Αφηρημένο

Εισαγωγή

Καρκίνος του παχέος εντέρου (CRC) είναι ένας από τους τρεις πιο κοινούς καρκίνους του κόσμου και η συχνότητα του αυξάνεται. Για τον εντοπισμό των ασθενών που επωφελούνται από την επικουρική θεραπεία απαιτεί μυθιστόρημα βιοδείκτες. Η αναγέννηση των νησιδίων προερχόμενο γονίδιο (REG) 4 ανήκει σε μια ομάδα μικρών εκκριτικών πρωτεϊνών που εμπλέκονται στον κυτταρικό πολλαπλασιασμό και την αναγέννηση. επάνω ρυθμισμένη έκφραση του λαμβάνει χώρα σε φλεγμονώδεις νόσους του εντέρου και σε καρκίνους του γαστρεντερικού. Οι εκθέσεις σχετικά με τη σύνδεση της έκφρασης REG4 με CRC πρόγνωση έχουν αναμιχθεί. Ο στόχος μας ήταν να διερευνηθεί η έκφραση REG4 όγκου σε ασθενείς με CRC και συνέκφραση του με άλλα εντερικά δείκτες.

Μέθοδοι

έκφραση του όγκου των REG4 εκτιμήθηκε με ανοσοϊστοχημεία σε 840 συνεχόμενους χειρουργικά ασθενείς που έλαβαν CRC στο Πανεπιστήμιο του Ελσίνκι κεντρικό Νοσοκομείο. Έκφραση των MUC1, MUC2, MUC5AC, synapthophysin και χρωμογρανίνη αξιολογήθηκε σε μια υποομάδα 220 διαδοχικά λειτουργούν ασθενείς CRC. αξιολογήθηκαν έκφραση REG4 με κλινικοπαθολογοανατομικές παραμέτρους, άλλες εντερικές δείκτες, και τον αντίκτυπο της έκφρασης REG4 στην επιβίωση.

Αποτελέσματα

έκφραση REG4 συνδέονται με ευνοϊκούς κλινικοπαθολογοανατομικές παραμέτρους και με μεγαλύτερη συνολική επιβίωση από μη-βλεννώδες CRC (p = 0.019). Για αυτούς τους ασθενείς κάτω των 65 ετών, η έκφραση της ήταν ένας ανεξάρτητος δείκτης χαμηλότερο κίνδυνο θανάτου εντός 5 ετών ότι ο καρκίνος του? μονοπαραγοντική αναλογία κινδύνου (HR) = 0,57? 95% διάστημα εμπιστοσύνης (CI) (0,34 – 0,94)? πολυπαραγοντική HR = 0,55? 95% CI (0,33 – 0,92). Σε μη-βλεννώδες CRC, REG4 που σχετίζονται με θετικά MUC2, MUC4, και την έκφραση MUC5AC.

Συμπέρασμα

δείχνουν, με τις γνώσεις μας, για πρώτη φορά, ότι η έκφραση REG4 IHC για να είμαστε μια ανεξάρτητη δείκτης ευνοϊκή πρόγνωση σε μη βλεννώδες CRC. Τα αποτελέσματά μας έρχονται σε αντίθεση με εκείνα από τις μελέτες με βάση την ποσοτικοποίηση των επιπέδων REG4 mRNA, μια διαφορά που δικαιολογούν περαιτέρω μελέτες

Παράθεση:. Kaprio Τ, Hagström J, Mustonen Η Koskensalo S, Andersson LC, Haglund C (2014) REG4 Ανεξάρτητα προβλέπει καλύτερη πρόγνωση σε μη-βλεννώδες του καρκίνου του παχέος εντέρου. PLoS ONE 9 (10): e109600. doi: 10.1371 /journal.pone.0109600

Επιμέλεια: Αντώνης WI. Lo, Queen Mary Hospital, το Χονγκ Κονγκ

Ελήφθη: 21, Ιουλίου, 2014? Αποδεκτές: 11, Σεπτεμβρίου, 2014? Δημοσιεύθηκε: 8 Οκτ 2014

Copyright: © 2014 Kaprio et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Η συγγραφείς επιβεβαιώνουν ότι όλα τα δεδομένα που διέπουν τα ευρήματα είναι πλήρως διαθέσιμα χωρίς περιορισμούς. Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. Η μελέτη αυτή χρηματοδοτήθηκε από Finska Läkaresällskapet, το Kurt och Doris Ίδρυμα Palander, το Ίδρυμα Sigrid Juselius, και Medicinska understödsföreningen Liv och Hälsa, Κ Ίδρυμα Johansson Albin, και μια ειδική κυβερνητική επιχορήγηση για την έρευνα και την εκπαίδευση. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

τρίτη πιο κοινή μορφή καρκίνου στον κόσμο, με ετήσια επίπτωση της πάνω από ένα εκατομμύριο νέες περιπτώσεις, είναι καρκίνου του παχέος εντέρου (CRC) [1]. θεραπεία του βασίζεται στην έγκαιρη διάγνωση, ριζική χειρουργική επέμβαση, και την πιθανή επικουρική θεραπεία. Αυτή η θεραπεία είναι ρουτίνα για τους ασθενείς σταδίου ΙΙΙ. Στο στάδιο ΙΙ, το πλεονέκτημα της επικουρικής θεραπείας, ωστόσο ασαφής, δεδομένου ότι περίπου το 80% των ασθενών που χειρουργήθηκαν σταδίου ΙΙ επιβιώσει χωρίς χημειοθεραπεία. Αν και γνωρίζουμε ότι πολλοί παράγοντες υψηλού κινδύνου? Τ4-στάδιο, χαμηλής διαφοροποίησης, αγγειακή εισβολή, απόφραξη του όγκου, διάτρηση του εντέρου, και ανεπαρκής εκτομή λεμφαδένων, δεν μπορούμε να εντοπίσει πάντοτε οι ασθενείς οι οποίοι θα ωφεληθούν από επικουρική θεραπεία. Θα ήταν χρήσιμο να βρούμε νέους βιοδείκτες για να βοηθήσουν στις αποφάσεις της θεραπείας.

Ανάπλαση γονίδιο νησάκι που προέρχονται από (REG) πρωτεΐνες συνιστούν μια ομάδα μικρών εκκριτικών πρωτεϊνών που εμπλέκονται στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων και την αναγέννηση, που συμμετέχουν επίσης στο σχηματισμό της ανοσοποιητικό σύστημα [2], [3]. Ανήκουν στην εξαρτώμενη από ασβέστιο λεκτίνη (C-λεκτίνη) υπεροικογένεια και χωρίζονται σε τέσσερις οικογένειες, REG Ι έως IV, με βάση την πρωτοταγή δομή τους. Σε αντίθεση με τις άλλες πρωτεΐνες REG, REG4 δεσμεύει πολυσακχαρίτες, ανεξάρτητα από το ασβέστιο [4]. Τα γονίδια που κωδικοποιούν REG Ι γονίδια III βρίσκεται στο χρωμόσωμα 2p12, ενώ εκείνη του REG4 είναι 1p12-13. REG4 κλωνοποιήθηκε αρχικά και προσδιορίζονται από Hartupee κ.ά. [5] και από Kämäräinen κ.ά. [6]. Περιέχουν 158 αμινοξέα και με ένα μοριακό βάρος από 18 kDa, είναι φυσιολογικά εκφράζεται στο κόλον και το λεπτό έντερο, με υψηλή έκφραση σε κύτταρα εντεροενδοκρινές. [6], [7]. Στο γαστρεντερικό επιθήλιο, REG4 ενεργοποιείται κατά τη διάρκεια συγκεκριμένων φάσεων της διαφοροποίησης και ωρίμανσης, η έκφραση της είναι χωρικά ειδικό, και έχει προταθεί για τη στήριξη βλεννώδες και νευροενδοκρινικών διαφοροποίηση ή [8], [9]. έκφραση REG4 Up-ρυθμίζονται συμβαίνει σε φλεγμονώδεις νόσους του εντέρου (IBD) [6], και εμφανίζεται επίσης σε πολλές κακοήθειες: ορθοκολικό, γαστρικό, και του παγκρέατος [10] – [12]. REG4 προτείνεται να συμμετέχει στην καρκινογένεση και την αναγέννηση των ιστών, να ενεργεί ως αντιαποπτωτικών παράγοντας, και για την προώθηση του πολλαπλασιασμού και της εισβολής [13]. Οι τελικοί φυσιολογικούς και παθολογικούς ρόλους του REG4 παραμένουν ασαφείς, ωστόσο. Έκφραση REG4 σε καρκίνους γαστρεντερική οδό έχει σε αρκετές μελέτες φάνηκε ότι είναι προβλεπτική και προγνωστική αξία [10], [11], [14], [15]. Τα ευρήματα στο CRC έχουν, όμως, ήταν αμφιλεγόμενη: αυξημένη έκφραση είναι ένα σημάδι κακή πρόγνωση, σύμφωνα με Numata et al [16], αλλά καμία συσχέτιση με την πρόγνωση έχει αναδειχθεί σε άλλες μελέτες [17], [18]

Αυτή η μελέτη στοχεύει να αξιολογήσει το CRC το ρόλο της REG4 ως προγνωστικός δείκτης και η σύνδεσή της με κλινικοπαθολογικών παραμέτρων σε μία ομάδα από 840 ασθενείς. Επιπλέον, σε μια υποομάδα 220 ασθενών, εστιάσαμε σχετικά με τη σύνδεση της έκφρασης REG4 με άλλους δείκτες: οι δείκτες των βλεννωδών διαφοροποίησης MUC1, MUC2, MUC4 και MUC5AC, καθώς επίσης και οι δείκτες των νευροενδοκρινικών φαινότυπο:. Synaptophysin και χρωμογρανίνης

μέθοδοι

ασθενείς

Ο πληθυσμός της μελέτης περιλάμβανε 840 διαδοχικούς ασθενείς με ορθοκολικό καρκίνο που υποβάλλονται σε χειρουργική επέμβαση στο 1983-2001 στο Τμήμα Χειρουργικής, Πανεπιστήμιο Κεντρικό Νοσοκομείο του Ελσίνκι. Μια υποομάδα των 240 αποτελείται διαδοχικά λειτουργεί ασθενείς μεταξύ 1998-2001. REG4 μελετήθηκε σε όλη την σειρά των ασθενών, και οι άλλοι δείκτες που μελετήθηκαν στην υποομάδα. Το Μητρώο Κέντρο φινλανδική Πληθυσμού παρέσχε τα δεδομένα ζωτικής σημασίας, το καθεστώς παρακολούθησης που απαιτούνται για τον υπολογισμό των στατιστικών της επιβίωσης, και Στατιστική Υπηρεσία της Φινλανδίας παρέχονται αιτία θανάτου για όλους εκείνους που απεβίωσε. Η διάμεση ηλικία κατά τη διάγνωση ήταν 66, με διάμεση παρακολούθηση 5,1 ετών (εύρος μηδέν έως 25,8). Το ποσοστό επιβίωσης για συγκεκριμένες ασθένειες 5 ετών ήταν 58,9% (95% Cl 55,0 έως 62,8%). Για την υποομάδα, διάμεση ηλικία κατά τη διάγνωση ήταν 67 με διάμεση παρακολούθηση 6,0 ετών (εύρος μηδέν έως 13,2). Το ποσοστό επιβίωσης για συγκεκριμένες ασθένειες 5 ετών ήταν 64,8% (95% Cl 58,1 έως 71,5%). Κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά και των δύο ομάδων είναι το S1.

Αυτή η μελέτη είναι σύμφωνη με τη Διακήρυξη του Ελσίνκι και εγκρίθηκε από την Χειρουργική Επιτροπή Δεοντολογίας του Πανεπιστημίου του Κεντρικού Νοσοκομείου του Ελσίνκι (Dnro HUS 226 /E6 /06, επέκταση TMK02 §66 17.4 0,2013) και η Εθνική Εποπτική Αρχή της Πρόνοιας και Υγείας έδωσε την άδεια να χρησιμοποιήσει τα δείγματα ιστών χωρίς συγκεκριμένη ενημερωμένη συγκατάθεση σε αυτήν την αναδρομική μελέτη (Valvira Dnro 10041 /06.01.03.01 /2012).

ιστός μικροσυστοιχιών

φορμόλη-σταθερές και δείγματα όγκων παραφίνη-ενσωματωμένες προήλθε από τα αρχεία του Τμήματος Παθολογίας του Πανεπιστημίου Κεντρικό Νοσοκομείο του Ελσίνκι. Αντιπροσωπευτικές περιοχές των δειγμάτων όγκων σε αιματοξυλίνη και διαφάνειες ηωσίνη-βάφονται σημαδεύτηκαν από έναν έμπειρο παθολογοανατόμο. Τρεις διατρήσεις 1,0-mm-διαμέτρου λαμβάνονται από κάθε δείγμα τοποθετείται σε κάθε μπλοκ παραλήπτη παραφίνης με ένα όργανο ημιαυτόματα μικροσυστοιχίες ιστού (ΤΜΑ) (Beecher Instruments, Silver Spring, MD) όπως περιγράφεται [19].

Ανοσοϊστοχημεία

TMA- και ιστών-μπλοκ φρεσκοκομμένο σε 4-μm τμήματα. Μετά αποπαραφινώσεως σε ξυλόλιο και επανυδάτωση μέσω μιας σταδιακά μειούμενη συγκέντρωση αιθανόλης προς απεσταγμένο νερό, τα πλακίδια υποβλήθηκαν σε επεξεργασία σε μία μονάδα προεπεξεργασίας (Lab Vision Corp., Fremont, CA) σε ρυθμιστικό προ-θεραπεία για 20 λεπτά στους 98 ° C για ανάκτηση αντιγόνου . Η διαδικασία χρώσης από το σύστημα ανίχνευσης Dako REAL EnVision, υπεροξειδάσης /DAB +, Κουνέλι /ποντίκι (Dako, Glostrup, Δανία) χρησιμοποιήθηκε μια Autostainer 480 (Lab Vision). Ιστοί επωάστηκαν με πρωτεύοντα αντισώματα για μία ώρα σε θερμοκρασία δωματίου. Το αντίσωμα REG4 είναι όπως περιγράφεται στο [20], άλλοι ήταν από εμπορικές πηγές. Αντισώματα και αραιώσεις τους στον πίνακα 1.

Η

Η βαθμολόγηση των δειγμάτων

REG4 κυτταροπλασματική έκφραση σκόραρε στα καρκινικά κύτταρα είτε ως αρνητικό θετικό. MUC1 και MUC2 εκφράσεις ήταν κυτταροπλασματική σε κύτταρα όγκου και βαθμολογήθηκαν ως αρνητικά χαμηλού μέτριας υψηλή ανάλογα με την ένταση. Για περαιτέρω στατιστική ανάλυση που ομαδοποιήθηκαν σε: χαμηλή (αρνητική προς χαμηλή) και υψηλή (μέτρια έως υψηλή). MUC4 και MUC5AC κυτταροπλασματική εκφράσεις βαθμολογήθηκαν είτε αρνητική είτε θετική. Νευροενδοκρινή διαφοροποίηση (αρνητικό έναντι θετικών) αξιολογήθηκε από την κυτταροπλασματική synapthophysin και χρωμογρανίνη θετικότητα. Χρώσεις βαθμολογήθηκαν ανεξάρτητα από την Τ.Κ. και J.H., οι οποίοι δεν γνώριζαν την κλινικά δεδομένα και τα αποτελέσματα. Οι διαφορές στο σκοράρισμα συζητήθηκαν μέχρι συναίνεση. Εκπρόσωπος εικόνες της έκφρασης είναι στο σχήμα 1. έκφρασης REG4 συγκρίθηκε με το δείκτη πολλαπλασιασμού από Ki-67 χρώση, η οποία θα δημοσιευθεί στο παρελθόν [21]

Εκπρόσωπος εικόνες της χρώσεις αντισώματος σε καρκίνο του παχέος εντέρου.? REG4 και αρνητικών κατά Gramm (Α & amp? Β), MUC1- αρνητικά και -θετικό (C & amp? D)? MUC2 και αρνητικών κατά Gramm (Ε & amp? F), MUC4 και αρνητικών κατά Gramm (G & amp? Η), MUC5AC και αρνητικών κατά Gramm (Ι & amp? J), synapthophysin και αρνητικών κατά Gramm (Κ & amp? L ), χρωμογρανίνη και αρνητικών κατά Gramm (M & amp? Ν) Αρχική μεγέθυνση ήταν χ 20.

η

Στατιστικές αναλύσεις

η αξιολόγηση της σχέσης μεταξύ της έκφρασης REG4 και κλινικοπαθολογοανατομικές παραμέτρους ή MUC εκφράσεις έγινε από το ακριβές τεστ chi-square Pearson ή την ακριβή γραμμική-by-γραμμική δοκιμή σύνδεσης για διέταξε παραμέτρους. Νόσος-ειδική συνολική επιβίωση μετρήθηκε από την ημερομηνία χειρουργική επέμβαση για να ημερομηνία θανάτου από καρκίνο του παχέος εντέρου, ή μέχρι το τέλος της παρακολούθησης. ανάλυση επιβίωσης με τη μέθοδο Kaplan-Meier συγκρίθηκε με τη δοκιμή log rank. Το μοντέλο αναλογικών κινδύνων Cox παλινδρόμησης υπηρέτησε για ομοιόμορφη και πολυπαραγοντική ανάλυση επιβίωσης, προσαρμοσμένο για το φύλο, την ηλικία, την ταξινόμηση Dukes, και διαφοροποίηση. Δοκιμή του μοντέλου υπόθεση Cox σταθερής αναλογίας κινδύνου πάροδο του χρόνου αφορούσε την ένταξη ενός εξαρτώμενη από το χρόνο συμμεταβλητή χωριστά για κάθε ελέγξιμη μεταβλητή. Η αναλογία κινδύνου της διαφοροποίησης αναλύθηκε σε δύο περιόδους (0 έως 1,25 και 1,25 έως 5 έτη), προκειμένου να καλύψει τις παραδοχές του μοντέλου Cox, με το χρόνο που εξαρτάται από το μοντέλο Cox. αφορά την αλληλεπίδραση εξετάστηκαν και μια αλληλεπίδραση μεταξύ της έκφρασης REG4 και την ηλικία προέκυψε. Ως εκ τούτου υπολογίζεται την προγνωστική ρόλος του REG4 ξεχωριστά για τους ασθενείς υπό και άνω των 65. Όλες οι δοκιμασίες ήταν δύο όψεων. Μια τιμή ρ 0,05 θεωρήθηκε σημαντική. Όλες οι στατιστικές αναλύσεις έγιναν με το λογισμικό SPSS έκδοση 20.0 (IBM SPSS Statistics, έκδοση 20.0 για Mac? SPSS Inc., Chicago, IL)

Αποτελέσματα

Η ανοσοϊστοχημεία

REG4. έκφραση σε κύτταρα όγκου ήταν κυτταροπλασματική και ελαφρώς κοκκώδης. Όταν είναι παρούσα, η έκφραση ήταν εμφανής στη συντριπτική πλειονότητα των καρκινικών κυττάρων, αλλά με καμία πυρηνική έκφραση. Σε τομές ολόκληρο ιστό, δεν υπάρχει σαφής διάκριση στην έκφραση εμφανίστηκε μεταξύ μεταναστευτικό μέτωπο και το υπόλοιπο του όγκου. Επιπλέον, σε ολόκληρα τμήματα, έκφραση REG4 εμφανίστηκε σε ορισμένες περιπτώσεις σε φυσιολογικό επιθήλιο, αλλά κάτω-ρυθμιζόμενη σε κύτταρα όγκου. Έκφραση των βλεννών, synapthopysin και χρωμογρανίνη ήταν κυτταροπλασματική, με καμία πυρηνική έκφραση

Από τους 840 όγκους που εκπροσωπούνται στο ΤΜΑ, χρώση REG4 θα μπορούσε να αξιολογηθεί σε 793.? 580 (73,1%) βαθμολογήθηκαν ως αρνητικοί και 213 (28,9%) βαθμολογήθηκαν ως θετικά. Σε μία υποομάδα των 220 όγκων, MUC 1 έκφραση αξιολογήθηκε σε 206 (χαμηλή 83.5% και υψηλή 17,5%), η έκφραση MUC2 σε 210 (χαμηλή 17.1% και υψηλή 82,9%), η έκφραση MUC4 σε 208 (αρνητικός 51,0% και θετική 49,0% ), και MUC5AC έκφραση σε 205 (93,2% αρνητική και θετική 6,8%). Νευροενδοκρινή θετικότητα (είτε /και synaptohysin- και χρωμογρανίνη-θετικό) θα μπορούσε να αξιολογηθεί σε 212 (αρνητικά 92,9% και θετική 7,1%).

REG4 σε λεμφαδένες μετάσταση

Με βάση τα αποτελέσματα TMA , επιλέξαμε 10 ασθενείς με νόσο του Dukes C, 5 με REG4-θετικούς όγκους και 5 με αρνητικό όγκους. Κανένα από αρνητικούς όγκους REG4 των ασθενών εμφάνισαν θετικότητα σε λεμφαδένες μετάσταση τους, ενώ από τους 5 ασθενείς με REG4-θετικών όγκων, 2 έδειξε θετικότητα επίσης σε λεμφαδένα μετάσταση τους (Σχήμα 2).

REG4- αρνητική έκφραση σε όγκο και σε παρακείμενες -θετικό επιθήλιο (Α). Θετική έκφραση REG4 σε πρωτογενή όγκο (Β) και αρνητική σε αντίστοιχη μετάσταση λεμφαδένα του (C) .Positive έκφραση REG4 σε πρωτογενή όγκο (D) και θετικά στον κόμβο μετάσταση αντίστοιχο λεμφογαγγλίων του (Ε). Αρχική μεγέθυνση x 4 στο σχήμα Α και x 20 στην Β-Ε.

Η

REG4 και κλινικοπαθολογικών παραμέτρων

Η κυτταροπλασματική έκφραση REG4 σχετίζεται με λιγότερο προχωρημένο στάδιο (p = 0.014), θέση στη δεξιά hemicolon (p = 0.035), και βλεννώδες ιστολογία (ρ & lt? 0,0001). Είδαμε καμία σχέση με την ηλικία, το φύλο, τη διαφοροποίηση, ή την τοποθεσία (παχέος εντέρου έναντι του ορθού) (Πίνακας 2). Όπως REG4 σχετίζονται έντονα με ιστολογία όγκων, αναλύσαμε βλεννώδες και μη βλεννώδες CRC ξεχωριστά. Σε μη-βλεννώδες CRC, έκφραση REG4 σχετίζεται με λιγότερο προχωρημένο στάδιο (p = 0,005) και υψηλότερη differentiaton (p = 0,023). Καμία συσχέτιση εμφανίστηκε με την ηλικία, το φύλο, τη θέση του όγκου, ούτε πλευράς όγκου. (Πίνακας 3) Σε βλεννώδες CRC, η έκφραση REG4 δεν συνδέουν με οποιαδήποτε clinocopathological παράμετρο (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Καμία συσχέτιση μεταξύ REG4 και Ki-67 παρατηρήθηκε σε CRC ούτε σε οποιαδήποτε από τις υποομάδες που αναλύθηκαν (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Η

REG4 και άλλων εντερικών δείκτες

στο υποομάδα των 220 όγκων, βρήκαμε ότι η έκφραση REG4 σημαντική συσχέτιση με υψηλότερη έκφραση της MUC2, MUC4, και MUC5AC, αλλά όχι με έκφραση MUC1. Ούτε REG4 συνεργάτης έκφρασης με δείκτες νευροενδοκρινών διαφοροποίησης. Το ίδιο ισχύει και όταν παρέμεινε μη βλεννώδες CRC αναλύθηκε μόνο (Πίνακας 4). Σε βλεννώδες CRC, έκφραση REG4 συνδέονται με καμία άλλη δείκτες που μελετήθηκαν (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Η

Επιβίωση ανάλυση

Σε μη-βλεννώδες, CRC REG4 θετικότητα ήταν ένα σημάδι ευνοϊκή πρόγνωση ( p = 0,019, δοκιμασία log-rank)? 5-ετή DSS για ασθενείς με θετική έκφραση κυτταροπλασματικό REG4 όγκου ήταν 67,9% (95% CI 60,5 – 75,3) σε σύγκριση με 57,8% (95% CI 53,5 έως 62,1) για εκείνους που δεν κυτταροπλασματική έκφραση (Σχήμα 3). Σε βλεννώδες CRC, καμία διαφορά εμφανίστηκε (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Όταν στρωματοποιημένη μη βλεννώδες CRC για ασθενείς κάτω ή άνω των 65 ετών, η έκφραση REG4 ήταν ένα σημάδι της ευνοϊκή πρόγνωση σε ασθενείς κάτω των 65 ετών (p = 0,049, δοκιμασία log-rank.), Χωρίς καμία διαφορά για τα μεγαλύτερης ηλικίας (p = 0,195, ημερολόγιο -rank-test). (S2 & amp? S3)..

ανάλυση νόσου επιβίωση συγκεκριμένων σύμφωνα με τη μέθοδο Kaplan-Meier για την έκφραση REG4 σε μη-βλεννώδες ορθοκολικού καρκίνου με τη δοκιμασία log-rank

Η

Cox παλινδρόμησης μονοπαραγοντική αναλύσεις επιβεβαίωσαν τα αποτελέσματα αυτά, με την έκφραση REG4 είναι ένα σημάδι μιας μειωμένο κίνδυνο θανάτου εντός 5 ετών για τις μη-βλεννώδες CRC. Μια σημαντική διαφορά προέκυψε επίσης για ασθενείς κάτω των 65 ετών (HR 0.57, 95% CI 0,34 – 0,94, p = 0,029), αλλά όχι για τους μεγαλύτερης ηλικίας (HR 0.83, 95% CI 0,57 – 1,22, p = 0,34). Cox παλινδρόμησης πολυπαραγοντική ανάλυση για CRC ασθενείς μη-βλεννώδες κάτω των 65 ετών, προσαρμοσμένο για το φύλο, το στάδιο, και η διαφοροποίηση, έδειξε ότι REG4 ήταν ένας ανεξάρτητος παράγοντας ευνοϊκή πρόγνωση (HR 0.55, 95% CI 0,33 – 0,92, p = 0,022) (Πίνακας 5 ).

η

Συζήτηση

Εδώ μπορούμε να δείξουμε με ανοσοϊστοχημεία ότι η έκφραση REG4 σε μη-βλεννώδες καρκίνο του παχέος εντέρου συνεργάτες με ευνοϊκούς κλινικοπαθολογοανατομικές παραμέτρους και ότι REG4 είναι ένας ανεξάρτητος δείκτης ευνοϊκή πρόγνωση σε ασθενείς ηλικίας κάτω 65. συνεργάτες έκφραση REG4 με την έκφραση των άλλων εντερικών δεικτών:. MUC1, MUC2 και MUC5AC

έκφραση REG4 ήταν υψηλότερη σε όγκους χαμηλού σταδίου και σε αυτούς με των βλεννώδες ιστολογία. Με αποκλείεται βλεννώδες όγκους, η έκφραση REG4 σχετίζεται σημαντικά με την υψηλότερη διαφοροποίηση και χαμηλό στάδιο. έκφραση REG4 σχετίζεται επίσης με MUC1, MUC2 και MUC5AC, που υποστηρίζει τη διαπίστωση ότι REG4-θετικούς όγκους είναι πιο πολύ διαφοροποιημένη από ό, τι είναι αυτά που είναι REG4 αρνητικά. Αυτά τα αποτελέσματα είναι σύμφωνα με τα ευρήματα των Li et al [17], ο οποίος έδειξε ότι για REG4, ανοσοϊστοχημική (IHC) έκφραση σε CRC συγγενείς σημαντικά με υψηλότερη διαφοροποίηση και με απουσία της φλεβικής εισβολής. Επιπλέον, η έκφραση REG4 έδειξε μια τάση παρόμοια συσχέτιση με χαμηλή Τ-στάδιο, απουσία μετάστασης λεμφαδένα, και τοπικές ασθένεια (Dukes Α-Β vs C-D). Παρόμοια αποτελέσματα εμφανίζονται για τον καρκίνο της χοληδόχου κύστης, όπου θετική έκφραση REG4 IHC, συνεργάτες με υψηλότερη differention όγκου [22]. Αμφιλεγόμενα αποτελέσματα για CRC σε Numata et al. δείχνουν ότι τα υψηλότερα συνεργάτες έκφραση mRNA REG4 με υψηλότερη διαφοροποίηση, βαθύτερη εισβολή (Τ-στάδιο), λεμφική εισβολή, παρουσία ηπατικών μεταστάσεων, και πιο προχωρημένο στάδιο [16]. Αυτοί, όμως μέτρησαν τα επίπεδα mRNA με PCR, δεν όπως κάναμε πραγματική έκφραση πρωτεΐνης.

σύνδεσης μεταξύ των επιπέδων REG4 και καρκίνωμα ήταν υπό μελέτη και στον ορό και στους ιστούς. Αυξημένα συγκέντρωση στον ορό του REG4 σε ασθενείς με καρκίνωμα σε σύγκριση με εκείνους σε υγιείς μάρτυρες υπήρξε εύρημα σε παγκρεατικού καρκίνου [12], γαστρικού καρκίνου [11] και της χοληδόχου κύστης καρκίνος [22], υποδεικνύοντας ότι REG4 ορός θα μπορούσε να χρησιμεύσει ως διαγνωστικό βιοδείκτη. Αυξημένη έκφραση REG4 IHC έχει προταθεί ως δείκτης της κακής πρόγνωσης σε καρκίνο του στομάχου [23], και αυξημένα επίπεδα ιστού του mRNA REG4 μπορεί να είναι ένας δείκτης κακής πρόγνωσης σε CRC [16]. REG4 έκφραση IHC έχει δείξει, ωστόσο, καμία επίδραση στην πρόγνωση σε CRC [17], [18]. Ένας λόγος για αυτό μπορεί να είναι ότι βλεννώδες και μη βλεννώδες καρκίνοι δεν αναλύθηκαν ξεχωριστά. Επίσης διαφορές σε αντισώματα, χρώση των διαδικασιών, και η ανάλυση των χρώσεις θα μπορούσε να διαφέρει από τη μελέτη μας. Στον καρκίνο της χοληδόχου κύστης, η έκφραση REG4 IHC έχει συσχετιστεί με καλύτερη πρόγνωση [22].

Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι η έκφραση REG4 IHC είναι ένας δείκτης των ευνοϊκών πρόγνωση σε μη-βλεννώδες CRC, ενώ δεν παρατηρήθηκε διαφορά προέκυψε στο βλεννώδες CRC. έκφραση REG4 είναι ιδιοσυστατικά υψηλό σε βλεννώδεις όγκους (δηλ Pseudomyxoma peritonei, και βλεννώδες cystadenomas και mucocellular γαστρικού καρκίνου) Αυτό μπορεί να εξηγήσει γιατί δεν υπάρχει σαφής μεταβολή στην έκφραση REG4 βρέθηκε από IHC στην ομάδα των βλεννωδών όγκων CRC. Οι διαφορές στην έκφραση REG4 ήταν από την άλλη πλευρά εμφανή σε μη βλεννώδες CRC. Σε ασθενείς μας κάτω των 65 ετών, αυξημένα REG4 ήταν ένας ανεξάρτητος παράγοντας για την καλύτερη πρόγνωση σε μη-βλεννώδες CRC. Φαίνεται συνεπώς εύλογο ότι τα επίπεδα REG4 mRNA μπορεί να είναι αυξημένα σε ασθενείς CRC με κακή πρόγνωση, αλλά αυτό δεν μεταφράζεται σε πρωτεΐνη. ως εκ τούτου απαιτούνται περαιτέρω μελέτες δικαιολογείται να συγκρίνουν τα επίπεδα REG4 mRNA με την περίπτωση REG4 IHC κατά περίπτωση.

Τα αποτελέσματα μας αναφορικά με πέντε ζεύγη των πρωτοπαθών όγκων REG4-θετικά και τα αντίστοιχα μεταστάσεις λεμφαδένων τους έδειξαν ότι πέντε λεμφαδένες, μόνο δύο έδειξε REG4 έκφραση? Αυτό μπορεί να σημαίνει ότι ένα REG4-αρνητικά υποπληθυσμό κυττάρων του όγκου είναι πιο πιθανό να κάνουν μετάσταση από REG4-θετικά κύτταρα.

REG4, εκφράζεται σε φλεγμονώδεις νόσους του εντέρου και επίσης στο περιθώριο των πεπτικών ελκών, θεωρείται δείκτης φλεγμονής [6]. Σε ορισμένες από ολόκληρους ιστού ιστός τομές όγκων μας χρωματίζονται αρνητικά για REG4, αλλά το παρακείμενο καλοήθη επιθήλιο εκφράζεται REG4 έντονα, προφανώς αντιπροσωπεύει μία φλεγμονώδη αντίδραση κατά του όγκου.

Είναι αξιοσημείωτο ότι η έκφραση REG4 προσδίδει μια πιο ευνοϊκή πρόγνωση μόνο στην CRC, χωρίς βλεννώδες διαφοροποίηση. Στην πραγματικότητα, η υψηλή έκφραση του REG4 έχει εμφανιστεί σε επιθετικές μορφές καρκίνου του γαστρεντερικού που δείχνουν βλεννώδες φαινότυπο που μοιάζει mucocellular (signet κύτταρο δακτύλιος) καρκίνωμα του στομάχου [9]. Από την άλλη πλευρά, είναι επίσης REG4 αφθονία σε βλεννίνη πλούσια cystadenomas του προσαρτήματος και σε κακοήθη, διαδίδονται μορφή του, peritonei pseudomyxoma, η οποία είναι εμφανώς ανθεκτικοί στη θεραπεία.

Η πλειοψηφία των εντερο-ενδοκρινών κυττάρων σε φυσιολογικά εντερικό βλεννογόνο εμφανίζουν υψηλή φυσιολογική έκφραση του REG4 με συν-έκφραση της συναπτοφυσίνης και χρωμογρανίνης. Εντερική νευρο-ενδοκρινείς όγκους τόσο χαμηλής όσο και υψηλής ποιότητας δείχνουν επίσης REG4 θετικότητα, συχνά με ένα ιδιόμορφο ανατομική κατανομή με το ισχυρότερο έκφραση σε ένα μονό στρώμα κυττάρων στην περιφέρεια του όγκου που βρίσκονται σε στενή επαφή με τον περιβάλλοντα στρώμα [6] Με δεδομένο αυτό, ήταν κάπως ενδιαφέρον ότι synaptophysin- και χρωμογρανίνης-θετικούς όγκους CRC σε αυτή τη μελέτη παρέμειναν αρνητικά για REG4.

Αρκετές αναφορές υποδεικνύουν την ογκογόνο ρόλο του REG4 στην ανάπτυξη του καρκίνου στο γαστρεντερικό σωλήνα. Οι τελικοί μοριακοί μηχανισμοί έχουν, ωστόσο, παρέμεινε άπιαστο. Bishnupari et al [24] ανέφεραν ότι η θεραπεία των καλλιεργημένων κυττάρων αδενοκαρκινώματος κόλου με επαγόμενη φωσφορυλίωση ανασυνδυασμένη πρωτεΐνη REG4 του υποδοχέα EGF και Akt. Πρότειναν ότι REG4 είναι μετενεργοποιητής του μονοπατιού σηματοδότησης EGFR /Akt. Μια περαιτέρω αποσαφήνιση του ρόλου του εξωγενούς REG4 ως ρυθμιστή του δυναμικού ανάπτυξης κυττάρων είναι, ωστόσο, αναμένουν αναγνώριση του υποθετικού υποδοχέα REG4. Αριθ στοιχεία δείχνουν ότι η αυξημένη έκφραση του REG4 από μόνη της προκαλεί καρκινική ανάπτυξη, ωστόσο. Οι παρατηρήσεις μας σε ποντίκια διαγονιδιακά για cDNA ανθρώπινης REG4 υπό τον προαγωγό βιλλίνη που οδηγεί στην παγκόσμια υπερέκφραση του REG4 στον εντερικό βλεννογόνο δεν προκάλεσε αυξημένο σχηματισμό όγκου ή του βλεννογόνου υπερπλασία (αδημοσίευτα δεδομένα).

Η ρύθμιση της έκφρασης REG4 εξακολουθεί ελάχιστα κατανοητή. Εμείς αρχικά αναφερθεί έντονα επάνω ρυθμισμένη έκφραση των REG4 επίσης σε φλεγμονή IBD βλεννογόνο του IBD εστιών που ομοιάζουν της γαστρίτιδας που προκαλείται εντερική μεταπλασία στο στομάχι [6]. Αυτό υποδηλώνει ότι φλεγμονώδεις κυτοκίνες μπορεί να επηρεάσουν την έκφραση REG4. διαφοροποίηση Νευροενδοκρινής, από την άλλη πλευρά, όπως φαίνεται στο εντεροενδοκρινές κύτταρα, φαίνεται να προσδίδει ιδιοσυστατική έκφραση REG4. Έχουμε αναφερθεί πρόσφατα συν-έκφραση του REG4 με το νευρωνικό παράγοντα μεταγραφής Hath-1 (ατονική, Math-1) σε νευροενδοκρινείς όγκους [9]. Αυτό που μένει να καθοριστεί είναι κατά πόσον ένας ρυθμιστής της έκφρασης REG4 είναι Hath-1.

Σε σύγκριση με τα τμήματα ολόκληρη ιστού, η τεχνική TMA επιτρέπει την ανάλυση των μεγαλύτερων ομάδων ασθενών, αλλά με μικρότερο ποσοστό των όγκων αξιολογήθηκαν. Αυτό θέτει κανένα πρόβλημα εδώ, όμως, όπως το πρότυπο χρώσης REG4 σε χρώση ολόκληρο το τμήμα μας ήταν ομοιογενής. Για τεχνικούς λόγους, μέχρι 5% των δειγμάτων χάθηκαν στην TMA-παραγωγής και -χρώση διαδικασία. Η δύναμη αυτής της μελέτης είναι ένα μεγάλο, καλά χαρακτηρίζεται ομάδα CRC-ασθενή με μεγάλο χρονικό διάστημα παρακολούθησης μας.

Εδώ θα δείξουμε, με τις γνώσεις μας, για πρώτη φορά, ότι η έκφραση REG4 IHC είναι ένας ανεξάρτητος δείκτης του ευνοϊκή πρόγνωση σε μη βλεννώδες ορθοκολικού καρκίνου σε ασθενείς κάτω των 65 ετών τα αποτελέσματα αυτά είναι σε διαφωνία με εκείνα που λαμβάνονται με την αξιολόγηση των επιπέδων mRNA? διαφορές μας με τα ευρήματα άλλων δικαιολογούν περαιτέρω μελέτες.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Σχήμα S1.

κλινικοπαθολογικοί χαρακτηριστικά του πληθυσμού της μελέτης και της υποομάδας πληθυσμού

doi:. 10.1371 /journal.pone.0109600.s001

(DOCX)

Εικόνα S2.

έκφραση REG4 υποδεικνύει καλύτερη πρόγνωση σε μη-βλεννώδες καρκίνο του παχέος εντέρου για τους νεότερους ασθενείς. ανάλυση επιβίωσης για συγκεκριμένες ασθένειες σύμφωνα με τη μέθοδο Kaplan-Meier για την έκφραση REG4 σε μη-βλεννώδες καρκίνου του παχέος εντέρου σε ασθενείς κάτω των 65 ετών από την δοκιμασία log-rank

doi:. 10.1371 /journal.pone.0109600.s002

( TIFF)

Εικόνα S3.

έκφραση REG4 δείχνουν καμία διαφορά στην επιβίωση σε μη-βλεννώδες καρκίνο του παχέος εντέρου για τους ηλικιωμένους ασθενείς. ανάλυση επιβίωσης για συγκεκριμένες ασθένειες σύμφωνα με τη μέθοδο Kaplan-Meier για την έκφραση REG4 σε μη-βλεννώδες καρκίνου του παχέος εντέρου σε ασθενείς 65 ετών και άνω από τη δοκιμασία log-rank

doi:. 10.1371 /journal.pone.0109600.s003

(TIFF)

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε Päivi Peltokangas, Gynel Arifdshan, και Ελίνα Aspiala για την εξαιρετική τεχνική βοήθεια τους.