Αφηρημένο

Ιστορικό

Για να ανακαλύψετε νέες δείκτες για τη βελτίωση της αποτελεσματικότητας του καρκίνου του παγκρέατος (PC) η διάγνωση, η secretome των δύο κυτταρικές σειρές PC (BxPC-3 και ΜΙΑ PaCa-2) έγινε προφίλ. πρωτεΐνη σύνδεσης UL16 2 (ULBP2), μία από τις πρωτεΐνες που προσδιορίζονται στο κύτταρο PC secretome, επελέγη για εκτίμηση ως βιοδείκτη για ανίχνευση PC επειδή το επίπεδο του mRNA του επίσης βρέθηκε να είναι σημαντικά αυξημένα σε ιστούς PC.

μέθοδοι

έκφραση ULBP2 στο PC ιστούς από τους 67 ασθενείς μελετήθηκε με ανοσοϊστοχημεία. επίπεδα ορού ULBP2 σε 154 ασθενείς PC και 142 υγιείς μάρτυρες μετρήθηκαν με ανοσοανάλυση με βάση σφαιρίδια, και η αποτελεσματικότητα του ορού ULBP2 για ανίχνευση PC συγκρίθηκε με την ευρέως χρησιμοποιούμενη αντιγόνο υδατάνθρακα ορολογικό δείκτη PC 19-9 (CA 19-9).

Αποτελέσματα

η ανοσοϊστοχημική ανάλυση αποκάλυψε μια αυξημένη έκφραση του ULPB2 στους ιστούς PC σε σύγκριση με παρακείμενες μη-καρκινικούς ιστούς. Εν τω μεταξύ, τα επίπεδα στον ορό του ULBP2 μεταξύ όλων των ασθενών PC (n = 154) και σε ασθενείς με καρκίνο πρώιμου σταδίου ήταν σημαντικά υψηλότερες από εκείνες των υγιών μαρτύρων (

ρ

& lt? 0,0001). Ο συνδυασμός των ULBP2 και CA 19-9 ξεπέρασε κάθε δείκτη και μόνο σε ασθενείς διακριτικό PC από υγιή άτομα. Είναι σημαντικό, μια ανάλυση της περιοχής κάτω από δέκτη που λειτουργούν χαρακτηριστικές καμπύλες έδειξε ότι ULBP2 ήταν ανώτερη CA 19-9 σε διακρίσεις ασθενείς με πρώιμου σταδίου PC από υγιείς μάρτυρες.

Συμπεράσματα

Συλλογικά, μας αποτελέσματα δείχνουν ότι ULBP2 μπορεί να αντιπροσωπεύει ένα νέο και χρήσιμο βιοδείκτη ορού για τον καρκίνο του παγκρέατος πρωτογενή διαλογή

Παράθεση:. Chang ΥΤ, Wu CC, Shyr ΥΜ, Τσεν TC, Hwang TL, Yeh TS, et al. (2011) Secretome-Based Αναγνώριση ULBP2 ως Novel Ορός δείκτης για την ανίχνευση του καρκίνου του παγκρέατος. PLoS ONE 6 (5): e20029. doi: 10.1371 /journal.pone.0020029

Επιμέλεια: Rakesh Κ Srivastava, Το Πανεπιστήμιο του Κάνσας Ιατρικό Κέντρο, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 21 Ιαν του 2011? Αποδεκτές: 10η Απριλίου του 2011? Δημοσιεύθηκε: May 20, 2011

Copyright: © 2011 Chang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε από τις επιχορηγήσεις από το Εθνικό Επιστημονικό Συμβούλιο της Ταϊβάν (NSC 96-2320-Β-182-031-my3), Υπουργείο Υγείας (DOH-99-TD-C-111-006), και το Υπουργείο Παιδείας (EMRPD180241 και EMRPD180091). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του παγκρέατος (PC) είναι η τέταρτη κύρια αιτία θνησιμότητας σχετίζονται με τον καρκίνο στις Ηνωμένες Πολιτείες με ένα 5-ετή επιβίωση λιγότερο από το 7% [1], [2]. Το 2010, περισσότερες από 43.000 νέες περιπτώσεις PC εκτιμήθηκαν για την ανάπτυξη και 36.800 θάνατοι αναμένονται στις Ηνωμένες Πολιτείες [1]. Στην Ταϊβάν, αυτή κατατάσσεται δέκατη ανάμεσα θανάτων από καρκίνο που σχετίζονται με το 2008 και παρουσιάζει αυξημένο ποσοστό θνησιμότητας κατά την τελευταία δεκαετία [3]. Λόγω της πρόωρης εξάπλωση του PC και την καθυστερημένη έναρξη των εμφανή συμπτώματα, λιγότερο από 8% των ασθενών PC διαγιγνώσκονται στο στάδιο εντοπισμένη όταν μία χειρουργική θεραπεία είναι δυνατή [1], [4], [5]. Ως εκ τούτου, υπάρχει επείγουσα ανάγκη για την ανάπτυξη βελτιωμένων στρατηγικών για την έγκαιρη διάγνωση του PC.

Οι τρέχουσες προσεγγίσεις για τη διάγνωση υπολογιστή που βασίζεται κυρίως στην απεικόνιση και ενδοσκοπικές μέθοδοι [6], η οποία, λόγω της οπισθοπεριτοναϊκή θέση του παγκρέατος , έχουν περιορισμένη πιθανότητα πρώιμης διάγνωσης [7], [8]. Μία αύξηση στα επίπεδα του αντιγόνου υδατάνθρακα 19-9 (CA 19-9) ορό έχει χρησιμοποιηθεί ευρέως για την ανίχνευση PC? Ωστόσο, αυτή η προσέγγιση είναι ανεπαρκής σε σχέση τόσο με την ειδικότητα και την ευαισθησία [6], [9], [10]. Εκτός από την CA 19-9, πάνω από 40 πρωτεΐνες έχουν αναφερθεί ως πιθανοί ορολογική βιοδείκτες για ανίχνευση PC [11]. Δυστυχώς, οι περισσότεροι είτε έχουν περιορισμένη εξειδίκευση και /ή ευαισθησία, ή να αναμείνει την επικύρωση με ένα μεγάλης κλίμακας κοόρτης των δειγμάτων [11] – [17], παρά τα στοιχεία ότι η χρήση ενός συνδυαστικού πίνακα βιοδείκτη βελτιώνει την ακρίβεια της διάγνωσης PC [12] . Ως εκ τούτου, η ανακάλυψη νέων και χρήσιμων δεικτών στον ορό θα μπορούσε να διευκολύνει τη βελτίωση της διάγνωσης PC ή /και την πρόγνωση.

Πρόσφατα, οι προσεγγίσεις secretome που βασίζεται έχουν εφαρμοστεί ευρέως στον εντοπισμό των πιθανών βιοδεικτών του καρκίνου [18], [ ,,,0],19]. Στην παρούσα μελέτη, αναλύσαμε την secretome των δύο κυτταρικών σειρών PC, BxPC-3 και ΜΙΑ PaCa-2 και αξιολογήθηκαν μία από τις ταυτοποιημένες πρωτεΐνες, UL16 πρωτεΐνη σύνδεσης 2 (ULBP2), ως πιθανό βιοδείκτη PC. Ανοσοϊστοχημική χρώση αποτελέσματα επιβεβαίωσαν τις αυξημένα επίπεδα ULBP2 σε ιστούς PC σε σύγκριση με παρακείμενες μη-καρκινικές ομολόγους. Με βάση σφαιρίδια ανοσοδοκιμασίες επικυρωθεί περαιτέρω τα αυξημένα επίπεδα ULBP2 ορού σε ασθενείς PC έναντι υγιών ατόμων. Το πιο σημαντικό, η συνδυασμένη χρήση των ULBP2 με CA 19-9 βελτίωσε την ευαισθησία και την ακρίβεια της έγκαιρης ανίχνευσης PC σε αυτήν την μελέτη ελέγχου υπόθεση, παρέχοντας μια πολλά υποσχόμενη προσέγγιση για τη διάγνωση PC σε πρώιμο στάδιο.

Υλικά και Μέθοδοι

πληθυσμό των ασθενών και τα κλινικά δείγματα

όγκων δειγμάτων από ασθενείς 67 PC (μέση ηλικία, 64? εύρος: 35 – 82) συλλέχθηκαν στο Gung Memorial Hospital Chang (CGMH), Lin-Κου, Ταϊβάν. Τα δείγματα ιστού συλλέχθηκαν κατά τη χειρουργική επέμβαση, αξιολογούνται από παθολόγους, και αποθηκεύονται στο CGMH Tissue Bank μέχρι τη χρήση. δείγματα ορού από 154 ασθενείς PC (μέση ηλικία, 70? εύρος, 31 έως 87) συλλέχθηκαν στην Ταϊπέι Γενικού Νοσοκομείου Βετεράνων, Ταϊπέι, Ταϊβάν. Επιπλέον δείγματα αίματος, συμπεριλαμβανομένων 142 δείγματα ορού από υγιείς δότες (μέση ηλικία, 58? Εύρος, 34 έως 86), 25 δείγματα πλάσματος από υγιείς δότες (μέση ηλικία, 54? Εύρος, 29-79), 28 δείγματα ορού από καρκίνωμα του ρινοφάρυγγα ( NPC) ασθενείς (μέση ηλικία, 46? εύρος, 31 έως 80), 29 δείγματα ορού από ορθοκολικό καρκίνωμα (CRC) ασθενείς (μέση ηλικία, 61? εύρος, 30-83), και 30 δείγματα πλάσματος από γαστρικό καρκίνο (GC) ασθενείς (μέση ηλικία, 66? εύρος, 33 – 83), συλλέχθηκαν στο CGMH, Lin-Κου, Ταϊβάν. Δείγματα αυτών των δειγμάτων αποθηκεύτηκαν στους -80 ° C μέχρι τη χρήση. Η έρευνα αυτή ακολούθησε τις αρχές της Διακήρυξης του Ελσίνκι και όλα τα θέματα που υπέγραψαν εν επιγνώσει συναίνεση που εγκρίθηκε από την επιτροπή δεοντολογίας του Chang Gung Memorial Hospital ή Ταϊπέι Γενικού Νοσοκομείου Βετεράνων, την Ταϊβάν πριν από τη συμμετοχή τους σε αυτή τη μελέτη και τη χρήση των δειγμάτων ιστού ή αίματος που συλλέγονται πριν από τη θεραπεία.

κυτταρική καλλιέργεια

Οι κυττάρων PC γραμμές BxPC-3, ΜΙΑ PaCa-2, PANC-1 και AsPC-1 αγοράστηκαν από Bioresource Συλλογή και Ερευνητικό Κέντρο (Hsinchu, Ταϊβάν) . BxPC-3 και AsPC-1 διατηρήθηκαν σε 10% εμβρυϊκό βόειο ορό (FBS, Biological Industries, Israel) με συμπλήρωμα από RPMI-1640 (Invitrogen, CA, USA). ΜΙΑ PaCa-2 και PANC-1 διατηρήθηκαν σε μέσο Dulbecco τροποποιημένο Eagle (ϋΜΕΜ? Invitrogen) με 10% FBS συν 2,5% ορό αλόγου (Biological Industries) και 10% FBS, αντίστοιχα. Οι τέσσερις κυτταρικές σειρές καλλιεργήθηκαν στους 37 ° C σε υγροποιημένη 5% CO

2 περιβάλλοντος.

Δημιουργία secretome σύνολο δεδομένων των κυτταρικών σειρών καρκίνου του

Οι μέθοδοι που χρησιμοποιούνται για την παρασκευή των καρκινικών κυττάρων ρυθμισμένο μέσο (CM) και secretome προφίλ περιγράφηκαν προηγουμένως [20], καθώς και λεπτομερή στα Υλικά και Μέθοδοι S1.

αναζήτηση της βάσης δεδομένων Δημόσιος τομέας για προφίλ έκφρασης επιλεγμένων γονιδίων στόχων

Τα προφίλ έκφρασης του εκκρινόμενες πρωτεΐνες σε ιστούς PC αναζητήθηκαν στο National Center for Biotechnology Information (NCBI) έκφραση γονιδίων βάση δεδομένων Omnibus (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/). Το σύνολο δεδομένων GSE1542 επελέγη για την αναγνώριση υποψήφιων γονιδίων με αυξημένα επίπεδα έκφρασης σε κύτταρα PC [21]. Το σύνολο δεδομένων GSE1542 περιέχει τα προφίλ γονιδιακής έκφρασης του παγκρεατικού πόρου κυττάρων που απομονώνονται από 24 ασθενείς με αδενοκαρκίνωμα του παγκρέατος πόρου και 25 δότες με ένα κανονικό πάγκρεας [21]. Οι μέσες εντάσεις κάθε ανιχνευτή γονιδίου σε υγιή και καρκινικό ομάδες υπολογίστηκαν για να ληφθεί η Tumor Normal αναλογία /(T /N)? γονίδια με Τ αναλογίες /N ≥ 2 θεωρήθηκαν up-ρυθμιζόμενη υποψηφίων. Ανάμεσά τους, εκείνοι με

p-τιμές

λιγότερο από 0,05 υπολογίζονται

t-test

περαιτέρω επιλεγεί ως τα πιο ελπιδοφόρα υποψήφιοι για αυξημένη έκφραση σε καρκινικούς ιστούς.

Δυτική blot ανάλυση

οι πρωτεΐνες σε εκχυλίσματα κυττάρων και CM διαχωρίστηκαν με SDS-PAGE, μεταφέρθηκαν σε μεμβράνες PVDF (Millipore, ΜΑ, USA), και ανιχνεύθηκαν με αντισώματα έναντι αυξητικός παράγοντας μεταμόρφωσης-β επαγόμενη πρωτεΐνη IG-H3 ( BIGH3) (1:1000 αραίωση? Santa Cruz Biotechnology, CA, USA), ULBP2 (1:1000 αραίωση? Ε & amp? D Systems, MN, USA) ή α-τουμπουλίνης (1:10000 αραίωση? Millipore). Οι πρωτεΐνες που ενδιαφέρουν ανιχνεύθηκαν με επώαση για 1 ώρα με την υπεροξειδάση αρμορακίας κατάλληλο (HRP) δευτερεύοντα αντισώματα (Santa Cruz Biotechnology), και οπτικοποιήθηκε χρησιμοποιώντας ένα ενισχυμένο σύστημα χημειοφωταύγειας (PerkinElmer, ΜΑ, USA).

Ανοσοϊστοχημεία

Η ανοσοϊστοχημική χρώση πραγματοποιήθηκε με αντισώματα ενάντια BIGH3 (1:100 αραίωση? Santa Cruz Biotechnology) και ULBP2 (1:20 αραίωση? Κ &? D Systems). Τα πρωτόκολλα χρώσης που περιγράφονται στο Υλικά και Μέθοδοι S1. Έκφραση των πρωτεϊνών στόχων αξιολογήθηκε σύμφωνα με το απλοποιημένο σύστημα βαθμολογίας Η, το οποίο βασίζεται στην ένταση της χρώσης των κυττάρων (3, ισχυρή? 2, μέτρια? 1, αδύναμη? 0, δεν χρώση κυττάρων) και του ποσοστού σήμανσης κυττάρων [3 , ≥90%? 2, 50-89%? 1, 10-49%? 0, 0-9%)]. Οι δύο βαθμολογίες πολλαπλασιάστηκαν και στη συνέχεια να διαιρείται δια 3 για να πάρει το τελικό σκορ. Θετική χρώση ορίστηκε ως τελικό σκορ ≥0.67 [22], [23]

Ορός αναλύει

Ορός BIGH3 και CA 19-9 επίπεδα καθορίστηκαν χρησιμοποιώντας τα κιτ ELISA από την R & amp?. Δ Συστήματα και Alpha Diagnostic (TX, USA), αντίστοιχα, σύμφωνα με τις οδηγίες του εκάστοτε κατασκευαστή. Για τον προσδιορισμό της συγκέντρωσης στον ορό ULBP2, ο ανοσοπροσδιορισμός in-house σάντουιτς ELISA και με βάση σφαιρίδια καθιερώθηκαν στο εργαστήριο μας (βλέπε Υλικά και Μέθοδοι S1 για λεπτομέρειες).

Στατιστική ανάλυση

Οι διαφορές στην ανοσοϊστοχημική βαθμολογίες και τα επίπεδα των πρωτεϊνών-στόχων μεταξύ των ομάδων ορού εξετάστηκαν χρησιμοποιώντας είτε τη δοκιμασία Wilcoxon ή τεστ Kruskal-Wallis. Συσχετίσεις μεταξύ των επιπέδων των πρωτεϊνών στόχων ορού υπολογίστηκαν με βάση τη συσχέτιση Pearson, και ανοσοϊστοχημική δεκάδες ζεύγη δειγμάτων από το ίδιο θέμα συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας ζεύγη

t

-ΜΕΛΕΤΕΣ. χειριστής Δέκτης χαρακτηριστικό (ROC) καμπύλες κατασκευάσθηκαν με γραφική παράσταση της ευαισθησίας έναντι 1-ειδικότητα και περιοχές υπό τις καμπύλες ROC (AUCs) αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας τη μέθοδο Hanley και McNeil. Όλες οι δοκιμασίες ήταν δύο όψεων, και

σ

-τιμή & lt? 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική. Όλα τα δεδομένα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με τη χρήση SPSS έκδοση λογισμικού 13.0 (IL, USA).

Αποτελέσματα

Secretome ανάλυση των δύο παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές σειρές

Για να ανακαλύψετε πιθανούς βιοδείκτες PC στον ορό, τα εκκρινόμενες πρωτεΐνες κυτταρικών σειρών PC ήταν συστημικά αναλύθηκαν. Η σχηματική αναπαράσταση του διαγράμματος ροής που χρησιμοποιείται απεικονίζεται στο Σχ. 1Α. Οι πρωτεΐνες που υπάρχουν στο 24 h χωρίς ορό CM κυττάρων BxPC-3 και ΜΙΑ PaCa-2 διαχωρίστηκαν με SDS-PAGE, ορατές με χρώση Coomassie blue (Σχ. 1Β, άνω πάνελ), κομμένη σε 40 κλάσματα, πέψη ατομικά με τρυψίνη και αναλύθηκε με C-18 αντίστροφης φάσης υγρή χρωματογραφία-διαδοχική φασματομετρία μάζας (LC-MS /MS). Το πρότυπο χρώσης πρωτεΐνη του κυτταρικού λύματος φαίνεται επίσης στο παράλληλο να αποδείξει ότι οι εκκρινόμενες πρωτεΐνες εμπλουτισμένο στο CM, και το μοτίβο της ήταν πολύ διαφορετική από εκείνη που παράγεται από ενδοκυτταρικές πρωτεΐνες (Εικ. 1 Β, άνω πίνακας). Η κατανομή της κυτοσολικής πρωτεΐνης, αλφα-τουμπουλίνης, εξετάστηκε περαιτέρω ως έλεγχος. Αλφα-τουμπουλίνης ήταν σαφώς ανιχνεύθηκε στα κυτταρικά εκχυλίσματα, αλλά όχι στο CM (Σχ. 1Β, κάτω πλαίσιο), υποδεικνύοντας ότι οι πρωτεΐνες που ανακτώνται από το CM δεν οφειλόταν σε κυτταρικό θάνατο.

(Α), το στρατηγική αποτελείται από secretome καρκίνο και την ανάλυση tranacriptome ιστού. (Β), οι πρωτεΐνες (50 μg) σε CM και κυτταρικά εκχυλίσματα (CE) των καρκινικών κυττάρων αναλύθηκαν με 10% SDS-PAGE και χρωματίστηκαν με Coomassie blue (άνω πάνελ) ή υποβλήθηκαν σε ανάλυση ανοσοστυπώματος με άλφα-τουμπουλίνης (κάτω πάνελ ). (C), η ανάλυση ανοσοστυπώματος με αντι-BIGH3 και ULBP2 αντισώματα.

Η

Μετά από αναζήτηση με αλγόριθμο μασκότ και τον καθορισμό ενός αποκοπής του 95,0% πεπτιδίου πιθανότητα και το 95,0% πιθανότητα πρωτεΐνη στο λογισμικό ικριωμάτων, 1011 και 1141 οι πρωτεΐνες με πολλαπλές (≥2) πεπτίδιο επιτυχίες βρέθηκαν στο BxPC-3 και ΜΙΑ PACA-2 CM, αντίστοιχα (Βάθρα S1 και S2), με αποτέλεσμα 1427 μη περιττές και 725 επικάλυψη πρωτεϊνών.

Δημιουργία κατάλογο υποψήφιων βιοδεικτών για

ανίχνευση PC

για να περιορίσετε τον κατάλογο υποψήφιων ουσιών, τα επίπεδα έκφρασης των κοινών 725 πρωτεϊνών στα κύτταρα παγκρεατικού πόρου εξετάστηκαν σε μια ανάλυση της σειράς που βασίζεται δημοσιεύθηκε από Ishikawa et al. [21], με την οποία σε σύγκριση γονιδιακής έκφρασης σε κύτταρα παγκρεατικού πόρου που προέρχονται από 24 ασθενείς παγκρεατικού πόρου αδενοκαρκίνωμα και 25 δότες με ένα κανονικό πάγκρεας (Σχ. 1Α). Αυτή η ανάλυση αποκάλυψε ότι 10 από τις πρωτεΐνες 725 ήταν σημαντικά ρυθμισμένη προς τα πάνω (≥2 φορές υπερ-έκφραση,

ρ

& lt? 0,05) σε καρκίνωμα παγκρεατικού πόρου σε σύγκριση με τα μη-καρκινικά κύτταρα παγκρεατικού πόρου (Πίνακας 1). Μεταξύ αυτών, σερουλοπλασμίνη έχει επιβεβαιωθεί ότι υπερεκφράζεται σε ιστούς PC [24], και αυξημένο επίπεδο ERO1 πρωτεΐνη παρόμοια άλφα ορού έχει αναφερθεί σε ασθενείς PC σύγκριση με υγιείς μάρτυρες [17], υποδεικνύοντας ότι η συνδυασμένη ανάλυση της secretome και το μεταγραφικό είναι μια εφικτή στρατηγική για την ανακάλυψη νέων δεικτών υποψήφιο PC.

η

η υπερέκφραση του ULBP2 και BIGH3 στους ιστούς PC

Εστιάσαμε την προσοχή μας σε ULBP2 και BIGH3 ως πιθανοί δείκτες PC (Πίνακας 1) επειδή ένας άλλος ανάλυση της σειράς που βασίζεται είχαν επίσης δείξει ότι τα επίπεδα του mRNA τους ήταν σημαντικά αυξημένα σε ιστούς PC [25], και ούτε είχαν ακόμη μελετηθεί σε PC. Επιβεβαιώσαμε την παρουσία BIGH3 και ULBP2 στο CM συλλέγονται από τέσσερις κυτταρικές σειρές PC (BxPC-3, ΜΙΑ PaCa-2, PANC-1 και AsPC-1) με ανάλυση Western Blot (Σχ. 1 C). Περαιτέρω ανοσοϊστοχημικές αναλύσεις έδειξαν θετική χρώση για BIGH3 και ULBP2 σε 41,9% (13/31) και 100,0% (67/67), αντίστοιχα, τομών ιστού PC. Επιθεώρηση του κάθε τμήματος ιστού που περιέχει τόσο μη καρκινικά και καρκινικά πορογενές ιστούς αποκάλυψε υψηλότερη έκφραση και των δύο πρωτεϊνών στα καρκινικούς ιστούς σε σύγκριση με τις μη-καρκινικές ομολόγους στις περισσότερες από τις τομές ιστών που εξετάστηκαν (Σχήμα 2Α?. Υποστηρικτικά Σχήματα S1 και S2). Οι ανοσοϊστοχημικές βαθμολογίες των δύο πρωτεϊνών σε ιστούς όγκων ήταν στατιστικά υψηλότερες από εκείνες των μη-καρκινικές ομολόγους: 0,54 ± 0,46 έναντι 0,14 ± 0,27 για BIGH3 (

σ

& lt? 0.0001) και 2,71 ± 0,49 έναντι 1,89 ± 0,74 για ULBP2 (

σ

& lt? 0.0001) (Σχήμα 2Β.). Περαιτέρω αναλύσεις έδειξαν ότι τα επίπεδα έκφρασης τους σε ιστούς όγκων δεν ήταν στατιστικά που σχετίζονται με την ηλικία, το φύλο, η ιστολογική βαθμό, συνολικά το στάδιο του όγκου, ή όγκου-node-μετάσταση (TNM) ταξινόμηση του καρκίνου του παγκρέατος (Βάθρα S3 και S4).

(Α), Ανοσοϊστοχημική χρώση για BIGH3 (αριστερό πάνελ) και ULBP2 (δεξί πάνελ) σε ζεύγη pericancerous παρακείμενες μη-καρκινικές (κατώτερο πάνελ) και όγκου (άνω πάνελ) ιστούς. μπαρ κλίμακα, 100 μm. Αρχική μεγέθυνση, × 400. (Β), Box-οικόπεδο ανάλυση των ανοσοϊστοχημική χρώση βαθμολογίες σε ζεύγη γειτονικών μη-καρκινικές (AN) και του όγκου των ιστών. Το πλαίσιο δείχνει την 25

ου και 75

ου εκατοστημόρια της σειράς δεδομένων? η μεσαία γραμμή δείχνει τη μέση? η διακεκομμένη γραμμή δείχνει την μέση κατανομή του 90%.

Η

Τα επίπεδα ορού της BIGH3 και ULBP2 σε ασθενείς PC

Για την αξιολόγηση του δυναμικού της BIGH3 και ULBP2 ως δείκτες PC ορού, εξετάσαμε τους επίπεδα σε ορούς από ασθενείς PC (n = 154) και των υγιών μαρτύρων (n = 142). Μετρήσαμε τα επίπεδα BIGH3 ορού χρησιμοποιώντας ένα εμπορικό κιτ ELISA και καθοριζόμενα επίπεδα ULBP2 ορού χρησιμοποιώντας μια ανοσοδοκιμασία με βάση σφαιρίδια αναπτύχθηκε στο εργαστήριο μας, που είναι ικανή να ανιχνεύει τα τυπικά πολύ χαμηλά επίπεδα ULBP2 ορού (& lt? 1 ng /mL), που δεν θα μπορούσε να είναι μετρηθεί με ακρίβεια με τη χρήση in-house μας σάντουιτς ELISA. ανοσολογική δοκιμή με βάση σφαιρίδια μας θα μπορούσε με ακρίβεια να ανιχνεύσει επίπεδα ULBP2 σε ένα εύρος από 4.3 pg /mL έως 31,9 ng /mL (Υποστήριξη Εικόνα S3). Βρήκαμε ότι τα επίπεδα στον ορό του ULBP2, αλλά δεν BIGH3, ήταν σημαντικά αυξημένα σε ασθενείς PC σε σύγκριση με εκείνα των υγιών μαρτύρων: 1,87 ± 1,67 έναντι 1,29 ± 0,49 μg /mL για BIGH3 (

σ

= 0.328? Σχήμα 3Α) και 200,2 ± 168,6 έναντι 51,4 ± 64,6 pg /mL για ULBP2 (

ρ

& lt?. 0.0001? Εικ. 3Β). Χρησιμοποιώντας μια τιμή αποκοπής 60 pg /mL για ULBP2, βρήκαμε ότι οι τιμές ευαισθησία και ειδικότητα για την ανίχνευση του καρκίνου ήταν 83,8% και 73,9%, αντίστοιχα. Ορός BIGH3 και τα επίπεδα ULBP2 δεν βρέθηκε στατιστικώς σημαντική συσχέτιση με την ηλικία, το φύλο, η ιστολογική βαθμό, συνολικά το στάδιο του όγκου, ή ΤΝΜ ταξινόμηση των PC σε αυτή τη μελέτη ασθενών-μαρτύρων (Στήριξη Πίνακας S5). Αυτά τα ευρήματα υποδεικνύουν ότι ULBP2 θα μπορούσε να είναι ένα νέο δείκτη ορού για ανίχνευση PC.

Τα επίπεδα του BIGH3 (Α), ULBP2 (Β), και CA 19-9 (C) στον ορό μετρήθηκαν σε 154 ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος (PC) και 142 υγιείς μάρτυρες (Ctrl). Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως οικόπεδα ασφαλείας. (D), η καμπύλη ROC ανάλυση της ικανότητας των BIGH3, ULBP2, CA 19-9, και ο πίνακας δύο σήμανσης περιλαμβάνει ULBP2 και CA 19-9 να διακρίνει τους ασθενείς PC από τους ελέγχους.

Η

Η αποτελεσματικότητα του ULBP2 και CA 19-9 για τη διαλογή PC

τα επίπεδα ορού του CA 19-9, μια που χρησιμοποιείται σήμερα βιοδείκτη PC στον ορό, επιπροσθέτως προσδιορίστηκαν στα ίδια δείγματα. Βρήκαμε ότι τα επίπεδα CA 19-9 στον ορό ήταν υψηλότερες σε ασθενείς υπολογιστή από ό, τι στους υγιείς μάρτυρες (63,4 ± 24,4 έναντι 28,3 ± 20,2 U /mL,

σ

& lt? 0,0001, Σχήμα 3C.)? όπως ULBP2, CA 19-9 επίπεδα δεν συσχετίστηκαν με κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά (Στήριξη Πίνακας S5). Περαιτέρω ανάλυση έδειξε ότι δεν υπήρχε συσχέτιση μεταξύ των δύο μορίων στην ομάδα των ασθενών (r = 0.061,

σ

= 0.453 από Pearson συσχέτιση? Στήριξη Σχήμα S4). Στα 40 U /mL, η τιμή αποκοπής που εφαρμόζονται επί του παρόντος για τη διαλογή PC, οι τιμές ευαισθησία και ειδικότητα για CA 19-9 ήταν 84,4% και 74,6%, αντίστοιχα. Αξίζει να σημειωθεί ότι, εφαρμόζοντας μια τιμή αποκοπής των 60 pg /mL για ULBP2, ήμασταν σε θέση να διακρίνουν 21 από τους 24 ασθενείς PC με CA 19-9 επίπεδα & lt? 40 U /mL από υγιή άτομα. Επιπλέον, 24 από 36 υγιή άτομα με CA 19-9 επίπεδα & gt? 40 U /mL θα μπορούσε να διακριθεί περαιτέρω από ασθενείς με βάση τα επίπεδα ULBP2 & lt?. 60 pg /mL

Η χρησιμότητα των ULBP2 και CA 19 -9 ως δείκτες ανίχνευσης ελέγχθηκε περαιτέρω με την εφαρμογή μιας ανάλυσης καμπύλης ROC. Αυτή η ανάλυση έδειξε ότι ULBP2 (AUC = 0.862? 95% διάστημα εμπιστοσύνης [CI], 0,821 – 0,904) εκτελούνται ελαφρώς καλύτερη από CA 19-9 (AUC = 0.856? 95% CI, 0,809 – 0,902) ως δείκτης διαλογής (Σχ. 3D). Το πιο σημαντικό, ένα μοντέλο λογιστικής παλινδρόμησης [26] έδειξε ότι η διαγνωστική ικανότητα του συνδυασμού ULBP2 και CA 19-9 ήταν μεγαλύτερη από εκείνη των δύο δείκτη μόνον (AUC = 0.910? 95% CI, 0,877 έως 0,943? Εικ. 3D) . Συλλογικά, αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι ULBP2 θα μπορούσε να είναι ένα χρήσιμο δείκτη PC στον ορό, ειδικά όταν χρησιμοποιείται μαζί με το CA 19-9.

Η καταλληλότητα των ULBP2 και CA 19-9 για PC

έγκαιρη ανίχνευση

στη συνέχεια αξιολογείται η καταλληλότητα ULBP2 ως δείκτης πρώιμης ανίχνευσης του PC από τα επίπεδα ULBP2 δοκιμές του ορού σε ασθενείς με πρωτογενείς όγκους πρώιμου σταδίου (ΤΝΜ-T1 /T2), χωρίς λεμφαδένα μετάσταση (ΤΝΜ-N0), και σε πρώιμα συνολικό όγκο στάδια (στάδιο Ι-ΙΙ). Βρήκαμε ότι τα επίπεδα ULBP2 ορού ήταν σημαντικά υψηλότερα σε ασθενείς με πρωτογενείς όγκους πρώιμου σταδίου (205,7 ± 184,3 pg /ml,

ρ

& lt? 0,0001, η = 34), καμία μετάσταση στους λεμφαδένες (191,6 ± 155,2 pg /mL,

σ

& lt? 0,0001, n = 57), και σε πρώιμο στάδιο συνολικό όγκο (181,2 ± 158,8 pg /mL,

σ

& lt? 0,0001, n = 106) από ό, τι σε υγιείς μάρτυρες (51,4 ± 64,6 pg /mL? n = 142? Εικ. 4Α). Ορός CA 19-9 επίπεδα ήταν επίσης αυξημένα σε πρώιμα στάδια της πρωτογενούς όγκου (56,3 ± 26,9 U /ml,

ρ

& lt? 0,0001), λεμφαδένα μετάσταση (62,1 ± 25,5 U /ml,

ρ

& lt? 0,0001), και η συνολική στάδιο του όγκου (60,7 ± 24,4 U /ml,

ρ

& lt? 0,0001) σε σύγκριση με υγιείς μάρτυρες (28,3 ± 20,2 U /mL, η = 142,) ( Σχ. 4Β). καμπύλη ROC περαιτέρω αναλύσεις έδειξαν ότι ULBP2 ήταν πιο κατάλληλη από την CA 19-9 για διακρίσεις υγιείς μάρτυρες από ασθενείς με PC διαγνωσθεί ως TNM-Τ1 /Τ2 (AUC = 0.854 [95% CI, 0,778 – 0,930] έναντι AUC = 0,796 [95% CI, 0,690 – 0,901]), ΤΝΜ-N0 (AUC = 0.866 [95% CI, 0,811 – 0,920] έναντι AUC = 0,841 [95% CI, 0,764 – 0,917]) ή σταδίου Ι /ΙΙ (AUC = 0.846 [95% CI, 0,798 – 0,895] έναντι AUC = 0.839 [95% CI, 0,782 – 0,896]? Εικ. 4C). Το πιο σημαντικό, ο συνδυασμός των δύο δεικτών ήταν καλύτερο για τη διάκριση μεταξύ υγιών ατόμων και ΤΝΜ-Τ1 /Τ2 (AUC = 0,883? 95% CI, 0,816 – 0,949), ΤΝΜ-N0- (AUC = 0,893? 95% CI, ασθενείς 0,841 – 0,946), ή το στάδιο I /II-PC (AUC = 0,897? 95% CI, 0,856 – 0,937) από κάθε δείκτη μόνο (Σχήμα 4C).. Τα αποτελέσματα αυτά υποδηλώνουν ότι ULBP2 είναι ένα δυνητικά χρήσιμος δείκτης ορού για την έγκαιρη ανίχνευση PC, ιδιαίτερα σε συνδυασμό με το CA 19-9.

ορού επίπεδα ULBP2 (Α) και CA 19-9 (Β) σε υγιείς μάρτυρες ( Ctrl) συγκρίθηκαν με εκείνες σε ασθενείς με πρώιμου σταδίου PC. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως οικόπεδα ασφαλείας. (C), η καμπύλη ROC ανάλυση της ικανότητας των ULBP2 (μαύρη γραμμή), CA 19-9 (διακεκομμένη γραμμή), και ένα συνδυασμό και των δύο πρωτεϊνών (παχιά γραμμή) να διακρίνει τους ασθενείς PC πρώιμου σταδίου από τους ελέγχους.

Τα επίπεδα αίματος ULBP2 σε ασθενείς με άλλους τύπους καρκίνου

για να δοκιμαστεί εάν ULBP2 είναι επίσης ένας δείκτης για άλλες κακοήθεις νόσους, προσδιορίσαμε τα επίπεδα ULBP2 στο αίμα των ασθενών με CRC, NPC και GC. Βρήκαμε ότι τα επίπεδα ULBP2 ορού trended να είναι υψηλότερη σε ασθενείς που υποφέρουν από NPC (65,5 ± 74,3 pg /mL,

σ

= 0.122, n = 28) σε σύγκριση με υγιείς μάρτυρες (51,4 ± 64,6 pg /ml) και ήταν μέτρια, αλλά σημαντικά υψηλότερο σε ασθενείς CRC (70,6 ± 73,8 pg /mL,

σ

= 0.038, n = 29? Εικ. 5Α)? επίπεδα ULPB2 στο πλάσμα δεν ήταν σημαντικά διαφορετική μεταξύ των υγιών ατόμων (86,1 ± 101,2, n = 25) και ασθενείς GC (78,1 ± 79,7 pg /ml, η = 30,

σ

= 0.673? Εικ. 5Β). Ωστόσο, τα επίπεδα ULBP2 ορού εντυπωσιακά αυξημένα σε ασθενείς PC σε σύγκριση με εκείνες του CRC (200,2 ± 168,6 έναντι 70,6 ± 73,8 pg /mL,

σ

& lt? 0.0001) και NPC (200,2 ± 168,6 έναντι 65,5 ± 74,3 pg /mL,

σ

& lt? 0,0001) ασθενείς (Σχήμα 5Α).. Η παρατήρηση ότι τα επίπεδα ULBP2 ήταν αμετάβλητες ή οριακά μόνο αυξημένη σε δύο άλλους γαστρεντερικούς καρκίνους, CRC και GC, δείχνει ότι ULBP2 μπορεί να αντιπροσωπεύουν ένα σχετικά ειδικό δείκτη PC.

(Α), τα επίπεδα ορού ULBP2 στους υγιείς μάρτυρες (Ctrl ) συγκρίθηκαν με εκείνες σε ασθενείς με ρινοφαρυγγικό καρκίνωμα (NPC, n = 28) και ορθοκολικό καρκίνωμα (CRC, n = 29). (Β), τα επίπεδα ULBP2 πλάσματος σε ελέγχους (Ctrl, n = 25) συγκρίθηκαν με εκείνες σε ασθενείς με καρκίνο του στομάχου (GC, n = 30).

Η

Συζήτηση

CA 19 -9 θεωρείται σήμερα ως το πιο εφικτό δείκτη PC στον ορό [27], [28]. Ωστόσο, επειδή CA 19-9 είναι επίσης αυξημένη σε άλλες γαστρεντερικές παθήσεις, συμπεριλαμβανομένης της παγκρεατίτιδας, της ηπατίτιδας, απόφραξη των χοληφόρων, και άλλες γαστρεντερικούς καρκίνους [9], [27], [28], η ειδικότητα του δεν είναι αξιόπιστη. Επιπλέον, δεν εκφράζεται σε άτομα με Lewis α-b- γονότυπο [29], και κακώς διαφοροποιημένα PC φαίνεται να παράγουν λιγότερο CA 19-9 από μετρίως ή καλώς διαφοροποιημένα καρκίνων [28], περιορίζοντας έτσι την ευαισθησία ανίχνευσης της. Σαφώς, η ταυτοποίηση νέων δεικτών PC που καταστρατηγούνται αυτοί οι περιορισμοί θα ήταν μια ευπρόσδεκτη εξέλιξη.

Σε αυτή τη μελέτη, χρησιμοποιήσαμε μια ολοκληρωμένη προσέγγιση, σε συνδυασμό αναλύσεις των κυττάρων PC secretome και μεταγραφικό για την ταυτοποίηση νέων υποψηφίων δείκτη PC, και να παρέχει την πρώτη απόδειξη ότι ULBP2 είναι ένας πιθανός δείκτης ορού νέο υποψήφιο για τη διάγνωση PC. ULBP2 υπερεκφράστηκε σε κύτταρα PC σε σύγκριση με παρακείμενες μη-καρκινικούς ιστούς (Σχ. 2). ανοσοδοκιμασίες με βάση σφαιρίδια πραγματοποιήθηκε με περισσότερα από 150 δείγματα ορού από ασθενείς PC αποκάλυψε ότι τα επίπεδα στον ορό ULBP2 όχι μόνο διάκριση ασθενών από υγιείς δότες, αλλά επίσης κατέδειξαν μεγάλες δυνατότητες για την έγκαιρη ανίχνευση PC (Σχ. 3 και 4). Αν και έχουν αρκετά δυνητικά δείκτες PC στον ορό έχουν αναφερθεί, πολύ λίγοι έχουν δειχθεί να είναι ανώτερη από την CA 19-9 [30], [31]. Είναι σημαντικό, η σύγκριση μας ULBP2 ορού με CA 19-9 σε αυτή τη μελέτη ασθενών-μαρτύρων έδειξε ότι ULBP2 ορού είναι ανώτερη από την CA 19-9 ως πρώιμο διαγνωστικό δείκτη (Εικ. 4). Αυτό το εύρημα είναι ιδιαίτερα σημαντικό υπό το φως του γεγονότος ότι οι περισσότεροι ασθενείς πεθαίνουν PC μέσα σε ένα χρόνο, επειδή δεν έχουν διαγνωστεί έως ότου ο καρκίνος φτάσει σε ένα προχωρημένο στάδιο [1]. Η διαγνωστική και προγνωστική δυναμικό της ULBP2 σε κλινικό περιβάλλον, θα πρέπει να επαληθευθεί με τη χρήση ενός μεγαλύτερου σειρά από δείγματα ορού. Επιπλέον, επιπλέον υποψήφιοι που παρατίθενται στον Πίνακα 1 δεν έχουν μελετηθεί λεπτομερώς για PC, αλλά τα επίπεδα έκφρασης τους θα μπορούσε να εξεταστεί σε ιστούς PC χρησιμοποιώντας Ανθρώπινη Πρωτεΐνη Atlas βάση δεδομένων (ΗΡΑ), το οποίο περιέχει το ανοσοϊστοχημική (IHC) χρώση προφίλ 10.118 πρωτεϊνών σε ένα ποικιλία καρκινικών και μη καρκινικών ιστών βασίζεται σε 13.154 αντισώματα (έκδοση 7.1, https://www.proteinatlas.org/) [32]. Ψάξαμε 8 πρωτεΐνες στη βάση δεδομένων ΗΡΑ και βρήκε 5 από αυτά ανιχνεύθηκαν σε περισσότερο από το 50% των τμημάτων PC εξετάστηκαν. Noteworthily, αλφα-διαλυτή πρωτεΐνη NSF συνημμένο, αννεξίνης Α11, και ERO1 πρωτεΐνη παρόμοια άλφα εκφράστηκαν σε περισσότερο από το 50% των τμημάτων PC με μέτρια έως ισχυρή χρώση IHC (Υποστηρικτικά Πίνακας S6). Αυτές οι τρεις πρωτεΐνες μπορεί να αντιπροσωπεύουν ως πιθανούς βιοδείκτες PC που χρήζουν περαιτέρω διερεύνησης.

Μια συναίνεση έχει συγχωνεύτηκαν γύρω από την ιδέα ότι η αποτελεσματική και ακριβή διάγνωση του καρκίνου σε πρώιμο στάδιο θα βασιστεί πιθανόν σε πίνακες δείκτη που διαθέτουν την καλύτερη εξειδίκευση και ευαισθησία από ό, τι κάθε δείκτη μόνον [26], [33]. Όπως σημειώνεται παραπάνω, CA 19-9 χρησιμοποιείται σήμερα για την ανίχνευση PC, αλλά η χρήση της ως πρωτεύοντα παράγοντα διαλογής είναι προβληματική. Ως εκ τούτου, μια ομάδα δείκτη που συνδυάζεται CA 19-9 με άλλα χρήσιμα δείκτες, όπως ULBP2, θα μπορούσε να ενισχύσει την ικανότητα να εντοπίζει και να παρακολουθεί τον καρκίνο. Πράγματι, ο συνδυασμός των δύο δεικτών εκδήλωσε μια βελτιωμένη διαγνωστική αποτελεσματικότητα σε σύγκριση με την παραδοσιακή προσέγγιση χρησιμοποιώντας CA 19-9 και μόνο, ειδικά σε σχέση με την ανίχνευση των αρχικών σταδίων PC (Εικ. 4).

Αν και ULBP2 έχει έχουν αναφερθεί ως ένα χαρτομάντιλο και προγνωστικός δείκτης ορού για καρκίνο των ωοθηκών [34] και το μελάνωμα [35], αντίστοιχα, πιστεύουμε ότι ULBP2 εξακολουθεί να έχει δυνατότητες ως μια σχετικά ειδική και χρήσιμη δοκιμασία ορού για τη διάγνωση PC. Μια σειρά από γραμμές αποδείξεων υποστηρίζουν αυτό: (α) ULBP2 ορού /επίπεδα στο πλάσμα δεν είναι σημαντικά αυξημένα σε GC, CRC ή NPC ασθενείς σε σύγκριση με υγιή άτομα σε αυτή τη μελέτη? (Β) Li et al. έχουν αναφέρει ότι ULBP2 δεν ήταν ανιχνεύσιμη στον ορό των ασθενών με καρκίνο των ωοθηκών [34]? (Γ) Paschen et al. έδειξε ότι ULBP2 δεν ήταν μετρήσιμη σε περισσότερο από το 20% των δοκιμαζόμενων ορών από ασθενείς με μελάνωμα, ιδιαίτερα σε ασθενείς σε πρώιμα στάδια [35]? και (δ) ULBP2, σε αντίθεση με CA 19-9, δεν φαίνεται να εκφράζεται σε χαμηλότερα επίπεδα στα φτωχά διαφοροποιημένα PC από ό, τι σε μέτρια ή καλά διαφοροποιημένο καρκίνους (Βάθρα S4 και S5). Εντούτοις, η αξιολόγηση του ULBP2 ως παγκρεατικό καρκίνο δείκτης θα απαιτήσει μεγάλης κλίμακας αντι-διαλογή, ιδιαίτερα χρησιμοποιώντας δείγματα ορού από ασθενείς παγκρεατίτιδα.

ULBPs και το μείζον σύμπλεγμα ιστοσυμβατότητας τάξης Ι συνδέονται με αλυσίδα (MIC) είναι κυτταρικής επιφάνειας συνδέτες για κυτταρική εκφράζεται ανοσοϋποδοχέα ΝΚ και Τ (NKG2D) που σπάνια εκφράζονται από φυσιολογικά κύτταρα, αλλά εμφανίζονται σε μια ευρεία ποικιλία κακοηθειών [36], [37]. Αυτά τα προσδέματα μπορεί να ενεργοποιήσει φυσικοί φονείς (ΝΚ) και κυτταροτοξικά Τ κύτταρα με σύνδεση προς το NKG2D, και στη συνέχεια συμβάλλουν στη μεσολάβηση κυττάρων κυτταρόλυση και η κάθαρση του καρκίνου [38], προτείνοντας ότι κύτταρα όγκου που υπερεκφράζουν αυτά τα προσδέματα είναι πιο επιρρεπή σε κύτταρο άνοσο επιτήρηση. Πράγματι, MIC έκφραση έχει περιγραφεί ως δείκτης καλύτερη πρόγνωση σε ασθενείς CRC [39], και την απελευθέρωση των συνδετήρων NKG2D από τα καρκινικά κύτταρα έχει καταδειχθεί προηγουμένως ως νέο μηχανισμό καρκίνο immunoevasion [40], [41]. Έχει πρόσφατα προταθεί ότι η πρωτεολυτική απόπτωση ULBP2 από καρκινικά κύτταρα διαμεσολαβείται από μεταλλοπρωτεάσες μήτρας (ΜΜΡ), και μπορεί να βλάψει την ανοσογονικότητα των καρκινικών κυττάρων [41]. Μέσω της secretome ανάλυση σε αυτή τη μελέτη, διάφοροι ΜΜΡ, συμπεριλαμβανομένης της ΜΜΡ-1, -7, -9, -11, -13, -14, -28 και θα μπορούσε να ανιχνευθεί σε CM από PC κυτταρικές σειρές (Βάθρα S1 και S2) . Επιπλέον, αυξημένη έκφραση των ΜΜΡ-7, -8, -9, -11 και έχουν περιγραφεί σε ιστούς PC? Δύο από αυτά, ΜΜΡ-7 και ΜΜΡ-11, συνδέονται στενά με κακή πρόγνωση του καρκίνου [42]. Αυτές οι παρατηρήσεις συλλογικά υποδηλώνουν ότι τα επίπεδα ULBP2 αυξημένα στον ορό σε ασθενείς PC θα μπορούσε να αντανακλά τη συμμετοχή των πρωτεολυτική διάσπαση από ΜΜΡ απελευθερώνεται από τον ίδιο τον καρκίνο. Με την ενεργοποίηση ΝΚ και κυτταροτοξικά Τ κυτταρική ανοσία, την εξάλειψη της διαλυτής μορφής ULBP2 θα μπορούσε να είναι ένας αποτελεσματικός θεραπευτική στρατηγική σε PC. Αυτή η ενδιαφέρουσα πιθανότητα δικαιολογεί περαιτέρω διερεύνηση.

Εν κατακλείδι, στο παρόν αναφέρουν ότι τα επίπεδα ULBP2 ορού σε ασθενείς PC είναι σημαντικά υψηλότερες από εκείνες των υγιών μαρτύρων. Ο συνδυασμός των ULBP2 και CA 19-9 ξεπέρασε κάθε δείκτη και μόνο σε ασθενείς διακριτικό PC από υγιή άτομα. Το πιο σημαντικό, η ανάλυση της περιοχής κάτω από την καμπύλη ROC έδειξε ότι ULBP2 ήταν ανώτερη CA 19-9 σε διάκριση ασθενείς με πρώιμου σταδίου καρκίνο του παγκρέατος από υγιείς ελέγχους. Έτσι, ULBP2 μπορεί να αντιπροσωπεύει ένα νέο και χρήσιμο ορού βιοδείκτη για την πρωτοβάθμια προσυμπτωματικού ελέγχου για τον καρκίνο του παγκρέατος.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Εικόνα S1.

ανίχνευση της έκφρασης BIGH3 σε 31 παγκρεατικό καρκινικούς ιστούς με ανοσοϊστοχημεία.

doi: 10.1371 /journal.pone.0020029.s001

(PDF)

Εικόνα S2.

ανίχνευση της έκφρασης ULBP2 σε 67 παγκρέατος καρκινικούς ιστούς με ανοσοϊστοχημεία.

doi: 10.1371 /journal.pone.0020029.s002

(PDF)

Εικόνα S3.

πρότυπη καμπύλη ULBP2 καθορίζεται από την ανοσοδοκιμασία με βάση σφαιρίδια που αναπτύχθηκε στο σπίτι.

doi: 10.1371 /journal.pone.0020029.s003

(PDF)

Εικόνα S4.

Συσχέτιση του ορού ULBP2 και τα επίπεδα CA 19-9 στον ορό.

doi: 10.1371 /journal.pone.0020029.s004

(PDF)

Πίνακα S1.

Κατάλογος των πρωτεϊνών που εντοπίζονται στην BxPC-3 ρυθμισμένο μέσο.

doi: 10.1371 /journal.pone.0020029.s005

(PDF)

Πίνακας S2.

Κατάλογος των πρωτεϊνών που εντοπίζονται στην ΜΙΑ PaCa-2 ρυθμισμένο μέσο.

doi: 10.1371 /journal.pone.0020029.s006

(PDF)

Πίνακα S3.

Συσχέτιση μεταξύ κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά και έκφραση BIGH3 σε τομές ιστών από 31 ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος.

doi: 10.1371 /journal.pone.0020029.s007

(PDF)

Πίνακας S4.