Abstract

Στην προηγούμενη μελέτη μας, μικροκυστίδια (Μν) που απελευθερώνεται από το

ανθρώπινο

του Wharton ζελέ μεσεγχυματικά βλαστικά κύτταρα (MSCs hWJ-) επιβραδύνουν την ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων κύστης. Θα ήθελα να ξέρω αν Μν έχουν παρόμοια επίδραση στο

ανθρώπινης

νεφροκυτταρικό καρκίνωμα (RCC). Με τη χρήση της κυτταρικής καλλιέργειας και το BALB /c ηυ /ηυ

ποντίκια

ξενο-μοσχεύματος μοντέλο, η επιρροή του Μν με την ανάπτυξη και την επιθετικότητα του RCC (786-0) αξιολογήθηκε. Η μέτρηση κυττάρων kit-8 (CCK-8) προσδιορισμό, συχνότητα εμφάνισης όγκου, μέγεθος του όγκου, Ki-67 ή

TUNEL

χρώση χρησιμοποιήθηκε για την αξιολόγηση της ανάπτυξης των καρκινικών κυττάρων

in vitro

ή

in vivo

. Η κυτταρομετρία ροής δοκιμασίας (

in vitro

) ή εξέταση της έκφρασης κυκλίνης D1 (

in vivo

) διεξήχθη για να προσδιοριστεί η μεταβολή του κυτταρικού κύκλου. Η επιθετικότητα αναλύθηκε με

Wound Healing Δοκιμασία

(

in vitro

) ή ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9 έκφρασης (

in vivo

). AKT /p-ΑΚΤ, ERK1 /2 /ρ-ERK1 /2 ή έκφραση /c-ΜΕΤ HGF ανιχνεύθηκε με PCR πραγματικού χρόνου ή με στύπωμα. Τα στοιχεία μας έδειξαν ότι Μν την προώθηση της ανάπτυξης και την επιθετικότητα του RCC και

in vitro

και

in vivo

. Επιπλέον, Μν διευκόλυνε την εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου από το G

0/1 για έκφραση S. HGF σε RCC προκλήθηκε σε μεγάλο βαθμό από Μν, που συνδέεται με την ενεργοποίηση των οδών σηματοδότησης ΑΚΤ και ERK1 /2. RNase προ-επεξεργασία κατήργησε όλες τις επιδράσεις του Μν. Εν ολίγοις, η επαγωγή της σύνθεσης HGF μέσω RNA μεταφέρθηκε από Μν ενεργοποίησης ΑΚΤ και ERK1 /2 σηματοδότησης είναι ένα από τα ζωτικής σημασίας παράγοντες για την επίδραση προ-καρκινικών

Παράθεση:. Du T, Ju G, Wu S, Cheng Z , Cheng J, Ζου Χ, et al. (2014) μικροκυστίδια Προέρχεται από Jelly μεσεγχυματικά βλαστικά κύτταρα του Ανθρώπου του Wharton την προώθηση των ανθρωπίνων καρκίνο του νεφρού ανάπτυξη των κυττάρων και την επιθετικότητα μέσω της επαγωγής του αυξητικού παράγοντα ηπατοκυττάρων. PLoS ONE 9 (5): e96836. doi: 10.1371 /journal.pone.0096836

Επιμέλεια: Giovanni Camussi, Πανεπιστήμιο του Τορίνο, Ιταλία

Ελήφθη: 26 Ιαν 2014? Αποδεκτές: 11 Απρ 2014? Δημοσιεύθηκε: 5 Μαΐου του 2014

Copyright: © 2014 Du et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίζεται από επιχορηγήσεις από το Πρόγραμμα Έρευνας της Επιστήμης και Τεχνολογίας της Επιτροπής του Δήμου Σαγκάης (10411967200) και τη Σαγκάη Τραγούδι-Jiang Γραφείου Υγείας (2011PD06) και το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (81.170.642) και τη Σαγκάη Shen Kang Plat μορφή επιχορήγησης (SHDC12007206) . Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Παρά το γεγονός ότι οι συγγραφείς έλαβαν χρηματοδότηση από τη Σαγκάη Τραγούδι-Jiang Γραφείο Υγείας, αυτό δεν μεταβάλλει τήρηση των συγγραφέων να PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών.

Εισαγωγή

Η ικανότητα των MSCs στο σπίτι στις περιοχές των όγκων έχει εμπνεύσει διερεύνηση αυτών των κυττάρων ως πιθανά εργαλεία κατά των όγκων [ ,,,0],1], [2]. Ωστόσο, υπήρξε συζήτηση για το αν MSCs ασκούν την αντικαρκινική δράση μέχρι τώρα. Σε αρκετές από τις μελέτες, MSCs κάνει προωθήσει την εξέλιξη των όγκων. Έχει τεκμηριωθεί ότι MSCs δεν εμπλέκονται μόνο στο σχηματισμό μικροπεριβάλλον του όγκου αλλά αλληλεπιδρούν με τα καρκινικά κύτταρα για την προαγωγή της ανάπτυξης και μετάστασης τους [3] – [5]. Ο ακριβής μηχανισμός δράσης παραμένει ασαφής. Η ανοσοκατασταλτική δράση [6], [7], trans-διαφοροποίηση προς την κατεύθυνση των μεσεγχυματικών κυττάρων [8], [9], καθώς και διάφορα βιοδραστικών παραγόντων που εκκρίνονται από MSCs [10] έχουν προταθεί ως δυνητικοί τελεστές.

έχει αναγνωριστεί πρόσφατα ότι Μν απελευθερώνεται από MSCs είναι ένα κρίσιμο δράστη των ενεργειών τους. έχουν Μν περιγραφεί ως μια νέα λεωφόρο για την ενδοκυτταρική επικοινωνία που μπορεί να επαναπρογραμματίσει κύτταρα-στόχους, παρέχοντας λειτουργικό mRNA και ακολουθίες microRNA [11], [12]. Όπως MSCs είναι μια πλούσια πηγή Μν, είναι κατανοητό ότι παίζουν κεντρικό ρόλο στη βιολογική επίδραση των βλαστικών κυττάρων [13]. Η κατανόηση του ρόλου του Μν στη διαμεσολάβηση της συμπεριφοράς των καρκινικών κυττάρων και η λειτουργία μπορεί να βοηθήσει στην αποκάλυψη περαιτέρω οι ακριβείς μηχανισμοί που βρίσκονται πίσω από MSCs προ- ή αντικαρκινική δράση.

Σε προηγούμενη μελέτη μας, Μν προέρχεται από hWJ-MSCs εξασθενημένο η ανάπτυξη των κυττάρων του όγκου ουροδόχου κύστης (Τ24), μέσω προς τα κάτω ρύθμιση της ενεργοποίησης ΑΚΤ και πάνω ρύθμιση διασπασμένης κασπάσης-3 [14]. RCC είναι ένα άλλο κοινό ουρολογικές όγκου. Είχαμε ένα μεγάλο ενδιαφέρον για την επίδραση του Μν για την ανάπτυξη και την επιθετικότητα του.

Ανθρώπινο

καρκίνωμα νεφρικών κυττάρων 786-0 κύτταρα χρησιμοποιήθηκαν σε αυτή τη μελέτη. Σε αντίθεση με Τ24, 786-0 κύτταρα εκφράζουν τόσο HGF και c-met, που αντιπροσωπεύουν καρκίνος δείκτης πρώιμης προγονικών κυττάρων [15]. Ως εκ τούτου, ιδιαίτερη προσοχή δίνεται στην επίδραση του Μν στο μονοπάτι σηματοδότησης HGF /c-MET.

Το

in vivo

και

in vitro

στοιχεία δείχνουν ότι Μν κυκλοφόρησε από hWJ-MSCs ευνοούν την ανάπτυξη και την επιθετικότητα του RCC. Περαιτέρω διορατικότητα δίνεται στους μηχανισμούς στους οποίους οφείλεται το φαινόμενο αυτό. Τα στοιχεία δείχνουν ότι η επαγωγή της έκφρασης HGF σε RCC μέσω πληροφοριών RNA μεταφέρθηκε με Μν είναι ένας από τους σημαντικούς παράγοντες για την ενεργοποίηση των ΑΚΤ και ERK1 /2 μονοπάτια σηματοδότησης που συμβάλλουν στο φαινόμενο του προ-όγκου Μν. Το μέσο ρυθμισμένο με hWJ-MSCs έχει αποδειχθεί ότι επάγει μητρική και ξένες σύνθεση HGF σε τραυματισμένα νεφρικά σωληνοειδή κύτταρα [16]. Σε μια πρόσφατη μελέτη, διαπιστώσαμε ότι

ανθρώπινης

HGF mRNA που υπάρχουν στο Μν προέρχεται από hWJ-MSCs παραδίδεται σε

αρουραίος

σωληνοειδή κύτταρα υποβλήθηκαν σε υποξία /re-οξυγόνωση και μεταφράζεται σε πρωτεΐνη . Νομίζουμε ότι η παράδοση του

ανθρώπινης

HGF mRNA σε

ανθρώπινα

καρκινικά κύτταρα μπορεί να είναι ένας από τους μηχανισμούς δράσης.

Υλικά και Μέθοδοι

δήλωση Δεοντολογίας

Στη μελέτη αυτή, όλες οι έρευνες που αφορούν τα ανθρώπινα συμμετέχοντες εγκρίθηκε από την επιτροπή δεοντολογίας της κινεζικής Ακαδημίας Ιατρικών Επιστημών και της Ιατρικής Σχολής της Σαγκάης Jiao Tong University. Τα ανθρώπινα όντα σε αυτή τη μελέτη έδωσαν γραπτή συγκατάθεση για να συμμετάσχουν στην έρευνα και μας επιτρέπουν να δημοσιεύουν τις λεπτομέρειες περίπτωση. Η μελέτη αυτή πραγματοποιήθηκε σε αυστηρά σύμφωνα με τις συστάσεις στον Οδηγό για τη Φροντίδα και Χρήση των Ζώων Εργαστηρίου της Σαγκάης Jiao Tong University. Το πρωτόκολλο εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας των πειραμάτων σε ζώα της Σαγκάης Jiao Tong University. Όλες οι χειρουργικές επεμβάσεις έγινε υπό αναισθησία πεντοβαρβιτάλης νατρίου, και όλες οι προσπάθειες έγιναν για να ελαχιστοποιήσουν την ταλαιπωρία.

καλλιέργειας κυττάρων

Το πείραμα αυτό έχει εγκριθεί από την Επιτροπή Ερευνών Δεοντολογίας του Νοσοκομείου της Σαγκάης Jiao Tong University Affiliated Πρώτη Λαϊκής . hWJ-MSCs απομονώθηκαν και πολλαπλασιάστηκαν όπως περιγράφεται προηγουμένως [17].

Ανθρώπινο

γραμμή RCC (786-0) (Σαγκάη Ινστιτούτα Βιολογικών Επιστημών, Σαγκάη, Κίνα) καλλιεργήθηκε σε RPMI-1640 (Gibco) συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου βοός (FBS) (Gibco).

Απομόνωση και χαρακτηρισμός του Μν

p> Μν

Bradford μέθοδο

ενώ

Limulus δοκιμή

χρησιμοποιήθηκε για να αποκλείσει μολύνσεις ενδοτοξίνη του Μν. RNA που εκχυλίζεται από Μν με τη χρήση του αντιδραστηρίου TRIZOL αναλύθηκε με φασματοφωτόμετρο. Ροή κυτταρομετρίας αναλύσεις Μν έδειξε την παρουσία CD9, CD29, CD44, CD63, CD73 και CD105, αλλά όχι CD34 και CD45 (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Τα παρασκευασμένα Μν φυλάχθηκαν στους -80 ° C μέχρι περαιτέρω χρήσης.

Ηλεκτρονική μικροσκοπία

Το εναιώρημα σταθεροποιήθηκαν με 2,5% γλουταραλδεΰδη σε PBS για 2 ώρες. Μετά την έκπλυση, Μν ήταν υπερφυγοκεντρηθούν και εναιωρήθηκαν σε 100 μΙ PBS. Μια σταγόνα 20 μΐ Μν φορτώθηκε σε Formvar /πλέγμα καλυμμένο με άνθρακα, αρνητικά χρωματίστηκαν με 3% υδατικό φωσφόρου βολφραμικό οξύ για 1 λεπτό και παρατηρήθηκαν με μικροσκοπία μετάδοσης ηλεκτρονίου (HITACHI, Η-7650, Tokyo, Japan). Το μέγεθος των απομονωμένων Μν κυμαίνονταν από 30 nm έως 500 nm.

Μν προ-επεξεργασμένο με RNase

Μέρος του απομονωμένου Μν υποβλήθηκαν σε αγωγή με 100 μg /mL RNase (Fermentas, Burlington, ΟΝ , Καναδάς) για 3 ώρες στους 37 ° C και η αντίδραση διεκόπη με προσθήκη αναστολέα RNase (Fermentas). Μετά από υπερφυγοκέντρηση σε 100.000 g για 1 ώρα στους 4 ° C, Μν ανεστάλησαν από Μ199 και στη συνέχεια αποθηκεύεται στους -80 ° C μέχρι τη χρήση (RNase-Μν). ανάλυση Φασματοφωτόμετρο αποκάλυψε ότι οι περισσότεροι από RNA που εξάγεται από Μν με χρήση αντιδραστηρίου TRIZOL (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) αποικοδομήθηκε με κατεργασία ΚΝάσης (Μν: 1,8 ± 0,3 μg RNA /mg πρωτεΐνης? RNase-Μν: λιγότερο από 0,15 μg RNA /mg πρωτεΐνης).

ζωικό μοντέλο

Δεκαοκτώ αρσενικά BALB /c nu /nu ποντικών 4-6 εβδομάδων ετών (Εργαστήριο Κέντρο ζώων της Σαγκάης, Ακαδημία Επιστημών, Σαγκάη, Κίνα) χωρίστηκαν τυχαία σε 3 ομάδες (η = 6 για κάθε ομάδα). Όλοι οι ποντικοί έλαβαν υποδόρια ένεση 1 × 10

7 786-0 κυττάρων με την προσθήκη Μν (200 μg /ml πρωτεΐνης) (ποσό Μν απελευθερώνεται από περίπου 1 × 10

6 hWJ-MSCs τη διάρκεια της νύχτας), RNase-Μν ή Μ199 (έλεγχος). Τα ζώα παρακολουθήθηκαν κάθε 3 ημέρες. Το χρονικό σημείο της εμφάνισης του όγκου καταγράφηκε. Η ανάπτυξη του όγκου εκτιμήθηκε με τον καρκινικό όγκο, το οποίο υπολογίστηκε με την τροποποιημένη ελλειψοειδές τύπο: V = 1/2 (μήκος χ πλάτος) [18]. Το μήκος και το πλάτος της μάζας του όγκου μετρήθηκε με παχύμετρο.

CCK-8 δοκιμασία

CCK-8 (Beyotime ινστιτούτο της βιοτεχνολογίας, Jiangsu, Κίνα) χρησιμοποιήθηκε για να προσδιοριστεί

in vitro

ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων. 786-0 κύτταρα σπάρθηκαν σε πλάκες 96-φρεατίων (2000cells /φρεάτιο) και επωάστηκαν σε μια υγρή ατμόσφαιρα που περιέχει 5% CO

2 στους 37 ° C. Μετά από 24 ώρες επώασης, τα κύτταρα πλύθηκαν με PBS, και στη συνέχεια συν-καλλιεργήθηκαν με Μν (200 μg /ml πρωτεΐνης), RNase-Μν σε Μ199 ή Μ199 (έλεγχος) για 24 ή 48 ώρες. Τα κύτταρα πλύθηκαν δύο φορές με PBS και επωάστηκαν σε 100 μΐ RPMI-1640 (Gibco) που περιέχει 10 μΐ CCK-8 αντιδραστήριο για άλλες 3 ώρες. Η απορρόφηση εκάστου φρεατίου στα 450 nm μετρήθηκε χρησιμοποιώντας έναν αναγνώστη ELISA μικρο-πλάκα (Bio-Tek Instruments, Winooski, VT, USA) φασματοφωτομετρικά. μέσο καλλιέργειας (RPMI-1640) χωρίς κύτταρα χρησιμοποιήθηκε ως μάρτυρα.

Ανάλυση του κυτταρικού κύκλου και Επούλωση Δοκιμασία

786-0 κύτταρα (5 × 10

4) επωάστηκαν με Μν (200 μg /ml) ή ΚΝάση-Μν σε Μ199 ή Μ199 (έλεγχος) επί 48 ώρες. Μετά την επεξεργασία με θρυψίνη, τα κύτταρα συλλέχθηκαν και πλύθηκαν δύο φορές με PBS, μετά μονιμοποιήθηκαν σε 70% παγωμένης αιθανόλης για 24 ώρες. Τα σταθεροποιημένα κύτταρα βάφτηκαν με 50 μg /ml ιωδιούχου προπιδίου (ΡΙ) (Sigma) σε PBS που περιέχει 0.1% Triton Χ-100 (Sigma) και 50 μg /ml RNase (Sigma), και στη συνέχεια αναλύθηκαν του G

0 /G

1, G

2 /M και S ποσοστό φάση από μια ροή FACS Calibur κυτταρομετρητή (Becton Dickinson FACS Calibur, Franklin Lake, NJ, USA).

Δοκιμασία επούλωση

πραγματοποιήθηκε επίσης για την αξιολόγηση της μετανάστευσης των κυττάρων. 786-0 κύτταρα (5 × 10

4) σπάρθηκαν σε πλάκες 6 φρεατίων σε φρέσκο ​​μέσο RPMI-1640 (Gibco) για 12 ώρες από την αρχική καλλιέργεια, και στη συνέχεια συνέχισε να καλλιέργεια για άλλες 12 ώρες και 24 με την προσθήκη του Μν ή RNase-Μν σε Μ199 ή Μ199 (έλεγχος). Τα βασικά βήματα περιλαμβάνει τη δημιουργία ενός «πληγή» σε ένα κύτταρο μονοστιβάδα, συλλαμβάνοντας τις εικόνες στην αρχή και στο τέλος κατά τη μετανάστευση των κυττάρων για να κλείσει το τραύμα. Το τραύμα που δημιουργήθηκε με το χέρι απόξεση μονοστοιβάδα των κυττάρων με μια άκρη ρ200 πιπέτας. Η περιοχή των τραυματιών περιοχής λείπει κύτταρα καταγράφηκε για την αξιολόγηση.

Real Time PCR

Το ολικό RNA απομονώθηκε από δείγματα κυττάρου ή όγκου χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο ΤπζοΙ (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) και στη συνέχεια αντίστροφα μεταγράφηκε με τη Moloney ιού λευχαιμίας ποντικού (Μ-MLV) αντίστροφης μεταγραφάσης Kit (Promega, Madison, WI, USA) και ολίγο dT εκκινητές (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) για 60 λεπτά στους 42 ° C. Real-time PCR πραγματοποιήθηκε με δοκιμασίες έκφρασης γονιδίου TaqMan (Applied Bio-Systems, Foster City, CA, USA) για την ανίχνευση του γονιδίου έκφρασης HGF, ΜΜΡ-2, ΜΜΡ-9 ή β-ακτίνης χρησιμοποιώντας τους ακόλουθους εκκινητές:

HGF

: 5’CTCTGGTTCCCCTTCAATAG, 3’GATAGCCCCATTTCTGGATGTC?

MMP-2

: 5’CCCATTTTGATGACGATGA, 3’CAAGTTACCGTTCCTCATGTT?

MMP-9

: 5’CGAACTTTGACAGCGACAAGA, 3’GATACCAGGAGCGGGACTT?

β-ακτίνης

: 5’AAGGTGACAGCAGTCGGTT, 3’GGAGAGGGTTCAGGTGTGT?

Η ποσοτικοποίηση του γονιδίου στόχου ομαλοποιήθηκε με β-ακτίνη, ενός γονιδίου εσωτερικού ελέγχου. Η Ct για το γονίδιο-στόχο και β-ακτίνης προσδιορίζεται για κάθε δείγμα. Τα πειραματικά δείγματα εκφράστηκαν ως Ν-πλάσια διαφορά σε σχέση με το μάρτυρα (κύτταρο ή τον όγκο δειγμάτων Μ199-θεραπεία). Η σχετική έκφραση του mRNA έκφραση ήταν υπολογίζονται 2

-ΔΔCT. Διεξήχθησαν εις τριπλούν κάθε δείγματος.

Western ανάλυση κηλίδος

Εκχυλίσματα πρωτεΐνης (30 μg ανά λωρίδα) ηλεκτροφορήθηκαν και στη συνέχεια μεταφέρθηκαν σε μεμβράνη φθοριούχου πολυβινυλιδενίου. Ανοσοαποτύπωση πραγματοποιήθηκε με επώαση κάθε μεμβράνη με ένα αντι-HGF (αραίωση: 1:1000? Abcam, Cambridge, UK), γ-ΜΕΤ (αραίωση: 1:250? Abcam, Cambridge, UK), ΑΚΤ (αραίωση: 1 :1000? Abcam, Cambridge, UK), π-ΑΚΤ (αραίωση: 1:1000? Abcam, Cambridge, UK), ERK1 /2 (αραίωση: 1:1000? Abcam, Cambridge, UK), p-ERK1 /2 ( αραίωση: 1:1000? Abcam, Cambridge, UK), MMP-2 (αραίωση: 1:1000? Abcam, Cambridge, UK), MMP-9 (αραίωση: 1:500? Abcam, Cambridge, UK), κυκλίνη D1 ( αραίωσης: 1:250? Abcam, Cambridge, UK) ή β-ακτίνης όλη τη νύκτα στους 4 ° C. Αφού πλύθηκαν σε PBS, κάθε μεμβράνη επωάστηκε για 1 ώρα με ένα δευτερεύον αντίσωμα συζευγμένο με υπεροξειδάση σε θερμοκρασία δωματίου. Η ζώνη αναπτύχθηκε από τη χρήση της ενισχυμένης χημειοφωταύγειας (Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ, USA). Η πυκνότητα της κάθε ζώνης προσδιορίστηκε. Τα αποτελέσματα επαναλήφθηκαν δύο φορές για να επιβεβαιωθεί η αναπαραγωγιμότητα

Ανοσοϊστοχημεία

Εν συντομία, τα πλακίδια επωάστηκαν με αντίσωμα για την ανθρώπινη HGF (αραίωση: 1:100? Abcam, Cambridge, UK) ή Ki-. 67 (αραίωση: 1:200? Abcam, Cambridge, UK) που ακολουθείται από ένα δευτερογενές αντίσωμα συζευγμένο με HPR με χρήση DAB ως υπόστρωμα. Αρνητικός έλεγχος πραγματοποιήθηκε με αντικατάσταση των πρωτογενών αντισωμάτων με ένα μη-άνοση ανοσοσφαιρίνη του ίδιου ισο-τύπου. Οι πυρήνες βάφτηκαν αντίθετα με αιματοξυλίνη Harris. Κυτταρικής απόπτωσης αξιολογήθηκε με δοκιμασία τερματικής τρανσφεράσης διαμεσολαβείται dUTP nick-άκρο επισήμανση (TUNEL) με τη χρήση

In Situ κυτταρικού θανάτου Detection Kit

(Roche, Mannheim, Germany). Όλα τα τμήματα εξετάστηκαν από γιατρό τυφλωμένος σε αυτό το πείραμα.

Συμπληρωματικά πειράματα

Τριάντα αρσενικά BALB /c nu /nu ποντικών 4-6 εβδομάδων ετών χωρίστηκαν τυχαία υποδορίως εμβολιάστηκαν με 1 × 10

7 786-0 κυττάρων με την προσθήκη του ρυθμισμένου μέσου (CM) από hWJ-MSCs, Μν απομονώνεται από CM ή τον έλεγχο μέσου (Μ199 ή χαμηλής γλυκόζης ϋΜΕΜ). Τα ζώα παρακολουθήθηκαν κάθε 3 ημέρες. Το χρονικό σημείο της εμφάνισης του όγκου και το μέγεθος του όγκου καταγράφηκε.

In vitro

, 786-0 κύτταρα σπάρθηκαν σε πλάκες 96 φρεατίων (2000 κύτταρα /φρεάτιο) και επωάστηκαν σε μια υγρή ατμόσφαιρα που περιέχει 5% CO

2 στους 37 ° C. Μετά από 24 ώρες επώασης, τα κύτταρα πλύθηκαν με PBS, και στη συνέχεια συν-καλλιεργήθηκαν με CM, Μν απομονώνεται από CM ή να ελέγξει μέσο για 24 ή 48 ώρες. CCK-8 Δοκιμασία διεξήχθη για να προσδιοριστεί κυτταρική ανάπτυξη.

Σε ένα άλλο συμπληρωματικό πείραμα, 786-0 κύτταρα (5 × 10

4) σπάρθηκαν σε πλάκες 6-φρεατίων σε φρέσκο ​​μέσο RPMI-1640 (Gibco ) για 12 ώρες από την αρχική καλλιέργεια, και στη συνέχεια επωάστηκαν με Μν (200 μg /ml πρωτεΐνης), Μν με προσθήκη PF2341066 (Pfizer, 6 μΜ), PF2341066 ή μέσο ελέγχου για 48 ώρες. Σύνολο πρωτεϊνών σε κύτταρα απομονώθηκαν για ανάλυση κηλίδος western π-ΑΚΤ και ρ-ERK1 /2. Τα αποτελέσματα των διαφόρων αγωγών επί της κυτταρικής ανάπτυξης εκτιμήθηκε επίσης με CCK-8 Δοκιμασία.

Στατιστική ανάλυση

Τα δεδομένα αναφέρονται ως το μέσο ± τυπική απόκλιση (SD). Οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση

SPSS v19.0.

Στατιστική διαφορά μεταξύ των μέσων των δεδομένων προσδιορίσθηκε με 2-tailed

t τεστ Student

και

ανάλυση διακύμανσης

(ANOVA) ως κατάλληλος. Μία τιμή του

P & lt? 0,05

θεωρήθηκε ότι είναι στατιστικά σημαντική

Αποτελέσματα

Μν διευκολύνει την ανάπτυξη και τη μετανάστευση των 786-0 κυττάρων in vitro

Η δοκιμασία CCK-8 αποκάλυψε ότι Μν προωθήσει σε μεγάλο βαθμό τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων 786-0 μετά από 48 ώρες επώασης ενώ RNase προ-επεξεργασίας καταργηθεί αυτό το αποτέλεσμα (Εικ. 1Α). Ανάλυση του κυτταρικού κύκλου έδειξε επίσης ότι 786-0 κύτταρα κατεργασμένα με Μν συσσωρευτεί κατά κύριο λόγο στη φάση S σε σύγκριση με G

0 /G

1 φάση RNase-Μν ή ομάδα ελέγχου (Σχ. 1Β και 1Γ). Με βάση τα αποτελέσματα αυτά, πιστεύουμε ότι Μν διευκολύνει την εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου, επιταχύνοντας έτσι τον πολλαπλασιασμό των RCC. Επιπλέον,

Επούλωση Δοκιμασία

χρησιμοποιήθηκε για να εκτιμηθεί η ικανότητα της κυτταρικής μετανάστευσης. Τα δεδομένα έδειξαν ότι Μν ενισχύσει σε περίοπτη θέση τη μετανάστευση των κυττάρων (Εικ. 1D).

(Α) CCK-8 Δοκιμασία. Μετά 48-0 κύτταρα, Μν προώθησε σε μεγάλο βαθμό την ανάπτυξη των κυττάρων ενώ προκατεργασία με RNase καταργηθεί αυτό το αποτέλεσμα. Τα κύτταρα επωάζονται με Μ199 θεωρήθηκαν ως έλεγχος. *

P

& lt? 0,01, Μν έναντι του ελέγχου?

#

P

& lt? 0,05, RNase-Μν εναντίον Μν? (Β) Ανάλυση (Γ) του κυτταρικού κύκλου. 786-0 κύτταρα κατεργασμένα με Μν συσσωρευμένη πρωτίστως στη φάση S σε σύγκριση με G

0 /G

1 φάση RNase-Μν ή ομάδα ελέγχου. *

P

& lt? 0,05, Μν ενάντια στον έλεγχο?

#

P

& lt? 0,05, RNase-Μν εναντίον Μν? (D)

Δοκιμασία Επούλωση Πληγών

. Η ικανότητα μετανάστευση των κυττάρων 786-0 ήταν σημαντικά ενισχύθηκε με Μν.

Η

Μν επιταχύνουν την ανάπτυξη και την εξέλιξη των όγκων εμβολιάσθηκαν

Με την παρουσία του Μν, οζίδια όγκου σχηματίστηκαν σε ορισμένες ποντικών συντομότερο 6d μετά τον εμβολιασμό με κύτταρα 786-0 (Εικ. 2Β). Με 18d, συχνότητα εμφάνισης όγκου έφτασε το 100% (Σχ. 2Β). Αντίθετα, δεν υπήρχε σχηματισμός οζιδίων όγκου σε ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με μέσο ελέγχου μέχρι 12d μετά τον εμβολιασμό (Σχ. 2Β). Η τελική συχνότητα εμφάνισης όγκου ήταν μόνο το 75% (Σχ. 2Β). Επιπλέον, η αύξηση του όγκου κάτω από την επαγωγή του Μν ήταν ταχύτερη από εκείνη που προκαλείται από ΚΝάση-Μν ή όχημα όπως υποδεικνύεται από τη μέτρηση του μεγέθους του όγκου (Σχ. 2Α και 2C). Επιπλέον, πιο Ki-67-θετικά και λιγότερες TUNEL θετικά κύτταρα όγκου ανιχνεύθηκαν σε τομές όγκου από ποντικούς που λαμβάνουν θεραπεία με Μν (Σχ. 2D). Ενδιαφέρον, η κυκλίνη D1 έκφραση πρωτεΐνης σε ιστούς όγκων ήταν σημαντικά πάνω ρυθμισμένα με Μν (Σχ. 3Α και 3Β). Η κυκλίνη D1, ως κρίσιμο μεσολαβητή, εμπλέκεται σε μεταβατικό στάδιο του κυτταρικού κύκλου από το G

1 έως S φάση. Ως εκ τούτου, η αύξηση στην έκφραση κυκλίνης D1 διευκολύνει την πρόοδο του κυτταρικού κύκλου. Η έκφραση του ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9 χρησιμοποιείται για να εκτιμηθεί η ικανότητα της επιθετικότητας του όγκου. Με τη βοήθεια της RT-PCR και κηλίδος western, διαπιστώσαμε ότι Μν οδηγήσει σε σημαντική αυξητική ρύθμιση του γονιδίου και την έκφραση της πρωτεΐνης (Εικ. 3A-3C) τους. Όλα αυτά τα στοιχεία δείχνουν ότι Μν προώθηση της ανάπτυξης και εξέλιξης του όγκου, σε συμφωνία με τα αποτελέσματα των

in vitro

πείραμα.

(Α) άτριχα ποντίκια που εμβολιάστηκαν με 786-0 κύτταρα. 786-0 κύτταρα αναμιγνύονται με Μν ή RNase-Μν σε Μ199 ή Μ199 (έλεγχος) εμβολιάστηκαν υποδορίως στο γυμνά ποντίκια θυσιάστηκαν στις 36d μετά τον εμβολιασμό? (Β) την εμφάνιση όγκων. Υπήρξε μια υψηλότερη συχνότητα εμφάνισης όγκου σε γυμνούς ποντικούς που έλαβαν θεραπεία με Μν σε σύγκριση με RNase-Μν ή ελέγχου? (Γ) Ο όγκος του όγκου. Σε αντίθεση με RNase-Μν ή ελέγχου, Μν οδήγησε στην ανάπτυξη μιας μεγαλύτερης όγκου σε γυμνούς ποντικούς. *

P

& lt? 0,05, Μν εναντίον RNase-Μν ή τον έλεγχο? (D) Ki-67 και TUNEL χρώση. Με την παρουσία του Μν, υπήρχαν περισσότερα Ki-67-θετικά κύτταρα χρώση και λιγότερα κύτταρα χρώση θετικά για TUNEL σε τομές όγκων.

Η

(Α) (Β) φωτογραφία Gel και densito-μετρική ανάλυση του κυκλίνη D1, ΜΜΡ-2 και η έκφραση πρωτεΐνης ΜΜΡ-9. Μν οδήγησε σε σημαντική αυξητική ρύθμιση της κυκλίνης D1, η έκφραση της πρωτεΐνης ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9 σε ιστούς όγκων. RNase προεπεξεργασία καταστραφεί αυτά τα αποτελέσματα. Η πυκνότητα της κάθε ζώνης προσδιορίστηκε. Οι τιμές στη γραφική παράσταση εκφράζονται ως λόγοι πυκνομετρία κυκλίνη D1 /β-ακτίνης, ΜΜΡ-2 /β-ακτίνη ή ΜΜΡ-9 /β-ακτίνης ως πτυχώσεις πάνω ελέγχου (διακεκομμένη γραμμή). Τα δεδομένα ελήφθησαν από 3 ζώα για κάθε πείραμα. *

P

& lt? 0,05, Μν ενάντια στον έλεγχο?

#

P

& lt? 0,05, RNase-Μν εναντίον Μν? (Γ) Η γονιδιακή έκφραση του ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9. Η γονιδιακή έκφραση του ΜΜΡ-2 ή ΜΜΡ-9 ήταν σημαντικά πάνω ρυθμισμένα με Μν. Η Ct (κύκλος κατωφλίου) για κάθε γονίδιο προσδιορίστηκε για κάθε δείγμα. Η ποσοτικοποίηση των ΜΜΡ-2 ή ΜΜΡ-9 ομαλοποιήθηκε με β-ακτίνη. Η γονιδιακή έκφραση σε ομάδα ελέγχου είχε θεωρηθεί ως το βαθμονομητή (διακεκομμένη γραμμή) .Η σχετική έκφραση του γονιδίου στόχου υπολογίστηκε με 2

-ΔΔCt. *

P

& lt? 0,05, Μν ενάντια στον έλεγχο?

#

P

& lt?. 0.05, RNase-Μν εναντίον Μν

Η

Ενεργοποίηση της ΑΚΤ και /2 σηματοδότησης ERK1 σε εμβολιάζονται όγκους που προκαλούνται από Μν

Λόγω της στενής σύνδεσης της ΑΚΤ και /2 σηματοδότησης ERK1 με την επιβίωση, την ανάπτυξη και τη μετανάστευση των RCC [19], [20], θα καθορίζεται επίσης η μεταβολή αυτών των δύο σηματοδότηση που προκαλείται από Μν στο

in vivo

πειραματική ρύθμιση. Η ανάλυση στυπώματος Western αποκάλυψε ότι, Μν οδήγησε σε ισχυρή αύξηση του επιπέδου φωσφορυλίωσης των ΑΚΤ σε εμβολιάστηκαν όγκους σε αντίθεση με RNase-Μν ή ελέγχου (Εικ. 4Α και 4Β). Μν προκάλεσε επίσης ένα συγκριτικά ασθενέστερη αλλά σημαντική αύξηση του p-ERK1 /2 επίπεδο (Εικ. 4Α και 4Β).

(Α) (Β) φωτογραφία Gel και densito-μετρική ανάλυση της ΑΚΤ, π-AKT , ERK1 /2 και της έκφρασης /πρωτεΐνης ρ-EREK1 2 σε εμβολιασμένο όγκους. Μν οδήγησε σε σημαντική φωσφορυλίωση των ΑΚΤ όγκου και πρωτεΐνες ERK1 /2. Η πυκνότητα της κάθε ζώνης προσδιορίστηκε. Οι τιμές στη γραφική παράσταση εκφράζονται ως λόγοι πυκνομετρία ρ-ΑΚΤ /β-ακτίνης, ρ-ERK1 /2 /β-ακτίνης, ρ-ΑΚΤ /ΑΚΤ ή ρ-ERK1 /2 /ERK1 /2 ως πτυχώσεις πάνω ελέγχου (διακεκομμένη γραμμή ). *

P

& lt? 0,05, Μν ενάντια στον έλεγχο?

#

P

& lt? 0,05, RNase-Μν εναντίον Μν

Η

Μν επάγει την έκφραση HGF στο RCC, είτε in vitro ή in vivo

. έχει τεκμηριωθεί ότι HGF /c-ΜΕΤ εμπλέκονται στον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων και εισβολή [21], [22]. Επιπλέον, η υπερβολική ή λανθασμένη έκφραση HGF και c-ΜΕΤ συχνά συσχετίζεται με κακή πρόγνωση και μετάσταση ανθρώπινων RCC [23] – [26]. HGF /c-ΜΕΤ σηματοδότηση μπορεί επίσης να οδηγήσει σε ενεργοποίηση τόσο της ΑΚΤ και /2 σηματοδότηση ERK1. Ως εκ τούτου, έχουμε σημειώσει περαιτέρω έρευνα σχετικά με τις επιπτώσεις της Μν κατά την έκφραση HGF /c-MET στο RCC.

Μετά από 48 ώρες επώασης με Μν, έκφραση της πρωτεΐνης HGF σε 786-0 κύτταρα ήταν ουσιαστικά up-ρυθμίζεται όπως αποδεικνύεται με ανάλυση κηλίδος western ενώ ο-ΜΕΤ έκφραση δεν έχουν υποστεί τέτοια αλλαγή (Σχ. 5Α και 5Β). Ένα παρόμοιο αποτέλεσμα επιτεύχθηκε με εξέταση της έκφρασης mRNA HGF (Εικ. 5C). Η επαγωγική δράση του Μν για HGF είναι επίσης επαληθεύεται στο

in vivo

πειραματική ρύθμιση. Με την παρουσία του Μν, υπήρξε μια αξιοσημείωτη εντατικοποίηση της χρώσης HGF σε τομές όγκων (Σχ. 5D). Η ανάλυση στυπώματος Western αποκάλυψε επίσης ότι η προσθήκη του Μν οδήγησε σε μια σημαντική αύξηση της έκφρασης της πρωτεΐνης HGF σε ιστούς όγκων (Σχ. 5Ε-5F). Όπως

in vitro

, η έκφραση της πρωτεΐνης c-ΜΕΤ σε ενοφθαλμισμένα όγκοι δεν πρέπει να επηρεάζεται από Μν (Σχ. 5Ε-5F). Προεπεξεργασία με RNase expectedly απογοητευμένοι τις μεταβολές στην έκφραση HGF είτε

in vivo

ή

in vitro

, υπονοώντας τον κρίσιμο ρόλο των πληροφοριών RNA που παραδίδονται από Μν στην επαγωγή HGF. Δεδομένου ότι η επαγωγή HGF είναι παράλληλα με την ενεργοποίηση του ΑΚΤ και ERK1 /2, Μν μπορεί να πυροδοτήσει την ενεργοποίηση ΑΚΤ και ERK 1/2 μέσω επαγωγής HGF, τουλάχιστον εν μέρει.

(Α) (Β) φωτογραφία Gel και πυκνομετρική ανάλυση του HGF και της έκφρασης c-met πρωτεΐνης σε 786-0 κύτταρα. Στις 48 ώρες μετά την προσθήκη του Μν, η έκφραση της πρωτεΐνης HGF σε 786-0 κύτταρα ήταν εμφανώς τα πάνω ρυθμισμένη ενώ η έκφραση ο-ΜΕΤ υπέστη καμία σημαντική αλλαγή. Προ-επεξεργασία με RNase καταστραφεί το αποτέλεσμα του Μν. Η πυκνότητα της κάθε ζώνης προσδιορίστηκε. Οι τιμές στη γραφική παράσταση εκφράζονται ως λόγοι πυκνομετρία HGF /β-ακτίνη ή γ-ΜΕΤ /β-ακτίνης ως πτυχώσεις πάνω ελέγχου (διακεκομμένη γραμμή). *

P

& lt? 0,05, Μν ενάντια στον έλεγχο?

#

P

& lt? 0,05, RNase-Μν εναντίον Μν? (Γ) HGF γονιδιακής έκφρασης σε 786-0 κύτταρα. Μετά από 48 ώρες επώασης με 786-0 κύτταρα, Μν επάγεται ουσιαστικά την προς τα πάνω ρύθμιση της έκφρασης του γονιδίου HGF, απογοητευμένοι με κατεργασία ΚΝάσης. Η Ct (κύκλος κατωφλίου) για κάθε γονίδιο προσδιορίστηκε για κάθε δείγμα. Η ποσοτικοποίηση των HGF ομαλοποιήθηκε με β-ακτίνη. έκφρασης HGF στην ομάδα ελέγχου είχε θεωρηθεί ως το βαθμονομητή (διακεκομμένη γραμμή). Η σχετική έκφραση του γονιδίου στόχου υπολογίστηκε με 2

-ΔΔCt. *

P

& lt? 0,05, Μν ενάντια στον έλεγχο?

#

P

& lt? 0,05, RNase-Μν εναντίον Μν? (D) χρώση HGF στα τμήματα του όγκου. Υπήρξε μια σημαντική εντατικοποίηση της χρώσης HGF σε τομές όγκων στον καθορισμό του Μν σε σύγκριση με RNase-Μν ή ελέγχου? φωτογραφία (Ε) (F) Gel και πυκνομετρική ανάλυση του HGF και της έκφρασης c-met πρωτεΐνης σε ιστούς όγκων. Μν επάγεται σημαντικά την έκφραση της πρωτεΐνης HGF σε ιστούς όγκων. Ως

in vitro

, προεπεξεργασία με RNase κατήργησε την επαγωγική επίδραση. *

P

& lt? 0,05, Μν ενάντια στον έλεγχο?

#

P

& lt?. 0.05, RNase-Μν εναντίον Μν

Η

In vitro

, αναστολέας c-Met καταργεί την ενεργοποίηση της ΑΚΤ και ERK1 /2 σηματοδότησης σε 786-0 κύτταρα και την ανάπτυξη των κυττάρων που προκαλείται από Μν

Όπως

in vivo

, Μν οδήγησαν σε έντονη ενεργοποίηση της ΑΚΤ και ERK1 /2 σηματοδότησης σε 786-0 κύτταρα μετά από 48 ώρες επώασης (Εικ. 6Α και 6Β). Για επαλήθευση της ένωσης της επαγωγής HGF με ενεργοποίηση ΑΚΤ και ERK1 /2, αναστολέα c-Met προστέθηκε για να εμποδίσει την οδό σηματοδότησης HGF /c-Met. Ενδιαφέρον, με την προσθήκη του αναστολέα c-Met, ενεργοποίηση ΑΚΤ και ERK1 /2 σηματοδότηση που προκαλείται από Μν ήταν ουσιαστικά απογοητευμένοι (Σχ. 6Α και 6Β), υποδηλώνοντας ότι η επαγωγή HGF είναι ένα κρίσιμης συνεισφέροντες σε ενεργοποίηση ΑΚΤ και ERK1 /2 σηματοδότησης. Επιπλέον, c-Met αναστολέας σημαντικά καθυστερημένη ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων διεγείρεται από Μν όπως φαίνεται από CCK-8 (Σχ. 6C).

(Α) (Β) φωτογραφία Gel και πυκνομετρική ανάλυση του ρ-ΑΚΤ και ρ- ERK1 /2 έκφραση πρωτεΐνης σε κύτταρα 786-0. Μν οδήγησε σε σημαντική φωσφορυλίωση της ΑΚΤ και ERK1 /2 πρωτεΐνες μετά από 48 ώρες επώαση με 786-0 κύτταρα, καταργήθηκε από αναστολέας c-Met. Η πυκνότητα της κάθε ζώνης προσδιορίστηκε. Οι τιμές στη γραφική παράσταση εκφράζονται ως λόγοι πυκνομετρία ρ-ΑΚΤ /β-ακτίνης, ρ-ERK1 /2 /β-ακτίνης ως πτυχώσεις πάνω ελέγχου (διακεκομμένη γραμμή). *

P

& lt? 0,05, Μν ενάντια στον έλεγχο?

#

P

& lt? 0,05, Μν + c-Met αναστολέα έναντι του Μν?

Χ

P

& lt? 0,05, αναστολέας c-Met έναντι του ελέγχου? (C) CCK-8 Δοκιμασία. Μετά από 48 ώρες επώασης με 786-0 κύτταρα, την προσθήκη του αναστολέα c-Met σημαντικά καθυστερημένη ανάπτυξη κυττάρων που προκαλείται από Μν. *

P

& lt? 0,01, Μν έναντι του ελέγχου?

#

P

& lt? 0,05, Μν + c-Met αναστολέα έναντι του Μν?

Χ

P

& lt?. 0.05, c-Met αναστολέα έναντι του ελέγχου

Η

Το μέσο ρυθμισμένο με hWJ-MSCs έχουν παρόμοιο αποτέλεσμα προ-καρκινικών ως Μν τόσο

in vivo

και

in vitro

η

σε αντίθεση με τον έλεγχο, το προσαρμοσμένο μέσο (CM) του hWJ-MSCs οδήγησε νωρίτερα εμφάνιση όγκων και μεγαλύτερο μέγεθος όγκου (Σχ. 7Α και 7Β). CCK-8 Δοκιμασία αποκάλυψαν επίσης ότι CM επιτάχυνε σημαντικά την ανάπτυξη των κυττάρων 786-0 ως

in vivo

(Εικ. 7C). Με βάση τα αποτελέσματα αυτά, εξασφαλίζουμε ότι Μν είναι μία ζωτική τελεστές του hWJ-MSC. Να διερευνήσει τους μηχανισμούς δράσης των Μν μπορεί να βοηθήσει στην αποκάλυψη πώς hWJ-MSCs ασκήσει το αποτέλεσμα προ-καρκινικών σε RCC.

(Α) Tumor συχνότητα. Υπήρξε μια υψηλότερη συχνότητα εμφάνισης όγκου σε γυμνούς ποντικούς που έλαβαν θεραπεία με CM ή Μν σε σύγκριση με τον έλεγχο? (Β) Ο όγκος του όγκου. Σε αντίθεση με τον έλεγχο, CM ή Μν οδήγησε στην ανάπτυξη μιας μεγαλύτερης όγκου σε γυμνούς ποντικούς. *

P

& lt? 0,05, Μν ενάντια στον έλεγχο?

#

P

& lt? 0,05, CM έναντι του ελέγχου? (C) CCK-8 Δοκιμασία. Μετά από 48 ώρες επώασης με 786-0 κύτταρα, CM ή Μν προωθηθεί σε μεγάλο βαθμό την ανάπτυξη των κυττάρων του όγκου. *

P

& lt? 0,01, Μν έναντι του ελέγχου?

#

P

& lt? 0,01, CM έναντι του ελέγχου

Η

Συζήτηση

Η λειτουργία του Μν ως νέα μεσολαβητές σε κύτταρο προς κύτταρο επικοινωνία. έχει αποδειχθεί σε διάφορες μελέτες [27] – [29]. Μια οριζόντια μεταφορά των λειτουργικών mRNAs και mi-RNAs μέσω Μν εμπλέκεται στη γενετική ανταλλαγή μεταξύ των κυττάρων [30] – [32]. Η γενετική πληροφορία μεταφέρεται από Μν είναι ο κύριος δράστης της λειτουργικής και pheno-τυπικές αλλαγές που συμβαίνουν σε κύτταρα δέκτες [27], [30], [33]. Σε ζωικά μοντέλα νεφρική βλάβη, Μν μιμούνται την ευεργετική επίδραση των MSC. Κατά συνέπεια MVS που απελευθερώνεται από MSCs μπορεί να είναι μια κρίσιμη συμβολή στην προ- ή αντι-όγκου ιδιότητες τους. Για να εξερευνήσετε τη μοριακή μεταβολή σε κύτταρα του όγκου που προκαλείται από Μν ευνοεί την αποκάλυψη της ουσίας της προσφυγής MSC ».

Μερικοί ερευνητές έχουν αναφέρει ότι Μν που προέρχονται από ανθρώπινα MSCs ασκούν αντικαρκινική δράση στο

στο vivo

και

in vitro

πειραματική ρύθμιση [34], [35]. Σε προηγούμενη μελέτη μας, Μν που απελευθερώνεται από hWJ-MSCs εμπόδισε επίσης την ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων της ουροδόχου κύστης. RCC είναι ένα άλλο κοινό ουρολογικές όγκου. Ήμασταν πολύ περίεργος για τις επιπτώσεις της Μν σε αυτού του όγκου. Οι in vitro και in vivo πειράματα διεξήχθησαν για να επιλύσετε αυτό το ζήτημα.

Εμείς επιτυχία απομονωμένες Μν από hWJ-MSC »υπερκείμενο και χαρακτηρίζεται τους. Μν αποτελούνταν από λιπίδια κυστιδίων bi-layer πολυειδές που κυμαίνονται 30 έως 500 nm και εξέφρασε CD9, CD29, CD44, CD63, CD73 και CD105. Μν ήταν πλούσια σε RNA (1,8 ± 0,3 μg RNA /mg πρωτεΐνης) και RNase προεπεξεργασίας σχεδόν πλήρως (& gt? 90%). Καταστραφεί το περιεχόμενο RNA

Με τη χρήση διαφόρων μεθόδων, κάναμε σαφές την επιρροή του Μν με την αύξηση του RCC.

In vitro

, Μν προωθούν την ανάπτυξη των 786-0 όπως καταδεικνύεται με CCK-8 δοκιμασίας. Με την παρουσία του Μν, σχηματισμός RCC όγκου ήταν πιο γρήγορη ενώ το μέγεθος του όγκου ήταν μεγαλύτερο. Επιπλέον, υπήρχαν περισσότερα πολλαπλασιαζόμενα κύτταρα όγκου και λιγότερα κύτταρα στην απόπτωση σε ιστολογική εξέταση. Η μεταβολή του κυτταρικού κύκλου ενεργοποιείται από Μν προσδιορίστηκε επίσης. Μν οδήγησε στη συσσώρευση των κυττάρων 786-0 πρωτίστως στη φάση S και όχι G0 /G1 φάση.

In vivo

, κυκλίνη έκφραση της πρωτεΐνης D1 σε ιστούς όγκων ήταν επίσης πολύ up-ρυθμίζεται. Κυκλίνη D1, ως κρίσιμος μεσολαβητής, συμμετέχει σε μεταβατικό στάδιο του κυτταρικού κύκλου από G1 προς S φάση [36]. Είναι κατανοητό ότι Μν την προώθηση της ανάπτυξης RCC μέσω της διευκόλυνσης της εξέλιξης των καρκινικών κυττάρων του κύκλου. Ένα παρόμοιο φαινόμενο παρατηρείται επίσης σε μερικά ζωικά μοντέλα οξείας νεφρικής ή της ηπατικής βλάβης. Η χορήγηση του Μν που απελευθερώνεται από βλαστικά κύτταρα προκαλεί κυτταρικό κύκλο επανείσοδο τραυματίες επιθηλιακών κυττάρων μέσω της ενεργοποίησης των αναγεννητικών προγραμμάτων [37] – [40].

Από την άλλη πλευρά, διαπιστώσαμε ότι Μν ευνοούν RCC εισβολή.