Αφηρημένο

Ιστορικό

ανθρωπίνων θηλωμάτων (HPV), ιδιαίτερα HPV16 , συνδέεται με την ανάπτυξη και των δύο του τραχήλου της μήτρας και του καρκίνου και των αμυγδαλών intratype παραλλαγές στην αλληλουχία αμινοξέων του HPV16 Ε6 έχουν ογκοπρωτεΐνη αποδειχθεί ότι συνδέεται με ιικά επιμονή και τον καρκίνο αλλοιώσεις. Για το λόγο αυτό η παρουσία των HPV16 Ε6 παραλλαγές αμυγδαλών καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων (TSCC) στον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας (CC), καθώς επίσης και σε δείγματα του τραχήλου της μήτρας (CS), διερευνήθηκαν.

Μέθοδοι

HPV16 Ε6 αλληλουχήθηκε σε 108 TSCC και 52 CC δείγματα από ασθενείς με διάγνωση 2000-2008 στην κομητεία της Στοκχόλμης, και σε 51 CS από νεαρές γυναίκες παρακολουθούν ένα κέντρο υγείας της νεολαίας στη Στοκχόλμη.

Αποτελέσματα

η σπάνια παραλλαγή Ε6 R10G ήταν σχετικά συχνή (19%) σε TSCC, απουσιάζει στο CC και σπάνια (4%) στο CS, ενώ η γνωστή παραλλαγή L83V ήταν κοινή σε TSCC (40%), CC (31%), και CS (29%). Η διαφορά για R10G ήταν σημαντική μεταξύ TSCC και CC (p = 0,0003), καθώς και μεταξύ TSCC και CS (p = 0.009). Η HPV16 Ευρωπαϊκή φυλογενετικές γενεαλογία και τα παράγωγά του κυριάρχησε σε όλα τα δείγματα (& gt? 90%).

Συμπέρασμα

Η σχετικά υψηλή συχνότητα της παραλλαγής R10G σε TSCC, σε σύγκριση με ό, τι έχει βρεθεί σε CC, τόσο στην παρούσα μελέτη, καθώς και σε διάφορες άλλες μελέτες σε διάφορες χώρες, μπορεί να υποδεικνύει μια διαφορά μεταξύ TSCC και CC σε σχέση με την επαγωγή και την ανάπτυξη όγκων. Εναλλακτικά, θα μπορούσαν να υπάρξουν διαφορές όσον αφορά την από του στόματος και του τραχήλου της μήτρας επικράτηση αυτής της παραλλαγής που θα πρέπει να διερευνηθεί περαιτέρω

Παράθεση:. Du J, Nordfors C, Näsman Α, Sobkowiak Μ, Romanitan Μ, Νταλιάνης Τ, et al. (2012) Ιού των Ανθρώπινων Θηλωμάτων (HPV) 16 Ε6 Παραλλαγές στον Καρκίνο αμυγδαλών σε σύγκριση με αυτά του καρκίνου του τραχήλου στη Στοκχόλμη της Σουηδίας. PLoS ONE 7 (4): e36239. doi: 10.1371 /journal.pone.0036239

Επιμέλεια: Rui Medeiros, IPO, Inst Λιμάνι Ογκολογίας, Πορτογαλία

Ελήφθη: 10, Φεβρουαρίου 2012? Αποδεκτές: 29 του Μαρτίου 2012? Δημοσιεύθηκε: 27 Απριλίου 2012 |

Copyright: © 2012 Du et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Οικονομική ενίσχυση δόθηκε από το σουηδικό Ινστιτούτο Ελέγχου Ειδικών Λοιμώξεων, το σουηδικό ίδρυμα Cancer (100.258), το σουηδικό Συμβούλιο Έρευνας (K2011-56X-15282-07-6), της Στοκχόλμης Αντικαρκινική Εταιρεία (101.081), το Δημοτικό Συμβούλιο της Στοκχόλμης (2.010.067) και το Ινστιτούτο Καρολίνσκα. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Συν-συγγραφέας Torbjörn Ramqvist είναι μια Συντακτική μέλος του Διοικητικού Συμβουλίου PLoS ONE. Αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων σε όλες τις PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών ..

Εισαγωγή

Η λοίμωξη με υψηλού κινδύνου (HR) ιού των ανθρωπίνων θηλωμάτων (HPV) έχει από το αρχή της δεκαετίας του 1980 έχουν αναγνωριστεί για να προκαλέσει την ανάπτυξη του καρκίνου του τραχήλου και πιο πρόσφατα στοματοφαρυγγικού καρκίνου του [1], [2]. Μεταξύ στοματοφαρυγγική καρκίνων, κυρίως των αμυγδαλών και τη βάση των καρκίνων γλώσσα σχετίζονται με τον HPV. Αξίζει να σημειωθεί ότι, η συχνότητα εμφάνισης του ιού HPV θετικές στοματοφαρυγγική καρκίνο έχει αυξηθεί κατά τις τελευταίες δεκαετίες, τόσο στην Ευρώπη όσο και στις ΗΠΑ [3] – [5]. Σύμφωνα με τη σουηδική Αρχείο Καρκίνου, στη Σουηδία, προς το παρόν πάνω από 400 νέες περιπτώσεις καρκίνου του τραχήλου της μήτρας και περίπου 200 περιπτώσεις καρκίνου των αμυγδαλών διαγιγνώσκονται κάθε χρόνο.

Όλοι οι τύποι του HPV που είναι γνωστό ότι συνδέεται με τον καρκίνο στοματοφαρυγγική συνδέονται επίσης με του τραχήλου της μήτρας καρκίνο και HPV16 κυριαρχεί στα δύο, προκαλώντας το 50-60% του συνόλου των HPV θετικού καρκίνου του τραχήλου της μήτρας και περίπου 90% του συνόλου HPV θετικά αμυγδαλών καρκίνου. Επιπλέον, ενώ το γονιδίωμα HPV είναι ως επί το πλείστον ενσωματωθεί σε καρκίνο του τραχήλου, είναι συχνά επισωματική στον καρκίνο των αμυγδαλών [6]. Αυτό δείχνει ότι, αν και υπάρχουν πολλές ομοιότητες μεταξύ αυτών των δύο τύπων όγκου θα μπορούσε επίσης να υπάρχουν διαφορές, τόσο όσον αφορά στο δυναμικό του HPV16 να προκαλέσουν ανάπτυξη των όγκων, και με τον τρόπο διαφορετικοί τύποι HPV προκαλούν όγκους.

Παραλλαγές του γονιδιώματος HPV16 σε καρκίνο του τραχήλου της μήτρας, σε προ-στάδια του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας, και τραχηλικών δειγμάτων από διαφορετικές γεωγραφικές περιοχές έχουν μελετηθεί εκτενώς και HPV έχει ταξινομηθεί σε φυλογενετικές καταγωγές ως ευρωπαϊκό (Ε), της Ασίας (As), της Ασίας και της Αμερικής (ΑΑ), της Αφρικής-1 και -2 (AF-1 και AF-2), και Βόρεια American1 (NA1) [7] – [11].

Η μεγάλη μετατροπή των πρωτεϊνών του HPV16, Ε6 και Ε7 , στοχεύουν ρ53 και Rb αντιστοίχως, αναστέλλουν την απόπτωση και να προωθήσει τον πολλαπλασιασμό και επομένως οι περισσότερες μελέτες σχετικά με τις παραλλαγές HPV16 έχουν επικεντρωθεί στην Ε6 και Ε7 εκτός από τις μελέτες της μη-κωδικοποίησης περιοχή ελέγχου (NCCR). Παραλλαγές δειχθεί ότι διαφέρουν συχνά σε Ε6 και NCCR, ενώ η πρωτεΐνη Ε7 είναι συχνά πιο συντηρημένη [12], [13]. Επιπλέον, με τα μεγάλα καταγωγές παραλλαγή, οι παραλλαγές με τα μονά μεταβολών νουκλεοτιδίου συναντάται συχνά, ειδικά σε όγκους. Η πιο συχνή από αυτές τις μεταλλάξεις είναι ο Τ προς G μετάπτωση στο nt 350 στην Ε6, συντετμημένο ως Ε-T350G, προκαλώντας μια αλλαγή αμινοξέος από λευκίνη σε valanine στο Α.Α. 83 (L83V). Αρκετές μελέτες σχετικά με την παραλλαγή L83V έχουν αποδείξει συσχέτιση με ιική επιμονή και εξέλιξη του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας καρκίνωμα, αν και μερικές μετέπειτα μελέτες έχουν αποτύχει να επιβεβαιώσουν αυτή τη συσχέτιση [14] – [17]. Άλλες παραλλαγές έχουν επίσης συνδεθεί με ιδιότητες σημαντική για την ανάπτυξη όγκων όπως π.χ. εκείνοι με την ικανότητα να αναστέλλουν το ρ53 διενεργοποίηση [18].

Ενώ πολλές μελέτες σχετικά με τις παραλλαγές HPV16 έχουν διεξαχθεί σε καρκίνο του τραχήλου, πολύ λίγες μελέτες αυτού του είδους έχουν γίνει σε καρκίνο του τραχήλου της κεφαλής [19], [20 ]. Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν επομένως να να εξεταστεί αν υπήρχαν διαφορές στην εμφάνιση και τη συχνότητα της HPV16 Ε6 παραλλαγών μεταξύ των αμυγδαλών του καρκίνου και του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας. Για το λόγο αυτό, η επικράτηση των αλληλουχιών HPV16 Ε6 συγκρίθηκαν σε τραχήλου της μήτρας και των αμυγδαλών δείγματα καρκίνου από ασθενείς διαγιγνώσκονται κατά τη διάρκεια του ίδιου χρονικού πλαισίου στην κομητεία της Στοκχόλμης, Σουηδίας. Επιπλέον, για να συγκρίνουν τα δεδομένα που λαμβάνονται από αυτούς τους όγκους με τις συχνότητες των παραλλαγών HPV16 σε υγιή άτομα, HPV16 Ε6 αναλύθηκε επίσης στην αυχενική δείγματα από υγιείς νεαρές γυναίκες σε μια κλινική της νεολαίας στη Στοκχόλμη.

Αποτελέσματα

HPV16 Ε6 παραλλαγές στο αμινοξύ R10G και L83V

Πενήντα πέντε HPV16 θετική ΕΡΔΚΠ, 52 CC και 51 ΑΧ αναλύθηκαν σε σχέση με την αλληλουχία HPV16 Ε6, Πίνακας S1. Η πιο αξιοσημείωτη διαφορά μεταξύ TSCC και CC βρέθηκε όσον αφορά τις συχνότητες της παραλλαγής E-A131G προκαλώντας μια αλλαγή από αργινίνη σε γλυκίνη σε Α.Α. 10 (R10G). Αυτή η μετάλλαξη ήταν παρούσα στο 22% (12/55) των TSCC, ενώ απουσιάζει τελείως στα δείγματα CC και το παρόν μόνο σε 4% (2/51) του τραχήλου της μήτρας δείγματα. Αυτή η διαφορά ήταν σημαντική τόσο μεταξύ TSCC και CC (p = 0,0003), καθώς και μεταξύ TSCC και CS (p = 0.009).

Η παραλλαγή E-T350G ήταν η πλέον διαδεδομένη μεταξύ όλων των τριών ομάδων δειγμάτων . Αυτή η παραλλαγή, προκαλώντας μια μετατόπιση από λευκίνη σε βαλίνη στο αα 83 (L83V), ήταν ιδιαίτερα συχνό σε TSCC (45%), ακολουθούμενη από CC (31%) και η CS (29%) αντίστοιχα.

Εκκαθάριση των R10G και οι συχνότητες L83V σε περαιτέρω δείγματα TSCC

για να επικυρώσετε περαιτέρω τις αυξημένες συχνότητες R10G και L83V μεταλλάξεις στο TSCC, 53 επιπλέον δείγματα TSCC, από ασθενείς διαγνώστηκαν στο ίδιο νοσοκομείο κατά τη διάρκεια της ίδιας περιόδου, αξιολογήθηκαν μόνο για την R10G και L83V μεταλλάξεις. Μεταξύ αυτών των 53 δειγμάτων 17% (9/53) έφερε το R10G και 34% (18/53) τη μετάλλαξη L83V. Όταν συνοψίζονται όλα τα 108 δείγματα 19% είχε R10G και 40% η μετάλλαξη L83V. Η πλειοψηφία (12/21) των Ε6 από TSCC υπόθαλψη R10G περιείχε επίσης L83V. Δεν παρατηρήθηκε σημαντική διαφορά μεταξύ του αρχικά επιλεγεί 55 TSCC και την εκτεταμένη ομάδα TCCS σε σχέση με αυτές τις δύο μεταλλάξεις.

Συχνότητα άλλες παραλλαγές

Οι μεταλλάξεις σε άλλες περιοχές ήταν λιγότερο κοινά για όλους τους τύπους δείγματα, και μόνο 19/28 από αυτές επηρέασαν την αλληλουχία αμινοξέων. Η πιο κοινή ήταν Q14H και H78Y, τόσο στο παρόν όσο το 4% των CC και CS, ενώ το 7% των TSCC είχε Q14H και H78Y. Επιπλέον, δύο τραχήλου της μήτρας δείγματα καρκίνου είχαν 27 επαναλήψεις bp μεταξύ nt 528 και 554.

Κατανομή των διαφορετικών φυλογενετικών καταγωγές

Όπως αναφέρεται λεπτομερώς στον Πίνακα S1, ο HPV16 Ε6 Ευρωπαϊκό πρότυπο βρέθηκε στο 38% της TSCC, το 65% των CC και 59% του CS. Ωστόσο, όταν συμπεριλήφθηκαν δείγματα με το Ευρωπαϊκό τύπου που περιέχει μικρές διαφορές νουκλεοτιδίου (συμπεριλαμβανομένων R10G και L83V), οι αριθμοί αυτοί αυξήθηκαν σε 93, 94 και 96% αντίστοιχα. Όπως φαίνεται και στον πίνακα S1 άλλα είδη, αφρικανικός-1 και 2, της Ανατολικής Ασίας. Ασίας Αμερικής και της Βόρειας Αμερικής είχαν βρεθεί μόνο σε μερικά δείγματα.

Συσχέτιση του HPV16 Ε6 παραλλαγές στον καρκίνο των αμυγδαλών με κλινικές παραμέτρους

Τα δείγματα TSCC συγκρίθηκαν σε σχέση με τα χαρακτηριστικά των ασθενών και των όγκων με βάση το παρουσία R10G, L83V ή η απουσία αυτών των παραλλαγών, όπως παρουσιάζονται στον πίνακα 1. εντούτοις, δεν υπήρξαν σημαντικές διαφορές για καμία από αυτές τις παραμέτρους, αν και υπήρξε μια τάση για όγκους με R10G να έχουν χαμηλότερο στάδιο Τ.

η

Η παρουσία του R10G ή L83V παραλλαγές στον καρκίνο αμυγδαλών αναλύθηκε σε σχέση με την ελεύθερη νόσου επιβίωση των 3 ετών (DSF) των ασθενών. Ωστόσο, καμία σημαντική συσχέτιση βρέθηκε όταν DSF συγκρίθηκε μεταξύ ασθενών με παρουσία ή την απουσία της παραλλαγής R10G ή μεταξύ των ασθενών με παρουσία ή την απουσία της παραλλαγής L83V (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Συζήτηση

στην παρούσα μελέτη, έχουμε αναλύσει και σε σύγκριση με τη συχνότητα των διαφόρων παραλλαγών HPV16 Ε6 στο TSCC, CC και CS, όλα προέρχονται από την περιοχή της Στοκχόλμης κατά την ίδια χρονική περίοδο. Βρήκαμε ότι HPV16 R10G ήταν σχετικά συχνή σε TSCC, απουσιάζει στο CC και σπάνια στο CS. Το HPV 16 Ευρωπαϊκή καταγωγή κυριαρχούσε και η παραλλαγή L83V ήταν πολύ κοινά σε όλες τις τρεις κατηγορίες των δειγμάτων.

Το γεγονός ότι η αλλιώς σπάνια παραλλαγή HPV16 Ε6 R10G παρατηρήθηκε σε TSCC, αλλά όχι σε CC σε ασθενείς διαγιγνώσκονται σε την ίδια χρονική περίοδο από το ίδιο νοσοκομείο είναι εντυπωσιακή. Αυτή η παραλλαγή έχει τη γνώση μας πάντα ήταν σπάνια, παρόλο που παρατηρήθηκε σε CC σε ορισμένες άλλες μελέτες [11], [13], [18]. Αν και ο χρόνος από τη μόλυνση από HPV στην ανάπτυξη του καρκίνου των αμυγδαλών είναι άγνωστος είναι πιθανόν παρόμοια μεταξύ του τραχήλου της μήτρας και του καρκίνου των αμυγδαλών, αφού η μέση ηλικία των ασθενών είναι συγκρίσιμη. Ετσι, είναι λογικό να υποθέσουμε ότι οι ασθενείς σε αυτή τη μελέτη με καρκίνο του τραχήλου και των αμυγδαλών καρκίνος ήταν πιθανότερο μολύνθηκαν με HPV16 κατά τη διάρκεια περίπου την ίδια περίοδο. Ο λόγος για την υψηλή συχνότητα της παραλλαγής R10G σε TSCC από Στοκχόλμη, σε σύγκριση με CC τόσο από Στοκχόλμη και άλλες περιοχές, είναι άγνωστη. Μια πιθανότητα είναι ότι αυτή η παραλλαγή HPV16 για κάποιο λόγο ήταν /είναι πιο κοινή στην στοματική σε σύγκριση με την περιοχή των γεννητικών οργάνων. Περαιτέρω μελέτες για HPV16 που λαμβάνονται από το στόμα δείγματα που χρειάζονται για να εξερευνήσετε αυτή τη δυνατότητα. Μια άλλη δυνατότητα θα μπορούσε να είναι ότι αυτή η παραλλαγή του HPV16 έχει μεγαλύτερη τάση να προκαλούν TSCC. Αξίζει να σημειωθεί ότι, αν και η πλειοψηφία των ασθενών με TSCC ήταν άνδρες, και μόνο οι γυναίκες έχουν CC, δεν υπήρχαν διαφορές μεταξύ των φύλων που σχετίζονται με τις σχετικές συχνότητες των R10G σε TSCC. Τα δεδομένα που συλλέχθηκαν δείχνουν ότι σχεδόν όλοι οι ασθενείς που φέρουν την παραλλαγή R10G είχε τη Σουηδία ως χώρα καταγωγής τους, όμως δεν έχουμε πληροφορίες, εάν έχουν κινηθεί προς Στοκχόλμη από άλλα μέρη της Σουηδίας.

Είναι καλά τεκμηριωμένο ότι HPV16 E6 μαζί με E6AP (Ε6 πρωτεΐνη που σχετίζεται με) σχηματίζει ένα σύμπλοκο που στοχεύει ειδικά p53 και μεσολαβούν αποικοδόμησης της ρ53, η οποία είναι απαραίτητη για την ογκογένεση [21], [22]. Αρκετές μελέτες έχουν διεξαχθεί σχετικά με την παραλλαγή R10G στους καρκίνους του τραχήλου. Η μετάλλαξη R10G είναι στην Ν-τερματικό άκρο, σημαντικά για τη σύνδεση και την υποβάθμιση ρ53, και έχει επίσης αποδειχθεί ότι έχει ως αποτέλεσμα σε ένα /Τ κυτταρικό επιτόπιο τροποποιημένο Β [13], [23], [24]. Έχει αποδειχθεί ότι τόσο Ε6 με R10G και L83V διατηρούν την ικανότητα να καταργήσει τη σύλληψη της ανάπτυξης, και σε μεγάλο βαθμό να μειώσει τα επίπεδα σταθερής κατάστασης της p53 [25]. Ωστόσο, ενώ Ε6 με R10G έχει μειωμένη δέσμευση με E6BP (Ε6 πρωτεΐνη δέσμευσης) και μειωμένη ικανότητα να επάγει αποικοδόμηση Βαχ, Ε6 με L83V Ε6 έχει αυξημένη πρόσδεση σε E6BP και διατηρούνται ικανότητα να επάγει αποικοδόμηση Βαχ σύγκριση με πρωτότυπο HPV16 Ε6 [18 ]. E6 τόσο με το R10G και L83 αλλοίωση, η οποία είχε 9/12 TSCC σε αυτή τη μελέτη, συμπεριφέρθηκε παρόμοια με το πρωτότυπο [18]. Επιπλέον, η τοποθεσία R10G έχει επίσης αναφερθεί ότι είναι απαραίτητη για το σήμα πυρηνικού εντοπισμού [26]. Έτσι, πολλά διαφορετικά χαρακτηριστικά του χώρου R10G μπορεί να επηρεάσουν την εξέλιξη του καρκίνου, αν και δεν είναι σαφές σε ποιο βαθμό. Στην παρούσα μελέτη δεν παρατηρήθηκε σημαντική διαφορά σε σχέση με το 3-ετή ελεύθερη νόσου επιβίωση μεταξύ των ασθενών με TSCC μεταφέρουν ή όχι την άσκηση παραλλαγή HPV16 Ε6 R10G. Αυτό συνηγορεί υπέρ της δυνατότητας ότι αυτή η παραλλαγή θα μπορούσε να προκαλέσει πιο επιθετικά αυξανόμενη TSCC.

Άλλες παραλλαγές του HPV16 Ε6, ειδικά L83V, διαφέρουν γεωγραφικά και μπορεί να επηρεάσει την παθολογική κίνδυνο [27]. Στη μελέτη αυτή, L83V ήταν η πιο κοινή παραλλαγή σε όλους τους τύπους του υλικού, το οποίο είναι σύμφωνο με πολλές άλλες παρατηρήσεις τόσο στο γεννητικό και το κεφάλι και το λαιμό περιοχή [16], [19], [20], [28], [ ,,,0],29]. Εδώ, μια υψηλότερη επικράτηση της L83V βρέθηκε σε TSCC σε σύγκριση με CC και CS, ενώ ο επιπολασμός στις τελευταίες κατηγορίες ήταν κατά προσέγγιση σε συμφωνία με προηγούμενες αναφορές [12], [14], [29] – [31]. Ωστόσο, υπάρχουν αρκετές μελέτες που αποδεικνύουν τη σύνδεση μεταξύ L83V και την αυξημένη αντοχή του ιού, και τον κίνδυνο του τραχήλου της νεοπλασίας και εξέλιξης του καρκίνου [28], [32]. Επιπλέον, οι μελέτες για HPV16 Ε6 παραλλαγές και η κυτταρική ανοσοαπόκριση υποδεικνύουν συγκεκριμένες αλλαγές, ότι από ένα ξενιστή-ιού σημείο ανοσολογία άποψη μπορεί να εξηγήσει ένα τροποποιημένο ογκογόνο δυναμικό [33] – [35]. Αξίζει να σημειωθεί, δεν βρήκαμε καμία σημαντική συσχέτιση μεταξύ της παρουσίας ή απουσίας της παραλλαγής L83V και το 3 ετών χωρίς νόσο επιβίωση των ασθενών.

Αξίζει να σημειωθεί ότι η Ευρωπαϊκή παραλλαγή HPV16 έχει σαφώς περίπου το ίδιο πολύ υψηλής συχνότητας στο CS από νεαρές γυναίκες, που λαμβάνονται 2009-2010, όπως σε δείγματα CC. Με την αύξηση ταξιδεύουν κατά τη διάρκεια των τελευταίων δεκαετιών η αύξηση παραλλαγές HPV16 από άλλες γεωγραφικές περιοχές δεν θα ήταν απρόσμενη, αλλά καμία τέτοια αύξηση παρατηρήθηκε.

Ένας περιορισμός στην παρούσα μελέτη είναι ο αριθμός των δειγμάτων που αναλύθηκαν. Παρ ‘όλα αυτά, το 108 TSCC αναλύθηκαν αποτελούν περίπου το 65% όλων των ασθενών από την κομητεία της Στοκχόλμης με HPV16 θετική TSCC διαγνωστεί κατά τη διάρκεια αυτού του χρονικού πλαισίου και όπου βιοψίες ήταν διαθέσιμες [1], [36]. Ένας άλλος περιορισμός είναι ότι μόνο η περιοχή Ε6 αναλύθηκε. Έτσι, αν υπήρχαν διαφορές στην NCCR, Ε7 ή Ε5 περιοχές μεταξύ των δειγμάτων TSCC και CC, αυτές θα είχαν χαθεί.

Στη μελέτη αυτή βρήκαμε μια σημαντική διαφορά στην κατανομή των παραλλαγών HPV16 μεταξύ TSCC και CC δείγματα από ασθενείς που εισήχθησαν στο ίδιο νοσοκομείο κατά τη διάρκεια της συγκεκριμένης χρονικής περιόδου. Πιο συγκεκριμένα, η σπάνια παραλλαγή R10G ήταν σημαντικά πιο συχνή σε TSCC ό, τι σε CC, και ήταν συχνά σε συνδυασμό με την παραλλαγή L83V στις πρώην όγκους. Απαιτούνται περαιτέρω μελέτες για να διερευνηθεί αν η παραλλαγή R10G μπορεί να είναι πιο συχνές σε προφορική, σε σύγκριση με του τραχήλου της μήτρας δείγματα. Επιπλέον, δεν υπήρχε σχετική συμφωνία μεταξύ της παρουσίας των παραλλαγών στο CC και CS.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθική δήλωση

Η μελέτη εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας στο Karolinska Institutet, Στοκχόλμη, Σουηδία, σύμφωνα με τις ηθικές δικαιώματα 2005 /431-31 /4, 2005 /1330-1332, 2008 /870-31 /4, 2008 /813-31 /2 και 2009 /1278-1231 /4. Γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από όλους τους συμμετέχοντες στη μελέτη.

όγκου και του τραχήλου της μήτρας δείγματα υλικού

Pre-θεραπεία παραφίνης ενσωματωμένο βιοψίες των όγκων από τους ασθενείς από την κομητεία της Στοκχόλμης, που είχαν διαγνωστεί 2000-2007, με αμυγδαλών καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων (TSCC) ή 2003-2008 με καρκίνο του τραχήλου της μήτρας (CC). Όλα τα δείγματα όγκων είχαν προηγουμένως αναλυθεί για την παρουσία και τον τύπο των HPV [1], [36] – [38]. Μεταξύ των 166 TSCC και 90 CC που ήταν HPV16 θετικά, 55 TSCC και 52 CC επιλέχθηκαν τυχαία. Στο δεύτερο μέρος της μελέτης, για την επικύρωση, 53 πρόσθετα, που επιλέγονται τυχαία, HPV16 θετική TSCC από το ίδιο χρονικό διάστημα είχαν συμπεριληφθεί. Ένα διάγραμμα ροής για τα δείγματα TSCC παρουσιάζεται στο Σχήμα 1. Επιπλέον, 51 HPV16 θετικών τραχηλικών δειγμάτων (CS), από μια προηγούμενη μελέτη 2009 – 2010 σε ένα κέντρο υγείας για τη νεολαία στη Στοκχόλμη [39] επιλέχθηκαν τυχαία και αναλύθηκαν. Οι μέσες ηλικίες των ασθενών με καρκίνο ήταν 59,7 y (διάμεσος 59 y, εύρος 30-84 y) για τους ασθενείς TSCC και 50,3 y (διάμεσος 45 y, εύρος 25-88 y) για τους ασθενείς CC, ενώ η μέση ηλικία για τις γυναίκες κατά τη κλινική νεολαίας ήταν 19.9 y (διάμεσος 20 ετών, range16-22 y).

η

αλληλουχίας

DNA εκχυλίζεται και αναλύθηκαν για την παρουσία του ιού HPV και HPV τύπο που περιγράφεται σε προηγούμενες μελέτες [1], [37], [39]. Για την ανάλυση του HPV16 Ε6 από καρκινικούς ιστούς χρησιμοποιήθηκε δύο ζεύγη εκκινητών που καλύπτουν ολόκληρη την περιοχή Ε6. 5′-CCGGTTAGTATAAAAGCAGACAT-3 ‘, μαζί με 5′-TGCTGTTCTAATGTTGTTCC-3′ ενίσχυση bp 57 έως 375 και 5’-GGAATCCATATGCTGTATGT-3 ‘, μαζί με 5′-TGCAATGTAGGTGTATCTCC-3′ ενίσχυση bp 273 έως 587. Για τραχηλικών δειγμάτων ένα ζεύγος εκκινητών που καλύπτουν το σύνολο της Ε6 χρησιμοποιήθηκε? 5’-CCGGTTAGTATAAAAGCAGACAT-3 ‘και 5′-GTACCCTCTTCCCCATTGGT-3’ ενισχύοντας bp 57-902. PCR διεξήχθη με θερμοκρασία ανόπτησης στους 49 ° C και τα προϊόντα καθαρίστηκαν χρησιμοποιώντας ExoSAP-IT (USB, VWR) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Ένα PCR για αλληλούχιση εκτελέσθηκε επί των καθαρισμένων προϊόντων με Big Dye ™ τερματισμού (Applied Biosystems) και τα αμπλικόνια αναλύθηκαν σε 3.130 sequencer Applied Biosystems. Και οι δύο έλικες του DNA αλληλουχήθηκαν και η αλληλουχία DNA και η αντίστοιχη αλληλουχία αμινοξέων συγκρίθηκε με την Ευρωπαϊκή αλληλουχία αναφοράς HPV16 (κωδικός αναφοράς: NC_001526.1) χρησιμοποιώντας το λογισμικό Sci-Ed (Επιστήμη και Εκπαιδευτικό Λογισμικό, Durham, NC, USA). Τρεις ερευνητές (JD, CC και MS) συμμετείχαν στην ανάλυση των αλληλουχιών. Για τις περιπτώσεις όπου το αποτέλεσμα που επιτεύχθηκε ήταν ασαφής, η αλληλούχιση επαναλήφθηκε.

Η στατιστική ανάλυση

Οι διαφορές στις συχνότητες των παραλλαγών για TSCC και CC ή CS αξιολογήθηκαν από chi-square και ακριβή τεστ του Fischer ( two-tailed) με τη χρήση on-line λογισμικό στατιστικής ανάλυσης (GraphPad Software). Η μέση ηλικία ήταν η ηλικία κατά την πρώτη διάγνωση.

ελεύθερη νόσου επιβίωση (DFS) ορίστηκε ως διάστημα από την ημερομηνία της διάγνωσης από την ημερομηνία της τελευταίας γνωστής φορά που ο ασθενής ήταν απαλλαγμένη από την ασθένεια, ή η ημερομηνία της υποτροπής της νόσου (τοπικό, περιφερειακό ή απομακρυσμένη υποτροπή). Θάνατος χωρίς τεκμηριωμένη υποτροπής λογοκρίθηκε κατά την ημερομηνία του θανάτου. Αθροιστική επιβίωση υπολογίστηκε με τη μέθοδο Kaplan-Meier και αναλύθηκαν με τη δοκιμασία log-rank. Η ανάλυση της επιβίωσης πραγματοποιήθηκε σε SPSS (IBM SPSS Statistics, έκδοση 20).

Υποστήριξη Πληροφορίες

Πίνακα S1.

τις συχνότητες των διαφόρων παραλλαγών HPV16E6 στον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας (CC), των αμυγδαλών ακανθοκυτταρικό καρκίνωμα (TSCC) και του τραχήλου της μήτρας δείγματα (CS)

doi:. 10.1371 /journal.pone.0036239.s001

(DOC)

Ευχαριστίες

Οι συγγραφείς θα ήθελαν να ευχαριστήσω τους μαίες, Τζένη Kugelberg, Ingrid Μαντάραζ, Anne Henriksson Klintberg, Kicki Bergström, Åsa Weitzberg, Kerstin Johanssson στην κλινική νεολαίας για βοήθεια σχετικά με τη συλλογή των δειγμάτων .