Αφηρημένο

Ιστορικό

Καρκίνωμα της χοληδόχου κύστης (GBC) είναι μια επιθετική κακοήθεια. Η υψηλότερη συχνότητα εμφάνισης του καρκίνου της χοληδόχου κύστης στις γυναίκες έχει εν μέρει αποδοθεί σε ορμονικούς παράγοντες. Ως εκ τούτου, η παρούσα μελέτη σχεδιάστηκε για να διερευνήσει το ρόλο των γενετικών παραλλαγών στα οιστρογόνα (

ESR1, eSR2

) και προγεστερόνης (

PGR

) υποδοχείς στην ανάθεση κίνδυνο καρκίνου της χοληδόχου κύστης.

Υλικά και Μέθοδοι

Η παρούσα μελέτη ασθενών-μαρτύρων προσληφθεί συνολικά 860 άτομα, συμπεριλαμβανομένων 410 GBC ασθενείς, 230 ασθενείς χολολίθων και 220 μάρτυρες. Εξετάσαμε τις ενώσεις των 6 επιλεγμένων πολυμορφισμών σε τρία γονίδια:

ESR1

(rs2234693, rs9340799, rs1801132),

eSR2

(rs1271572, rs1256049) και

PGR

(rs1042838) με GBC κίνδυνο. Γονοτυποποίηση για όλους τους πολυμορφισμούς έγινε χρησιμοποιώντας PCR-RFLP. Πολλαπλά μείωσης διάστασης και την ταξινόμηση και το δέντρο παλινδρόμησης προσεγγίσεις σε συνδυασμό με την λογιστική παλινδρόμηση για να ανακαλύψουν τις αλληλεπιδράσεις γονιδίων-γονίδιο υψηλής τάξης ορμονικών μονοπάτι.

Αποτελέσματα

Από τη σύγκριση της κατανομής συχνοτήτων γονοτύπου στο χολολίθων και GBC ασθενείς με εκείνη των υγιών ατόμων, οι ομόζυγο παραλλαγή γονότυπους του

ESR1

-397TT (rs2234693) πολυμορφισμός έδειξε σημαντικό κίνδυνο για την ανάπτυξη χολολίθων [λόγος πιθανοτήτων: OR = 2.9] και GBC [OR = 1.8], αντίστοιχα. Λεπτομερής ανάλυση απλοτύπων πρότεινε ότι

ESR1

Τ

rs2234693G

rs9340799C

rs1801132 έχουν σημαντική συσχέτιση με την ανάθεση του κινδύνου και για τις δύο πέτρες στη χολή [OR = 2.2] και GBC [OR = 3,0]. Ωστόσο, οι γονότυποι παραλλαγή που περιέχουν (DI + ΙΙ) του

PGR

(rs1042838) έδειξε χαμηλό κίνδυνο τόσο GBC [OR = 0,4] και οι ασθενείς χολολίθων [OR = 0,4] .Από την εκτέλεση της ανάλυσης MDR,

ESR1

IVS1-397C & gt? Τ,

ESR1

IVS1-351A & gt? G, και

eSR2

-789 A & gt? C απέδωσε την υψηλότερη ακρίβεια δοκιμή των 0.634. Αυτά τα αποτελέσματα υποστηρίχθηκαν περαιτέρω από την ανάλυση ΚΑΛΑΘΙ η οποία αποκάλυψε ότι τα άτομα με τα συνδυασμένα γονότυπους του

ESR1

-397 CT ή TT,

ESR1

-351 AG ή GG και

eSR2

-789 ΑΑ είχαν τον υψηλότερο κίνδυνο για GBC [OR = 3.9].

Συμπέρασμα

η χρήση πολλαπλών αναλυτικές προσεγγίσεις, η μελέτη μας έδειξε σημαντικό ρόλο του

ESR1

IVS1- 397C & gt? Τ,

ESR1

IVS1-351A & gt? G, και

eSR2

-789 A & gt?. Γ παραλλαγές στην ευαισθησία GBC και ο κίνδυνος φαίνεται να διαμεσολαβείται μέσω χολολίθων οδού εξαρτάται

Παράθεση: Srivastava Α, Sharma KL, Srivastava Ν, Misra S, Mittal Β (2012) σημαντικός ρόλος των οιστρογόνων και της προγεστερόνης υποδοχέων Ακολουθία Παραλλαγές στο χοληδόχου κύστης Καρκίνος Προδιάθεση: στρατηγική Multi-Αναλυτικές. PLoS ONE 7 (7): e40162. doi: 10.1371 /journal.pone.0040162

Συντάκτης: Amanda Ewart Toland, Πολιτειακό Πανεπιστήμιο του Οχάιο Medical Center, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 1 Μαρ 2012? Αποδεκτές: 2 του Ιουνίου 2012? Δημοσιεύθηκε: 10 Ιουλίου 2012 |

Copyright: © 2012 Srivastava et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Η μελέτη υποστηρίχθηκε από την έρευνα και την υποτροφία επιχορηγήσεις από την ινδική Συμβουλίου Ιατρικής έρευνας (ICMR) και Τμήμα Βιοτεχνολογίας (DBT) Govt. της Ινδίας. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

το καρκίνωμα της χοληδόχου κύστης είναι μια ιδιαίτερα θανατηφόρα ασθένεια με την καθυστερημένη διάγνωση, περιορισμένες θεραπευτικές επιλογές και στερούνται πρόγνωση [1]. Είναι η πιο συχνή κακοήθης βλάβη του χοληφόρου οδού και η έκτη πιο συχνή μεταξύ κακοήθη νεοπλάσματα του πεπτικού συστήματος [1], [2], [3]. Μια μελέτη από το μητρώο του καρκίνου Γιούτα (RUE) και η σουηδική βάση δεδομένων οικογενειακή καρκίνο ανέφεραν οικογενειακή ομαδοποίηση των GBC [4]. Αδιάσειστα στοιχεία υπάρχουν επίσης και για το ρόλο των οικογενειακό ιστορικό χολολιθίασης στην αιτιολογία του καρκίνου της χοληδόχου κύστης [5], [6]. Επιπλέον, το γράφημα συχνότητα εμφάνισης του καρκίνου της χοληδόχου κύστης κυμαίνεται ανάλογα με το φύλο και την εθνικότητα και τα υψηλότερα συχνότητες αναφέρθηκαν στις γυναίκες που ανήκουν σε ιθαγενείς της Αμερικής, τη Νότια Αμερική, και τη Βόρεια Ινδία [7].

Μια πολύπλευρη αλληλεπίδραση μεταξύ των ορμονών, μεταβολικές αλλοιώσεις , έχουν μολύνσεις, και ακόμη και ανατομικές ανωμαλίες έχουν διευκρινιστεί στην αιτιολογία του καρκινώματος της χοληδόχου κύστης [1]. Επιπλέον, ένας μεγάλος αριθμός από επιδημιολογικές μελέτες έχουν δείξει ισχυρή συσχέτιση της GBC με χολολίθων ασθένεια [8] και με πολλούς από τους παράγοντες κινδύνου, όπως η παχυσαρκία, η υψηλή πρόσληψη υδατανθράκων, και το γυναικείο φύλο [9]. Σε γυναίκες μετά την εμμηνόπαυση, η θεραπεία ορμονικής υποκατάστασης αυξάνει σημαντικά τον κίνδυνο ασθενειών της χοληδόχου κύστης [10], [11] προτείνοντας ένα αξιοσημείωτο ρόλο των ορμονών του φύλου στην αιτιολογία της GBC [12], [13], [14], [15], [16] .Επίσης οι γυναίκες είναι δύο έως έξι φορές επηρεάζονται περισσότερο από τους άνδρες. Συνολικά, αυτά τα αποδεικτικά στοιχεία έχουν αυξήσει την πιθανότητα ότι τα στεροειδή του φύλου (οιστρογόνα και προγεστερόνη) θα μπορούσε να διαδραματίσει βασικό παθοφυσιολογικό ρόλο στην ανάπτυξη του καρκίνου της χοληδόχου κύστης. Τα οιστρογόνα και η προγεστερόνη οι ορμόνες δρουν σε ιστούς-στόχους με σύνδεση προς τους αντίστοιχους υποδοχείς τους. υποδοχείς οιστρογόνων (

ESR1, eSR2

) και των υποδοχέων προγεστερόνης (

PGR)

τα γονίδια που βρίσκονται στο χρωμόσωμα 6q25.1, 14q21-22 και 11q22, αντίστοιχα, και η έκφρασή τους έχουν ανιχνευθεί στο ανθρώπινο χοληδόχου κύστης κανονική βλεννογόνο [15] και GBC έχουν [16] τα αλληλόμορφα παραλλάγματα των γονιδίων υποδοχέα οιστρογόνου έχει αποδειχθεί ότι σχετίζεται με την ευαισθησία ή την πρόοδο με διάφορες διαταραχές, όπως το έμφραγμα του μυοκαρδίου [17], χολολίθων χοληστερόλη και ασθένειες των χοληφόρων οδών [18]. Επιπλέον, λειτουργικές δοκιμασίες δείχνουν ότι

ESR1

IVS1-397C & gt? T πολυμορφισμός επηρεάζει μια θέση πρόσδεσης για την οικογένεια myb των μεταγραφικών παραγόντων [19], [20] και ο πολυμορφισμός έχει επίσης μελετηθεί σε διάφορες μελέτες συσχέτιση του καρκίνου του μαστού [17], [21], [22]. Αντιθέτως, ορμόνη προγεστερόνη παίζει σημαντικό ρόλο στη ρύθμιση του επιπέδου των οιστρογόνων και παρέχοντας προστασία έναντι αρκετών μορφών καρκίνου [23], [24].

Λαμβάνοντας υπόψη την πιθανή ορμονική ρόλο σε ασθένειες της χοληδόχου κύστης, καθώς επίσης και τα προηγουμένως διερευνηθούν ρόλος του

ΤΚΕ /PGR

πολυμορφισμοί σε καρκίνους που σχετίζονται θηλυκό, υποθέσαμε ότι οι γενετικές παραλλαγές στο

ESR1

,

eSR2

και

PGR

γονίδια μπορεί να έχουν σημαντικές επιπτώσεις για τους κινδύνους του καρκίνου της χοληδόχου κύστης. Ως εκ τούτου, στην παρούσα μελέτη, ερευνήσαμε ένα πάνελ από 6 καλά μελετημένων πολυμορφισμών στο

ESR1, eSR2

και

PGR

γονίδια σε ένα σχέδιο ασθενών-μαρτύρων που περιλαμβάνει 410 GBC ασθενείς, 230 ασθενείς χολολίθων και 220 του καρκίνου /χολολίθων χωρίς ελέγχους από τη Βόρεια Ινδία. Εκτός από λογιστικής παλινδρόμησης (LR), δύο μη-παραμετρικές προσεγγίσεις, μείωση πολυπαραγοντική διάσταση (MDR) και ταξινόμηση και δέντρο παλινδρόμησης (CART) εφαρμόστηκαν να διερευνήσουν τις αλληλεπιδράσεις γονιδίου-γονίδιο υψηλής τάξης στην ρύθμιση κίνδυνο καρκίνου της χοληδόχου κύστης. Για το καλύτερο της γνώσης μας, αυτή είναι η πρώτη έκθεση που έχει ερευνήσει το ρόλο των γενετικών παραλλαγών ορμονικών υποδοχέων γονίδια που χρησιμοποιούν multi-αναλυτική προσέγγιση για να καθορίσει τις διάφορες προφίλ κινδύνου για καρκίνο της χοληδόχου κύστης και χολολιθίαση.

Αποτελέσματα

χαρακτηριστικά Πληθυσμός

τα δημογραφικά χαρακτηριστικά της GBC και οι ασθενείς χολολίθων σε σχέση με την ηλικία και το φύλο τους ταιριάζουν οι έλεγχοι παρουσιάζονται στον πίνακα 1. Η μέση ηλικία σε όλες τις τρεις ομάδες ήταν συγκρίσιμες και δεν έδειξαν στατιστικά σημαντική διαφορές. Περισσότερο από το 90% των ασθενών ήταν GBC σε προχωρημένα στάδια του καρκίνου (στάδια III και IV) και χολόλιθοι βρέθηκαν να είναι παρούσα σε 50.5% των ασθενών GBC. Περίπου 31% των ασθενών GBC συσχετίστηκαν με χρήση του καπνού σε κάποια μορφή (κάπνισμα, το μάσημα, ή και τα δύο). Παρατηρήθηκε κατά τη συλλογή δεδομένων ότι πλειοψηφία των γυναικών ασθενών ήταν νοικοκυρές και οι άνδρες ασθενείς που δεν είχαν εμπλακεί σε οποιαδήποτε επικίνδυνα επαγγέλματα. Όλες οι ασθενείς με καρκίνο και χολολιθίασης ήταν περιπτώσεις περιστατικό, και κανένας από τους μάρτυρες είχαν οικογενειακό ιστορικό καρκίνου.

Η

Τα αλληλόμορφα Διανομή Σπούδασε πολυμορφισμών στο Έλεγχοι

Η γονοτυπική και αλληλομόρφων διανομή

ESR1

IVS1-397C & gt? T (rs2234693), IVS1-351A & gt? G (rs9340799), Ex4-122C & gt? G (rs1801132),

eSR2

-789 A & gt? C (rs1271572), 1082 G & gt ? Α (rs1256049) και

PGR

ins /del (rs1042838) φαίνονται στον πίνακα 2. Η παρατηρούμενη συχνότητα γονότυπος όλων των μελετήθηκαν πολυμορφισμούς σε ελέγχους ήταν σύμφωνες με Hardy-Weinberg ισορροπία (ρ & lt? 0,05). Οι συχνότητες των αλληλομόρφων παραλλαγή στη μελέτη μας ήταν παρόμοια με τα προηγούμενα δημοσιευμένες εκθέσεις [25].

Η

Σύλλογος

ESR1

,

eSR2

και

PGR

πολυμορφισμοί με GBC και χολόλιθοι

ο Πίνακας 3 δείχνει τον κίνδυνο καρκίνου της χοληδόχου κύστης και πέτρες σε σχέση με καθένα από τα SNPs του

ESR1, eSR2

και

PGR.

συγκρίνοντας την κατανομή συχνότητας του γονότυπου των ομάδων μελέτης μας, δηλαδή GBC και χολολίθων ασθενείς με εκείνη των ελέγχων, οι ομόζυγο παραλλαγή γονότυπους του

ESR1

IVS1-397C & gt? T (rs2234693) πολυμορφισμός έδειξε στατιστικά σημαντική αύξηση του κινδύνου για την ανάπτυξη GBC ( p = 0,02? [OR], 1.8) και χολολιθίασης (p = & lt? 0.001? [OR], 2.9). Επιπλέον, σε ασθενείς χολολίθων

ESR1

IVS1-351A & gt? G που παρέχει υψηλότερο κίνδυνο (p = 0,002? [OR], 2.6). Αντίθετα, δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές στην κατανομή των

ESR1

IVS1-351A & gt? G, Ex4-122C & gt? G, (rs1801132) και

eSR2

-789 A & gt? C (rs1271572 ), EX6 1082 G & gt? Α (rs1256049) πολυμορφισμών σε οποιαδήποτε από τις ομάδες, τόσο σε γονοτυπική και αλληλομόρφων επίπεδα. Η παραλλαγή που περιέχουν γονότυπους (DI + ΙΙ) του

PGR

ins /del (rs1042838) έδειξε χαμηλό κίνδυνο και στις δύο GBC και χολολίθων ασθενείς που ήταν επίσης σημαντική (p = 0,004? [OR], 0,4? P = 0.009? [OR], 0.4 Πίνακας 2), σε σύγκριση με ομόζυγο γονότυπο DD άγριου τύπου

Η

Η μελέτη θεμάτων κατανεμήθηκαν σε άνδρες και γυναίκες.. Σε GBC ασθενείς αρσενικό, η παραλλαγή γονότυπο ΤΤ του

ESR1

IVS1-397C & gt? T (rs2234693) πολυμορφισμού έδειξαν σημαντικά αυξημένο κίνδυνο για GBC (p = 0,009? [OR], 4.8), ενώ IVS1-351A & gt? G ( rs9340799) πολυμορφισμός ανατίθενται αυξημένο κίνδυνο για GBC στις γυναίκες (p = 0,026? [OR], 2.4). Αυτά τα αντικρουόμενα αποτελέσματα μπορεί να οφείλεται εν μέρει σε ανεπαρκή αριθμό των ανδρών σε σύγκριση με το GBC γυναίκες ασθενείς. Καμία από τις γενετικές παραλλαγές του

eSR2

και

PGR

ins /ντελ ανατίθενται κίνδυνο φύλο για GBC τόσο σε γονοτυπική και αλληλομόρφων επίπεδα. Παρόμοια αποτελέσματα ελήφθησαν όταν συγκρίναμε χολολίθων αρσενικά και τα θηλυκά με τα αντίστοιχα φύλο διαχωρισμένου ελέγχους. (Τα δεδομένα δεν εμφανίζονται.).

ESR1

και

PGR

πολυμορφισμών και Διαμόρφωση του κινδύνου στην παρουσία χολολίθων

Από χολόλιθοι είναι παρούσα σε περισσότερες από το 50% των ασθενών GBC, τα κρούσματα καρκίνου διαχωρίστηκαν σε δύο ομάδες με βάση την παρουσία ή την απουσία συνοδευτικών χολόλιθων και συγκρίθηκε με τους ελέγχους ανεξάρτητα (Πίνακας 3). GBC ασθενείς με συνοδευτικά χολόλιθους βρέθηκαν να έχουν υψηλότερο κίνδυνο ανάπτυξης της νόσου με το

ESR1

IVS1-397 CT + ΤΤ (rs2234693) γονότυπους (p = 0,002? [OR], 1.6 Πίνακας 3). Σε αντίθεση,

ESR1

Ex4-122C & gt? G (rs1801132) δεν βρέθηκε να σχετίζεται σημαντικά και στις δύο υποομάδες. Σε περίπτωση

PGR

ins /del (rs1042838), μια προστατευτική επίδραση παρατηρήθηκε σε GBC ασθενείς ανεξάρτητα από το καθεστώς χολολίθων τους (Πίνακας 3). Ωστόσο, σε σύγκριση των GBC ασθενείς που έχουν πέτρες στη χολή με τους ασθενείς χολολίθων (όχι καρκίνος), τα αποτελέσματα έδειξαν καμία συσχέτιση με όλες τις μελετηθεί πολυμορφισμούς του

ESR1, eSR2

και

PGR,

τόσο σε γονοτυπική και αλληλομόρφων επίπεδα. (Τα δεδομένα δεν εμφανίζονται.).

Ανισορροπία Σύνδεσης και απλότυποι Ανάλυση του

ESR1

στην υπόθεση και Ελέγχου Ομάδων

Κατά την ανάλυση LD,

ESR1

rs2234693 και rs9340799 βρέθηκαν να είναι σε ανισορροπία σύνδεσης (D ‘= 0,575). Απλοτύπων κατασκευάστηκαν για τους τρεις πολυμορφισμούς στο

ESR1

γονίδιο συμπεριλαμβανομένων IVS1-397C & gt? T (rs2234693)? IVS1-351A & gt? G (rs9340799) και Ex4-122C & gt? G (rs1801132). Οι απλότυποι που περιλαμβάνει τα ομόζυγα άγρια ​​αλληλόμορφα ελήφθησαν ως αναφορά και η διαφορά στις συχνότητες των απλοτύπων μεταξύ ασθενών και μαρτύρων ελέγχθηκαν με τη χρήση τεστ chi-square.

απλοτύπων ανάλυση των μελετήθηκαν τρεις πολυμορφισμούς του

ESR1

αποκάλυψε ότι η διανομή των Τ

rs2234693G

rs9340799C

rs1801132 απλότυπος ήταν σημαντικά υψηλότερη στα δύο GBC (27,5% ν /s 13.7%) ασθενείς και χολολίθων (25,1% ν /s 13,7) σε σύγκριση με τους μάρτυρες και απονέμει υψηλό κίνδυνο για GBC (p = & lt? 0,0001? [OR], 3.0 Πίνακας 4) και χολολιθίαση (p = 0,0012? [OR], 2.2 Πίνακας 4). Παγκόσμια απλοτύπων ανάλυση έδειξε μία στατιστικά σημαντική διαφορά μεταξύ GBC περιπτώσεις και τους ελέγχους με βάση το πρότυπο κατανομής του

ESR1

απλοτύπων (p = & lt? 0.001). Ωστόσο, κανένας από το

eSR2

απλοτύπων βρέθηκαν να σχετίζονται με το GBC και τον κίνδυνο χολολιθίασης.

Η

Gene-γονιδίου Αλληλεπίδραση

Όπως μπορεί να υπάρχουν σημαντικές αλληλεπιδράσεις μεταξύ

PGR, ESR1

και

eSR2

, έγινε συνολική γονίδιο- ανάλυση της αλληλεπίδρασης γονιδίων. Τα αποτελέσματα φαίνονται στον Πίνακα 5 αποκάλυψε σημαντική αλληλεπίδραση σε συγκεκριμένες παραλλαγές των τριών γονιδίων με τη συνολική αλληλεπίδραση τιμή p & lt?. 0.0001

Η

Σύλλογος Αλληλεπιδράσεις Υψηλής τάξης με GBC κινδύνου από MDR Ανάλυση

προηγούμενα αποτελέσματα μας έδειξαν την εμπλοκή των αλληλεπιδράσεων γονιδίων-γονίδιο υψηλής τάξης στην επιδιόρθωση του DNA και φλεγμονώδεις μονοπάτια στο GBC ευαισθησία [26]. Ως εκ τούτου, ψάξαμε για τέτοιες αλληλεπιδράσεις στις γενετικές παραλλαγές των ορμονικών γονιδίων υποδοχέα, χρησιμοποιώντας ανάλυση MDR και CART.

Ο Πίνακας 6 παρουσιάζει το καλύτερο μοντέλο αλληλεπίδρασης με ανάλυση MDR. Το καλύτερο μοντέλο ενός παράγοντα για την πρόβλεψη GBC κίνδυνος ήταν

ESR1

IVS1-397C & gt? T SNP (ακρίβεια δοκιμής = 0.519, CVC = 10/10, μετάθεση p = 0,025). Το καλύτερο μοντέλο δύο παραγόντων του

ESR1

IVS1 351Α & gt? G και

eSR2

-789 A & gt? C είχε μια βελτιωμένη ακρίβεια δοκιμή των 0.564 (μετάθεση p = & lt? 0.001), ωστόσο, η CVC μειώθηκαν (6/10). Το καλύτερο μοντέλο αλληλεπίδρασης ήταν το μοντέλο τριών παραγόντων συμπεριλαμβανομένων των

ESR1

IVS1-397C & gt? T

ESR1

IVS1 351Α & gt? G και

eSR2

-789 A & gt? C SNPs, η οποία απέδωσε την υψηλότερη ακρίβεια δοκιμή των 0,634 και η μέγιστη CVC του 10/10 (μετάθεση p = & lt? 0.001). Το μοντέλο τεσσάρων παράγοντας που αποτελείται από

ESR1

IVS1-397C & gt? T, IVS1 351Α & gt? G, Ex4-122C & gt? G και

eSR2

-789 A & gt? C και βελτιωμένη ακρίβεια δοκιμών σε σύγκριση με το μοντέλο ενός παράγοντα (CVC = 10/10 μετάθεση p = & lt? 0.001). Για τα τρία SNPs που προσδιορίζονται με τον καλύτερο μοντέλο αλληλεπίδρασης,

ESR1

IVS1-397C & gt? T, IVS1 351Α & gt? G και

eSR2

-789 A & gt? C ενώθηκαν και διαχωρίστηκαν μεταξύ τους, ανάλογα με το λογισμικό MDR . Τα άτομα που φέρουν το συνδυασμένο στρώμα του κινδύνου είχαν 4,0 φορές αυξημένο κίνδυνο για GBC (p = & lt? 0.001). Επιπλέον, ένα συνδυασμένο αποτέλεσμα των

ESR1

IVS1-397C & gt? T, IVS1 -351A & gt? G και

eSR2

-789 A & gt? C αξιολογήθηκε με ανάλυση λογιστικής παλινδρόμησης (Πίνακας 7) με το

ESR1

IVS1-397TT, IVS1-351GG και

eSR2

-789 ΑΑ ως γονότυπους κίνδυνο. Τα υποκείμενα κατηγοριοποιήθηκαν σε τέσσερις ομάδες ανάλογα με τον αριθμό των γονότυπων κινδύνου που διενεργείται και αυτών χωρίς γονότυπο κινδύνου είχαν οριστεί ως ομάδα αναφοράς. Βρήκαμε ότι οι ρ-τιμές για τα άτομα που φέρουν ένα και δύο γονότυπους κινδύνου 0,46 και 0,015 αντίστοιχα, Ωστόσο, η τιμή ρ και ΕΑΠ για τις τρεις γονότυπους κίνδυνος δεν μπορεί να διαπιστωθεί, λόγω της απουσίας του συνδυασμού παραλλαγής στους ελέγχους (Πίνακας 7). Αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν σημαντική επίδραση του γονιδίου δοσολογία του

ESR1

IVS1-397C & gt? T, IVS1 -351A & gt? G και

eSR2

-789 A & gt?. C

Η

Σύλλογος Αλληλεπιδράσεις υψηλής τάξης με GBC κινδύνου από ΚΑΛΑΘΙ ανάλυση

το τελικό προκύπτον δέντρο δημιουργήθηκε από την ανάλυση ΚΑΛΑΘΙ (Πίνακας 8). Συνεπής με το καλύτερο μοντέλο ενός παράγοντα MDR, η αρχική διάσπαση του ριζικού κόμβου στο δέντρο απόφαση ήταν

ESR1

IVS1-397C & gt? T, γεγονός που υποδηλώνει ότι αυτή η SNP είναι ο ισχυρότερος παράγοντας κινδύνου για GBC μεταξύ των πολυμορφισμών που εξετάστηκαν . Περαιτέρω έλεγχος της δομής δέντρου αποκάλυψε διακριτά πρότυπα αλληλεπίδρασης μεταξύ των ατόμων που φέρουν το

ESR1

IVS1-397 CT ή ΤΤ και εκείνες με τις

eSR2

-789 AC ή CC γονότυπους. Τα άτομα που μεταφέρουν

ESR1

IVS1-397CC,

ESR1

-122CC και

eSR2

-789 AC ή ΑΑ γονότυπους είχε το χαμηλότερο ποσοστό περίπτωση του 33,3%, και λαμβάνεται ως σημείο αναφοράς. Χρησιμοποιώντας το τερματικό κόμβο που περιλαμβάνει τα

ESR1

Ex4-122 CC φορείς γονότυπο ως αναφορά, τα άτομα που φέρουν τόσο το

ESR1

-397 CT ή TT,

ESR1

-351 AG ή GG και

eSR2

-789 AC γονότυπους παρουσίασαν σημαντικά υψηλότερο κίνδυνο για GBC (προσαρμογή OR 3.6? 95% CI, 01.07 – 09.01), ενώ τα άτομα με τα συνδυασμένα γονότυπους του

ESR1

– 397 CT ή TT,

ESR1

-351AG ή GG,

eSR2

-789 ΑΑ είχαν τον υψηλότερο κίνδυνο για GBC (προσαρμογή OR 3.9? 95% CI, 2,0 – 9,8) (Πίνακας 8) . Έτσι, συνδυάζοντας την ενιαία ανάλυση τόπου, CART και MDR βρήκαμε ότι μόνο γενετικές παραλλαγές είτε

ESR1

ή

eSR2

δεν μπορεί να είναι υπεύθυνη στην παροχή υψηλού κινδύνου για τη νόσο, αλλά μάλλον μια υψηλότερη γονίδιο τάξης -γονίδιο αλληλεπιδράσεις είναι πιθανό να εμπλέκονται σε γενετική προδιάθεση για GBC.

η

In-silico ανάλυση των γενετικών παραλλαγών στο γονίδιο Δραστηριότητα

Καθώς η SNPs βρίσκονται σε μη-κωδικοποίησης ακολουθίες, ήταν εύλογο ότι ο SNPs μπορεί να έχει επίδραση επί της μεταγραφής του γονιδίου. In-silico ανάλυση χρησιμοποιώντας FAST-SNP και F-SNP έδειξαν αλλαγή στην μεταγραφική ρύθμιση και εναλλακτική συρραφή για τις περισσότερες των επιλεγμένων SNPs (Πίνακας 8). Για in-SILCO ανάλυση των PROGINS, Polyphen «αποτέλεσμα έδειξε την αλλαγή ως καλοήθεις, ενώ SIFT πρότεινε» ανεκτή «αλλαγή (Πίνακας 9).

Η

Συζήτηση

Οι γενετικές διαφορές στα γονίδια ορμονών του φύλου μπορεί να έχει επίδραση στις αντίστοιχες δραστηριότητές τους, προκαλώντας έτσι δια-ατομικές αποκλίσεις στην τάση για GBC. Επίσης, η ισχυρή γυναικεία επίπτωση έθεσε την πιθανότητα ότι τα οιστρογόνα μπορεί να παίζει καθοριστικό παθοφυσιολογικό ρόλο στην εξέλιξη του καρκίνου της χοληδόχου κύστης [27]. Επιπλέον, η έκφραση και λειτουργικές μελέτες έχουν δείξει άμεσες αλληλεπιδράσεις μεταξύ ESR και τομέων υποδοχέων PGR [28], [29]. Υπάρχουν ενδείξεις ότι η εγγενής κίνδυνος της GBC από χολολιθίαση σε ασθενείς χωρίς οικογενειακό ιστορικό χολολιθίασης είχαν 21 φορές τον κίνδυνο, ενώ εκείνοι με δύο πέτρες στη χολή και ένα θετικό οικογενειακό ιστορικό είχαν 57 φορές υψηλότερο κίνδυνο [6].

στην παρούσα μελέτη, εφαρμόσαμε ένα πολυ-αναλυτική στρατηγική που συνδυάζει LR, MDR και προσεγγίσεις ΚΑΛΑΘΙ να εξετάζει συστηματικά τις συσχετίσεις μεταξύ GBC κινδύνου και μια ομάδα γενετικών πολυμορφισμών που εμπλέκονται στην ορμονική οδό.

στο μονού ανάλυση τόπο,

ESR1

IVS1-397C & gt? T (rs2234693) πολυμορφισμός έδειξε σημαντική συσχέτιση με το GBC κίνδυνο. Τα αποτελέσματά μας από LR, MDR και ΚΑΛΑΘΙ αναλύσεις Προτείνεται επίσης παγίως ότι

ESR1

IVS1-397C & gt? T πολυμορφισμός είναι ο σημαντικότερος παράγοντας ευαισθησίας για την ανάπτυξη GBC. Επιπλέον, η γονιδιακή – ανάλυση της αλληλεπίδρασης γονιδίων έδειξαν σημαντικές αλληλεπιδράσεις μεταξύ αυτών των ορμονικών παραλλαγές. Επιπλέον genethe πολυ-αναλυτική στρατηγικές αποκάλυψε επίσης τις αλληλεπιδράσεις γονιδίων-γονίδιο υψηλότερης τάξης μεταξύ των

ESR1

IVS1-397C & gt? T, IVS1 -351A & gt? G και

eSR2

-789 A & gt? C πολυμορφισμοί στο GBC κίνδυνο.

σχετικά με την εκτέλεση λεπτομερή ανάλυση των απλοτύπων, βρήκαμε ότι το καρκίνωμα της χοληδόχου κύστης και πέτρες στη χολή άτομα που μεταφέρουν

ESR1

απλοτύπων IVS1-397T, IVS1-351G, Ex4-122C ανατίθενται αυξημένο κίνδυνο τόσο για GBC και πέτρες στη χολή που δείχνει ότι

ESR1

απλότυπος ως παράγοντας κινδύνου. Έτσι, οι μεταφορείς των

ESR1

απλοτύπων είχε ένα 3,04 φορές αυξημένο κίνδυνο καρκίνου της χοληδόχου κύστης σε σχέση με τους μη φορείς, ενώ οι ίδιες απλοτύπων που ανατίθενται 2,2 φορές αυξημένο κίνδυνο για ασθένειες χολολίθων. Σε αντίθεση,

Alu

πολυμορφισμού εισαγωγή των υποδοχέων προγεστερόνης (

PGR

) ανατίθενται χαμηλότερο κίνδυνο σε GBC και οι ασθενείς χολολίθων.

Πρόσφατα, μια μελέτη από Park et al. στην κινεζική πληθυσμού έχουν αξιολογήσει τις διαφορές στους υποδοχείς ορμονών (

ESR1, eSR2

) σε σχέση με καρκίνους των χοληφόρων οδών (35) και ανέφερε μια συσχέτιση με το

ESR1

(rs1801132) και

eSR2

(rs1255953) παραλλαγές στο GBC κινδύνου, αλλά εμείς δεν παρατηρούμε καμία σημαντική συσχέτιση με αυτά τα εξονικό πολυμορφισμούς. Αντ ‘αυτού, βρήκαμε συσχέτιση με την ιντρονική (

ESR1

) και υποκινητή (

eSR2

) πολυμορφισμούς. Ο λόγος πίσω από αυτή τη διαφορά θα μπορούσε να είναι η διακύμανση του πληθυσμού. Οι αλληλόμορφες συχνότητες

ESR1

και

eSR2

πολυμορφισμοί δεν ήταν συγκρίσιμα μεταξύ των δύο μελετών. Επίσης, ο συνολικός αριθμός των περιπτώσεων GBC που εγγράφονται από Πάρκο et al ήταν σχετικά μικρότερη σε σύγκριση με την παρούσα μελέτη, η οποία αυξάνει τις πιθανότητες του τύπου ΙΙ β λάθος στη μελέτη τους. Είναι επίσης πιθανό ότι η SNPs του

ESR1

και

eSR2

δεν μπορεί να παρέχουν άμεσες επιπτώσεις στην ευαισθησία GBC και τα αποτελέσματά τους μπορεί να διαμεσολαβείται μέσω της σύνδεσής τους με ορισμένες βασικές λειτουργικές πολυμορφισμούς.

Η σχέση μεταξύ

ESR1

πολυμορφισμούς και τον κίνδυνο της GBC /χολόλιθοι είναι βιολογικά αξιόπιστη. Οι μελέτες σε ζώα έχουν δείξει ότι η ΤΚΕ είναι παρόντα στο ηπατο-παγκρεατικών-χοληφόρου δένδρου [30], [31], [32], συμπεριλαμβανομένων των χολικών επιθηλιακών κυττάρων πόρου και της χοληδόχου κύστης, γεγονός που υποδηλώνει ότι τα οιστρογόνα μπορεί να παίζει ένα ρόλο σε ασθένειες της χοληδόχου κύστης. Επιπλέον, ανοσοϊστοχημικές και ποσοτικές μελέτες RT PCR προέκυψε επίσης ότι το επίπεδο έκφρασης του

ESR1

γονίδιο είναι περίπου 50 φορές υψηλότερη σε σύγκριση με

eSR2

[33] Σε ζωικά μοντέλα, 17β οιστραδιόλη προωθείται χολολίθων σχηματισμός περιλαμβάνει προς τα πάνω ρύθμιση της ηπατικής έκφρασης ERalpha αλλά όχι ERbeta, και οι lithogenic δράσεις του οιστρογόνου μπορεί να αποκλειστεί εντελώς από τις αντι-οιστρογονική παράγοντες ICI 182,780 [34]. Αυτές οι μελέτες δείχνουν ότι ESR-1 είναι παίκτης-κλειδί και τα ευρήματα μπορεί να προσφέρει μια νέα προσέγγιση για τη θεραπεία της χολολιθίασης και καρκίνου της χοληδόχου κύστης, αναστέλλοντας την ηπατική δραστηριότητα ER με το συκώτι-ειδικά, ERalpha-εκλεκτικοί ανταγωνιστές. Μερικές μελέτες έχουν αναδείξει τον σημαντικό ρόλο του

ESR-2

rs1271572 του κινδύνου καρκίνου των ωοθηκών [35], [36]. Επιπλέον, μια μελέτη από MARIE-Genica Κοινοπραξία πρότεινε ότι παρατηρήθηκαν υψηλότερο κίνδυνο σε άτομα που έχουν συνδυαστεί γονότυπους των δύο

ESR1

και

eSR2

γονίδια που τροποποιημένο κίνδυνο που συνδέεται με τη μονοθεραπεία με οιστρογόνα που χρησιμοποιούνται στον καρκίνο του μαστού [37 ]. Παρομοίως, στη μελέτη μας, εφαρμόζοντας τις αλληλεπιδράσεις γονιδίων-γονιδίου και multianalytical προσεγγίσεις αποκάλυψε ότι GBC κίνδυνος ήταν υψηλότερος όταν οι παραλλαγή γονότυπους του

ESR1

και άγρια ​​

eSR2

-789 A & gt? C ήταν παρούσα σε συνδυασμούς .

μπορεί επίσης να αναφερθεί ότι οι γενετικές παραλλαγές σε πολλά άλλα γονίδια της βιοσύνθεσης οιστρογόνων, των μεταφορών και του μεταβολισμού έχουν δείξει σημαντική συσχέτιση τόσο με χολολίθων ασθένεια και καρκίνος των χοληφόρων οδών, ενδεχομένως με ρύθμιση του μεταβολισμού ορμόνη [18]. Η IVS1-397C & gt? T και IVS1-351A & gt? G πολυμορφισμοί έχουν ένα σημαντικό τομέα της έρευνας σε ασθένειες όπως η οστεοπόρωση [22], [38], [39] καρδιαγγειακής νόσου [40] και του καρκίνου [41]. Ένας αριθμός υποθέσεων για τη λειτουργική σημασία αυτών των πολυμορφισμών έχουν αναφερθεί στη βιβλιογραφία. Λόγω της θέσης τους, 397 και 351 ζεύγη βάσεων ανοδικά από την έναρξη του εξονίου 2, πιθανή λειτουργική μηχανισμοί περιλαμβάνουν αλλαγμένη έκφραση ESR1 με δέσμευση των παραγόντων μεταγραφής και επηρεάζουν εναλλακτικό μάτισμα απόκλιση. Μελέτες in-silico μας στηρίξει περαιτέρω την επίδραση των γενετικών παραλλαγών του υποδοχέα οιστρογόνου στη γονιδιακή μεταγραφή και μηχανισμούς μάτισμα. Έτσι, τα οιστρογόνα θα μπορούσαν να ενισχύσουν cholelithogenesis χοληστερόλης από αυξάνοντας τις λειτουργίες των υποδοχέων οιστρογόνων στο ήπαρ και της χοληδόχου κύστης [42]. Λαμβάνοντας υπόψη τη σημασία των ορμονικών υποδοχέων σε λειτουργία της χοληδόχου κύστης, οι υπέθεσαν παραλλαγές μπορεί να οδηγήσει σε χολόλιθοι χοληστερόλης που ακολουθείται από χρόνια φλεγμονή και την περαιτέρω έντονη μεταπλασία, τελικά εξελίσσεται σε GBC η οποία με τη σειρά της μπορεί να χαρακτηριστεί ως το χολολίθων οδού που εξαρτάται από τους υποδοχείς οιστρογόνων.

Για τον πολυμορφισμό των υποδοχέων προγεστερόνης, πολύ λίγα είναι γνωστά για τις λειτουργικές συνέπειες με τις οποίες em

Alu

εισαγωγή σε υποδοχέα προγεστερόνης προστασία των ατόμων από το καρκίνωμα της χοληδόχου κύστης και πέτρες στη χολή. PROGINS κωδικούς αλληλόμορφο για την PGR που αποτελείται από 306 bp Alu εισαγωγή στο ιντρόνιο G.

PGR

ins /del είναι σε τέλεια ανισορροπία σύνδεσης (D ‘= 1.0) με V660L πολυμορφισμό (rs1042838) [43] (δηλαδή το αλληλόμορφο ένθετο που φέρει (PGR Ι) παρουσιάζει μεγαλύτερη σταθερότητα mRNA και μεταγράφεται σε ένα πιο σταθερό και μεταγραφικά ενεργή πρωτεΐνη [44]. Το αλληλόμορφο εισαγωγή PROGINS έχει αναφερθεί ως αντιστρόφως ανάλογη με τον κίνδυνο καρκίνου του μαστού [45], [46], [47] και η ενδομητρίωση [48] σε ορισμένους πληθυσμούς [49], [50 ], [51]. πιστεύεται ότι η αυξημένη PGR μπορεί να αναστέλλει τη μιτογόνο δράση της ινσουλίνης αυξητικούς παράγοντες (IGFs), ενδεχομένως μέσω της ρύθμισης των πρωτεϊνών με ινσουλίνη αυξητικός παράγοντας-δεσμευτική 1 (ΑΕΣ-1) και έτσι να επηρεάσει τον καρκίνο κινδύνου [52], [53], [54].

Περιορισμοί μελέτη

Παρά το γεγονός ότι, το μέγεθος του δείγματος στην παρούσα μελέτη είναι αρκετή για να δώσει το 80% της ισχύος, αλλά περιορίζεται στην ανάλυση των υποομάδων. Ως εκ τούτου, η μελέτη μπορεί να απαιτούν επιβεβαίωση σε μεγαλύτερες ομάδες. Επειδή αυτό είναι μια μελέτη σύνδεσης, δεν μπορούμε να αποκλείσουμε την παρουσία πιθανών ανισορροπία σύνδεσης με άλλα γειτονικά γονίδια που μπορεί να εξηγήσει τη σημαντική σύνδεση με φαινοτύπους καρκίνο της χοληδόχου κύστης ή δυσμενή πρόγνωση.

Εν κατακλείδι, η μελέτη μας έδειξε ότι

ESR1

IVS1-397C & gt? T (rs2234693),

ESR1

IVS1-351A & gt? G (rs9340799),

eSR2

-789 A & gt ? C (rs1271572) πολυμορφισμών και αλληλεπιδράσεις ανώτερης τάξης τους μπορούν να επιφέρουν αυξημένο κίνδυνο καρκίνου της χοληδόχου κύστης, πιθανώς μέσω χολολίθων οδού μεσολάβηση

Μέθοδοι

Δήλωση Ηθικής

Το πρωτόκολλο της μελέτης. εγκρίθηκε από την θεσμική επιτροπή δεοντολογίας του Sanjay Gandhi Μεταπτυχιακό Ινστιτούτο Ιατρικών Επιστημών (SGPGIMS), και οι συγγραφείς ακολούθησαν τους κανόνες της Διακήρυξης Παγκόσμια Ένωση του Ελσίνκι. Όλοι οι συμμετέχοντες δόθηκαν με γραπτή συγκατάθεση για τη μελέτη.

Πληθυσμός μελέτης

Η παρούσα μελέτη ελέγχου υπόθεση προσληφθεί συνολικά 860 άτομα, συμπεριλαμβανομένων 410 GBC ασθενείς που περιλάμβανε 230 προηγούμενες GBC περιπτώσεις [ ,,,0],26], 230 ασθενείς χολολίθων (GS) και 220 υγιή άτομα. Όλοι οι μη συνδεδεμένοι θέματα ήταν ινδικής εθνικότητας Βορρά. Οι ασθενείς διαδοχικά διαγνώστηκαν μεταξύ Ιουνίου 2006 και Σεπτεμβρίου 2011 στο Τμήμα Γαστροοισοφαγική χειρουργική επέμβαση, Sanjay Gandhi Μεταπτυχιακό Ινστιτούτο Ιατρικών Επιστημών και Τμήμα Χειρουργικής Ογκολογίας, CSMMU Lucknow, Ινδία. GBC ορίστηκε ως όγκος που προκύπτει στο εσώτατο (βλεννογόνου) στρώμα και εξαπλώνονται με τη σπλαχνικό περιτόναιο (ιστός που καλύπτει τη χοληδόχο κύστη) ή /και στο ήπαρ ή /και σε ένα κοντινό όργανο (όπως το στομάχι, το λεπτό έντερο, κόλον, πάγκρεας, ή χοληφόρων πόρων εκτός του ήπατος), και σε κοντινά λεμφαδένες. διάγνωση του καρκίνου για όλες τις περιπτώσεις επιβεβαιώθηκε από Fine Needle Ατμοσφαιρικός κυττάρων κυτταρολογική εξέταση (FNAC) και ιστοπαθολογική εξέταση, δίδοντας ένα ποσοστό ανταπόκρισης 94%. Σταδιοποίηση του καρκίνου τεκμηριώθηκε σύμφωνα με την AJCC /UICC στάσης [55]. Σε χολολιθίαση, συμπτωματική χολολιθίαση είχαν εντοπιστεί από διακοιλιακό υπερηχογράφημα. Οι υγιείς μάρτυρες είχαν προσληφθεί από άσχετα άτομα χωρίς καμία κακοήθεια από το γενικό πληθυσμό. Άτομα με αθόρυβη χολόλιθοι ανιχνεύεται με υπερηχογράφημα εξαιρέθηκαν από τους ελέγχους. Οι έλεγχοι ήταν συχνότητα ταιριάζει με τους ασθενείς ως προς την ηλικία (± 5 έτη) και το φύλο. Κατά την πρόσληψη, ενημερωμένη συγκατάθεση λήφθηκε από κάθε θέμα και τις πληροφορίες που αφορούν δημογραφικά χαρακτηριστικά, όπως το φύλο, την ηλικία και τη συνήθεια του καπνίσματος, συλλέχθηκαν μέσω ενός ερωτηματολογίου.

Τα δείγματα DNA και Γονοτυπικές

Με βάση της προηγούμενης λειτουργικής και επιδημιολογικές μελέτες [17], επιλέξαμε ένα σύνολο 6 λογοτεχνία-καθορισμένες λειτουργικές πολυμορφισμούς σε τρία σημαντικά γονίδια που εμπλέκονται ανήκουν σε υποδοχείς οιστρογόνων και προγεστερόνης. Υποψήφιες πολυμορφισμών μονού νουκλεοτιδίου (SNPs) επιλέχθηκαν με βάση τα ακόλουθα: (α) τη συχνότητα αλληλόμορφου του πάνω από πέντε τοις εκατό σε δημοσιευμένη βιβλιογραφία ή τις βάσεις δεδομένων [56] (β) επικυρωμένη αλληλικές υποκαταστάσεις, και /ή (γ) λειτουργικές αλλαγές που συνδέονται με αλληλόμορφη υποκατάσταση που αναφέρονται στη βιβλιογραφία. Αυτά περιλαμβάνονται τρεις πολυμορφισμούς μονών νουκλεοτιδίων (SNPs) σε υποδοχέα οιστρογόνου 1 (

ESR1

: IVS1-397C & gt? Rs2234693 Τ, IVS1-351A & gt? G rs9340799), και Ex4-122C & gt? G (rs1801132) του γονιδίου, δύο SNPs στον υποδοχέα οιστρογόνων 2 (

eSR2

: -789 A & gt? Crs1271572, 1082 G & gt? ένα rs1256049) του γονιδίου και ένα SNP σε υποδοχέα προγεστερόνης (

PGR

: ins /del rs1042838). Γενωμικό DNA εκχυλίστηκε από 5 ml λευκοκύτταρα περιφερικού αίματος σύμφωνα με το πρότυπο εξαλάτωση μέθοδο [57]. Το δείγμα αίματος και τα κλινικά στοιχεία συλλέχθηκαν από κάθε συμμετέχοντα σε προσλήψεις. Οι πολυμορφισμοί γονότυπος χρησιμοποιώντας τη μέθοδο του πολυμορφισμού μήκους θραύσματος PCR ή ΡΟΚ-περιορισμού όπως περιγράφηκε προηγουμένως από τους Lai

et al

[58] και Rowe

et al

. [59]. Οι πέψη PCR θραύσματα διαχωρίστηκαν σε πηκτή πολυακρυλαμιδίου, κηλιδώθηκαν με βρωμιούχο αιθίδιο και παρατηρήθηκε με υπεριώδες σύστημα απεικόνισης (Bio-Rad Model). Γονοτυπική έγινε χωρίς τη γνώση της κατάστασης υπόθεσης ή τον έλεγχο. Ένα 10% μασκοφόροι, τυχαίο δείγμα των περιπτώσεων και οι έλεγχοι ελέγχθηκαν δύο φορές από διαφορετικές εργαστηριακό προσωπικό και η επαναληψιμότητα ήταν 100%.

Στατιστική Ανάλυση

Η περιγραφική στατιστική παρουσιάστηκαν ως μέση τιμή και την τυπική απόκλιση [SD ] για συνεχή μέτρα, ενώ η απόλυτη τιμή και τα ποσοστά χρησιμοποιήθηκαν για τις κατηγορικές μέτρα. Η chi-square τεστ καλής προσαρμογής χρησιμοποιήθηκε για κάθε απόκλιση από Hardy Weinberg ισορροπία στους ελέγχους. Οι διαφορές στο γονότυπο και αλληλόμορφο συχνότητες μεταξύ των ομάδων της μελέτης εκτιμήθηκαν με την δοκιμασία chi-square. Άνευ όρων LR πολυπαραγοντική χρησιμοποιήθηκε για την εκτίμηση λόγων πιθανοτήτων [ΕΑΠ] και τα διαστήματα εμπιστοσύνης 95% τους [ΠΙ] προσαρμογή για την ηλικία και το φύλο. Οι ΕΑΠ προσαρμόστηκαν για συγχυτικούς παράγοντες όπως η ηλικία και το φύλο. Μια δίπλευρη ρ-τιμή μικρότερη από 0.05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική αποτέλεσμα. Όλες οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση SPSS έκδοση λογισμικού 16.0 (SPSS, Chicago, IL, USA). ανάλυση απλότυπου διεξήχθη χρησιμοποιώντας SNPstatwww.snpstats.in [60].

μείωσης διάστασης Πολλαπλά (MDR) μέθοδος είναι μη-παραμετρικές, γενετική δωρεάν μοντέλο μέθοδος για την υπερνίκηση ορισμένων από τους περιορισμούς της λογιστικής παλινδρόμησης (δηλαδή το μέγεθος του δείγματος περιορισμούς) για την ανίχνευση και τον χαρακτηρισμό των αλληλεπιδράσεων γονίδιο-γονίδιο [61].