Αφηρημένο

Ιστορικό

Η καχεξία επηρεάζει την πλειοψηφία των ασθενών με προχωρημένο καρκίνο και συνδέεται με μια μείωση στην ανοχή της θεραπείας , απόκριση στη θεραπεία, και τη διάρκεια της επιβίωσης. Ένα εμπόδιο για την αποτελεσματική αντιμετώπιση της καχεξίας είναι ένα επικυρωμένο σύστημα ταξινόμησης.

Μέθοδοι

41 ασθενείς με χειρουργικά εξαιρέσιμων ανώτερου γαστρεντερικού (GI) ή καρκίνο του παγκρέατος υποβλήθηκε χαρακτηρισμός για την καχεξία βασίζεται στην απώλεια βάρους (WL ) και /ή χαμηλή μυϊκή ρώμη (LM). Τέσσερα διαγνωστικά κριτήρια χρησιμοποιήθηκαν & gt? 5% WL, & gt? 10% WL, LM, και LM + & gt? 2% WL. Όλοι οι ασθενείς υποβλήθηκαν σε βιοψία του ορθού μυός. Ανάλυση περιλαμβάνονται ανοσοϊστοχημεία για το μέγεθος των ινών και το είδος, η πρωτεΐνη και η συγκέντρωση νουκλεϊνικών οξέων, κηλίδες Western για τους δείκτες της αυτοφαγία, σηματοδότησης SMAD, και φλεγμονή.

Ευρήματα

Σε σύγκριση με τους ασθενείς με καρκίνο μη καχεκτικά, οι ασθενείς με LM ή LM + & gt? 2% WL, μέση διάμετρος των μυϊκών ινών μειώθηκε κατά περίπου 25% (ρ = 0,02 και ρ = 0,001 αντίστοιχα). Δεν παρατηρήθηκε σημαντική διαφορά στη διάμετρο ίνας παρατηρήθηκε εάν οι ασθενείς είχαν μόνο του WL. Ανεξάρτητα από την ταξινόμηση, δεν υπήρχε διαφορά στον αριθμό των ινών ή της αναλογίας των ινών τύπου σε όλες τις ισομορφές βαριά αλυσίδα μυοσίνης. Η μέση περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη των μυών ήταν μειωμένη και η αναλογία του RNA /DNA μειώνεται σε ασθενείς με είτε & gt? 5% WL ή LM + & gt? 2% WL. Σε σύγκριση με μη καχεκτικούς ασθενείς, τα επίπεδα πρωτεΐνης Smad3 αυξήθηκαν σε ασθενείς με & gt? 5% WL (p = 0,022) και με & gt? 10% WL, Beclin (p = 0.05) και ATG5 (p = 0.01) επίπεδα πρωτεΐνης αυξήθηκαν . Δεν υπήρχαν διαφορές στα φωσφο-NFkB ή επίπεδα φωσφο-STAT3 σε όλη οποιαδήποτε από τις ομάδες.

Συμπέρασμα

μέγεθος μυϊκών ινών, βιοχημική σύνθεση και φαινότυπο οδός μπορεί να ποικίλει ανάλογα με το αν τα διαγνωστικά κριτήρια για καχεξία βασίζονται στην απώλεια βάρους και μόνο, ένα μέτρο της χαμηλής μυϊκότητα μόνο του ή σε συνδυασμό των δύο. Για μελέτες παρέμβασης, όπου το πρωταρχικό καταληκτικό σημείο είναι μια αλλαγή στη μυϊκή μάζα ή τη λειτουργία, τη χρήση των συνδυασμένων διαγνωστικά κριτήρια μπορούν να επιτρέψουν την ταυτοποίηση ενός πιο ομοιογενή ομάδα ασθενών, να μειώσει το μέγεθος του δείγματος που απαιτούνται και να ενισχύσει την κλίμακα χρόνου εντός του οποίου μπορεί να διεξαχθεί δοκιμές.

Παράθεση: Johns Ν, Hatakeyama S, Stephens NA, Degen Μ, Degen S, Frieauff W, et al. (2014) Κλινική Ταξινόμηση της καρκινικής καχεξίας: Φαινοτυπικής Correlates σε ανθρώπινο σκελετικό μυ. PLoS ONE 9 (1): e83618. doi: 10.1371 /journal.pone.0083618

Επιμέλεια: Imed Eddine Gallouzi, το Πανεπιστήμιο McGill, Καναδάς

Ελήφθη: 2 του Οκτώβρη, 2013? Αποδεκτές: 5 Νοέμ 2013? Δημοσιεύθηκε: 3 Ιανουαρίου του 2014

Copyright: © 2014 Johns et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Οι συγγραφείς «έλαβε μια μικρή επιχορήγηση από το Royal College of Surgeons: https://www.rcsed.ac.uk/fellows-members/awards-and-grants/grants/small-research-grants.aspx. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Shinji Hatakeyama, Martin Degen, Simone Degen, Wilfried Frieauff, Christian Lambert, Ronenn Roubenoff , David Γυαλί και Carsten Jacobi είναι όλοι οι εργαζόμενοι της Novartis. Όσον αφορά τους υπαλλήλους της Novartis, αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων σε όλες τις PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών.

Εισαγωγή

καχεξία του καρκίνου έχει οριστεί πρόσφατα ως μια πολυπαραγοντική σύνδρομο που χαρακτηρίζεται με συνεχή απώλεια της μάζας του σκελετικού μυός (με ή χωρίς απώλεια λίπους μάζας) που δεν μπορεί να αναστραφεί πλήρως με συμβατική διατροφική υποστήριξη και οδηγεί σε προοδευτική λειτουργικές διαταραχές [1]. Η καχεξία επηρεάζει την πλειοψηφία των ασθενών με προχωρημένο καρκίνο και συνδέεται με μια μείωση στην ανοχή θεραπεία, η απόκριση στη θεραπεία, την ποιότητα ζωής και η διάρκεια της επιβίωσης. Σκελετικός απώλεια μυών φαίνεται να είναι το πιο σημαντικό γεγονός στην καρκινική καχεξία και συνδέεται με κακή έκβαση [1], [2]. Η διεθνής συναίνεση σχετικά με την ταξινόμηση της καχεξίας καρκίνου πρότεινε ότι τα διαγνωστικά κριτήρια θα πρέπει να λαμβάνει υπόψη όχι μόνο ότι η απώλεια βάρους είναι μια εκδήλωση σήμα της διαδικασίας καχεκτικό, αλλά ότι η αρχική αποθεματικό του ασθενούς θα πρέπει επίσης να εξεταστεί (είτε χαμηλό ΔΜΣ ή χαμηλό επίπεδο των μυϊκή ρώμη). Παρά το γεγονός ότι η τελευταία αυτή έννοια έχει κάποια επικύρωση από την άποψη του κλινικού κινδύνου [2], δεν υπήρξε αξιολόγηση των βιολογικών συσχετισμοί όσον αφορά τις αλλαγές στο εσωτερικό της ίδιας σκελετικών μυών.

Ανθρώπινο σκελετικούς μυς αποτελείται από μυϊκές ίνες που είναι ταξινομούνται ανάλογα με την ταχύτητα τους συστολής και κυρίαρχο τύπο του ενεργειακού μεταβολισμού. Μυϊκές ίνες μπορεί να χαρακτηριστεί ως τύπου Ι (βραδείας συστολής) και τύπου ΙΙ (ταχείας συστολής) ίνες με βάση το περιεχόμενο ισομορφή τους κυρίαρχη μυοσίνης βαριά αλυσίδα (MyHC). Σε γενικές γραμμές, τύπου Ι και τύπου ΙΙα ινών χρησιμοποιούν την οξειδωτική φωσφορυλίωση, ενώ πληκτρολογήστε IIx και IIb ίνες αξιοποιήσει κυρίως αναερόβιου μεταβολισμού να παράγει ΑΤΡ. Τόσο το ποσοστό και τις διαρθρωτικές μορφολογία του τύπου ίνας θα καθορίσει την φαινοτυπική ικανότητα και λειτουργική απόδοση της κάθε δεδομένη μυών. Περιβαλλοντικοί παράγοντες τόσο για την υγεία και την ασθένεια έχουν άμεσο αντίκτυπο που οδηγούν σε αλλαγές στο είδος ίνας /μορφολογία και την επακόλουθη λειτουργικότητα? τέτοιες διεργασίες περιλαμβάνουν τη γήρανση, την άσκηση, τη χρόνια νόσο, και καχεξία [3] – [7]. Η αλλαγή, διατήρηση ή απώλεια ινών μπορεί να επηρεάσει τα κλινικά συμπτώματα και υπάρχουν κάποιες ενδείξεις ότι όλοι οι τύποι MyHC στοχεύεται εκλεκτικά στην καρκινική καχεξία [8]. Συνεχίζεται απώλεια πρωτεΐνης στο μυϊκό ιστό μπορεί να οδηγήσει σε συρρίκνωση των μυϊκών ινών και τη μείωση του εμβαδού διατομής (CSA). Επίσης, η απώλεια των μυϊκών ινών CSA μπορεί να οδηγήσει σε απώλεια της αερόβιας ικανότητας (VO

2 max) σε υγιή άτομα καθώς και ασθενείς με καρκίνο [5], [9].

Αν και συστηματική φλεγμονή θεωρείται γενικά να είναι ένας σημαντικός μεσολαβητής ανάντη της καχεξίας καρκίνου του [10], ο ακριβής μοριακοί μηχανισμοί που μεσολαβούν τις μεταβολές στη σύνθεση πρωτεϊνών και την υποβάθμιση που τελικά οδηγούν σε ατροφία των μυϊκών ινών σε καχεξία καρκίνου σε ανθρώπους δεν είναι γνωστές. Για κάθε ζώο μοντέλο που έχει μελετηθεί, έχουν διαφορετικές οδούς εμπλακεί. Από μια τέτοια ζωικά μοντέλα υπάρχει μια κυρίαρχη εντύπωση ότι η αυξημένη αποδόμηση μέσω της ενεργοποίησης του μονοπατιού ουβικουϊτίνης πρωτεασώματος (UPP) είναι σημαντική [10]. Σε αντίθεση, η ανθρώπινη δεδομένα είναι πολύ περιορισμένη. Η ενεργοποίηση της πρωτεϊνικής αποδόμησης μέσω του UPP δεν έχει ένα σταθερό εύρημα [11] [12]. Αυτό έχει οδηγήσει σε προτάσεις ότι αυτοφαγία μπορεί να είναι σημαντική ή ότι οδούς που μπορεί να επηρεάσουν τόσο τη σύνθεση και την υποβάθμιση μπορεί να είναι σημαντικές (π.χ. TGF-β /SMAD σηματοδότηση) [13].

Στην παρούσα μελέτη επιλέξαμε να αξιολογήσει η σχέση μεταξύ των διαφόρων ορισμών καχεξίας, συστηματική φλεγμονή (C-αντιδρώσα πρωτεΐνη ορού) και δυνητικές οδούς σηματοδότησης φλεγμονής εντός μυών (φωσφο-STAT3 και φωσφο-NFkB). Εξετάσαμε επίσης για πιθανές συσχετίσεις μεταξύ των διαφόρων ορισμών καχεξία και την ενεργοποίηση των οδών αυτοφαγία ή TGF-β σηματοδότηση /SMAD.

Ο στόχος αυτής της μελέτης ήταν να διερευνήσει τις αλλαγές στο μυϊκό βιολογία ινών σε σχέση με την μορφολογική δομή και σύνθεση, για να μελετήσει τις μεταβολές σε διάφορες οδούς που μπορεί να ευθύνεται για αλλαγμένο μέγεθος των ινών και των αλλαγών αυτών με τα διάφορα διαγνωστικά κριτήρια που έχουν προταθεί ως μέρος της πρόσφατης διεθνούς συναίνεσης σχετικά με την ταξινόμηση της καχεξίας καρκίνου [1].

Υλικά και Μέθοδοι

Πρόσληψη ασθενούς, Ταυτοποίηση, συναίνεση και Ηθική

οι ασθενείς με χειρουργικά εξαιρέσιμων νόσο και είναι κατάλληλο για τη μελέτη εντοπίστηκαν μέσω του ανώτερου γαστρεντερικού καρκίνου διεπιστημονική ομάδα (MDT) συνεδριάσεις το Royal Infirmary, Εδιμβούργο, Ηνωμένο Βασίλειο. Γραπτή συγκατάθεση δόθηκε πριν από την έναρξη της μελέτης. Όλες οι διαδικασίες εγκρίθηκαν από την τοπική επιτροπή δεοντολογίας στην έρευνα NHS Lothian. Η μελέτη ήταν σύμφωνα με τα πρότυπα που ορίζονται από τη Διακήρυξη του Ελσίνκι.

Υπολογισμός της απώλειας βάρους

Pre-νοσηρή βάρος ανακλήθηκε από τον ασθενή και επαλήθευσε όπου είναι δυνατόν από τις ιατρικές σημειώσεις. Παρά το γεγονός ότι μπορεί να υπάρχει προκατάληψη ανάκληση, στοιχεία που να υποστηρίζουν την αξιοπιστία της αυτο-αναφερθεί το βάρος και την ιστορία βάρος [14], [15] είναι καλά τεκμηριωμένη. Ατομική απώλεια βάρους υπολογίστηκε και εκφράστηκε ως ποσοστό των προ-νοσηρή βάρος σώματος χάνεται

Η κατάταξη του Καρκίνου καχεξία

Η απώλεια βάρους & gt?. 5% κατά τους τελευταίους 6 μήνες (σε περίπτωση απουσίας των απλών πείνα) (WL & gt? 5%)

Η απώλεια βάρους & gt? 10% κατά τους τελευταίους 6 μήνες (σε περίπτωση απουσίας των απλών πείνα) (WL & gt? 10%)

προσαρμοστεί Ανάστημα δείκτη σκελετικών μυών συνεπής με χαμηλή μυϊκή ρώμη (LM) (βλέπε «ανάλυσης CT-εικόνα» για cut-offs)

Ανάστημα προσαρμοστεί σκελετικών δείκτη μυών συνεπής με χαμηλή μυϊκή ρώμη και κάθε βαθμός απώλειας βάρους & gt? 2% (LM + & gt? 2% WL)

η

ορθό κοιλιακό μυ βιοψία και αποθήκευσης για βιοχημικές αναλύσεις

Όλες οι βιοψίες ελήφθησαν κατά την έναρξη της ανοικτής εγχείρηση στην κοιλιακή χώρα υπό γενική αναισθησία. Οι ασθενείς είχαν νηστικοί όλη τη νύχτα πριν από το χειρουργείο. Η άκρη του ορθού κοιλιακού εκτέθηκε και ένα 1 εκατοστό

3 δείγμα αφαιρεθεί χρησιμοποιώντας αιχμηρή ανατομή. Η βιοψία είχε καθαριστεί του ακαθάριστου μόλυνσης του αίματος. Εμφανή λίπος /ινώδους ιστού απομακρύνθηκε πριν από την τοποθέτηση σε ένα κρυοσωλήνα και που καταψύχθηκαν γρήγορα σε υγρό άζωτο και αποθηκεύτηκαν στους -80 ° C.

ορθό κοιλιακό μυ Προετοιμασία δείγματος για Cryo-Τμήμα

A 0,1-0,5 cm

3 τμήμα του μυϊκού κόπηκε. Υγρό άζωτο χρησιμοποιείται για την ψύξη ισοπεντανίου διαλύτη σε ένα σωλήνα σε μια θερμοκρασία ~-190 ° C. Το τμήμα του μυός ραμμένο επάνω σε ένα τμήμα του φελλού. διάλυμα ΥΧΕ τοποθετήθηκε στη διασταύρωση μεταξύ της βάσης φελλού και του μυός. Αυτό στη συνέχεια χαμηλώνει με το κορυφαίο φελλό (δηλαδή μυών πρώτα) σε ψυχόμενο διαλύτη και διατηρήθηκε για περίπου 5 λεπτά (έως ότου το μυς ήταν κατεψυγμένο). Τα δείγματα στη συνέχεια αποθηκεύτηκαν στους -80 ° C μέχρι τη χρήση.

CT ανάλυσης εικόνας

αξονικές τομογραφίες που χρησιμοποιούνται για την ανάλυση έγιναν αποκλειστικά και μόνο για τη συνήθη φροντίδα του καρκίνου. Μία εγκάρσια CT εικόνα από την τρίτη οσφυϊκών σπονδύλων (L3) εκτιμήθηκε για κάθε ημερομηνία σάρωσης και του όγκου των ιστών εκτιμάται [16]. Όλες οι εικόνες CT αναλύθηκαν με ένα μόνο εκπαιδευμένο παρατηρητή. επιφάνεια διατομής για τους μυς και στο λιπώδη ιστό ομαλοποιήθηκε για ανάστημα (cm

2 /m

2).

Οι εκτιμήσεις του ολόκληρο το σώμα αποθηκεύει δημιουργήθηκαν από τα πρωτογενή δεδομένα (cm

2 ) χρησιμοποιώντας τις εξισώσεις παλινδρόμησης με Mourtzakis et al. [17], τα οποία δείχνουν μια στενή συσχέτιση μεταξύ των μυών και του λίπους περιοχές σε CT εικόνες στο τρίτο οσφυϊκών σπονδύλων και ολόκληρα διαμερίσματα σώμα μάζας χωρίς λίπος (ΓΓΑ) και λιπώδους μάζας (FM) αντίστοιχα.Η αντίστοιχους δείκτες για ΓΓΑ και FM ( kg /m

2) υπολογίστηκαν.

αποκοπές για χαμηλή μυϊκή ρώμη βασίστηκαν σε σαρκοπενίας μελέτη CT-based παχυσαρκίας των ασθενών με καρκίνο από Prado et al. (Δηλαδή, L3 δείκτη σκελετικών μυών: ≤38.5 cm

2 /m

2 για τις γυναίκες και ≤52.4 cm

2 /m

2 για τους άνδρες). [18]

αξονικές τομογραφίες που χρησιμοποιήθηκαν ήταν ρουτίνα διάγνωσης στάσης αξονικές τομογραφίες που έγιναν εντός 30 ημερών από τη διάγνωση του καρκίνου και όλοι ήταν σε ασθενείς χωρίς προηγούμενη θεραπεία θεραπεία. Ο διάμεσος χρόνος έως την βιοψία μετά την αξονική τομογραφία ήταν 18 ημέρες.

Η ανοσοϊστοχημεία

Τα κατεψυγμένα τμήματα των μυών ήταν συν-χρώση για λαμινίνη (L9393, Sigma-Aldrich, Buchs, Ελβετία) και μυοσίνης βαριά τύπου αλυσίδας Ι και ΙΙα, να διακρίνει κάθε τύπο ινών (BA-D5 για τον τύπο Ι, SC-71 για τον τύπο ΙΙα). Οι τομές παραφίνης χρωματίστηκαν για φωσφο-STAT3 (D3A7, Cell Signaling Technologies, Danvers, ΜΑ, USA) με μια ανακάλυψη XT Ventana (ομάδα Roche, Tucson, USA). Εικόνες ολόκληρου του τμήματος του ιστού αποκτήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα σαρωτή VS120 διαφανειών (Olympus Corporation, Tokyo, Japan). Η κατανομή των τύπων ινών μυοσίνης βαριά αλυσίδα, η διατομή των μεμονωμένων ινών στο τμήμα, και η θετική πυρήνες και χρώση πυκνότητα φωσφο-STAT3 αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το ASTORIA πλατφόρμα ιδιόκτητο ανάλυση εικόνας (Automated Αποθηκευμένα ανάλυσης εικόνας) που αναπτύχθηκε από τη Novartis /Προκλινικά Ασφάλεια.

Παρασκευή ιστού για το DNA, RNA και πρωτεΐνης εκχυλίσεις

σκελετικού μυϊκού ιστού ήταν κιμά και το έδαφος σε ξηρό πάγο. Δείγματα ζυγίστηκαν χρησιμοποιώντας μία αναλυτική ισορροπία (Mettler Toledo) και αποθηκεύτηκε στους -80 ° C μέχρι τη χρήση.

DNA και RNA Εκχύλιση και γραμμικότητα της μεθόδου εκχύλισης

DNA

και RNA από ανθρώπινο σκελετικό μυ ιστός εκχυλίστηκε και καθαρίστηκε με το αυτοματοποιημένο σύστημα Maxwell 16 (Promega, Duebendorf, Ελβετία). Για να προσδιοριστεί η γραμμικότητα των μεθόδων εκχύλισης με χρήση του Maxwell 16 σύστημα, DNA και RNA εκχυλίστηκε από 4 mg, 6 mg, 8 mg, και 10 mg του μυός, αντιστοίχως. Υπολογισμός της περιεκτικότητας σε ολικό DNA και RNA ανά υγρό βάρος (η οποία σε ένα γραμμικό σύστημα εκχύλισης θα πρέπει να είναι ίση για όλα τα δείγματα), μας επέτρεψε να καθοριστεί το γραμμικό εύρος του συστήματος εξαγωγής Maxwell 16. Με βάση αυτές τις προκαταρκτικές μελέτες, δείγματα 4-8 mg ανθρώπινου σκελετικού μυϊκού ιστού χρησιμοποιήθηκαν για όλες τις επόμενες DNA και RNA εκχυλίσεις. Χρησιμοποιώντας πλέον υλικό έναρξης μείωσε δραστικά το συνολικό περιεχόμενο DNA και RNA ανά υγρό βάρος (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Για την εκχύλιση του DNA, το Maxwell 16 LEV Kit DNA Blood (Promega) χρησιμοποιήθηκε με ένα ελαφρώς προσαρμοσμένο πρωτόκολλο σε σύγκριση με τις οδηγίες του εγχειριδίου. Εν συντομία, προστέθηκαν 300 μl της ουράς Ρυθμιστικού Λύσης από το κιτ ReliaPrep gDNA Miniprep System (Promega) ιστών με κιμά και αλεσμένα σκελετικό μυϊκό ιστό ανθρώπου Precellys 24 λύσης σωλήνες κιτ. Ο ιστός ομογενοποιείται περαιτέρω με τη χρήση του ομογενοποιητή υψηλής απόδοσης Precellys 24, για 10 s. Μετά από ψύξη σε πάγο για 5 λεπτά, 30 μΙ της πρωτεΐνης Κ και 5 μΐ του διαλύματος 1-Thiolglycerol προστέθηκαν. Το μίγμα αυτό επωάστηκε στους 56 ° C για 2 ώρες. Στη συνέχεια, το προϊόν λύσης μεταφέρθηκε σε καλά 1 του φυσιγγίου DNA LEV Blood, και αραιώνεται με 300 μΙ ύδατος άνευ νουκλεάσης. Για την έκλουση, 50 μΐ ρυθμιστικού διαλύματος έκλουσης προστέθηκε σε σωλήνες έκλουσης. Το όργανο Maxwell 16 ξεκίνησε τη χρήση του προγράμματος DNA του αίματος.

Για την εκχύλιση RNA, χρησιμοποιήθηκε το Maxwell 16 LEV simplyRNA Κιτ ιστού (Promega), ακολουθώντας τις οδηγίες του εγχειριδίου. Εν συντομία, κιμά και αλεσμένα ανθρώπινου μυϊκού ιστού επωάστηκε σε 200 μΙ ψυχρού διαλύματος 1-θειογλυκερόλη /ομογενοποίησης και περαιτέρω ομογενοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας το σύστημα Precellys 24 (βλέπε DNA). Στη συνέχεια, τα δείγματα θερμάνθηκαν στους 70 ° C για 2 λεπτά, μετά τα προϊόντα λύσης αφήνεται να ψυχθεί. 200 μΙ ρυθμιστικού διαλύματος λύσης προστέθηκαν στο ομογενοποίημα ψύχθηκε κάτω, αναμίχθηκαν έντονα, ακολουθούμενη από μεταφορά του συνόλου των 400 μΙ σε καλά 1 του φυσιγγίου LEV Maxwell 16. 5 μΙ DNAse προστέθηκε σε καλώς 4 του φυσιγγίου και, 50 μΙ RNAse ελεύθερο νερό προστέθηκε σε 0.5 ml έκλουσης σωλήνες και το πρόγραμμα εκχύλιση RNA άρχισαν στο όργανο Maxwell 16.

εξαχθέντος DNA και RNA μετρήθηκαν φασματομετρικά χρησιμοποιώντας ένα DropSense μέσο Trinean (Trinean, Gentbrugge, Βέλγιο) για την ποσότητα και την ποιότητα.

εκχυλίσεις πρωτεΐνης

για να εξαγάγετε τις πρωτεΐνες, 300 μλ PhosphoSafe Εξόρυξη αντιδραστηρίου (Millipore) προστέθηκε ένα συγκεκριμένο ποσό (μεταξύ 8 και 18 mg) του ομογενοποιημένου ανθρώπινου μυϊκού ιστού σκελετικών. Για να ομογενοποιήσει περαιτέρω τα δείγματα, το σύστημα Precellys 24 χρησιμοποιήθηκε (βλέπε παράγραφο ανωτέρω). Μετά την επώαση σε πάγο για 5 λεπτά, τα προϊόντα λύσης υποβλήθηκαν σε φυγοκέντρηση σε 800 χ g για 5 λεπτά στους 4 ° C. Τα υπερκείμενα μεταφέρθηκαν σε νέους σωλήνες και περιστράφηκαν για άλλα 12 λεπτά σε 1,600 χ g στους 4 ° C. Τα υπερκείμενα συλλέχθηκαν και οι συγκεντρώσεις πρωτεΐνης μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας το BCA Protein Assay Kit (Pierce) με BSA σαν πρότυπο. Στη συνέχεια, ο αναστολέας φωσφατάσης κοκτέιλ (Roche) προστέθηκε και τα δείγματα αποθηκεύτηκαν στους -80 ° C μέχρι περαιτέρω χρήσης.

Western Blots

20 μg ανθρώπινης εκχυλίσματα σκελετικών μυών πρωτεΐνη (βλέπε παραπάνω) σε αναγωγικό ρυθμιστικό δείγματος Laemmli SDS έβρασαν για 5 λεπτά στους 95 ° C και στη συνέχεια διαχωρίστηκαν με SDS-PAGE σε γέλες κλίσης 4-20% (Bio-Rad, Cressier, Ελβετία), στυπώθηκαν σε μεμβράνες νιτροκυτταρίνης (Bio-Rad) με τη χρήση του trans-Blot Σύστημα μεταφοράς Turbo (Bio-Rad), δεσμευμένο για 1 ώρα σε 5% άπαχο γάλα σε αλατόνερο ρυθμισμένο με Tris + 0,05% Tween-20, επωάστηκαν όλη τη νύκτα με πρωτογενές αντίσωμα, εκπλύθηκαν, και επωάστηκαν για 1 ώρα με υπεροξειδάση IgG συζευγμένο γίδινο αντι-κουνελιού (1:5000) (Santa Cruz, Heidelberg, Germany) σε θερμοκρασία δωματίου. Οι κηλίδες αναπτύχθηκαν χρησιμοποιώντας ECL (Roche, Rotkreuz, Ελβετία) ή υπόστρωμα SuperSignal West Femto (Thermo Scientific, Wohlen, Switzerland) και εκτέθηκαν σε φιλμ Kodak (Kodak, Rochester, ΝΥ, USA).

Rabbit μονοκλωνικά αντισώματα που χρησιμοποιούνται ήταν: Beclin-1 (κλώνος D40C5), Atg5 (κλώνος D1G9), ATG7 (κλώνος D12B11), Atg12 (κλώνος D88H11), Smad3 (κλώνος C67H9), φωσφο-NF

κ

Β p65 (Ser536) ( κλώνος 93H1) και α-τουμπουλίνης (κλώνος 11H10) (όλα από την Cell Signaling Technologies, Danvers, ΜΑ, USA), φωσφο-Smad3 (Ser423 /Ser425, κλώνος EP823Y) (Millipore, Billerica, ΜΑ, USA). Κουνέλι πολύκλωνα αντισώματα που χρησιμοποιήθηκαν ήταν:. Πηκτωλυματίνης (Cell Signaling Technologies)

Δυτική κηλίδες αναλύθηκαν πυκνομετρικώς χρησιμοποιείτε την έκδοση του λογισμικού ImageJ 1,45 (ΝΙΗ, Bethesda, MD, USA? https://rsbweb.nih.gov/ij) . ένταση μπάντα της κάθε δείγμα ομαλοποιήθηκε με εκείνη του α-τουμπουλίνης

Γ. – αντιδρώσας πρωτεΐνης (CRP)

Ο ορός συγκέντρωση CRP μετρήθηκε με ένα αυτοματοποιημένο ανοσοθολοσιμετρική δοκιμασία από το τμήμα κλινικής χημείας, Royal Infirmary Εδιμβούργο, χρησιμοποιώντας αίμα που συλλέγεται από τους ασθενείς κατά τη στιγμή της πρόσληψης και πριν από οποιαδήποτε θεραπευτική παρέμβαση.

Στατιστική Ανάλυση

τα αποτελέσματα εκφράζονται ως μέση τιμή (± SEM). Οι συγκρίσεις μεταξύ των ομάδων πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας t δοκιμές αταίριαστο του Student, ενώ πιθανές σχέσεις αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας συσχετίσεις κατά Pearson. Τα αποτελέσματα θεωρήθηκαν σημαντικά αν ρ τιμές ήταν μικρότερη από 0,05. Το πρόγραμμα SPSS (έκδοση 20, SPSS, Chicago, IL, USA) χρησιμοποιήθηκε για όλες τις στατιστικές δοκιμές.

Αποτελέσματα

δημογραφικά στοιχεία του ασθενούς

Ένα σύνολο των 41 ασθενών με καρκίνο με χειρουργικά εξαιρέσιμων UGI ή καρκίνο του παγκρέατος προσλήφθηκαν. Σε γενικές γραμμές, οι ασθενείς ήταν άνω των 65 ετών, κυρίως άνδρες και είχαν υποστεί, κατά μέσο όρο, την απώλεια 5% του βάρους σε σύγκριση με τα επίπεδα προ-ασθένειας (Πίνακας 1). Οι ασθενείς ομαδοποιήθηκαν με βάση τις έννοιες του Διεθνούς Πλαισίου Ταξινόμηση [1], σύμφωνα με την απώλεια βάρους ή απώλεια βάρους σε συνδυασμό με χαμηλή μυϊκή ρώμη. Οι ειδικές φαινότυποι που εξετάστηκαν ήταν η απώλεια βάρους & gt? 5% (WL & gt? 5%), απώλεια βάρους & gt? 10% (WL & gt? 10%), χαμηλή μυϊκή ρώμη (LM), και LM με την απώλεια βάρους & gt? 2% (LM + & gt ? 2% WL). Αν και ο ΔΜΣ μειώθηκε σε όλες τις ομάδες που κατατάσσονται ως καχεκτικά, μόνο το LM και LM + & gt?. 2% WL ομάδες είχαν σημαντικά χαμηλότερα λιπαρά δείκτη μάζας (Πίνακας 1)

Η

Μύες Fibre μέγεθος, τον αριθμό και Τύπος

Εάν οι ασθενείς ταξινομήθηκαν ως καχεκτικά από LM ή LM + & gt? 2% WL, το μέγεθος των ινών μειώθηκε σημαντικά (όλα τα είδη της μυοσίνης ίνες βαριά αλυσίδα) σε σύγκριση με μη καχεκτικούς ασθενείς και τους ελέγχους ( Σχήμα 1Α). Η σύνδεση της καχεξίας με μειωμένο μέγεθος των ινών δεν παρατηρήθηκε εάν οι ασθενείς ταξινομήθηκαν ανάλογα με WL μόνο. Αντιπροσωπευτικά ανοσοϊστολογικές τμήματα καταδεικνύοντας διαφορές στην διάμετρο ινών μεταξύ ενός υγιούς ελέγχου και ένα άτομο στην ομάδα II έναντι της ομάδας IV φαίνεται στο Σχήμα 1Β. Ανοσοϊστολογία για τον τύπο Ι και ΙΙα οδήγησε σε συμπληρωματικές χρώση σε γενικές γραμμές, ενώ τύπος ίνας IIb οδήγησε σε πολύ χαμηλή ένταση χρώσης όπως αναφέρθηκε αλλού [19]? Ως εκ τούτου, ποσοτική ανάλυση έγινε μόνο με τον τύπο Ι και ΙΙα, αλλά όχι με τον τύπο IIb (Πίνακας 2). Όπως θα αναμενόταν από μία μείωση στο μέγεθος των ινών, υπήρχε μια τάση σε όλες τις ομάδες για την πυκνότητα των ινών για την αύξηση σε εκείνους με καχεξία. Ωστόσο, λόγω της μεγάλης μεταβλητότητας, αυτή δεν ήταν στατιστικά σημαντική. Δεν υπήρξε καμία ένδειξη της επιλεκτικής ατροφία ινών σε όλη την οποιαδήποτε από τις ομάδες κατάταξης (Πίνακας 2).

(Α) Μέσος όρος (± SEM) μέγεθος ίνες τόσο για MyHC1 και MyHCIIa. Η σύγκριση γίνεται μεταξύ των ασθενών με τον προτεινόμενο ορισμό καχεξία απουσιάζει (σκούρο γκρι) και εκείνοι με τον προτεινόμενο ορισμό καχεξία παρόν (ανοιχτό γκρι) για τις τέσσερις ορισμούς που καθορίζονται στις Μεθόδους (Ι-IV). (*, Ρ & lt? 0,05 και **, Ρ & lt? 0,01, με δοκιμή t του Student). (Β) Ανοσοϊστολογικές τμήματα των μυών για μια υγιή ελέγχου, ασθενής με την απώλεια βάρους και μόνο (10,1%) (Ομάδα ΙΙ), και ο ασθενής με χαμηλή μυϊκή ρώμη και & gt? Απώλεια βάρους 2% (Ομάδα IV). Λαμινίνη εμφανίζεται με πράσινο χρώμα, MyHC1 εμφανίζονται με κόκκινο χρώμα, και MyHCIIa παρουσιάζεται στο μπλε.

Η

Protein Περιεχόμενο

Τα αποτελέσματα για την περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη των σκελετικών μυών φαίνονται στο Σχήμα 2 (ΈΝΑ). Σε σύγκριση με τους μη καχεκτικούς ασθενείς, η περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη των μυών μειώθηκε σημαντικά (περίπου 13%) σε ασθενείς με είτε & gt? 5% WL ή LM + & gt? 2% WL (Σχήμα 2Α και πίνακας 3). Ωστόσο, εάν εφαρμόζονταν μόνα τα κριτήρια LM δεν παρατηρήθηκε καμία διαφορά στην περιεκτικότητα σε πρωτεΐνες. Επιπλέον, οι ασθενείς με & gt? 10% WL παρουσίασαν μείωση κατά 10% της περιεκτικότητας σε πρωτεΐνες σε σύγκριση με τους μη καχεκτικούς ασθενείς, αλλά η διαφορά αυτή δεν ήταν στατιστικά σημαντική (Σχήμα 2Α και πίνακας 3)

Μια σύγκριση είναι. μεταξύ των ασθενών με τον προτεινόμενο ορισμό καχεξία απουσιάζει (σκούρο γκρι) και εκείνοι με τον προτεινόμενο ορισμό καχεξία παρόν (ανοιχτό γκρι) για τις τέσσερις ορισμούς που καθορίζονται στο μεθόδους (Ι-IV). (Α) Μέσος όρος (± SEM) περιεκτικότητα σε πρωτεΐνες υγρό βάρος. περιεκτικότητα σε RNA (Β) Η μέση (± SEM). (Γ) Η μέση (± SEM) περιεκτικότητα DNA. DNA αναλογία (C) Μέση (± SEM) ΚΝΑ /. (*, Ρ & lt? 0.05 με δοκιμασία t του Student)

Η

RNA, DNA και RNA /DNA Λόγος

Τα αποτελέσματα για τους σκελετικούς μύες DNA και το περιεχόμενο RNA είναι επίσης. φαίνεται στο Σχήμα 2 (Β, Γ και Δ) και τον πίνακα 3. περιεκτικότητα RNA δεν ήταν σημαντικά διαφορετική σε καχεκτικούς ασθενείς, σε σύγκριση με τους μη καχεκτικούς ασθενείς σύμφωνα με οποιαδήποτε από τις διαγνωστικά κριτήρια (Σχήμα 2Β και πίνακας 3). Σε αντίθεση, το περιεχόμενο DNA αυξήθηκε κατά 50% με & gt? 5% WL αλλά μειώθηκε κατά -40% σε ασθενείς με LM (Σχήμα 2C). Η αναλογία του RNA /DNA μειώθηκε (περίπου 30%) σε ασθενείς με & gt? 5% WL και LM + & gt?. 2% WL (Σχήμα 2D)

Autophagy Pathways

Σε ασθενείς με & gt? 10% WL, Beclin και τα επίπεδα πρωτεΐνης ATG5 αυξήθηκαν σημαντικά σε καχεκτικούς ασθενείς, σε σύγκριση με μη καχεκτικούς ασθενείς (Σχήμα 3). ATG7 και 12 επίπεδα δεν ήταν διαφορετικές σε καχεκτικούς ασθενείς, σε σύγκριση με μη – καχεκτικούς ασθενείς σύμφωνα με οποιαδήποτε από τις διαγνωστικά κριτήρια (Πίνακας 3)

ανάλυση κηλίδας Western με υποδεικνυόμενα αντισώματα, α-τουμπουλίνης χρησιμοποιήθηκε ως φόρτωση. έλεγχος. Γράφημα δείχνει το μέσο επίπεδο (± SEM) πρωτεΐνη εκπροσωπούνται σε αυθαίρετες μονάδες (A.U). (*, Ρ & lt? 0,05 και **, Ρ & lt? 0,01, με δοκιμή t του Student).

Η

SMAD σηματοδότηση

Σε ασθενείς με & gt? 5% των επιπέδων της πρωτεΐνης WL, Smad3 ήταν σημαντικά αυξημένη σε σύγκριση με μη καχεκτικούς ασθενείς (Σχήμα 4). Δεν υπήρχαν σημαντικές διαφορές στα φωσφο-Smad3 /Smad3 σε όλη οποιαδήποτε από τις ομάδες (Εικόνα 4).

ανάλυση κηλίδας Western με υποδεικνυόμενα αντισώματα, α-τουμπουλίνης χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης. Γράφημα δείχνει το μέσο επίπεδο (± SEM) πρωτεΐνη εκπροσωπούνται σε αυθαίρετες μονάδες (A.U). (*, Ρ & lt? 0.05 με δοκιμασία t του Student).

Η

φλεγμονώδη μονοπάτια

Η συστηματική φλεγμονή εκτιμήθηκε χρησιμοποιώντας τα επίπεδα της CRP στον ορό των ασθενών (Πίνακας 1). Οι ασθενείς ταξινομήθηκαν ως έχουν συστημική φλεγμονή αν CRP τους ήταν ≥10 mg /L. Δεν υπήρχε διαφορά στο ποσοστό των ασθενών με ή χωρίς συστηματική φλεγμονή σύμφωνα με τον ορισμό της καχεξίας. Επίπεδα φωσφο-ΝΡκΒ και φωσφο-STAT3 δεν ήταν σημαντικά διαφορετικές σε ασθενείς με ή χωρίς καχεξία (χρησιμοποιώντας οποιονδήποτε από τους ορισμούς: πίνακας 4). Ή με ή χωρίς συστηματική φλεγμονή (Σχήμα 5)

(Α) Western ανάλυση κηλίδας με την παρουσία ή απουσία συστηματικής φλεγμονής με υποδεικνυόμενα αντισώματα, α-τουμπουλίνης χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης. (Β) Διάγραμμα δείχνει τη μέση τιμή (± SEM) επίπεδο πρωτεΐνης φωσφο-NF-κΒ, εκπροσωπούνται σε αυθαίρετες μονάδες (A.U). (C) Αντιπροσωπευτική ανοσοϊστοχημεία και πυρήνες καταμέτρηση της φωσφο-STAT3 (περιοχή που απεικονίζεται είναι αντιπροσωπευτική πεδίου) ενός ασθενούς με ή χωρίς συστηματική φλεγμονή. (Δ) γράφημα δείχνει την πυκνότητα χρώση των φωσφο-STAT3 πυρήνες (AU) (± SEM) παρουσία ή απουσία συστηματικής φλεγμονής.

Η

Συζήτηση

Fibre Μέγεθος

Το διαγνωστικό κριτήριο για την καχεξία του καρκίνου έχει από καιρό βασίζεται στην απώλεια βάρους και μόνο [1] και μπορεί να αντανακλά ζημία είτε λίπος ή άπαχο διαμερίσματα ιστών. Δεδομένου ότι το κλειδί για την απώλεια ιστού στην καρκινική καχεξία θεωρείται σκελετικών μυών, μια πρόσφατη διαδικασία συναίνεσης πρότεινε ότι τα διαγνωστικά κριτήρια για την καχεξία θα πρέπει επίσης να λαμβάνουν υπόψη χαμηλά επίπεδα κατά την έναρξη της μυϊκή ρώμη [1]. Στην παρούσα μελέτη, όταν οι ασθενείς ταξινομήθηκαν ως καχεκτικά ή όχι σύμφωνα με την απώλεια βάρους ≥5% δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στο σύνολό μυϊκή ρώμη του σώματος (FFMI) ή των μυϊκών ινών CSA. Αντίθετα, όταν οι ασθενείς ταξινομήθηκαν σύμφωνα με χαμηλή μυϊκότητα και ≥2% απώλεια βάρους, FFMI μειώθηκε και η περιοχή διατομής των ινών μειώθηκε επίσης σημαντικά (Σχήμα 1). Τέτοια ευρήματα καταδεικνύουν ότι ετερογένεια σε σχέση με χαμηλή μυϊκότητα και ατροφία των ινών μπορεί να μειωθεί ανάλογα με την κλινική ορισμό της καχεξίας. Αυτό το εύρημα μπορεί να είναι σημαντικό, ιδιαίτερα κατά την εξέταση κριτήρια ένταξης για κλινικές δοκιμές που αποσκοπούν για να δοκιμαστεί η αποτελεσματικότητα των φαρμάκων που απευθύνονται σε αναστροφή της μυϊκής απώλειας σε ασθενείς με καρκίνο. Η μείωση του μεγέθους των ινών σε όλες τις ισομορφές MyHC παρατηρήθηκε στην παρούσα μελέτη είναι σύμφωνη με προηγούμενες ζώων [20] και μελέτες σε ανθρώπους της καχεξίας καρκίνου του [4] – [7]. Η ορθού μυός των ασθενών με oesophago-γαστρικό καρκίνο καχεξία έχει δειχθεί να χάσει όλο το περιεχόμενο MyHC τύπου καθώς και να υποβληθούν σε μείωση του μεγέθους των ινών [4]. Επίσης, σε ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος με καχεξία, δύο ΙΙ επίπεδα πρωτεΐνης MyHC τύπου Ι και τύπου μειώθηκαν κατά 45% σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου [6].

Fibre Τύπος

Για να μελετήσουμε τις διαφορές στη μορφολογία μυϊκών ινών και σύνθεση εντός των διαφόρων κατηγοριών καχεξία, πραγματοποιήσαμε ανοσοϊστοχημική ανάλυση δειγμάτων ανθρώπινου μυός. Για αυτό, έχουμε για πρώτη φορά και επικυρωμένες μεθόδους χρώσης για την αλυσίδα μυοσίνης αντισώματα βαρείας ειδικά για τους διάφορους τύπους ινών (I, IIa, IIb και). Χρώση για τον τύπο Ι και ΙΙα ίνες είχε ως αποτέλεσμα ισχυρή ειδική εξειδίκευση χρώση, ωστόσο μόνο ασθενή χρώση παρατηρήθηκε κατά του τύπου IIb MyHC, το εύρημα αυτό έχει επίσης αναφερθεί αλλού [19]. Τα κυρίαρχα είδη των ινών MyHC σε ορθό κοιλιακό μυ είναι Ι και ΙΙα και μόνο & lt? 8% του τύπου IIb θετικών ινών έχουν περιγραφεί προηγουμένως [21]. Της σκελετικής ισομορφές ενηλίκων, κάθε εκφράζονται σε διάφορους βαθμούς σε αμφότερα ποντικού και ανθρώπου σκελετικούς μύες. Ωστόσο, παρόλο που MyHCIIb εκφράζεται έντονα τόσο στο αγγελιοφόρο RNA (mRNA) και το επίπεδο πρωτεΐνης στο σκελετικό μυ ποντικού, στοιχεία μέχρι σήμερα δείχνουν ότι αυτή η ισομορφή αποτελεσματικά μόνο εκφράζεται σε επίπεδο mRNA σε ένα πολύ μικρό υποσύνολο των εξειδικευμένων μυών στο ενήλικο άνθρωπο [22]. Όπως αναφέρθηκε παραπάνω, η έκφραση MyHCIIb είναι κατά κανόνα συνδέονται με υψηλές δυνάμεις συστολής σε συνδυασμό με την ταχεία συσταλτική χαρακτηριστικά και έχει προταθεί ότι οι συσταλτικές χαρακτηριστικά των MyHCIIb μπορεί να είναι ασύμβατη με τις βιο-μηχανικές περιορισμούς των μεγαλύτερων μυών [23], η οποία μπορεί να ευθύνεται για την έλλειψη της ειδικότητας που βρέθηκαν στο ορθό μυ του πληθυσμού μας ασθενή.

σε καχεξία υπάρχουν αντικρουόμενες ενδείξεις ως προς το αν υπάρχει επιλεκτική απώλεια του τύπου ινών. Δεν υπήρξε καμία ένδειξη για την επιλεκτική απώλεια τύπος ίνας στην παρούσα μελέτη (Πίνακας 2). Τα στοιχεία από ζωικά μοντέλα δείχνουν ότι ο τύπος ίνες ΙΙ στοχεύουν επιλεκτικά [24], με σχετική διατήρηση των ινών τύπου Ι σε νηστεία [25], η έκθεση σε γλυκοκορτικοειδή [26], σηψαιμία [27] και στο γαστροκνήμιο μυ του μοντέλου C26 της καχεξία του καρκίνου [28], [29]. Μοντέλα καρδιακή καχεξία, ωστόσο έχουν προτείνει μια τάση προς επιλεκτική απώλεια ινών τύπου Ι και μια αύξηση στην ίνα τύπου II [30]. Επιπλέον, δεν είναι όλες οι ομάδες έχουν δείξει Τύπου Ι και II διαφορές ινών ακόμη και σε ζώα. Πράγματι, σε μια πρόσφατη μελέτη του καχεκτικών μοντέλο ποντικού C26, τόσο γλυκολυτικού και οξειδωτική ίνες (εκτείνοντα μακρού) EDL μυών υποβλήθηκαν σε σπατάλη [20], ενώ σε μια προηγούμενη μελέτη χρησιμοποιώντας το ίδιο μοντέλο ποντικού υπήρξε μια σημαντική αύξηση στην ποσότητα του MyHCIIb και μια σημαντική μείωση στην ποσότητα του τύπου 1 MyHC σε υποκνημίδιο μυ [31]. Επί του παρόντος δεν είναι απολύτως σαφές ποιο είδος των ινών επηρεάζονται σε ανθρώπινο καχεξία του καρκίνου, όμως, σε ασθενείς με oesophago-γαστρικό καρκίνο καχεξία πρόωρη απώλεια όλων των MyHC ισομορφών έχει αναφερθεί [4].

Τα πρότυπα δραστηριότητας του ένας μυς είναι επίσης το κλειδί για τον προσδιορισμό φαινοτύπου. Εάν τα μυϊκά κύτταρα προσλαμβάνονται σπανίως αναπτύσσουν σε γρήγορο /γλυκολυτικά μονάδες ενώ εάν έχουν προσληφθεί πιο συχνά, σχηματίζουν αργή /οξειδωτική μονάδες. Στο μοντέλο ποντικού C26 της καχεξίας καρκίνου, έχουν υπάρξει αναφορές μεταγωγής των ισομορφών μυοσίνης μυός του πέλματος του καχεκτικών ποντικούς [31]. Σε ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος καχεξία, καμία διαφορά στην αναλογία γρήγορα /αργή μυοσίνης ισομορφή καταδείχθηκε σε σύγκριση με ελέγχους [6].

Μύες RNA, DNA, και Protein Περιεχόμενο

Εν μελέτη, σε σύγκριση με τους μη καχεκτικούς ασθενείς, περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη των μυών μειώθηκε σημαντικά (περίπου 13%), αν οι ασθενείς ταξινομήθηκαν ως καχεκτικά είτε & gt? 5% WL (p = 0,015) ή LM + & gt? 2% WL (p = 0,035) και κατά 10% σε ασθενείς με & gt? 10% WL. Η περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη που εκφράζεται σε σχέση με το υγρό βάρος των μυών έχει δειχθεί ότι μειώνεται προοδευτικά (άνω του 50%) στο γαστροκνήμιο μυ των ποντικών που φέρουν το MAC-16 όγκου [32]. Αυτό υποδηλώνει ότι όχι μόνο είναι η απώλεια της διαμέτρου των ινών εκεί, αλλά ότι η ποιότητα της ίνας μεταβάλλεται με απώλεια είτε σαρκοπλασμικής ή myofibrillar πρωτεΐνη. Τέτοιες αλλαγές στην σύνθεση των ινών μπορεί να συμβάλλει στην μειωμένη μυϊκή μηχανική ποιότητα (δύναμη ανά μονάδα εμβαδού διατομής) που παρατηρήθηκε σε ανθρώπινο καρκίνο καχεξία [33].

Μία μείωση τόσο στο περιεχόμενο RNA και δραστηριότητα σε σκελετικό μυ έχει αποδοθεί σε κατάθλιψη της πρωτεϊνικής σύνθεσης σε ποντικούς που φέρουν το καρκίνωμα MAC16 [32]. Στην παρούσα μελέτη, το περιεχόμενο RNA ήταν αμετάβλητη σε καχεκτικούς ασθενείς (που ταξινομούνται είτε με & gt? 5% WL ή LM + & gt? 2% WL) σε σύγκριση με μη καχεκτικούς ασθενείς. Μία μείωση της περιεκτικότητας σε RNA στο μυ των ποντικών που φέρουν το Ehrlich ασκίτης όγκος έχει επίσης αναφερθεί, αλλά αυτό συνέβη αργότερα από την παρατηρούμενη κατάθλιψη στο ρυθμό της σύνθεσης πρωτεΐνης [34]. Είτε σύνθεση των μυϊκών πρωτεϊνών είναι σε ύφεση στην ανθρώπινη καρκινική καχεξία απομένει να επιλυθεί [10].

Σε ένα μοντέλο ποντικού του περιεχομένου DNA καρκίνο καχεξία του γαστροκνημίου μυός έχει αποδειχθεί ότι παραμένει σχετικά σταθερή, παρά τη διαπίστωση της μείωση στην περιεκτικότητα σε πρωτεΐνες και RNA [32].