Αφηρημένο

Ιστορικό

Παρά την πρόοδο στην επικουρική χημειοθεραπεία κατά τις πρόσφατες δεκαετίες, καρκίνους του παγκρέατος και του παχέος εντέρου παραμένουν συχνές αιτίες θανάτου παγκοσμίως. Βακτηριακές τοξίνες, οι οποίες δεσμεύονται ειδικά σε επιφανειακά εκτεθειμένες γλυκοσφιγγολιπίδια κύτταρο, είναι ένας πιθανός νέα θεραπεία. Προσδιορίσαμε την έκφραση του globotriaosylceramide (Gb3Cer /CD77), ο υποδοχέας τοξίνη Shiga, σε ανθρώπινα παγκρεατικά αδενοκαρκινώματα και του παχέος εντέρου.

Μεθοδολογία Κύρια Ευρήματα /

Tissue λιπιδίων εκχυλίσματα ζεύγη των καρκινικών και παρακείμενων φυσιολογικό ιστό από 21 παγκρεατικά και 16 ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου διερευνήθηκαν με λεπτής στοιβάδας χρωματογραφία δοκιμασία επικάλυψης σε συνδυασμό με μια νέα προσέγγιση φασματομετρία μάζας. Gb3Cer /CD77 εντοπίστηκε με μικροσκοπία ανοσοφθορισμού κρυοτομών από κακοήθη και αντίστοιχα δείγματα υγιούς ιστού. 62% του παγκρέατος και του 81% των αδενοκαρκινώματα του παχέος εντέρου έδειξαν αυξημένη έκφραση Gb3Cer /CD77, ενώ το 38% και το 19% των κακοήθων παγκρέατος και του παχέος εντέρου ιστού, αντίστοιχα, δεν το έκανε, δείχνει τη σύνδεση αυτού του δείκτη με νεοπλασματικό μετασχηματισμό. Επίσης, Gb3Cer /CD77 συσχετίστηκε με κακή διαφοροποίηση (G & gt? 2) σε καρκίνο του παγκρέατος (P = 0,039). Ανάλυση φασματογράφου μάζας αποδεικνύεται ενισχυμένη έκφραση Gb3Cer /CD77 με μακρά (C24) και βραχείας αλύσου λιπαρά οξέα (C16) σε κακοήθεις ιστούς και υπέδειξε την παρουσία lipoforms υδροξυλιωμένων λιπαρών οξέων, που προτείνονται να είναι σημαντικό για τον υποδοχέα στόχευση. Θα μπορούσαν να ανιχνευθούν στο 86% των παγκρεατικών και περίπου 19% των αδενοκαρκινωμάτων κόλον. Ανοσοϊστολογία κρυοτομές ιστού έδειξε όγκου-σύνδεση αυτών των υποδοχέων.

Συμπεράσματα /Σημασία

Ενισχυμένη έκφραση Gb3Cer /CD77 στα περισσότερα παγκρέατος και του παχέος εντέρου αδενοκαρκινώματα ζητά την εξέταση της τοξίνης Shiga, Β-υπομονάδα της ή Β-υπομονάδα-παράγωγα, όπως νέων θεραπευτικών στρατηγικών για την αντιμετώπιση των εν λόγω προκλητική κακοηθειών

Παράθεση:. Distler U, Souady J, Hülsewig Μ, Drmic-Hofman Ι, Haier J, Friedrich AW, et al. (2009) Shiga τοξίνη Receptor Gb3Cer /CD77: Tumor-σύνδεσης και πολλά υποσχόμενη θεραπευτική Target στο πάγκρεας και τον καρκίνο του παχέος εντέρου. PLoS ONE 4 (8): e6813. doi: 10.1371 /journal.pone.0006813

Επιμέλεια: Georg χάκερ, Τεχνικό Πανεπιστήμιο του Μονάχου, Γερμανία

Ελήφθη: 30 Μαρ του 2009? Αποδεκτές: 22 Ιούνη 2009? Δημοσιεύθηκε: 28 Αυγούστου 2009

Copyright: © 2009 Distler et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη έχει χρηματοδοτηθεί από την Deutsche Forschungsgemeinschaft (URL: www.dfg.de) χορηγεί FR2569 /1-1 και MU845 /4-1, η Graduiertenkolleg GRK1409 /1 (URL: http: //zmbe.uni-muenster.de/GRK1409 /) και η Deutsche Krebshilfe (URL: www.krebshilfe.de) χορηγεί DKH 106742. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Οι ανταγωνιστικές. ενδιαφέροντα: Οι συγγραφείς δηλώνουν ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

παγκρέατος και του παχέος εντέρου είναι η τέταρτη και η δεύτερη πιο συχνές αιτίες της θνησιμότητας από καρκίνο στον δυτικό κόσμο, αντίστοιχα, αντιπροσωπεύοντας κατ ‘εκτίμηση. 84.250 θάνατοι το 2008 μόνο στις ΗΠΑ [1]. Με μια μέση περίοδο επιβίωσης περίπου 6 μήνες και τα ποσοστά επιβίωσης 5 ετών & lt? 5% του παγκρέατος τάξεις του καρκίνου από τις πιο θανατηφόρες των κοινών όγκων. Η πρόγνωση για τους ασθενείς που πάσχουν από καρκινώματα του παχέος εντέρου με μακρινή μετάσταση κατά τον χρόνο της διάγνωσης είναι σχεδόν τόσο κακή, όπως για τον καρκίνο του παγκρέατος [2]. Μόνο περίπου το 10-15% των ασθενών με καρκίνο του παγκρέατος είναι υποψήφιοι για πιθανώς θεραπευτική χειρουργική επέμβαση [3], [4], υπογραμμίζοντας την επείγουσα ανάγκη να αναπτυχθούν νέες στρατηγικές για τη θεραπεία ασθενών με αυτές τις ανεγχείρητο όγκους. Στοχευμένες θεραπείες, για παράδειγμα, με βάση τις βακτηριακές και φυτικές τοξίνες ή μονοκλωνικά αντισώματα, τα οποία αναγνωρίζουν κυτταρικής επιφάνειας γλυκοσφιγγολιπίδια (ΓΣΛ), που υπερεκφράζονται στο πάγκρεας ή /και καρκίνο του παχέος εντέρου, θα μπορούσε να αποδειχθεί υποσχόμενες προσεγγίσεις για συμπληρωματική θεραπεία μετά από χειρουργική επέμβαση [5] -. [9]

ΓΣΛ, που αποτελείται από ένα υδρόφιλο ολιγοσακχαρίτη αλυσίδα και μία υδρόφοβη άγκυρα μεμβράνης κεραμιδιού [10], εκφράζονται ως βασικό συστατικό του λιπιδικών σχεδιών στην εξωτερική φύλλο της μεμβράνης πλάσματος [11]. Εκτός από τη συμμετοχή τους στη ρύθμιση της κυτταρικής ανάπτυξης και κυτταρικής προσκόλλησης [12], κυτταρική επιφάνεια εκτεθειμένη αλυσίδες ολιγοσακχαριτών των ΓΣΛ «εξυπηρετεί» σαν θέσεις προσάρτησης για βακτήρια [13] και αξιοποιούνται από διαφορετικές τοξίνες, συμπεριλαμβανομένων Shiga τοξίνες (Stxs), για επιφάνεια πρόσδεσης , ενδοκυτταρική διακίνηση, και τα γεγονότα σηματοδότησης [14]. Stxs (ονομάζεται επίσης βεροτοξίνες), τα οποία παράγονται από παθογόνα

Escherichia coli

στελέχη [15] – [19], ανήκουν στην ΑΒ

5 οικογένειας βακτηριακών τοξινών. Αποτελούνται από ένα ενζυμικά ενεργή Α υπομονάδα που αναστέλλει τη βιοσύνθεση πρωτεϊνών τροποποιώντας ξενιστή rRNA και ένα μη τοξικό homopentameric υπομονάδα Β [20], [21]. Η Β-πενταμερούς συνδέεται με προτιμησιακό globotriaosylceramide υποδοχέα ΕΝΓ της (Gb3Cer /CD77) και ενεργοποιεί εσωτερίκευση της ΑΒ

συγκρότημα 5-Gb3Cer από υποδοχέα ενδοκυττάρωση

μέσω

clathrin επικαλυμμένα κυστίδια [22] ή από ενδοκυτταρικά διαδρομές που δεν περιλαμβάνουν clathrin επικαλυμμένα pits [23]. Το σύμπλοκο τοξίνης-υποδοχέα υφίσταται ανάδρομη μεταφορά μέσα από το δίκτυο Golgi στο ενδοπλασματικό δίκτυο. Μετά retro-μετατόπιση στο κυτοσόλιο [24], ένα μόριο του πρωτεολυτική επεξεργασία A

1-υπομονάδα μπορεί να αναστέλλει την πρωτεϊνική σύνθεση και να σκοτώσει ένα κύτταρο.

Η ανώμαλη έκφραση των ΓΣΛ συμβαίνει σε όλα σχεδόν τα ανθρώπινα και ζωικά καρκίνους [12], [25] και πολλοί που σχετίζονται με όγκους αντιγόνα είναι τώρα γνωστό ότι είναι ΓΣΛ. Η αυξημένη έκφραση του υποδοχέα Stx-Gb3Cer /CD77 έχει αναφερθεί σε διάφορους συμπαγείς όγκους όπως των ωοθηκών [26] και του καρκίνου του μαστού [27] ή κακοήθη μηνιγγίωμα [28]. Πρόσφατα, η ενισχυμένη έκφραση του Gb3Cer /CD77 έχει περιγραφεί ως συσχέτιση με την ανάπτυξη της μετάστασης του καρκίνου του παχέος εντέρου [9], [29]. Gb3Cer /CD77 επιτρέπει επίσης ογκοειδικό εντοπισμό μεμβράνης πλάσματος των πρωτεϊνών (π. Χ. Hsp70) [30]. Καθώς τα μόρια κυτταρικής επιφάνειας, ΓΣΛ που σχετίζονται με όγκους είναι προσβάσιμες σε αντισώματα ή GSL δέσμευσης τοξίνες (δηλαδή, Stx), καθιστώντας τα υποψήφιων στόχων για ογκολογικές εφαρμογές [31]. Κατά συνέπεια, η Stx-συνδετήρα Gb3Cer /CD77 βρίσκεται υπό έρευνα ως πιθανή υποψήφια στόχο για θεραπευτική τοξίνη που βασίζεται [28], [29], [32], [33].

Στην παρούσα μελέτη αναλύσαμε παγκρεατικό ιστό και καρκίνου του κόλου για την έκφραση Gb3Cer /CD77, χρησιμοποιώντας χρωματογραφία λεπτής στιβάδας (TLC) του GSL εκχυλίσματα από ιστούς και ανοσοϊστολογική χρώση κρυοτομές ιστού. Ενισχυμένη έκφραση της STX-υποδοχέων ήταν ανιχνεύσιμο στην πλειονότητα του παγκρέατος και του παχέος εντέρου ιστούς, αντίστοιχα, υποδεικνύοντας μία συσχέτιση με νεοπλασματικό μετασχηματισμό. Επιπλέον, δομικές τροποποιήσεις των λιπιδίων άγκυρες του που σχετίζονται με όγκους Gb3Cer /ειδών CD77 ανιχνεύθηκαν σε καρκινικούς ιστούς και των δύο ειδών όγκων που χρησιμοποιεί μία νέα προσέγγιση φασματομετρία μάζας σε συνδυασμό με TLC ανοσοανίχνευση [8], [34]. Έτσι, ενισχυμένη έκφραση και μεταβολές των λιπιδίων του Gb3Cer /CD77 στα καρκινώματα καθιστούν αυτό το στόχο ένα πολλά υποσχόμενο υποψήφιο για Stx ή /και Stx-κατασκευές σε ογκολογικές εφαρμογές των δύο παγκρέατος και κακοήθειες του παχέος εντέρου.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθική Δήλωση

η Τοπική Επιτροπή Ηθικής του Ιατρικού Συμβουλίου της Westfalen-Lippe και η Ιατρική Σχολή του Πανεπιστημίου Νοσοκομείου Münster (Münster, Γερμανία) ενέκρινε την παρούσα μελέτη (αριθμός αναφοράς 1IXHai). Όλοι οι ασθενείς είχαν ενημερωθεί και συναινέσει εγγράφως.

χειρουργικά δείγματα

Η μελέτη διεξήχθη χρησιμοποιώντας δείγματα του παγκρέατος (n = 21) και του παχέος εντέρου (n = 16) αδενοκαρκινώματα από ασθενείς που είχαν υποβληθεί σε χειρουργική επέμβαση για πρωτογενείς όγκους τους [5]. Tumor ιστολογία προσδιορίστηκε σύμφωνα με τα κριτήρια του UICC [35]. Τα κλινικοπαθολογικοί χαρακτηριστικά της σειράς ασθενών με τα καρκινώματα που περιγράφονται στη συμπληρωματική πίνακες S1 και S2. δείγματα των όγκων καταψύχθηκαν σε υγρό άζωτο αμέσως μετά από χειρουργική επέμβαση και αποθηκεύτηκαν στους -80 ° C μέχρι να αναλυθούν. Αντίστοιχη δείγματα ελέγχου ελήφθησαν από τον ίδιο τον ασθενή στον ίδιο χώρο όργανο χωρίς μακροσκοπική συμμετοχή των όγκων που επιβεβαιώθηκε με ιστολογική εξέταση.

Προετοιμασία των λιπιδίων Αποσπάσματα από χειρουργικά δείγματα

Οι ιστοί ομογενοποιούνται και εξάγεται δυο φορές με 2 mL χλωροφορμίου /μεθανόλης (1/2, ν /ν), 2 ml χλωροφορμίου /μεθανόλης (1/1, ν /ν), και 2 ml χλωροφορμίου /μεθανόλης (2/1, ν /ν). Τα συνδυασμένα υπερκείμενα εκάστου εκχυλίσματος ιστού (12 mL) ξηράνθηκαν με περιστροφική εξάτμιση και φωσφολιπίδια σαπωνοποιείται με επώαση σε 4 mL υδατικού 1 Ν ΝαΟΗ για 1 ώρα στους 37 ° C. Μετά από εξουδετέρωση με 400 μΙ 10 Ν HCl, τα δείγματα υποβλήθηκαν σε διαπίδυση έναντι απιονισμένου νερού και ξηραίνεται με περιστροφική εξάτμιση. Τα εκχυλίσματα ρυθμίστηκε στο καθορισμένων όγκων χλωροφορμίου /μεθανόλης (2/1, ν /ν) που αντιστοιχεί σε 0,1 mg υγρού βάρους ανά μL.

Καθαρισμός της stx1

stx1 καθαρίστηκε από

Ε. coli

C600 (H19J) που φέρει το

STX

1

γονίδιο από

Ε. coli

ρ26: Η11 στέλεχος H19 [36]. Εν συντομία, τα βακτήρια είχαν αποσυντεθεί με κατεργασία υπερήχων και εκχυλίζεται με πολυμυξίνη Β (3000 U /ml) (Sigma-Aldrich Chemie GmbH, Taufkirchen, Γερμανία). Μετά από φυγοκέντρηση, το υπερκείμενο που περιέχει ακατέργαστο stx1 συμπυκνώθηκε με υπερδιήθηση και υποβλήθηκε σε χρωματογραφία επί στήλης υδροξυλαπατίτη ακολουθούμενη από χρωματοεστίαση [37]. Τα κλάσματα στήλης που περιέχει stx1 συνενώθηκαν, υποβλήθηκαν σε διαπίδυση και δείγματα φυλάχτηκαν στους -70 ° C μέχρι τη χρήση. Η καθαρότητα του παρασκευάσματος stx1 παρακολουθήθηκε με SDS-PAGE, και η δομική ακεραιότητα της τοξίνης ελέγχθηκε με χαρτογράφηση πεπτιδίου που χρησιμοποιεί φασματομετρία μάζας [21]. Η βιολογική δραστηριότητα προσδιορίστηκε από κύτταρα Vero κυτταροτοξικότητα [38].

Anti-Gb3Cer /CD77 και αντι-stx1 Αντισώματα

Η προετοιμασία και η εξειδίκευση του αντι-Gb3Cer /αντίσωμα CD77 πολυκλωνικά κοτόπουλο αναγνωρίζοντας την Galα1 -4Galβ1-4Glc-υπολειμμάτων των ειδών /CD77 Gb3Cer έχει περιγραφεί [39], [40]. Stx1 ανιχνεύθηκε με την-stx1 αντίσωμα IgG 1 μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού 109/4-E9b (Sifin, Βερολίνο, Γερμανία).

Υψηλή απόδοση λεπτής στοιβάδας χρωματογραφία (TLC) και ΓΣΛ αναφοράς

Ένα μίγμα ουδέτερων ΓΣΛ από ανθρώπινα ερυθροκύτταρα, που αποτελείται από monohexosylceramide, λακτοζυλοκεραμίδη, Gb3Cer /CD77, και globotetraosylceramide (Gb4Cer), χρησιμοποιήθηκε ως αναφορά [40] για την TLC αντισώματος και προσδιορισμούς επικάλυψης stx1. Η ονοματολογία του ΓΣΛ ακολουθεί τις συστάσεις της IUPAC-IUBM 1997 [41]. ΓΣΛ Αναφοράς και τα εκχυλίσματα λιπιδίου των ιστών εφαρμόστηκαν σε γυάλινες-backed silica gel 60 προεπικαλυμμένα υψηλής απόδοσης χρωματογραφία λεπτής στοιβάδας πλακών (TLC) (καμία 1.05633.0001?. Merck, Darmstadt, Γερμανία) με αυτόματο εφαρμοστή (Linomat IV, CAMAG, Muttenz, Ελβετία) και διαχωρίστηκαν σε χλωροφόρμιο /μεθανόλη /νερό (120/70/17, το καθένα με vol. με 2 mM ΟαΟ

2). ΓΣΛ αναφορά βάφτηκαν με ορσινόλης.

TLC Επικάλυψη Δοκιμασία

Gb3Cer /CD77 ανιχνεύθηκε χρησιμοποιώντας την υπέρθεση πολύκλωνο αντίσωμα κοτόπουλου ή stx1 όπως περιγράφεται [40], [42]. αντισώματα φωσφατάση σημασμένο πρωτογενή αντι-Gb3Cer /CD77 και δευτεροβάθμιας αλκαλικό (Dianova, Αμβούργο, Γερμανία) χρησιμοποιήθηκαν σε 1:2000 αραιώσεις. Bound δευτερογενή αντισώματα κατέστησαν ορατά με ανάπτυξη χρώματος με 0,05% (w /v) 5-βρωμο-4-χλωρο-3-ινδολυλφωσφορικό π-τολουϊδίνη άλας (ΒΟΙΡ, όχι 6368.3?. Roth, Karlsruhe, Germany). Οι ανοσοχρωματίστηκε χρωματογραφήματα πλύθηκαν με ρυθμιστικό διάλυμα γλυκίνης και αποθηκεύεται στους -20 ° C. Μπλε ανοσοθετικού Gb3Cer /CD77-ζώνες ποσοτικά με ένα σαρωτή CD60 (Desaga, Χαϊδελβέργη, Γερμανία, λογισμικό ProQuant

R, έκδοση 1.06.000). Gb3Cer /CD77 ποσά καθορίστηκαν ημιποσοτικά ως σχετική έκφραση σε σύγκριση με ΓΣΛ αναφοράς. Τα δεδομένα δευτερεύουσα πυκνομετρικής (βλέπε «Στατιστική Ανάλυση» παρακάτω) χρησιμοποιήθηκαν για να καθορίσουν 4 κατηγορίες έκφρασης όγκου σε σύγκριση με φυσιολογικούς ιστούς με τυπική ανάλυση cut-σημείο: υψηλή υπερέκφραση (κατηγορία Ι, 4000 & lt? X), μέτρια υπερέκφραση (κατηγορία II, 700 & lt? x & lt? 4000), ίση έκφραση (κατηγορία ΙΙΙ, -700 & lt? x & lt? 700), και μείωσε την έκφραση (κατηγορία IV, x & lt? -700) για το καρκίνωμα του παγκρέατος και υψηλή υπερέκφραση (κατηγορία I, 2000 & lt? x), μέτρια υπερέκφραση (κατηγορία ΙΙ, 200 & lt? x & lt? 2000), ίση έκφραση (κατηγορία ΙΙΙ, -200 & lt? x & lt? 200), και μείωσε την έκφραση (κατηγορία IV, x & lt? -200) για καρκίνωμα του παχέος εντέρου, αντίστοιχα

ανοσοϊστοχημεία.

ανοσοκυτταροχημική χρώση διεξήχθη όπως περιγράφεται [8]. Εν συντομία, κατεψυγμένες τομές (4 μm) επωάστηκαν με το αντίσωμα αντι-Gb3Cer /CD77 (1:15) και ένα αντίσωμα αντι-CD31 (1:200) (lgG1 ποντικού, κλώνος ΜΕΜ-05, Immunotools, Friesoythe, Γερμανία). Αντισώματα που δεσμεύονται με Gb3Cer /CD77 και CD31 ανιχνεύθηκαν με dichlorotriazinylamino φλουορεσκεΐνη (DTAF) σημασμένη αντι-κοτόπουλου-IgY αντίσωμα (Dianova) και Alexa Fluor 568-συζευγμένο αντι-ποντικού IgG-αντίσωμα (Invitrogen, USA, CA), αραιωμένο 1: 40 και 1:250, αντίστοιχα. Για αρνητικούς ελέγχους, ανοσοϊστοχημεία εκτελέστηκε χρησιμοποιώντας ορό προάνοσο κοτόπουλο και άσχετο αντίσωμα IgG 1 ποντικού (Immunotools). Πυρηνικό DNA των κυττάρων χρωματίστηκε με 4 ‘, 6-diamidine-2-φαινυλινδόλη-διϋδροχλωρική (DAPI, Sigma-Aldrich, USA). Φθοριόχρωμα σημασμένα αντισώματα και DAPI-βάφονται πυρήνες αξιολογήθηκαν κάτω από ένα μικροσκόπιο φθορισμού (Axioskop, Zeiss, Jena, Germany), αρχική μεγέθυνση × 40 (στόχος φακό Plan-Neofluar, αριθμητικό άνοιγμα 0,75), μετά από δημοσιευμένα πρωτόκολλα [43]. Για να επιβεβαιωθεί η υδρόφοβη φύση του στόχου των αντισωμάτων αντι-Gb3Cer /CD77, λιπίδια εκχυλίστηκαν με μεθανόλη και χλωροφόρμιο /μεθανόλη (1/1, ν /ν) από τα συναρμολογημένα τμήματα πριν από τη χρώση.

Υπέρυθρες μήτρα με τη βοήθεια εκρόφησης λέιζερ /ιονισμού Ορθογώνια Time-of-Flight (IR-MALDI-o-TOF) Φασματομετρίας μάζας

Οι προδιαγραφές του φασματόμετρου μάζας IR-MALDI-o-TOF (MDS Sciex, Concord, Οντάριο , Καναδάς) και άμεση TLC-IR-MALDI-MS-ανάλυση από ανοσοθετικού μπάντες του δοκιμασία επίστρωσης stx1 TLC έχουν λεπτομερώς από Distler et al. [34]. ΓΣΛ αναλύθηκαν στην κατάσταση θετικού ιόντος χρησιμοποιώντας γλυκερίνη ως μήτρα.

Στατιστική Ανάλυση

Δημοτικό πυκνομετρική δεδομένων των ανοσοχρωματίστηκε μπάντες /CD77 Gb3Cer και δευτεροβάθμιας πυκνομετρική δεδομένα, που προέρχονται από τις αξίες διαφορά ζεύγη υπολογίζονται αφαιρώντας κανονικές από σχετικές αξίες ιστό του όγκου, συντάχθηκαν με το πακέτο λογισμικού SPSS, έκδοση 14.0.2 (SPSS Inc., Chicago, IL) για την μη παραμετρική στατιστική ανάλυση. Το τεστ σήμα χρησιμοποιήθηκε για το σύνολο των πρωτογενών δεδομένων πυκνομετρική να εξεταστεί η σημασία της σχέσης μεταξύ Gb3Cer έκφρασης /CD77 και νεοπλασματικό μετασχηματισμό. Το μεσαίο δοκιμή έγινε για πρωτογενή και δευτερογενή δεδομένα πυκνομετρική να ελέγξετε αν Gb3Cer /CD77-έκφραση ήταν σημαντικά διαφορετική μεταξύ των όγκων που περιλαμβάνουν διάφορες κατηγορίες κλινικοπαθολογική. Οι συντελεστές συσχέτισης υπολογίστηκαν για κατετάγη τιμές των πρωτογενών πυκνομετρική δεδομένα των φυσιολογικών και καρκινικών ιστών, αντίστοιχα, και τα ανάλογα τιμές διαφοράς. τ Kendall χρησιμοποιήθηκε για την αξιολόγηση του βαθμού συσχέτισης μεταξύ Gb3Cer /CD77-έκφραση και την ιστοπαθολογική ταξινόμηση. Όλες οι δοκιμές δύο ουρών και αwas ορίζεται σε 0,05.

Αποτελέσματα

ανιχνεύθηκαν ιστών από ασθενείς αδενοκαρκίνωμα του παγκρέατος 21 και 16 του παχέος εντέρου για την έκφραση της STX-υποδοχέα Gb3Cer /CD77 (για τη δομή βλέπε Εικόνα 1 ). Για το σκοπό αυτό, ακατέργαστα εκχυλίσματα λιπιδίων και κρυοτομές από μετεγχειρητική ζεύγη των κακοήθων

έναντι

παρακείμενων ανεπηρέαστο ιστούς από τους ίδιους ασθενείς αναλύθηκαν με τη βοήθεια τεχνικής επικάλυψης TLC και μικροσκοπία ανοσοφθορισμού. Για να αποκτηθεί περαιτέρω δομικές λεπτομέρειες του σχετιζόμενου με τον όγκο τροποποιήσεις των ειδών /CD77 Gb3Cer, μία νέα προσέγγιση φασματομετρία μάζας χρησιμοποιήθηκε που συνδυάζει TLC ανοσοανίχνευση με IR-MALDI-o-TOF-MS [8], [34]. Τα υγρά βάρη των διερευνήθηκαν καρκινικούς και υγιείς ιστούς και τα αντίστοιχα δεδομένα παθολογία που απαριθμούνται στο συμπληρωματικούς πίνακες S1 και S2.

Κλάσματα από εκχυλίσματα ακατέργαστο λιπιδικό ισοδύναμη με 2 mg υγρού βάρους ιστού του φυσιολογικού (Ν) και καρκινικό ιστό (Τ) ταυτόχρονα διαχωρίστηκαν με TLC. Ουδέτερη ΓΣΛ από ανθρώπινα ερυθροκύτταρα χρησίμευσε ως θετικός αναφοράς στην δοκιμασία επίστρωσης (R, 10,8 μg) και το λεκέ ορκινόλης (O, 16,0 μg). Η σύνοψη του Gb3Cer /CD77-έκφραση σε καρκινικούς ιστούς και των δύο οντοτήτων όγκου παρέχεται στον Πίνακα 1, και τα ιστοπαθολογικά δεδομένα του παγκρέατος και του παχέος εντέρου καρκινωμάτων συνοψίζονται στον Συμπληρωματικό Πίνακες S1 και S2, αντίστοιχα. Αντιπροσωπευτικά παραδείγματα παγκρέατος (Α) και του παχέος εντέρου (Β) των κατηγοριών των όγκων Ι έως IV απεικονίζεται. Κανένα από τα καρκινώματα κόλον διερευνηθεί βρέθηκε με ίση έκφραση των Gb3Cer /CD77 σε παρακείμενο φυσιολογικό ιστό (Β). Έτσι, η κατηγορία ΙΙΙ παρέμεινε κενή στην ομάδα των ασθενών. C, η δομή της stx1 υποδοχέα Gb3Cer (D18: 1, C16: 0). Το κεραμίδιο (CER) λιπίδιο άγκυρα εμφανίζεται κατά προτίμηση σε υγιείς ανθρώπινους ιστούς με C24 ή C16 λιπαρό οξύ αλλά σταθερή σφιγγοσίνης (δ18: 1).

Η

TLC Ανοσοανίχνευση του σχετιζόμενου με τον όγκο Gb3Cer /CD77 στο πάγκρεας και Colon καρκίνο του

Όμοια κλάσματα του αργού λιπιδίων εκχυλίσματα ζεύγη από νεοπλασματικές και τα αντίστοιχα επηρεάζεται ιστοί υποβλήθηκαν ταυτόχρονα σε TLC, που ακολουθείται από TLC ανίχνευση επικάλυψη των Gb3Cer /CD77 χρησιμοποιώντας stx1 και το αντι-Gb3Cer /αντίσωμα CD77. Θετικές μπάντες έγιναν κατατάσσονται ανάλογα με την διαφορετική έκφραση της Gb3Cer /CD77? rank 1 δείχνει την υψηλότερη ένταση (Πίνακας 1). Με βάση την πυκνομετρία, οι όγκοι ομαδοποιήθηκαν σε τέσσερις κατηγορίες: κυμαίνονται από υψηλή (Ι), και μέτρια (II) υπερέκφραση, ίσα (III), και μείωσε την έκφραση (IV)

Η

καρκίνων του παγκρέατος

Σχήμα 1Α δείχνει τέσσερις ενιαίο αντιπροσωπευτικό stx1 TLC επικάλυψη λεκέδες των όγκων και των σχετικών αποσπασμάτων υγιή ιστό, το καθένα αντιπροσωπεύει μία από τις τέσσερις κατηγορίες των καρκίνων του παγκρέατος. Συνολικά, 61,9% των παγκρεατικών καρκινωμάτων ερευνήθηκαν έδειξε μέτρια έως υψηλή υπερέκφραση του Gb3Cer /CD77, ενώ 14,3% εμφάνισαν ίσα και τα επίπεδα μειώθηκαν Gb3Cer /έκφραση CD77 23,8% (βλέπε πίνακα 1). Globotetraosylceramide (Gb4Cer), που είναι γνωστή ως «χαμηλής συνάφειας» συνδέτης του stx1, δεν ήταν ανιχνεύσιμη σε παγκρεατικών όγκων και των παρακείμενων φυσιολογικών ιστών χρησιμοποιώντας stx1 ως εργαλείο ανίχνευσης. TLC immunostains απασχολούν το πολύκλωνο αντίσωμα /CD77 αντι-Gb3Cer ήταν παρόμοια με τα ευρήματα με εκείνα που λαμβάνονται με τις δοκιμασίες επικάλυψης stx1 TLC δείχνει λίγο μεγαλύτερη ευαισθησία στον εντοπισμό των Gb3Cer /CD77-είδη (βλέπε συμπληρωματικό σχήμα S1 Α).

Colon καρκίνους.

το σχήμα 1Β δείχνει τρεις μόνο αντιπροσωπευτικό stx1 TLC επικάλυψη λεκέδες του παχέος καρκίνο ζεύγη, το καθένα αντιπροσωπεύει μία από τις τρεις κατηγορίες επαληθεύεται παχέος καρκίνους. Gb3Cer /CD77 ήταν μέτρια έως υψηλά υπερεκφράζεται στο 81,3% των κακοήθων

έναντι

υγιείς ιστούς του παχέος εντέρου. Κανένας από τους όγκους του παχέος εντέρου παρουσίασαν ίση έκφραση οδηγεί σε κενή κατηγορία III. Λιγότερο Gb3Cer /CD77 ανιχνεύθηκε σε 18,8% του ιστού του όγκου (βλέπε Πίνακα 1). Όπως και στην παγκρέατος ιστούς, Gb4Cer ήταν μη ανιχνεύσιμη σε όγκους του παχέος εντέρου και των παρακείμενων φυσιολογικών ιστών χρησιμοποιώντας stx1 ως εργαλείο ανίχνευσης. Οι παράλληλες immunostains TLC χρησιμοποιώντας το πολυκλωνικό αντίσωμα αντι-Gb3Cer /CD77 φαίνεται στο Σχήμα Συμπληρωματικό S1B.

ανοσοϊστοχημική ανίχνευση του σχετιζόμενου με τον όγκο Gb3Cer /CD77 στο πάγκρεας και του καρκίνου παχέος εντέρου

Η πρόσδεση του αντι- Gb3Cer /CD77 αντισώματος σε κατεψυγμένες τομές παγκρέατος και καρκινώματος κόλου ιστούς και σε αντίστοιχες υγιείς ιστούς των ίδιους ασθενείς παρακολουθούνταν ιστοχημικά. Οι τομές συν-ανοσοχρώση με ένα αντίσωμα έναντι του CD31 ενδοθηλιακού δείκτη κυττάρου και πυρήνες κυττάρων απεικονίστηκαν με DAPI φθοριόχρωμα.

Για παράδειγμα, η εκτεταμένη σύνδεση αντισώματος με παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα (Τ) ανιχνεύθηκε για ασθενή 18 (όγκος κατηγορία Ι), όπως φαίνεται στο Σχήμα 2Α. Αντίθετα, μικρή ή καθόλου Gb3Cer /CD77 βρέθηκε σε φυσιολογικό παγκρεατικό ιστό (Ν). Περιστασιακές ενδοθηλιακά κύτταρα των αιμοφόρων αγγείων, που είναι γνωστό ότι φέρουν Gb3Cer /CD77 [21], [39], [43], έδειξαν επίσης θετική χρώση σε παγκρεατικά κακοήθη ιστό.

Τμήματα του φυσιολογικού (Ν) και του όγκου του ιστού (Τ) του παγκρεατικού καρκίνου του ασθενούς 18 (Α) και του παχέος εντέρου καρκινοπαθής 13 (Β) ανοσοχρώση με αντι-Gb3Cer /αντίσωμα CD77 και coimmunostained με ένα αντίσωμα έναντι του CD31 ενδοθηλιακού δείκτη κυττάρου. Οι πυρήνες των κυττάρων ανιχνεύθηκαν με DAPI. Ράβδοι κλίμακας αντιστοιχούν σε 20 μm. Αντιπροσωπευτικά παραδείγματα όγκων της κατηγορίας Ι παρουσιάζονται (βλέπε Πίνακα 1). Τα ιστοπαθολογικά δεδομένα του παγκρέατος και καρκινώματος κόλου συνοψίζονται στον Συμπληρωματικό Πίνακες S1 και S2, αντίστοιχα.

Η

Ανοσοϊστοχημική συγκρίσεις καταδεικνύουν υψηλά Gb3Cer /επίπεδα έκφρασης CD77 σε όγκους κόλον (Τ) όπως επεξηγείται για τον ασθενή 13, Σχήμα 2Β. Σε αντίθεση, παρακείμενο φυσιολογικό ιστό (Ν) από τον ίδιο ασθενή έλειπε Gb3Cer /CD77. Η αγγειογένεση φαίνεται να προχωρήσει σε μερικούς καρκίνους του παχέος εντέρου διερευνήθηκε όπως αποδεικνύεται από CD31 και Gb3Cer /CD77 θετικών ενδοθηλιακών κυττάρων εντός της μάζας του όγκου.

τμήματα ελέγχου επωάζονται με ελέγχους ισοτύπου IgG1 ποντικού, καθώς και με προάνοσο ορό κοτόπουλου δεν λεκιάζει . Μετά την εκχύλιση GSL των ιστών, Gb3Cer /CD77 δεν ήταν πλέον ανιχνεύσιμη με το αντίσωμα (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Δομικός Χαρακτηρισμός του σχετιζόμενου με τον όγκο Gb3Cer /CD77 στο πάγκρεας και του καρκίνου παχέος εντέρου

Η stx1 θετικές ζώνες της TLC-διαχωρισμένα εκχυλίσματα λιπιδίων άμεσα αναλύονται στις πλάκες TLC με TLC-IR-MALDI-MS όπως περιγράφεται [34]. φάσματα μάζας αποκτήθηκαν με τρόπο θετικού ιόντος και όλα τα είδη /CD77 Gb3Cer ανιχνεύθηκαν ως μεμονωμένα χρεώνονται monosodiated μοριακά ιόντα.

καρκίνων του παγκρέατος.

ανίχνευσης συνδυασμένης stx1 και TLC-IR-MALDI-MS αποδεικνύουν μεμονωμένες αλλαγές σύνθεσης του υπερεκφράζεται ειδών /CD77 Gb3Cer σε νεοπλασματικά σύγκριση με ανεπηρέαστη παγκρεατικό ιστό (π.χ., ασθενής 19 (όγκος κατηγορία Ι), Εικόνα 3). Αναλύοντας το άνω του stx1 θετικό τριπλής ζώνης του όγκου (Τ, αριστερό πάνελ, ένθετο), πιο άφθονο [Μ

3 * + Να]

+ μοριακά ιόντα επισημαίνουν την παρουσία του Gb3Cer (D18: 1 /D18: 0, C24: 0) με κορεσμένο D18: 0 σφινγκανίνης εκτός από την πιο κοινή D18 μονοακόρεστα: 1 σφιγγοσίνης (σφιγγενίνη). Το ίδιο ισχύει και για τον ανήλικο [Μ

2 + Na]

+ και [Μ

1 + Na] + ιόντα

, τα οποία αναφέρονται στις δομές του Gb3Cer (D18: 1 /D18 : 0, C23: 0) και Gb3Cer (D18: 1 /D18: 0, C22: 0), αντίστοιχα. Αντίθετα, μόνο χαμηλή έκφραση του Gb3Cer /CD77 μπορούσε να ανιχνευθεί στο άνω stx1 θετική ζώνη του φυσιολογικού παγκρεατικού ιστού όπως φαίνεται στο Σχήμα 3 (Ν, αριστερό πάνελ). Η μεγάλη αφθονία [Μ

4 + Na]

+ ιόντα του κάτω stx1 θετική μπάντα του όγκου (Τ, μεσαίο πάνελ) δείχνουν ισχυρή υπερέκφραση του Gb3Cer (D18: 1, C16: 0) στον ιστό του όγκου σε σύγκριση σε πολύ χαμηλή αφθονία ιόντων κατά την αντίστοιχη υγιή ιστό (Ν, μεσαίο πλαίσιο). Ωστόσο, το πιο σημαντικό δομική αλλαγή βρέθηκε στο χαμηλότερο stx1 θετική ζώνη του καρκινικού ιστού με ανίχνευση [Μ

5 * + Να]

+ ιόντα (Τ, δεξί πάνελ), τα οποία ήταν μη ανιχνεύσιμα σε φυσιολογικό ιστό ( Ν, δεξί πάνελ). Σε σύγκριση με Gb3Cer (D18: 1, C16: 0) (T, μεσαίο πλαίσιο), η στροφή σε 16 μονάδες ατομικής μάζας δείχνει υδροξυλίωση του ημίσεως κεραμιδιού που οδηγεί στην προτεινόμενη δομή του Gb3Cer (D18: 1, Η16: 0) μεταφέρουν ένα υδροξυλιωμένο C16: 0 λιπαρό οξύ. Επιπλέον, τα ιόντα σε

m /z

1064.65 δείχνει την παρουσία του Gb3Cer (D18: 0, Η16: 0). Αυτό το εντυπωσιακό τροποποίηση κεραμιδιού συνέβη στο 85,7% των όγκων του παγκρέατος μέχρι τώρα διερευνηθεί. Μια σύνοψη των προτεινόμενων δομών των ειδών /CD77 Gb3Cer παρέχεται στον συμπληρωματικό πίνακα S3.

λιπιδίων εξάγει ισοδύναμη με 2 mg υγρού βάρους των φυσιολογικών (Ν) και τον ιστό του όγκου (Τ) του ασθενούς (κατηγορία όγκου 19 I, βλέπε πίνακα 1 και συμπληρωματικό πίνακα S1) έχουν ταυτόχρονα διαχωρίστηκαν με TLC που ακολουθείται από επικάλυψη ανάλυση χρησιμοποιώντας stx1. Οι stx1 μπάντες θετική Gb3Cer /CD77, οι οποίες σημειώνονται με βέλη στα ένθετα, αναλύθηκαν με TLC-IR-MALDI-MS. Η επικρατούσα [Μ

3 * + Να]

+ μοριακά ιόντα της άνω ζώνης του ιστού του όγκου (Τ, αριστερό πάνελ) αντιστοιχούν σε Gb3Cer (D18: 1 /D18: 0, C24: 0) και το ανήλικος ιόντα θα μπορούσε να ανατεθεί σε Gb3Cer (D18: 1 /D18: 0, C23: 0) και Gb3Cer (D18: 1 /D18: 0, C22: 0), αντίστοιχα. Στην άνω ζώνη του φυσιολογικού ιστού (Ν, αριστερό πάνελ) πολύ χαμηλότερες εντάσεις αυτών των μοριακών ιόντων παρατηρήθηκαν. Η υψηλή αφθονία [Μ

4 + Na]

+ ιόντα του κάτω συγκροτήματος στον όγκο (Τ, μεσαίο πάνελ) αντιπροσωπεύουν Gb3Cer (D18: 1, C16: 0), το οποίο είναι ανιχνεύσιμο μόνο σε ποσότητες ιχνών σε φυσιολογικό ιστό (Ν, μεσαίο πλαίσιο). Ανάλυση της χαμηλότερης ζώνης του όγκου (Τ, δεξιός πίνακας) αποκάλυψε [Μ

5 * + Na] + ιόντα

, τα οποία είναι ενδεικτικά για υδροξυλιωμένες Gb3Cer (D18: 1 /D18: 0, Η16: 0) . Αυτή η παραλλαγή Gb3Cer /CD77 ήταν ανιχνεύσιμο σε φυσιολογικό ιστό (Ν, δεξιά πλευρά). Η

m /z

οι τιμές των μοριακών ιόντων και προτεινόμενες δομές της Gb3Cer /CD77-παραλλαγές των κακοήθων και των παρακείμενων φυσιολογικών ιστών, καθώς και αναφορές από ανθρώπινα ερυθροκύτταρα που περιλαμβάνονται στο συμπληρωματικό πίνακα S3.

Η

καρκίνων του παχέος εντέρου.

ανίχνευση stx1 συνδυασμό με TLC-IR-MALDI-MS μας επέτρεψε να εκμαιεύσει τις επιμέρους δομές υπερεκφράζεται ειδών /CD77 Gb3Cer ως παραδειγματικά δείχνεται για 16 ασθενών στο Σχήμα 4 (Τ, αριστερό πάνελ) . Υψηλή άφθονη [Μ

3 + Na] + ιόντα

σημείο να Gb3Cer (D18: 1, C24: 1 /C24: 0) ως το πιο πιθανό παραλλαγές Gb3Cer /CD77 στην άνω stx1 θετική ζώνη, που συνοδεύεται από λιγότερο προφέρεται [Μ

2 + Na]

+ και [Μ

1 + Na] ιόντα

+, οι οποίες αντιστοιχούν σε Gb3Cer (D18: 1, C23: 0) και Gb3Cer (D18: 1, C22: 0), αντίστοιχα. Τα ίδια ιόντα, αλλά με πολύ χαμηλότερες εντάσεις ελήφθησαν από την άνω stx1 θετική ζώνη του φυσιολογικού ιστού (Ν, αριστερό πάνελ). Στην κάτω ζώνη του όγκου (Τ, μεσαίο πλαίσιο), εξέχοντες [Μ

4 + Na] + ιόντα

θα μπορούσε να ανατεθεί στο Gb3Cer (D18: 1, C16: 0) δομή, η οποία είναι επίσης ανιχνεύσιμη στο φυσιολογικό ιστό, αλλά με λιγότερη ένταση ιόν (Ν, μεσαίο πλαίσιο). Στην χαμηλότερη ζώνη [Μ

5 * + Na] + ιόντα

υποδεικνύουν την παρουσία του Gb3Cer (D18: 1, Η16: 0) παραλλαγή με υδροξυλιωμένα C16: 0 λιπαρό οξύ, το οποίο δεν θα μπορούσε να βρεθεί στο φυσιολογικό ιστό (Ν, δεξί πάνελ). Αυτή η αξιοσημείωτη τροποποίηση του κεραμιδιού βρέθηκε σε περίπου 19% του όγκου του παχέος εντέρου TLC immunostains μέχρι στιγμής ερευνηθεί. Μια σύνοψη των προτεινόμενων δομών των ειδών /CD77 Gb3Cer παρέχεται στον συμπληρωματικό πίνακα S3.

λιπιδίων εξάγει ισοδύναμη με 2 mg υγρού βάρους των φυσιολογικών (Ν) και τον ιστό του όγκου (Τ) του ασθενούς (κατηγορία όγκου 16 II, βλέπε πίνακα 1 και συμπληρωματικό πίνακα S2) έχουν ταυτόχρονα διαχωρίστηκαν με TLC που ακολουθείται από επικάλυψη ανάλυση χρησιμοποιώντας stx1. Οι stx1 ζώνες θετική Gb3Cer, οι οποίες σημειώνονται με βέλη στα ένθετα, αναλύθηκαν με TLC-IR-MALDI-MS. Η επικρατούσα [Μ

3 + Na]

+ μοριακά ιόντα της άνω ζώνης του ιστού του όγκου (Τ, αριστερό πάνελ) αντιστοιχούν σε Gb3Cer (D18: 1, C24: 1 /C24: 0) και το λιγότερο άφθονη [Μ

2 + Na]

+ και [Μ

1 + Na]

+ ιόντα να Gb3Cer (D18: 1, C23: 0) και Gb3Cer (D18: 1, C22: 0 ), αντίστοιχα. Στην άνω ζώνη του φυσιολογικού ιστού (Ν, αριστερό πάνελ) πολύ χαμηλότερες εντάσεις των αντίστοιχων μοριακών ιόντων παρατηρήθηκαν. Η ισχυρή [Μ

4 + Na]

+ ιόντα του κάτω συγκροτήματος στον όγκο (Τ, μεσαίο πάνελ) αντιπροσωπεύουν Gb3Cer (D18: 1, C16: 0), το οποίο είναι ανιχνεύσιμο μόνο σε μικρές ποσότητες σε φυσιολογικό ιστού (Ν, μεσαίο πλαίσιο). Ανάλυση της χαμηλότερης ζώνης του όγκου (Τ, δεξιός πίνακας) αποκάλυψε [Μ

5 * + Na] + ιόντα

, τα οποία είναι ενδεικτικά για υδροξυλιωμένες Gb3Cer (D18: 1, Η16: 0). Αυτή η παραλλαγή Gb3Cer /CD77 ήταν ανιχνεύσιμο σε φυσιολογικό ιστό (Ν, δεξιά πλευρά). Η

m /z

οι τιμές των μοριακών ιόντων και προτεινόμενες δομές της Gb3Cer /CD77-παραλλαγές των κακοήθων και των παρακείμενων φυσιολογικών ιστών, καθώς και αναφορές από ανθρώπινα ερυθροκύτταρα που περιλαμβάνονται στο συμπληρωματικό πίνακα S3.

Η

Στατιστική Ανάλυση

Κουτί οικόπεδα των πρωτογενών πυκνομετρική δεδομένα της δοκιμασίας επικάλυψης TLC προσδιορίζονται επίπεδα Gb3Cer /CD77 στην παγκρέατος (n = 21 ασθενείς) και του παχέος εντέρου (n = 16 ασθενείς) σε ιστούς που παρέχονται (σχήμα 5Α και Β, αντίστοιχα). Η υπερέκφραση του Gb3Cer /CD77 καταγράφεται στο 81,3% του καρκίνου του παχέος εντέρου σε σύγκριση με γειτονικά υγιείς ιστούς ήταν σημαντική (P = 0,021), ενώ αυξημένη έκφραση της Gb3Cer /CD77 στο 61,9% των κακοήθων παγκρεατικών ιστών δεν ήταν σημαντική (P = 0,189). Σε τόσο του παγκρέατος και του παχέος εντέρου, η παρουσία της STX-ανιχνεύονται μπάντες /CD77 Gb3Cer δεν συσχετίζονται με κανένα κλινικοπαθολογικών παραμέτρων (για τα δεδομένα της παθολογίας δείτε συμπληρωματικοί πίνακες S1 και S2). Ωστόσο, για όγκους του παγκρέατος, οι τιμές διαφορά της έκφρασης /CD77 Gb3Cer συσχετίζονται με το βαθμό διαφοροποίησης του όγκου (P = 0,039, τ = 0.396) που υποδεικνύει υψηλότερα επίπεδα Gb3Cer /CD77 σε λιγότερο διαφοροποιημένες κακοήθειες. Αυτή η συσχέτιση μεταξύ της κακής διαφοροποίησης των όγκων σε ασθενείς με Gb3Cer /CD77 υπερέκφραση σε κακοήθη παγκρεατικού ιστού απεικονίζεται στα οικόπεδα κουτί του Σχήματος 5C. Συμπερασματικά, η έκφραση του Gb3Cer /CD77 είναι μεγαλύτερη σε λιγότερο διαφοροποιημένες κακοήθη ιστό υποδηλώνοντας τον υποδοχέα STX ως δυνητικού δείκτη για κακή διαφοροποίηση των παγκρεατικών όγκων.

Τα κουτιά οριοθετούνται πάνω και κάτω από το 25% και 75 % εκατοστημόρια. Οι γραμμές στα κουτιά και τα μικρά τετράγωνα δείχνουν την μέση και μέσες τιμές και τα δύο × τις ελάχιστες και μέγιστες τιμές, αντίστοιχα. Α, αν και δεν είναι σημαντική (Ρ = 0,189, η = 21), μια ενισχυμένη έκφραση του Gb3Cer /CD77 θα μπορούσε να παρατηρηθεί σε όγκους του παγκρέατος σε σύγκριση με φυσιολογικούς ιστούς. Β, η έκφραση του Gb3Cer /CD77 είναι σημαντικά αυξημένη σε ιστούς κόλου όγκου σε σύγκριση με εκείνη των γειτονικών φυσιολογικούς ιστούς υποδεικνύει τη σύνδεση μεταξύ Gb3Cer έκφρασης /CD77 και νεοπλασματικό μετασχηματισμό (*, Ρ = 0,021, η = 16). C, συσχετισμός μεταξύ Gb3Cer έκφρασης /CD77 και διαφοροποίησης παγκρεατικού όγκου (n = 20 ασθενείς, διότι ένα όγκου δεν θα μπορούσε να αποδοθεί? Βλέπε Πίνακα 1). Οι όγκοι διαιρούνται σε δύο ομάδες ανάλογα με ιστοπαθολογικές ταξινόμησης: grade≤2 (n = 14 ασθενείς) και βαθμού & gt? 2 (n = 6 ασθενείς). ανάλυση συσχέτισης της διαφοράς τιμών σημείων σε στατιστικά σημαντικά υψηλότερο /CD77 έκφραση Gb3Cer σε όγκους του παγκρέατος βαθμολογείται ως & gt?. 2 (*, P = 0,039, τ = 0.396)

Η

Συζήτηση

με την ομαδοποίηση των λιπιδίων μικροεπικράτειες μεμβράνη σχεδία [11], [44], οι αλυσίδες ολιγοσακχαριτών των ΓΣΛ επιδεικνύουν ισχυρή δέσμευση των δραστηριοτήτων προς τους συνδέτες τους [45]. Ως εκ τούτου, ΓΣΛ που σχετίζονται με όγκους, δηλαδή, ΓΣΛ που δείχνουν αυξημένη έκφραση σε καρκινικά σε σύγκριση με φυσιολογικούς ιστούς, είναι ιδανικό για τη διάγνωση των όγκων και στοχευμένη αντικαρκινικών θεραπειών [31], [46], [47]. Κατά συνέπεια, τα αντισώματα, λεκτίνες ή τις τοξίνες με ιδιαιτερότητες δέσμευσης ΕΝΓ έχουν δημιουργήσει μεγάλο ενδιαφέρον στην ογκολογία.