλιταξέλη-ανθεκτικές κυτταρικές γραμμές ωοθήκης με IC

50 τιμές που κυμαίνονται από 2-7 ηΜ (Σχήμα 1Β).

(Α) πολλαπλασιαζόμενα ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών (SKOV- 3, OVCAR-3, και A2780-1A9) και πακλιταξέλη-ανθεκτικά sublines (SKOV-3-TR, OVCAR-3-TR, και 1Α9-ΡΤΧ10) υποβλήθηκαν σε θεραπεία με BPR0L075 (κόκκινος κύκλος) ή πακλιταξέλη (μπλε τετράγωνο) σε 3 -15 συγκεντρώσεις ηΜ για 4 ημέρες και η κυτταροτοξικότητα εκτιμήθηκε με δοκιμασία SRB. Κλάσμα της επιβίωσης των κυττάρων σε σχέση με τους ελέγχους αντιπροσωπεύει μέση ± SD 12 προσδιορισμών. (Β) Περίληψη της έκφρασης Ρ-gp, βIII-τουμπουλίνης έκφραση, και την ευαισθησία του ζεύγη κυτταρικών σειρών καρκίνου των ωοθηκών σε πακλιταξέλη, δοξορουβικίνη, και η θεραπεία BPR0L075. Οι αριθμοί σε παρένθεση αντιπροσωπεύει το βαθμό αντίστασης (x-φορές), που εκφράζεται ως ο λόγος του IC

50 τιμές σε σύγκριση με τις αντίστοιχες γονικές γραμμές. Όλα τα πειράματα επαναλήφθηκαν τρεις φορές.

Η

BPR0L075 δεν είναι υπόστρωμα για τους μεταφορείς εκροής, και Active στον καρκίνο των ωοθηκών κύτταρα με αλλαγμένη βIII-τουμπουλίνης Εκφράσεις και β-τουμπουλίνης Μετάλλαξη

ανάλυση ανοσοαποτύπωσης έδειξε ότι τα κύτταρα ανθεκτικά OVCAR-3-TR και SKOV-3-TR έχουν υψηλή έκφραση της Ρ-gp πρωτεΐνη ενώ τα γονικά OVCAR-3 και SKOV-3 κύτταρα δεν έχουν ανιχνεύσιμη P-gp έκφρασης (Σχήμα 2Α). Για να επιβεβαιωθεί ότι BPR0L075 δεν είναι ένα υπόστρωμα για τις αντλίες εκροής, μετρήσαμε τα ενδοκυτταρικά επίπεδα BPR0L075 στα δύο ζεύγη κυτταρικών σειρών OVCAR-3 /OVCAR-3-TR και SKOV-3 /SKOV-3-TR χρήση ευαίσθητης LC /MS /μέθοδος MS (Σχήμα 2Β). Αμφότερα τα ζεύγη των κυττάρων που λαμβάνονται παρόμοια ενδοκυτταρικές συγκεντρώσεις BPR0L075 μετά τη θεραπεία BPR0L075 (20 ηΜ για 6 ώρες, το Σχήμα 2C) χωρίς στατιστική διαφορά (

P

& gt? 0,05). BPR0L075 δεν είναι ένα υπόστρωμα για ένα άλλο ΑΤΡ-δέσμευσης πρωτεΐνης αντίσταση μεταφορέα καρκίνο του μαστού εκροής κασέτα (BCRP), αποδεικνύεται από την συγκρίσιμη κυτταροτοξικότητα σε ανθρώπινα κύτταρα καρκίνου του μαστού MCF7 (IC

50 = 3.5 ηΜ) και μιτοξαντρόνη ανθεκτικά MCF7 κύτταρα /MX (IC

50 = 4.0 ηΜ), τα κύτταρα MCF7 /MX γνωστό ότι υπερεκφράζουν BCRP [23], [24], [25]. Μαζί, τα αποτελέσματα δείχνουν ότι μεταφορέα εκροής P-gp συνέβαλαν στην επιλεγμένη αντίσταση paclitaxel σε κύτταρα-TR OVCAR-3 SKOV-3-TR και, αλλά BPR0L075 δεν αποτελεί υπόστρωμα για τις αντλίες εκροής, η οποία συμβάλλει στην ικανότητά της να ξεπεράσει την αντίσταση paclitaxel .

(Α) ανάλυση κηλίδας Western της P-gp και βIII-τουμπουλίνης εκφράσεις στα ζεύγη κυτταρικές γραμμές καρκίνου των ωοθηκών. Pan β-τουμπουλίνης και β-ακτίνης φόρτωση ελέγχους. (Β) LC /MS /MS ανάλυση των ενδοκυτταρικών επιπέδων BPR0L075, με LC χρωματογράφημα που δείχνει το χρόνο κατακράτησης του εσωτερικού προτύπου [1- (1Η-ινδολ-3-υλκαρβονυλ) -1 Η-ιμιδαζόλη] και BPR0L075 ως 2,2 και 2,8 λεπτά, αντιστοίχως . Οι μαζικές μεταβάσεις του m /z 212 → 144 για εσωτερικό πρότυπο και m /z 342 → 195 για BPR0L075 παρακολουθήθηκαν για ποσοτικό προσδιορισμό. (Γ) Τα ενδοκυτταρικά επίπεδα BPR0L075 στα ζεύγη κυτταρικές γραμμές καρκίνου των ωοθηκών. Τα κύτταρα επωάστηκαν με 20 ηΜ BPR0L075 για 6 ώρες, στη συνέχεια τα κύτταρα πλύθηκαν, συλλέχθηκαν, λύθηκαν και για LC μέτρηση /MS /MS. Οι ράβδοι αντιπροσωπεύουν μέση τιμή ± SD τριών ανεξαρτήτων δοκιμών. Δεν παρατηρήθηκε στατιστικά σημαντική διαφορά δεν παρατηρήθηκε (

P

& gt? 0,05, φοιτητής

t-test

)

Η

φαινότυπο αντοχής πακλιταξέλη συχνά συνδέεται με μεταβολή της τάξης. III έκφραση ισότυπο β-τουμπουλίνης [26]. Παρατηρήσαμε διαφορική έκφραση της τουμπουλίνης-ισοτόπου βIII-τουμπουλίνης σε γονική και πακλιταξέλη ανθεκτικά καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών. Αμφότερες OVCAR-3 και SKOV-3 κύτταρα έχουν υψηλή έκφραση της βIII-τουμπουλίνης, αλλά μετά την επιλογή με πακλιταξέλη, η έκφραση του βIII-τουμπουλίνης σημαντικά ελαττωμένη (Σχήμα 2Α), η τροποποίηση των βIII-τουβουλίνης εκφράσεις σε ανθεκτικά κύτταρα δεν το έκανε επηρεάζουν την ευαισθησία στην BPR0L075. Τα κύτταρα 1Α9-ΡΤΧ10 γνωστό ότι επιδεικνύουν μία ανθεκτική φαινότυπο μη-MDR1, που φιλοξενούν β-τουμπουλίνης μετάλλαξη με εξασθενημένη αλληλεπίδραση paclitaxel με τουμπουλίνης [27], [28], [29], [30] (Εικόνα 1Β). Η μετάλλαξη του β-τουμπουλίνης δεν επηρέασε αρνητικά την επαγόμενη κυτταροτοξικότητα BPR0L075 σε κύτταρα 1Α9-ΡΤΧ10 (Σχήμα 1). Μαζί, BPR0L075 είναι κυτταροτοξική σε κύτταρα με υψηλό P-gp και εκφράσεις BCRP? η κυτταροτοξικότητα είναι ανεξάρτητη από βIII-τουμπουλίνης επίπεδα έκφρασης ή κατάσταση μετάλλαξης β-τουμπουλίνης.

BPR0L075 Προκαλεί G2 /M σύλληψης σε δύο Γονική και πακλιταξέλη-ανθεκτικό καρκίνο των ωοθηκών κύτταρα

Ακολουθήσαμε τον κυτταρικό κύκλο εξέλιξη τόσο των γονέων και πακλιταξέλη-ανθεκτικά κύτταρα μετά τη θεραπεία BPR0L075. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 3, η επεξεργασία BPR0L075 (10-100 ηΜ, επίπεδα φαρμάκου μπορούν να επιτευχθούν σε ξενομοσχεύματα ποντικών [22]) επί 24 ώρες είχε ως αποτέλεσμα απώλειες κυτταρικό πληθυσμό από φάσεις G0-G1, με ταυτόχρονη συσσώρευση των κυττάρων στο G2 /Μ φάση και στις δύο OVCAR-3 και OVCAR-3-TR κυττάρων. Σε σύγκριση με την ισχυρή αναστολή του κυτταρικού κύκλου από BPR0L075, πακλιταξέλη ανθεκτικά κύτταρα εμφάνισαν ελαττωματικά μιτωτικά απόκριση στο paclitaxel, η οποία απέτυχε να συλλάβει στη μίτωση ακόμη και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με 100 ηΜ του paclitaxel (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Για κύτταρα OVCAR-3-TR, πολυπλοειδών κυττάρων (& gt? 4Ν DNA) εμφανίστηκε μετά από θεραπεία BPR0L075 σύγκριση με OVCAR-3 κύτταρα. Διερευνήσαμε επίσης την χρονική πορεία της BPR0L075 διακοπή κύκλου που επάγεται κύτταρο όταν υποβάλλεται σε επεξεργασία με 10 ηΜ BPR0L075. BPR0L075 άρχισε να εμποδίσει τις OVCAR-3 κύτταρα σε G2 /M φάση συντομότερο 12 ωρών, και προχώρησε για να ολοκληρωθεί σύλληψης από 24 έως 48 ώρες και στις δύο OVCAR-3 και OVCAR-3-TR κυττάρων. BPR0L075 επεξεργασμένα κύτταρα OVCAR-3-TR οδήγησε σε σημαντικό κλάσμα πολυπλοειδών κυττάρων (περιεχόμενο DNA & gt? 4Ν) σε 24-48 ώρες (Εικόνα 3, βέλη). Ομοίως, η θεραπεία BPR0L075 επάγεται επίσης συγκέντρωσης- και χρονο-εξαρτώμενη αναστολή του κυτταρικού κύκλου στην G2 /M φάση, τόσο στα κύτταρα SKOV-3 και SKOV-3-TR, με υψηλό κλάσμα της πολυπλοειδών κυττάρων σε SKOV-3-TR (Σχήμα S1 ). Η μιτωτική κυτταρικό θάνατο ή το μιτωτικό καταστροφή συνδέεται συχνά με διακοπή της ανάπτυξης στη φάση G2 /M του κυτταρικού κύκλου που ακολουθείται από τον σχηματισμό μεγάλων πολυπλοειδών κυττάρων [31], [32], αυτά τα πολυπλοειδών κυττάρων παρατηρήθηκε υποδεικνύει ότι BPR0L075 επάγεται μιτωτική καταστροφή στην πακλιταξέλη ανθεκτικών ωοθηκών καρκινικά κύτταρα.

OVCAR-3 και τα κύτταρα OVCAR-3-TR υποβλήθηκαν σε αγωγή με όχημα αιθανόλης ή BPR0L075 (10-100 ηΜ) για 24 ώρες ή 10 ηΜ BPR0L075 για υποδεικνύεται διάρκειες (0-48 ώρες ), χρωματίστηκαν με ιωδιούχο προπίδιο και αναλύθηκαν με κυτταρόμετρο ροής. Τα προφίλ κυτταρικού κύκλου παρουσιάζονται ως τρισδιάστατο επικάλυψης. Ο άξονας Χ δείχνει την ένταση του φθορισμού ιωδιούχο προπίδιο, το οποίο δείχνει το περιεχόμενο κυτταρικό DNA σε διαφορετικές φάσεις του κυτταρικού κύκλου. Ο Υ-άξονας αντιπροσωπεύει τις μετρήσεις κυττάρων? και ζ-άξονας δείχνει τα σημεία συγκέντρωσης ή το χρόνο της θεραπείας BPR0L075. 2Ν, τα κύτταρα που κατοικούν στην G0-G1 φάση του κυτταρικού κύκλου? 4Ν, κύτταρα στο G2 φάση ή μίτωση. BPR0L075 προκαλεί σημαντική G2 /M σύλληψης που ακολουθείται από την εμφάνιση ενός πληθυσμού υπο-G1 τόσο γονικών και ανθεκτικά κύτταρα, με πολυπλοειδών κυττάρων (βέλη) μόνο στα ανθεκτικά κύτταρα. Τα αποτελέσματα είναι αντιπροσωπευτικά τριών ανεξάρτητων πειραμάτων.

Η

BPR0L075 διαταράσσει την μικροσωληνίσκων Κυτταροσκελετού και προκαλεί μιτωτική καταστροφή στην πακλιταξέλη ανθεκτικό καρκίνο των ωοθηκών κύτταρα

Εξετάσαμε την επίδραση της BPR0L075 σχετικά με την οργάνωση των μικροσωληνίσκων δικτύων των καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών με χρώση ανοσοφθορισμού της α-τουμπουλίνης (πράσινο). Όπως φαίνεται στο Σχήμα 4, όχημα αιθανόλης κατεργάζεται OVCAR-3 και SKOV-3 κύτταρα είχαν καλά οργανωμένη τυπικό συστοιχίες δίκτυο ακτινική μικροσωληνίσκων? Αντίθετα, BPR0L075 (20 ηΜ για 18 ώρες) αγωγή OVCAR-3 και SKOV-3 κύτταρα είχαν στρογγυλό σχήμα, συμπυκνώνεται χρωμοσωμάτων, με την διάσπαση των ινών των μικροσωληνίσκων των κυττάρων που συνοδεύεται από την κυτταρική παραμόρφωση. Για το paclitaxel ανθεκτική OVCAR-3-TR και τα κύτταρα SKOV-3-TR, οι μακριές ίνες μικροσωληνίσκων ήταν σπάνια σε κύτταρα κατεργασμένα όχημα, με ακόμη λιγότερη χρώση μετά από τη θεραπεία του BPR0L075. BPR0L075 αγωγή ανθεκτικών κυττάρων έδειξε επίσης χαρακτηριστικά της μιτωτικής καταστροφής, όπως ορίζεται από το σχηματισμό γιγαντιαίων, πολυπύρηνων (σχήμα 4, βέλη).

Καλυπτρίδες που περιέχουν OVCAR-3 και SKOV-3 γονικών και πακλιταξέλη ανθεκτικά κύτταρα εκτέθηκαν για μέσο που περιέχει όχημα αιθανόλης ή 20 ηΜ BPR0L075 για 18 ώρες. Τα κύτταρα σταθεροποιήθηκαν, καλυπτρίδες μετά χρωματίστηκαν με αντι-α-τουμπουλίνης αντίσωμα (AlexaFluor 488, πράσινο) για μικροσωληνίσκους και 4,6-διαμιδινο-2-φαινυλινδόλιο (ϋΑΡΙ, μπλε) για τους κυτταρικούς πυρήνες, και παρατηρήθηκαν από την Olympus IX81 μικροσκόπιο φθορισμού . Τα μητρικά κύτταρα ελέγχου έδειξαν τυπική συστοιχίες ακτινική μικροσωληνίσκων. θεραπεία BPR0L075 διαταράσσεται μικροσωληνίσκων κυτταροσκελετού τόσο γονικών και ανθεκτικά καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών. Λευκά βέλη δείχνουν τα γιγαντιαία, πολυπύρηνα κύτταρα χαρακτηριστικό της μιτωτικής καταστροφής. μπαρ κλίμακα, 10 μm.

Η

Η πακλιταξέλη-ανθεκτικά κύτταρα των ωοθηκών Καρκίνος Προβολή Απελευθερωμένης Μιτωτικά απόκρισης και η εξάντληση των Surviving

Αναλύσαμε τα βασικά μοριακά γεγονότα που σχετίζονται με BPR0L075 σύλληψης που προκαλείται από τον κυτταρικό κύκλο. Η κυκλίνη Β1 είναι μία ρυθμιστική πρωτεΐνη του κυτταρικού κύκλου εμπλέκονται σε μίτωση και εκφράζεται κυρίως κατά τη διάρκεια της G2 /M φάση του κυτταρικού κύκλου. Η ανάλυση στυπώματος Western έδειξε ότι οι βασικές εκφράσεις της κυκλίνης Β1 σε πακλιταξέλη ανθεκτικά κύτταρα OVCAR-3-TR-TR και SKOV-3 ήταν σημαντικά χαμηλότερες από εκείνες OVCAR-3 και τα κύτταρα SKOV-3. θεραπεία BPR0L075 (10-100 ηΜ για 24 ώρες) προκάλεσε μία εξαρτώμενη από τη συγκέντρωση αύξηση στα επίπεδα κυκλίνης Β1 σε αμφότερες τις γονικές κυτταρικές σειρές και πακλιταξέλη ανθεκτικές υποσειρές (Σχήμα 5Α, Β). θεραπεία BPR0L075 επάγεται επίσης ρύθμιση προς τα πάνω της μιτωτικής ατράκτου πρωτεΐνης σημείου ελέγχου BubR1 σε γονική OVCAR-3 και τα κύτταρα SKOV-3. Σε paclitaxel ανθεκτικά OVCAR-3-TR και SKOV-3-TR κύτταρα, η ενδογενής έκφραση του BubR1 έγινε μη ανιχνεύσιμο (Σχήμα 5Α, Β). Παρακολουθήσαμε επίσης την πρωτεΐνη ΜΡΜ-2, ένα καθιερωμένο δείκτη μιτωτικών κυττάρων που αναγνωρίζει μια ομάδα φωσφορυλιωμένες μορφές των πρωτεϊνών που φωσφορυλιώνεται μόνο σε μίτωση [33], [34]. θεραπεία BPR0L075 (10-100 ηΜ για 24 ώρες) προκάλεσε άμεση επαγωγή του ΜΡΜ-2 σε γονικά κύτταρα, αλλά όχι στα ανθεκτικά υποσειρές που έχουν μιτωτική ελαττώματα (Σχήμα 5Α, Β). Παρατηρήσαμε επίσης την ενδογενή έκφραση του survivin, ρυθμιστή μίτωση και αναστολέας της πρωτεΐνης απόπτωσης, σε OVCAR-3 και SKOV-3 κύτταρα (Σχήμα 5Α, Β). BPR0L075 μεσολάβηση μιτωτική σύλληψη σχετίζεται με την επαγωγή της survivin σε εξαρτώμενο από τη συγκέντρωση τρόπο σε γονικά κύτταρα, η οποία διατηρεί ένα μονοπάτι επιβίωσης για τα καρκινικά κύτταρα. Αντίθετα, η έκφραση survivin ήταν ελλιπής σε OVCAR-3-TR και SKOV-3-TR υποσειρές, η θεραπεία BPR0L075 απέτυχε να επάγει survivin αυξητική ρύθμιση στα πακλιταξέλη ανθεκτικά κύτταρα (Σχήμα 5Α, Β).

θεραπεία BPR0L075 (10-100 ηΜ για 24 ώρες) που προκαλείται από αλλαγές στη κυκλίνη Β1, BubR1, ΜΡΜ-2, και survivin εκφράσεις σε OVCAR-3 /OVCAR-3-TR κύτταρα (Α) και SKOV-3 /SKOV-3- κύτταρα TR (Β). θεραπεία BPR0L075 (10 ηΜ) προκάλεσε αλλαγές στην PARP, BCL-XL, και Bcl-2 πρωτεϊνών σε διαφορετικές χρονικές (0-72 ώρες) σε OVCAR-3 /OVCAR-3-TR κύτταρα (C) και SKOV-3 /SKOV- κύτταρα 3-TR (D). 50 μg του λύματος πρωτεΐνης φορτώθηκε επί SDS-PAGE και τα πειράματα επαναλήφθηκαν και αντιπροσωπευτικές κηλίδες φαίνονται.

Η

BPR0L075 επάγει φωσφορυλίωση του Bcl-XL σε γονικά κύτταρα, αλλά όχι σε Paclitaxel ανθεκτικά ωοθηκών τα καρκινικά κύτταρα

οικογένειας Bcl-2 πρωτεϊνών είναι ρυθμιστές κλειδιά της απόπτωσης, και τα επίπεδα έκφρασής τους έχουν προταθεί ότι συσχετίζονται με την ευαισθησία στην πακλιταξέλη [35], [36], [37]. Οι OVCAR-3 και SKOV-3 κυτταρικές γραμμές δεν εξέφρασαν πρωτεΐνη Bcl-2, σε έναν ανοσοανιχνεύσιμη επίπεδο, αλλά βρέθηκαν να εκφράζουν υψηλά επίπεδα Bcl-XL. Αντίθετα, για την sublines OVCAR-3-TR-TR και SKOV-3, το επίπεδο της πρωτεΐνης Bcl-2 ήταν εύκολα ανιχνεύσιμες οποία σχετίζεται με μειωμένη έκφραση του Bcl-XL (Σχήμα 5C, D). Όταν αντιμετωπίζονται τα γονικά κύτταρα με 10 ηΜ BPR0L075, η φωσφορυλιωμένη μορφή της Bcl-XL εμφανίστηκε στο 12-72 ώρες, αποδεικνύεται από τα ηλεκτροφορητική κινητικότητα μετατοπίσεις σε ανοσοστυπώματα (Σχήμα 5C, D). Ωστόσο, παρόμοια έκθεση της BPR0L075 δεν προκάλεσε Bcl-2 ή φωσφορυλίωσης Bcl-XL σε OVCAR-3-TR και SKOV-3-TR sublines. θεραπεία BPR0L075 μειωμένα επίπεδα ΒοΙ-Χι σε κύτταρα-TR SKOV-3 OVCAR-3-TR και χωρίς να επηρεάζονται οι Bcl-2 επίπεδα (Σχήμα 5C, D).

BPR0L075 κυτταρικό θάνατο που επάγεται είναι Caspase-3 Ανεξάρτητες σε Τόσο γονικών και Paclitaxel-ανθεκτικά κύτταρα καρκίνου των ωοθηκών

BPR0L075 επάγεται θεραπεία πρωτεολυτική διάσπαση πολυ (ΑΟΡ-ριβόζη) πολυμεράσης (PARP) από ένα MW 116 KDa πολυπεπτιδίου σε ένα ΜΒ 85 KDa θραύσμα σε OVCAR-3 και SKOV-3 κύτταρα σε ένα χρονικό (Σχήμα 5C, D) και συγκέντρωσης- (Σχήμα 6Α, Β) εξαρτώμενο τρόπο. Ωστόσο, η διάσπαση PARP δεν παρατηρήθηκε στα κύτταρα OVCAR-3-TR και SKOV-3-TR (σχήμα 5C, D, 6Α, Β), παρά το γεγονός ότι η θεραπεία BPR0L075 σκοτώθηκαν και οι δύο γονικών και ανθεκτικά κύτταρα με παρόμοια IC

50 τιμές (Σχήμα 1). Παρατηρήσαμε επίσης ότι η θεραπεία BPR0L075 επάγεται σχηματισμός σκάλας DNA, ένα χαρακτηριστικό γνώρισμα της κυτταρικής απόπτωσης, στα κύτταρα SKOV-3 και OVCAR-3, αλλά όχι στο SKOV-3-TR και OVCAR-3-TR sublines (Σχήμα 6C). Χρησιμοποιώντας την ανάλυση στυπώματος western, παρατηρήσαμε καμία ενεργοποίηση της κασπάσης-3 (απώλεια procaspase 3 ή εμφάνιση του διασπασμένη κασπάση-3) και στις δύο γονικών και ανθεκτικά κύτταρα μετά την επεξεργασία BPR0L075 χρησιμοποιώντας είτε αντισώματα ειδικά αναγνωρισμένες procaspase-3 ή διασπασμένη κασπάση 3 ( Σχήμα 6Α, Β). Για να επιβεβαιωθεί περαιτέρω κασπάσης-3 ανεξάρτητες μονοπάτι κυτταρικού θανάτου, εμείς προεπεξεργασία των κυττάρων με ένα κασπάσης-3 ειδικές και μη αναστρέψιμο αναστολέα (20 μΜ Ζ-DEVD-FMK) ή αναστολέα αρνητικού ελέγχου (20 μΜ Ζ-FA-FMK) 24 ώρες πριν η προσθήκη BPR0L075. Δεν παρατηρήθηκε στατιστικά σημαντική διαφορά παρατηρήθηκε κυτταροτοξικότητα για κάθε ζεύγος κυτταρικές σειρές (Σχήμα 6D,

P

& gt? 0,05, φοιτητής

t-test

)? αναστολέα της κασπάσης-3 δεν εμποδίζει τον κυτταρικό θάνατο και στις δύο γονικών και ανθεκτικά κύτταρα. Η μιτωτική καταστροφή είναι γνωστό ότι οδηγεί σε κυτταρικό θάνατο με κασπάση-2 και κασπάσης-3 εξαρτώμενη και ανεξάρτητους μηχανισμούς [38]. Ελέγξαμε την ενεργοποίηση της κασπάσης-2 μετά από θεραπεία με BPR0L075, η διάσπαση της κασπάσης-2 δεν ανιχνεύθηκε σε δύο γονικών και ανθεκτικών κυττάρων (Σχήμα 6Α, Β). Μαζί, τα δεδομένα δείχνουν ότι η κασπάση-2 και κασπάσης-3 ανεξάρτητες κυτταρικού θανάτου είχε εμπλακεί σε τόσο γονικών και πακλιταξέλη ανθεκτικά καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών? η κυρίαρχη οδός κυτταρικού θανάτου ήταν μέσω απόπτωση σε γονικά κύτταρα, και μιτωτική καταστροφή των ανθεκτικών καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών.

ανάλυση Western blot της PARP, κασπάσης-2, και της κασπάσης-3 μετά BPR0L075 (10-100 ηΜ) θεραπεία για 24 ώρες στα κύτταρα OVCAR-3 /OVCAR-3-TR (Α) και τα κύτταρα SKOV-3 /SKOV-3-TR (Β). β-ακτίνης φόρτωση ελέγχου. δοκιμασίες (C) σκάλα DNA σε κύτταρα σε επεξεργασία με 10 ηΜ BPR0L075 για 72 ώρες. Γονιδιωματικό DNA υποβλήθηκε σε ηλεκτροφόρηση σε πήκτωμα αγαρόζης 1%. Το πήγμα κηλιδώνεται με βρωμιούχο αιθίδιο και οι ταινίες του DNA έγιναν ορατά υπό υπεριώδες διαφανοσκόπιο. (D) Επίδραση της κασπάσης-3 αναστολέα για BPR0L075 που προκαλείται κυτταροτοξικότητα. Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε προεπεξεργασία με τον αναστολέα της κασπάσης-3 (20 μΜ Ζ-DEVD-FMK) ή αναστολέα αρνητικού ελέγχου (20 μΜ Ζ-FA-FMK) για 24 ώρες πριν από την επώαση με 10 ηΜ BPR0L075 για επιπλέον 72 ώρες. Μετά την ολοκλήρωση της επωάσεως, η βιωσιμότητα των κυττάρων προσδιορίστηκε με δοκιμασία SRB. Δεν παρατηρήθηκε στατιστικά σημαντική διαφορά παρατηρήθηκε κυτταροτοξικότητα για κάθε ζεύγος κυτταρικών σειρών (

P

& gt? 0,05, φοιτητής

t

-τεστ). Δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση ± SD.

Η

Συζήτηση

Η πακλιταξέλη είναι ένα από τα πιο επιτυχημένα χημειοθεραπευτικούς παράγοντες και χρησιμοποιείται για τη θεραπεία μιας ευρείας ποικιλίας ανθρώπινων κακοηθειών, συμπεριλαμβανομένου συμπαγείς όγκους και αιματολογικές κακοήθειες [4], [39]. Η πακλιταξέλη είναι γνωστό ότι συνδέεται με την β-τουμπουλίνης και προάγει την συγκρότηση της σε μικροσωληνίσκους [40], η οποία οδηγεί σε αναστολή του κυτταρικού κύκλου στην G2 /M φάση, ενεργοποιεί μιτωτικής ατράκτου «σημείο ελέγχου», και τελικά οδηγεί σε αποπτωτικό κυτταρικό θάνατο [4]. Η πακλιταξέλη είναι ένας παράγοντας πρώτης γραμμής για τη χημειοθεραπεία του καρκίνου των ωοθηκών, μαζί με τους παράγοντες πλατίνας. Ωστόσο, η θεραπεία του προχωρημένου καρκίνου των ωοθηκών με πακλιταξέλη παρεμποδίζεται από την ανάπτυξη αντοχής φαρμάκου. Ο εντοπισμός νέων παραγόντων που ξεπεράσει την αντίσταση πακλιταξέλη είναι επειγόντως αναγκαία. BPR0L075 είναι μια ετεροκυκλική 3-aroylindole μικροσωληνίσκων αποσταθεροποίησης παράγοντα, ο οποίος παρεμβαίνει με δυναμική μικροσωληνίσκων των καρκινικών κυττάρων, οδηγεί σε αναστολή του κύκλου των καρκινικών κυττάρων και κυτταρικού θανάτου με την κασπάση-3 απόπτωση [20] και αντιαγγειογόνο δράση [21]. Επιπλέον, BPR0L075 διαταράσσει αγγείωση του όγκου και κλείνει αιμάτωση του όγκου

in vivo

[22]. Στην παρούσα μελέτη, εξετάσαμε την αποτελεσματικότητα και το μηχανισμό της BPR0L075 στη θεραπεία των paclitaxel ανθεκτικά ωοθηκών καρκινικά κύτταρα.

Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι ο καρκίνος των ωοθηκών κυτταρικές σειρές που ανθεκτικές στην πακλιταξέλη παράγοντα σταθεροποίησης μικροσωληνίσκων μπορεί να παραμείνει ευαίσθητος σε μικροσωληνίσκων -destabilizing παράγοντα BPR0L075. BPR0L075 εμφανίζεται ισχυρή κυτταροτοξικότητα στους δύο γονικών ωοθηκών καρκινικά κύτταρα και πακλιταξέλη ανθεκτικά υποσειρές τους με IC

50 τιμές γύρω στα 5 ηΜ, ενώ ίση συγκέντρωση αγωγή με πακλιταξέλη ήταν αναποτελεσματική σε ιδιαίτερα ανθεκτικό καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών (Εικόνα 1). Αυτά paclitaxel ανθεκτικά καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών έδειξε επίσης διασταυρούμενη αντίσταση σε άλλα χημειοθεραπευτικά όπως δοξορουβικίνη (Σχήμα 1Β). Αυτή η παρατήρηση είναι σύμφωνη με την προηγούμενη αναφορά που BPR0L075 είναι αποτελεσματική κατά πολυανθεκτικά ανθρώπινου τραχηλικού καρκινώματος ΚΒ κύτταρα τα οποία είναι ανθεκτικά σε βινκριστίνη, πακλιταξέλη, και κολχικίνη [20]. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι BPR0L075 είναι ένας πιθανός χρήσιμος παράγοντας στον έλεγχο της πολυανθεκτικής ωοθηκών καρκινικά κύτταρα.

Τα στοιχεία μας δείχνουν ότι BPR0L075 υπερνικά δύο κύριοι μηχανισμοί αντίστασης στην πακλιταξέλη, δηλαδή, αντίσταση MDR1 αποδίδεται σε Ρ-γλυκοπρωτεΐνη υπερέκφραση και μεταβολή της έκφρασης ισοτύπου κατηγορίας III β-τουμπουλίνης. Η πακλιταξέλη ανθεκτική OVCAR-3-TR και SKOV-3-TR υποσειρές έδειξε υπερέκφραση της Ρ-gp (Σχήμα 2Α), μία αντλία εκροής είναι σε θέση να παρεμποδίζουν τη διατήρηση των ταξανών και άλλα κατιονικά φάρμακα [41]. BPR0L075 δεν είναι ένα υπόστρωμα για τις P-gp και BCRP αντλίες εκροής, αποδεικνύεται από τα παρόμοια BPR0L075 ενδοκυτταρικά επίπεδα επιτυγχάνονται σε γονικών και ανθεκτικά υποσειρές (Σχήμα 2C) και συγκρίσιμες IC

50 τιμές σε κύτταρα MCF7 και MCF7 /ΜΧ. Αμφότερες OVCAR-3 και SKOV-3 κύτταρα έχουν υψηλή έκφραση κατηγορίας III β-τουμπουλίνης, ενώ ο OVCAR-TR και SKOV-3-TR έδειξε αξιοσημείωτα μειωμένη έκφραση των κλάσεων III β-τουμπουλίνης (Σχήμα 2Α), γεγονός που υποδηλώνει ότι η μεταβολή της κατηγορίας ΙΙΙ β-τουμπουλίνης έκφραση επηρεάζει την ευαισθησία με την πακλιταξέλη, αλλά δεν BPR0L075. BPR0L075 είναι επίσης ιδιαίτερα αποτελεσματικό στη θανάτωση κυττάρων 1Α9-ΡΤΧ10 με γονιδιακή μετάλλαξη β-τουμπουλίνης [27], [28] (Εικόνα 1). Τα αποτελέσματα μας υποστηρίζουν τις προηγούμενες αναφορές ότι οι μεταλλάξεις σε β-τουμπουλίνης και μεταβολές στην έκφραση των κλάσεων III ισοτύπων β-τουμπουλίνης επάγουν αντίσταση σε παράγοντες σταθεροποίησης των μικροσωληνίσκων και υπερευαισθησία σε παράγοντες μικροσωληνίσκων-αποσταθεροποίησης μέσω μιας αλλαγής στην συγκρότηση μικροσωληνίσκων και τη δυναμική των καρκινικών κυττάρων [42]. Μαζί, τα αποτελέσματα μας υποδεικνύουν ότι η πακλιταξέλη και BPR0L075 συνδέονται σε διαφορετικά σημεία της τουμπουλίνης? έχουν μη-επικαλυπτόμενες μηχανισμό αντίστασης, έτσι δυνητικά επιτρέπει τη χρήση της BPR0L075 για τους ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών υποτροπιάζουσα μετά την πακλιταξέλη χημειοθεραπεία με βάση.

BPR0L075 που προκαλείται διακοπή του κυτταρικού κύκλου στη φάση G2 /M στη γονική και πακλιταξέλη ανθεκτικά ωοθηκών καρκινικά κύτταρα, όταν η θεραπεία πακλιταξέλη ήταν ουσιαστικά αναποτελεσματική (Σχήμα 3, Σχήμα S1). Η κυτταρομετρία ροής τα δεδομένα δείχνουν ότι BPR0L075 δεν προκαλεί πλήρη μιτωτική σύλληψη στην πακλιταξέλη ανθεκτικά κύτταρα, υποδεικνύοντας ότι τα ανθεκτικά κύτταρα μπορούν ακόμη να υποβληθούν σύνθεση DNA παρά την αποτυχία της κυτταρικής διαίρεσης. BPR0L075 αγωγή ανθεκτικών κυττάρων οδήγησε σε σημαντικό κλάσμα πολυπλοειδών κυττάρων (Σχήμα 3, Σχήμα S1), γεγονός που υποδηλώνει ότι BPR0L075 επαγόμενο κυτταρικό θάνατο σε πακλιταξέλη ανθεκτικά κύτταρα προχωρούν μέσω μιτωτικής καταστροφής. Μιτωτική καταστροφή είναι μια άλλη μορφή του μονοπατιού κυτταρικού θανάτου που προκαλείται από ανώμαλη μίτωση ή /και ανεπανόρθωτη χρωμοσωμική βλάβη [32], [43], [44], [45]. Η μιτωτική καταστροφή συμβαίνει κατά τη διάρκεια ή αμέσως μετά από μία απορυθμισμένη ή απέτυχαν μίτωση και μπορεί να συνοδεύεται από μορφολογική αλλοίωση όπως μικροπυρήνωσης (την εμφάνιση των χρωμοσωμάτων ή χρωμοσωμικό υλικό εκτός των πυρήνων δύο θυγατρικά) και πολυπυρήνωση (την εμφάνιση δύο ή περισσότερους πυρήνες παρόμοια ή ετερογενής σε μέγεθος, που προκύπτει από ανεπαρκή διαχωρισμό κατά τη διάρκεια της κυτταροκίνησης) [43], [44], [45]. Ο σχηματισμός των γιγαντιαία πολυπύρηνα κύτταρα είναι ένα φαινότυπο μιτωτικής καταστροφής των κυττάρων που προκαλείται από ιονίζουσες ακτινοβολίες [46], [47] ή αντικαρκινικά φάρμακα που επηρεάζουν τη σταθερότητα των μικροσωληνίσκων [43], [48], [49], [50]. χρώση ανοσοφθορισμού δείχνει την εμφάνιση των γιγαντιαίων, πολυπύρηνων (Σχήμα 4) μετά από θεραπεία BPR0L075 των ανθεκτικών κυττάρων, γεγονός που υποδηλώνει ότι το χρωμόσωμα διαχωρισμός συμβαίνουν τουλάχιστον σε κάποιο βαθμό, στην πακλιταξέλη ανθεκτικά κύτταρα αλλά κυτοκίνηση απέτυχε.

Η μελέτη μας δείχνει ότι οδοί μιτωτική απόκριση είναι ιδιαίτερα απορύθμιση στις OVCAR-3-TR και SKOV-3-TR καρκινικά κύτταρα, όπως αποδεικνύεται από τα κάτω ρύθμιση της κυκλίνης Β1, εξάντληση μιτωτικών πρωτεΐνης ατράκτου οδοφράγματος BubR1, και ανικανότητα να ενεργοποιήσει μιτωτικό επίτοπο MPM-2 σε ανθεκτικά κύτταρα σε σύγκριση με τα γονικά κύτταρα (Σχήμα 5Α, Β). Οι παρατηρήσεις είναι συνεπείς με τις εκθέσεις που μειωμένη έκφραση κυκλίνης Β1 και BubR1 σχετίζεται με εξασθενημένο σημείο ελέγχου ατράκτου και αντίσταση paclitaxel σε κύτταρα καρκινώματος των ωοθηκών [51]? εξάντληση του BubR1 με siRNA είχε σαν αποτέλεσμα απώλεια της ατράκτου λειτουργίας οδοφράγματος συναρμολόγηση και αντοχή σε πακλιταξέλη [52].

εξάντληση Σουρβιβίνης σε πακλιταξέλη ανθεκτικά καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών θα μπορούσε να διαδραματίσει ένα ρόλο στην BPR0L075 επαγόμενη μιτωτική καταστροφή. Survivin είναι μια διλειτουργική πρωτεΐνη που δρα ως καταστολέας της απόπτωσης και μιτωτικό ρυθμιστής [53], [54], [55]. Survivin αναστέλλει την απόπτωση αλληλεπιδρώντας με κασπάσης και πρωτεΐνες Smac /DIABLO, καταστέλλουν την ενεργοποίηση των κασπασών κατάντη, η οποία διατηρεί ένα μονοπάτι επιβίωσης [56]. Survivin ρυθμίζει επίσης αρκετές μιτωτική εκδηλώσεις, συμπεριλαμβανομένης της ατράκτου και ενδιάμεση οργάνωση των μικροσωληνίσκων, της ατράκτου συναρμολόγηση οδοφράγματος και κυτταροκίνηση [44]. Παρατηρήσαμε την απώλεια βασικής έκφρασης της survivin σε πακλιταξέλη ανθεκτικά κύτταρα σε σύγκριση με τα γονικά κύτταρα (Σχήμα 5Α, Β), γεγονός που υποδηλώνει την εξασθένιση της ατράκτου οδοφράγματος στα ανθεκτικά κύτταρα. Η πακλιταξέλη είναι γνωστό ότι είναι αναποτελεσματική στην θεραπεία των survivin-εξαντλημένο καρκινικών κυττάρων [57], [58].