Αφηρημένο

Tocopherylquinone (ΔΠ), το προϊόν οξείδωσης της α-τοκοφερόλης (AT), είναι μια βιοδραστικών μόριο με ξεχωριστές ιδιότητες από την AT. Σε αυτή τη μελέτη, η AT και ΔΠ διερευνώνται για συγκριτικές επιπτώσεις τους στην ανάπτυξη και ανδρογόνο δράση σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη. TQ ανέστειλε ισχυρά την ανάπτυξη αποκρίνονται στο ανδρογόνο κυτταρικές σειρές καρκίνου προστάτη (π.χ., LAPC4 και LNCaP κύτταρα), ενώ η αύξηση του ανεξάρτητου από ανδρογόνο καρκίνου του προστάτη κύτταρα (π.χ., DU145 κύτταρα) δεν επηρεάστηκε από TQ. Λόγω των ανασταλτικά αποτελέσματα ανάπτυξης που επάγεται από TQ επί ανδρογόνα αποκριτικά κύτταρα, εξετάστηκαν οι αντι-ανδρογόνο ιδιότητες του ΔΠ. TQ ανέστειλε την επαγόμενη από ανδρογόνο ενεργοποίηση ενός αποκρίνονται στο ανδρογόνο ρεπόρτερ και ανέστειλαν την απελευθέρωση του ειδικού προστατικού αντιγόνου από κύτταρα LNCaP. TQ προεπεξεργασία βρέθηκε επίσης ότι αναστέλλει την ενεργοποίηση AR όπως μετράται χρησιμοποιώντας την δοκιμασία ελέγχου πολλαπλών λειτουργιών ανδρογόνων υποδοχέων. Επιπλέον, TQ μειωμένη έκφραση του γονιδίου που αποκρίνονται στο ανδρογόνο, συμπεριλαμβανομένων TM4SF1, KLK2, και PSA πάνω από 5 φορές, ενώ ΑΤ δεν επηρέασε την έκφραση των γονιδίων που αποκρίνονται στο ανδρογόνο. Σπουδαιότητας, βρέθηκαν οι αντιανδρογόνου επιδράσεις της ΔΠ επί κυττάρων καρκίνου του προστάτη να προκύψουν από ανδρογόνου πρωτεΐνη υποδοχέα προς τα κάτω ρύθμιση που παράγεται από TQ που δεν παρατηρήθηκε με τη θεραπεία με ΑΤ. Επιπλέον, καμία από τις ανδρογόνες τελικά σημεία αξιολογήθηκαν επηρεάστηκαν από την ΑΤ. Η προς τα κάτω ρύθμιση πρωτεΐνης υποδοχέα ανδρογόνων με TQ καταργήθηκε με την ταυτόχρονη αγωγή με αντιοξειδωτικά. Συνολικά, οι βιολογικές δράσεις του ΔΠ βρέθηκαν να είναι διακριτή από την ΑΤ, όπου TQ βρέθηκε να είναι ένας ισχυρός αναστολέας της κυτταρικής ανάπτυξης και ανδρογονική δράση σε αποκρίνονται στο ανδρογόνο καρκίνου του προστάτη κύτταρα

Παράθεση:. Fajardo ΑΜ, MacKenzie DA, Olguín SL, Scariano JK, Rabinowitz Ι, Thompson TA (2016) Αντιοξειδωτικά καταργεί Άλφα-Tocopherylquinone Μεσολαβεί κάτω ρύθμιση του υποδοχέα ανδρογόνων σε ανδρογόνα-κύτταρα που αποκρίνονται καρκίνο του προστάτη. PLoS ONE 11 (3): e0151525. doi: 10.1371 /journal.pone.0151525

Επιμέλεια: Λουκία R. Languino, Πανεπιστήμιο Τόμας Τζέφερσον, Ηνωμένες Πολιτείες |

Ελήφθη: 21η Οκτωβρίου του 2015? Αποδεκτές: 28 Φλεβάρη του 2016? Δημοσιεύθηκε: 17 του Μάρτη του 2016

Copyright: © 2016 Fajardo et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Όλη η δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. Υποστήριξη παρέχεται από Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας επιχορήγησης, χορηγεί αριθμό: 1 R03 CA133941 (ΤΑΤ) και το Πανεπιστήμιο του Νέου Μεξικού Cancer Center Focus-Interactive Ομάδα βραβείο (ΤΑΤ και IR). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ο ρόλος της αντιοξειδωτική δράση στην ανάπτυξη και εξέλιξη του καρκίνου είναι ασαφής. Η βιταμίνη Ε είναι μία οικογένεια φυσικών διαιτητικών παραγόντων (π.χ., α-, β-, γ-, δ-τοκοφερόλες και -tocotrienols) με ένα σημαντικό βιολογικά δραστική μορφή αναγνωρίζεται ως RRR-α-τοκοφερόλη (RRR-AT) [1, 2]. α-τοκοφερόλη (ΑΤ) δρα κυρίως ως αντιοξειδωτικό, μειώνοντας την κυτταρική οξειδωτική βλάβη που παράγεται από οξειδωμένα λιπίδια [1,2]. Το κύριο προϊόν της οξείδωσης της ΑΤ είναι α-tocopherylquinone (TQ), η οποία σχηματίζεται από την οξείδωση δύο ηλεκτρονίων του ημίσεως χρωμανόλη του ΑΤ (Σχήμα 1). ΔΠ έχει ξεχωριστές ιδιότητες σε σύγκριση με AT με ένα μοναδικό φάσμα των βιομοριακών δράσεων [3]. Για παράδειγμα, TQ έχει δειχθεί ότι αναστέλλει την ανάπτυξη του καρκίνου του παχέος εντέρου κύτταρα, ενώ η ΑΤ δεν παρατηρήθηκε να μεταβάλλει την ανάπτυξη αυτών [4] κύτταρα. Παρά το γεγονός ότι ΔΠ έχει καθιερωθεί ως βιοενεργά κινόνης για ορισμένες μορφές καρκίνου, τη δράση της για την ανάπτυξη του καρκίνου του προστάτη κυττάρων και ανδρογόνο οδών σε καρκινικά κύτταρα του προστάτη είναι άγνωστη.

Η

Το AR είναι απαραίτητη συμβολή στην ανάπτυξη του καρκίνου του προστάτη και είναι αναγνωρίζεται ως μια ουσιαστική στόχο για την πρόληψη και τη θεραπεία του καρκίνου του προστάτη [5]. Αυτό υποστηρίζεται από τη σημασία του AR σε εξέλιξης του καρκίνου του προστάτη [6-8] και από τα αποτελέσματα των μελετών που χρησιμοποιούν αναστολείς του μεταβολισμού της τεστοστερόνης για την πρόληψη της ανάπτυξης του καρκίνου του προστάτη [8,9]. Το AR είναι μέλος της στεροειδούς ορμόνης /υπεροικογένειας πυρηνικών υποδοχέων [10], το οποίο δρα ως παράγοντας μεταγραφής ενεργοποιούμενοι από συνδέτες για τα γονίδια που εμπλέκονται στην ανάπτυξη, την επιβίωση, τη διαφοροποίηση και του προστάτη [11]. Επιπλέον, η δραστηριότητα AR συμβάλλει στην ανάπτυξη, την εξέλιξη και τη συντήρηση του καρκίνου του προστάτη [7,12]. Κλινικά, τα κάτω ρύθμιση ενεργοποίησης AR επιτυγχάνεται μέσω ενός αριθμού μέσων που περιλαμβάνουν την άμεση παρέμβαση του δέσμευση στο AR και με ανταγωνιστές AR, με μείωση της παραγωγής διϋδροτεστοστερόνης με αναστολείς της 5-αλφα-αναγωγάσης των ανδρογόνων, ή μειώνοντας την παραγωγή της τεστοστερόνης με απελευθέρωσης γοναδοτροπινών αγωνιστές ορμόνης και αναστολείς CYP17A1 [7,12,13]. Οι στρατηγικές αυτές δεν στοχεύουν άμεσα την έκφραση της πρωτεΐνης AR και έτσι, κάτω από αυτές τις παρεμβάσεις, το AR παραμένει λειτουργική.

Πληροφορίες σχετικά με τις βιολογικές δράσεις της ΔΠ είναι περιορισμένες σε σύγκριση με τις πιο εκτεταμένες έρευνες για την AT. Μέχρι σήμερα, δεν υπάρχουν μελέτες που εξετάζουν την επίδραση του ΔΠ στην κυτταρική ανάπτυξη και ανδρογονική δράση σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη. Ωστόσο, η διαμόρφωση της δραστηριότητας AR από την ΑΤ σχετίζονται παράγοντες έχει αναφερθεί. Ο μηχανισμός της αναστολής από ανδρογόνο αυτές τις χημικές ουσίες μπορεί να είναι άμεση ή έμμεση. Για παράδειγμα, έχουμε δείξει παλαιότερα ότι η χαρακτηριστική ομάδα χρωμανόλης του μπλοκ ΑΤ ανδρογόνο δραστικότητα με ανταγωνιστική αναστολή του ανδρογόνων δέσμευση στον AR [14]. Άμεση αναστολή του AR έχει παρατηρηθεί με ΑΤ ηλεκτρικό, μια πιο υδατοδιαλυτό παράγωγο εστέρα του ΑΤ, η οποία έχει δειχθεί ότι ρυθμίζει προς τα κάτω πρωτεΐνη AR σε αποκρίνονται στο ανδρογόνο καρκινικών κυττάρων του προστάτη [15]. Επειδή ανάλογα AT και παράγωγα έχουν δείξει βιολογική δράση κατά των καρκινικών κυττάρων του προστάτη, ενώ οι δράσεις του προϊόντος οξείδωσης της AT στον καρκίνο του προστάτη είναι άγνωστη, έχουμε ως στόχο να προσδιορίσει εάν ΔΠ κατείχε μοναδική δράση βιολογικές στα καρκινικά κύτταρα του προστάτη. Στη μελέτη αυτή, αξιολογήθηκαν τα αποτελέσματα των δύο ΑΤ και ΔΠ επί του πολλαπλασιασμού των κυττάρων καρκίνου του προστάτη, αντι-ανδρογονική δραστικότητα, και πιθανός μηχανισμός πρωτεΐνης AR ρύθμισης προς τα κάτω. Σε σύγκριση με AT, TQ βρέθηκε να έχει διακριτικές ιδιότητες επί αποκρίνονται στο ανδρογόνο καρκίνου του προστάτη κυτταρικές γραμμές με αξιοσημείωτες δράσεις για την έκφραση του AR. Τα αντιοξειδωτικά βρέθηκαν να τροποποιήσει τις συνέπειες του ΔΠ σε αυτά τα κύτταρα. Η μελέτη αυτή αρχίζει να αποσαφηνιστεί ο μηχανισμός του ΔΠ για την αναστολή της έκφρασης πρωτεΐνης AR που μπορεί να είναι μέσα από τη δραστηριότητά της να μεταβάλλει την κατάσταση οξειδοαναγωγής σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη.

Αποτελέσματα

Αναστολή του πολλαπλασιασμού των κυττάρων σε ανδρογόνα ευαίσθητη προστάτη καρκινικές κυτταρικές γραμμές από TQ

Προηγούμενες μελέτες έχουν αποδείξει ότι εστέρα-συζευγμένο, διαλυτό νερό VE αναλόγων (π.χ., βιταμίνη Ε ηλεκτρικό) μπορούν να αναστείλουν την ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων του προστάτη σε καλλιέργεια [15,16]. Λόγω των ανησυχιών σχετικά με την παραγωγή των φυσιολογικά ενεργές ελεύθερες μορφές της ΑΤ και ΔΠ από τις συζευγμένες μορφές, οι μη συζευγμένη, ελεύθερες μορφές αυτών των παραγόντων ερευνήθηκαν. Δεδομένου ότι οι ελεύθερες μορφές των ΑΤ και ΔΠ έχουν χαμηλή υδατική διαλυτότητα, μία μέθοδο χορήγησης φορέα με βάση αναπτύχθηκε για να διαχειρίζεται τις ελεύθερες μορφές αυτών των παραγόντων σε καλλιέργεια κυττάρων, όπως περιγράφεται στο

Υλικά και Μέθοδοι

. AT θεραπεία είχε ελάχιστη επίδραση στην ανάπτυξη του ανδρογόνου ευαίσθητων LAPC4 και LNCaP κύτταρα, καθώς και ανεξάρτητο από ανδρογόνο καρκίνου του προστάτη DU145 κύτταρα μετά από επεξεργασία με συγκεντρώσεις μέχρι και 40 μΜ (Σχήμα 2Α). Αντίθετα, η θεραπεία TQ παρήγαγε μια δοσοεξαρτώμενη μείωση της ανάπτυξης αποκρίνονται στο ανδρογόνο LAPC4 και LNCaP κυττάρων καρκίνου του προστάτη, ενώ η ανάπτυξη των κυττάρων DU145 δεν επηρεάστηκε από TQ σε δόσεις μέχρι και 40 μΜ (Σχήμα 2Β). Σε μια πιο επιλυθεί δόσης-απόκρισης με κύτταρα LAPC4, η ΕΚ

50 του ΔΠ για την αναστολή της ανάπτυξης των κυττάρων βρέθηκε να είναι 8,2 μΜ (Σχήμα 2C). Ομοίως, σε μια ανάλυση που αποτελεί επίκεντρο της ανάπτυξης των κυττάρων LNCaP, TQ βρέθηκε να αναστέλλει τον σχηματισμό εστίαση, ενώ ΑΤ δεν επηρέασε τον σχηματισμό εστίασης (Εικ 2Δ). Για να καθοριστεί εάν η αναστολή της κυτταρικής ανάπτυξης με ΔΠ οφείλεται εν μέρει σε επιδράσεις επί της βιωσιμότητας των κυττάρων, η βιωσιμότητα των κυττάρων DU145, LAPC4 και LNCaP μετρήθηκε με αιμοκυτταρομετρία και αποκλεισμό trypan blue. Η βιωσιμότητα των κυττάρων σε επεξεργασία με 5, 10, και 25 μΜ ΔΠ δεν διέφεραν από τα κύτταρα υπό αγωγή με όχημα (Εικόνα 2Ε). Επιπλέον, μια ροή κυτταρομετρίας με βάση ανάλυση ιωδιούχου προπιδίου αποκλεισμό των κυττάρων LNCaP έδειξε 92,4% (± 1,4%) βιωσιμότητα σε ελέγχους υπό αγωγή με όχημα και 93,2% (± 1,2%) επί 25 μΜ LNCaP κύτταρα TQ-θεραπεία. Για τα κύτταρα DU145, 94,7% (± 1,0%) παρατηρήθηκε βιωσιμότητα σε ελέγχους που δέχτηκαν φορέα και 94,4% (± 1,3%) επί 25 μΜ κύτταρα TQ-επεξεργασία με ιωδιούχο προπίδιο αποκλεισμό, υποστηρίζοντας περαιτέρω ότι TQ δεν επηρεάζει έντονα την κυτταρική βιωσιμότητα σε δόσεις έως 25 μΜ. LNCaP κύτταρα κατεργασμένα με είτε 10 ή 25 μΜ TQ έδειξαν αυξημένο αριθμό κυττάρων στην φάση G1 με ταυτόχρονη μείωση των κυττάρων φάσης S (Σχήμα 2F). Αυτά τα δεδομένα υποστηρίζουν ότι TQ αναστέλλει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων καρκίνου του προστάτη από ανδρογόνο ευαίσθητος μέσω σύλληψης G1 σε δόσεις που δεν μειώνουν την βιωσιμότητα αυτών των κυττάρων.

A-F. TQ-διαμεσολαβούμενη αναστολή του πολλαπλασιασμού των κυττάρων, αλλά όχι βιωσιμότητα, σε καρκινικές κυτταρικές σειρές προστάτη. (A) σε ανάλυση ανάπτυξης σε LAPC4 και LNCaP κύτταρα ευαίσθητο σε ανδρογόνο και ανεξάρτητων από ανδρογόνο DU145 κύτταρα καρκίνου προστάτη. (Β) Δόση-απόκριση της κυτταρικής ανάπτυξης DU145, LAPC4 και LNCaP σε κύτταρα επεξεργασμένα με ΔΠ για 4 d. (C) ΔΠ ΕΚ

50 αποφασιστικότητα για την ανάπτυξη των κυττάρων LAPC4. (D) Προσδιορισμός LNCaP ανάπτυξης εστιών μετά από αγωγή είτε με 10 μΜ ΑΤ ή 10 μΜ TQ για 5 d. (Ε) Ανάλυση Βιωσιμότητας σε κύτταρα DU145, LAPC4 και LNCaP στα 5, 10, και 25 μΜ ΔΠ για 48 ώρες με καμία μείωση στην βιωσιμότητα των κυττάρων. (F) Η ανάλυση κυτταρικού κύκλου (δηλαδή, το περιεχόμενο DNA) σε κύτταρα LNCaP σε επεξεργασία με 10 και 25 μΜ ΔΠ που δείχνει μια σύλληψη G1. *

P

& lt?. 0.05

Η

ΔΠ, δεν AT, η θεραπεία μειώνει δραστηριότητα Ar και Ar ρυθμίζονται τα επίπεδα μεταγραφής του mRNA

Οι μελέτες για να καθοριστεί εάν ΔΠ ή διαμορφωμένη δραστηριότητα AR άρχισαν χρησιμοποιώντας ένα σύστημα αναφοράς της λουσιφεράσης ανδρογόνα-ευαίσθητο. Για τη μελέτη αυτή, η δραστηριότητα ανταποκριτή ευαίσθητο σε ανδρογόνο διεγέρθηκε χρησιμοποιώντας το συνθετικό ανδρογόνο R1881 και εκτιμήθηκε μετά από κατεργασία με είτε 30 μΜ TQ ή ΑΤ (Σχήμα 3Α). επεξεργασία ΔΠ μόνη της δεν ρυθμίζουν τη δράση δημοσιογράφος. Αντίθετα, TQ βρέθηκε να αναστέλλει σημαντικά την ενεργοποίηση ρεπόρτερ R1881 που προκαλείται μετά από 2 d σε σύγκριση με R1881-διεγερμένα κύτταρα ελέγχου. Παραδόξως, 30 μΜ ΑΤ θεραπεία αυξημένη δραστηριότητα ανταποκριτή ευαίσθητο σε ανδρογόνο (Σχήμα 3Α). Αυτά τα δεδομένα υποστηρίζουν ένα ανασταλτικό ρόλο για TQ για δραστικότητα AR σε αντίθεση με ΑΤ, η οποία δεν εμφανίζουν αντιανδρογόνο δραστικότητα.

Α-D. Αναστολή της ανδρογόνο αποκρίσεις σε κύτταρα LNCaP με επεξεργασία TQ. (Α) ανδρογόνα που προκαλείται [δηλαδή, R1881 (R)] έκφραση λουσιφεράσης από ένα ευαίσθητο σε ανδρογόνο υποκινητή μετράται μετά TQ ή ΑΤ θεραπεία για 48 ώρες. Βικαλουταμίδη χρησιμοποιήθηκε ως ανδρογόνου ανταγωνιστής υποδοχέα. απελευθέρωσης (Β) PSA υποκινήθηκε από 50 έκθεσης σε μικροσωματίδια R1881 στα κύτταρα LNCaP και μετράται 4 d μετά ΔΠ ή AT θεραπεία. κύτταρα (C) PC3 συν-επιμολύνθηκαν με έναν φορέα έκφρασης του υποδοχέα ανδρογόνων και ενός ανδρογόνου αποκρίνεται αναφοράς GFP διεγείρονται με R1881. Κύτταρα κατεργασμένα με όχημα (αριστερό πάνελ) και 25 μΜ ΔΠ (δεξί πάνελ) δείχνει R1881 που διεγείρεται, τα κύτταρα που εκφράζουν GFP (βέλη) (βλέπε MARS δοκιμασία στο Υλικά και Μέθοδοι). (Δ) Ποσοτικοποίηση των GFP θετικών κυττάρων ανά φρεάτιο σε σύγκριση με τον έλεγχο, τα δείγματα θεραπεία με όχημα σε μία δόση-απόκρισης της ΔΠ από 5 έως 50 μΜ. *

P

& lt?. 0.05

Η

Η απελευθέρωση του ειδικού προστατικού αντιγόνου (PSA? KLK3) από τα κύτταρα LNCaP αναγνωρίζεται ως ευαίσθητος δείκτης των ανδρογόνων απόκρισης στα κύτταρα LNCaP [17] . Για να εξεταστεί περαιτέρω επιδράσεις TQ για ανδρογόνο μονοπάτια, το ανδρογόνο διεγειρόμενη απελευθέρωση του PSA από κύτταρα LNCaP προσδιορίστηκε. LNCaP κύτταρα κατεργασμένα με TQ έδειξαν εξαρτώμενη από τη δόση μείωση των R1881-επαγόμενη απελευθέρωση PSA σε σύγκριση με μη επεξεργασμένα κύτταρα ελέγχου (Εικόνα 3Β). Σε αντίθεση, η θεραπεία με 10 έως 40 μm με δεν επηρέασε ανδρογόνου προκαλούμενη απελευθέρωση PSA από κύτταρα LNCaP (Σχήμα 3Β). Η εξηναγκασμένη έκφραση του υποδοχέα ανδρογόνων στα κύτταρα ανθρώπινου προστάτη PC3 να αξιολογηθεί η ενεργοποίηση ενός πράσινου φθορισμού ρεπόρτερ που αποκρίνονται στο ανδρογόνο χρησιμοποιήθηκε για να μετρηθεί η ικανότητα των ΔΠ να αναστέλλουν την ενεργοποίηση του υποδοχέα ανδρογόνων. Έλεγχος, κύτταρα υπό αγωγή με όχημα παρουσίασαν εκτεταμένη ενεργοποίηση του υποδοχέα των ανδρογόνων μετά από διέγερση με το συνθετικό ανδρογόνο R1881 (Σχήμα 3C [αριστερό πάνελ] και το Σχήμα 3D), ενώ κύτταρα κατεργασμένα με 5, 10, 25, ή 50 μΜ TQ έδειξαν μια σημαντική μείωση στην ανδρογόνων ενεργοποίηση του υποδοχέα από R1881 (Σχήμα 3C [δεξιός πίνακας] και Σχήμα 3D).

Η μείωση στην απελευθέρωση PSA μπορεί να οφείλεται εν μέρει στην προς τα κάτω ρύθμιση του

PSA

γονιδιακής έκφρασης που παράγεται από ΔΠ ( Τραπέζι 1). Εκτός από την

PSA

επίπεδα mRNA, άλλα γονίδια που αποκρίνονται στο ανδρογόνο μετρήθηκαν μετά τη θεραπεία TQ. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 1, τα επίπεδα mRNA για τις AR-γονιδίων που αποκρίνονται

καλλικρεΐνη 2

,

prostein

,

προστατική όξινη φωσφατάση

,

NKX3

.

1

και

ειδικό προστατικό αντιγόνο μεμβράνης

μειώθηκαν στα κύτταρα LNCaP 4 d μετά τη θεραπεία με ΔΠ. Σε αντίθεση με ΔΠ, ΑΤ θεραπεία δεν μετέβαλλε σημαντικά την έκφραση του ανδρογόνου ευαίσθητης mRNAs (Πίνακας 1).

Η

κάτω ρύθμιση των επιπέδων της πρωτεΐνης AR στους αποκρίνονται στο ανδρογόνο καρκινικών κυττάρων του προστάτη με TQ

για να προσδιοριστούν τα αποτελέσματα της ΑΤ και ΔΠ σε πρωτεΐνη AR σε ανδρογόνα ανταποκρινόμενα κύτταρα, διεξήχθη ανάλυση ανοσοκηλίδος για AR πρωτεΐνη. LNCaP και LAPC4 κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με τον έλεγχο του οχήματος, 25 μΜ TQ, ή 25 μΜ ΑΤ επί 4 d (Σχήμα 4Α και 4Β). Και για τις δύο γραμμές, κύτταρα κατεργασμένα με TQ παρουσίασαν σημαντική μείωση του AR πρωτεΐνης σε σύγκριση με ελέγχους που δέχτηκαν φορέα, ενώ AT έδειξε καμία διαφορά στην ανίχνευση AR σε σύγκριση με τους μάρτυρες (Σχήμα 4Α και 4Β). Για την καλύτερη κατανόηση της δυναμικής των AR ρύθμιση προς τα κάτω από ΔΠ σε καρκινικά κύτταρα του προστάτη, η κυτταρική εντόπιση AR, δόση, και ο χρόνος που απαιτείται για τη ΔΠ επιδράσεις στα κύτταρα LAPC4 και LNCaP προσδιορίστηκαν. Μια δόση-απόκριση των 4, 12,5, ή 25 μΜ ΔΠ σε κύτταρα LNCaP έδειξε μειωμένα επίπεδα πρωτεΐνης AR με 25 μΜ μετά από 4 d (Σχήμα 4C). Παρόμοια με κύτταρα LNCaP, TQ επίπεδα πρωτεΐνης ανέστειλε σημαντικά AR σε κύτταρα LAPC4 επεξεργασία με 25 μΜ TQ για 24, 48, 72, και 96 h (Σχήμα 4D). Η ανοσοκυτταροχημική χρώση των AR σε κύτταρα LNCaP παρουσίασαν σημαντική πυρηνικό εντοπισμό του AR (Σχήμα 4Ε), ενώ κύτταρα κατεργασμένα με 25 μΜ TQ για 4 ημέρες έδειξαν ανέπαφα κύτταρα με σημαντική μείωση των επιπέδων της χρώσης AR πρωτεΐνης (Εικ 4F). Λαμβανόμενα μαζί, αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι ΔΠ, αλλά όχι AT, έχει ισχυρή αντιανδρογόνο αποτελέσματα επί αποκρίνονται στο ανδρογόνο κυτταρικές σειρές καρκίνου του προστάτη.

A-F. Cellular localization, δόσης-απόκρισης, και η χρονική πορεία της TQ-επαγόμενης πρωτεΐνη AR κάτω ρύθμιση σε AR-εκφράζουν κύτταρα καρκίνου προστάτη. τα επίπεδα πρωτεΐνης AR προσδιορίστηκε με ανοσοστύπωμα σε LNCaP (Α) και LAPC4 κύτταρα (Β) κατεργασία με 25 μΜ TQ ή 25 μΜ ΑΤ για 4 d. (Γ) TQ δοσοεξαρτώμενη μείωση των επιπέδων πρωτεΐνης AR σε κύτταρα LNCaP σε επεξεργασία με 4, 12,5, ή 25 μΜ ΔΠ για 4 d. (D) Ανοσοστύπωμα χρονοεξαρτώμενες μεταβολές στα επίπεδα πρωτεΐνης AR από κύτταρα LAPC4 επεξεργασία με 25 μΜ TQ για 24, 48, 72, και 96 ώρες. Τα επίπεδα της πρωτεΐνης ποσοτικοποιημένων AR παρουσιάζονται κάτω από κάθε ανοσοαποτύπωση (*

P

& lt? 0,05). (EF) LNCaP κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με έκδοχο ελέγχου (Ε) ή 25 μΜ TQ (F) για 4 ημέρες και η έκφραση πρωτεΐνης AR ανιχνεύθηκε με ανοσοκυτταροχημεία.

Η

Προσδιορισμός

AR

mRNA κάτω ρύθμιση με ΔΠ και στο

αξιολογηθούν περαιτέρω ΔΠ προς τα κάτω ρύθμιση του

AR

mRNA και να αποδείξει η ενέργεια αυτή ήταν διαφορετική από την AT.

AR

έκφραση του mRNA μετά την κατεργασία TQ για 24, 48, 72, και 96 ώρες σε LNCaP κύτταρα προσδιορίστηκε δείχνει σημαντική μείωση στην

AR

mRNA στις 96 h (Σχήμα 5Α). Έτσι, τα επίπεδα έκφρασης του

AR

mRNA σε κύτταρα LAPC4 και επιπλέον mRNAs μετρήθηκαν μετά τη θεραπεία με 25 μΜ TQ ή ΑΤ για 4 d.

AR

mRNA επίπεδα μειώθηκαν κατά 1,7 φορές μετά την κατεργασία με 25 μΜ ΔΠ σε κύτταρα LAPC4 (Σχήμα 5Β). Σημειώστε ότι παρατηρήθηκαν να συμβεί πριν από την μείωση που παρατηρήθηκε σε

AR

mRNA μειώσεις στα επίπεδα AR πρωτεΐνη (Εικ 4D). Επιπλέον, αν και μία σημαντική μείωση του

AR

mRNA παρατηρήθηκε σε 4 d κατά την κατεργασία TQ τόσο LNCaP και LAPC4 κυττάρων, σε σύγκριση με τη σχετική ρύθμιση προς τα κάτω του

AR

mRNA στους 4 d , AR πρωτεΐνη ήταν περισσότερο αναστέλλεται σημαντικά σε αντίστοιχα δείγματα (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται), υποδεικνύοντας ότι TQ τα κάτω ρύθμιση της έκφρασης πρωτεΐνης AR μπορεί να είναι, τουλάχιστον εν μέρει, ανεξάρτητα από μεταγραφικής αναστολής της

AR

έκφραση mRNA. ΔΠ επίσης μειωθεί σημαντικά

FOXA1

επίπεδα έκφρασης του mRNA (Σχήμα 5C). Είναι αξιοσημείωτο ότι η AT δεν επηρέασε

AR

ή

επίπεδα επίπεδα FOXA1

mRNA μετά από 4 d (Σχήμα 5Α, 5Β και 5C). Ωστόσο, το mRNA ρύθμιση προς τα κάτω, δεν ήταν μια απροκάλυπτη δράση των ΔΠ ως

ρετινοειδή

υποδοχέα Χ,

άλφα

(

RXRα

) επίπεδα mRNA δεν άλλαξαν από ΔΠ στα κύτταρα LNCaP (Σχήμα 5D). Αν και η θεραπεία δεν επηρέασε τα επίπεδα mRNA των ανδρογόνων-απόκρισης γονιδίων αξιολογούνται, AT παρήγαγε μια μείωση κατά 20% στα επίπεδα του

RXRα

mRNA (Σχήμα 5D), παρέχοντας περαιτέρω υποστήριξη για τη διαφορική αποτελέσματα της ΑΤ και ΔΠ για προστάτη καρκινικά κύτταρα.

AD. Έκφραση των mRNAs παράγοντα μεταγραφής σε TQ-αγωγή LNCaP και LAPC4 κύτταρα. ανάλυση μαθημάτων (Α) Ώρα των επιπέδων AR mRNA σε ΔΠ επεξεργασμένα κύτταρα LNCaP σε σύγκριση με τα επίπεδα AR mRNA σε έλεγχο, LNCaP κύτταρα που έλαβαν φορέα. επίπεδα (Β) mRNA σε κύτταρα LAPC4 αγωγή για 4 d με 25 μΜ TQ ή 25 μΜ σε σύγκριση με τον έλεγχο, τα κύτταρα υπό αγωγή με όχημα. Επίπεδα

FOXA

1 mRNA (C) και

RXR

α mRNA (D) σε κύτταρα LNCaP σε αγωγή για 4 ημέρες με 25 μΜ TQ ή 25 μΜ σε σύγκριση με τους ελέγχους. *

P

& lt?. 0.05

Η

AR πρωτεΐνη ρύθμιση προς τα κάτω από ΔΠ καταργήθηκε από αντιοξειδωτικά

χρησιμοποιήθηκαν Τα αντιοξειδωτικά Ν-ακετυλοκυστεΐνη (NAC) και η AT για να προσδιοριστεί εάν ένας πιθανός μηχανισμός ρύθμισης προς τα κάτω TQ της έκφρασης πρωτεΐνης AR επηρεάζεται από αντιοξειδωτική θεραπεία. LNCaP κύτταρα υποβλήθηκαν σε προ-θεραπεία με 5 mM NAC ή 25μΜ AT για 24 ώρες και στη συνέχεια υποβλήθηκε σε επεξεργασία με 25 μΜ TQ με ή χωρίς AT (Σχήμα 6Α) και NAC (Σχήμα 6Β) για 48 ώρες. Η TQ μεσολάβηση κάτω ρύθμιση AR πρωτεΐνης βρέθηκε να είναι εξασθενημένοι σημαντικά από την παρουσία αντιοξειδωτικών, υποστηρίζοντας ότι η TQ μπορεί μειορυθμίζουν πρωτεΐνη AR μέσω οδών που είναι ευαίσθητα στη δράση αυτών των αντιοξειδωτικών.

AB . Αναστολή της ΔΠ με τη μεσολάβηση της πρωτεΐνης AR ρύθμιση προς τα κάτω από τα αντιοξειδωτικά AT και NAC στα κύτταρα LNCaP. (Α) Ανάλυση ανοσοκηλίδας της έκφρασης πρωτεΐνης AR σε κύτταρα προκατεργάστηκαν για 24 ώρες με 25 μΜ ΑΤ και στη συνέχεια υποβλήθηκε σε επεξεργασία με 25 μΜ TQ παρουσία ή απουσία 25 μΜ ΑΤ για επιπλέον 48 ώρες. (Β) Ανάλυση ανοσοαποτύπωσης των επιπέδων της πρωτεΐνης AR σε κύτταρα προκατεργάστηκαν για 24 ώρες με 5 mM NAC και στη συνέχεια υποβλήθηκε σε επεξεργασία με 25 μΜ TQ παρουσία ή απουσία 5 πιΜ NAC για 48 ώρες. (*

P

& lt? 0,05 σε σύγκριση με τον έλεγχο? #

P

& lt? 0,05 σε σύγκριση με το ΔΠ που έλαβαν τα επίπεδα πρωτεΐνης AR)

Η

Συζήτηση

.

Οι βιολογικές δράσεις της AT έχουν ερευνηθεί εκτενώς. Αντίθετα, πολύ λιγότερα είναι γνωστά σχετικά με το προϊόν της οξείδωσης της ΑΤ, ΔΠ. Εδώ, η ρύθμιση προς τα κάτω των ανδρογόνων δραστηριότητας από ΔΠ ερευνήθηκε με τη διαπίστωση ότι η δραστηριότητα αυτή εξαρτιόταν δραστηριότητα ΔΠ ως προ-οξειδωτικό. ΑΤ δεν επηρέασε σημαντικά είτε την ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων του προστάτη ή πορείες είναι γνωστό ότι είναι κρίσιμης σημασίας στην εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη σε σύγκριση με TQ. Η μελέτη αυτή αρχίζει να προσδιορίσει το νέο αντι-ανδρογονική δράση του ΔΠ και καταδεικνύει τη διαφορική δραστικότητα της ΑΤ και ΔΠ σε ανθρώπινα κύτταρα καρκίνου του προστάτη. TQ ανέστειλε σημαντικά τον πολλαπλασιασμό που αποκρίνονται στο ανδρογόνο καρκίνου του προστάτη κυττάρων, δραστικότητα AR, και η έκφραση πρωτεΐνης AR. TQ βρέθηκε να ρυθμίζουν προς τα κάτω την έκφραση της πρωτεΐνης AR τόσο σε χρόνο- και δοσο-εξαρτώμενο τρόπο, μέσω ενός μηχανισμού που περιλαμβάνει μεταβολές στην κυτταρική οξειδοαναγωγής. Δείξαμε επίσης ότι ΔΠ προς τα κάτω ρύθμιση των AR πρωτεΐνης εξασθενημένος από τα αντιοξειδωτικά NAC και AT. Η ικανότητα αυτών των διακριτών αντιοξειδωτικά να καταργήσει τις ενέργειες της ΔΠ σε πρωτεΐνη AR σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη είναι το επίκεντρο των μελλοντικών μελετών. Συνολικά, μια νέα δράση για ΔΠ βρέθηκε στο κάτω ρύθμιση ανδρογονική δράση σε ανθρώπινα κύτταρα καρκίνου του προστάτη.

Στη μελέτη αυτή, ούτε η ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων του προστάτη, ούτε οι οδοί είναι γνωστό ότι είναι κρίσιμης σημασίας στον καρκίνο του προστάτη εξέλιξη που συγκρίθηκαν επηρεάστηκαν από την ΑΤ, ενώ TQ ανέστειλε ισχυρά την ανάπτυξη των ανδρογόνων ευαίσθητου καρκίνου του προστάτη κύτταρα. Η μείωση του ρυθμού αύξησης των κυττάρων που παράγονται με κατεργασία TQ μπορεί να είναι AR-εξαρτώμενη ως θεραπεία TQ δεν είχε μια έντονη επίδραση στην ανάπτυξη του ανεξάρτητου από ανδρογόνο DU145 ανθρώπινου προστάτη καρκινική κυτταρική γραμμή. Σημαντικά, TQ, αλλά όχι AT, βρέθηκε να μειώσει τόσο

AR

mRNA και AR επίπεδα πρωτεΐνης σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη με ταυτόχρονη μείωση σε ανδρογόνο μονοπάτια. Αρκετές μελέτες έχουν δείξει ότι η ρύθμιση προς τα κάτω των αποτελεσμάτων AR σε μειωμένο πολλαπλασιασμό των κυττάρων σε ευαίσθητο σε ανδρογόνο καρκινικών κυττάρων του προστάτη. Για παράδειγμα, μειωμένη έκφραση AR επιτεύχθηκε σε LNCaP κύτταρα καρκίνου προστάτη ανθρώπου χρησιμοποιώντας siRNA με αποτέλεσμα τη μείωση του ρυθμού αύξησης LNCaP [18,19]. Έτσι, η μείωση της κυτταρικής ανάπτυξης που παράγεται από TQ στον καρκίνο του προστάτη κυτταρικές γραμμές ευαίσθητο σε ανδρογόνο μπορεί να οφείλεται τουλάχιστον εν μέρει στη δράση της ΔΠ προς τα κάτω ρύθμιση της έκφρασης AR.

Το AR είναι ένα ιστοειδική , παράγοντα μεταγραφής ενεργοποιούμενοι από συνδέτες που είναι γνωστό ότι ρυθμίζει την έκφραση των γονιδίων όπως

διαμεμβρανική 4 L έξι μέλος της οικογένειας 1

,

PSA

,

καλλικρεΐνη 2

,

prostein

,

προστατική όξινη φωσφατάση

,

NKX3

.

1

, και

ειδικό προστατικό αντιγόνο μεμβράνης

στα κύτταρα του προστάτη [20-24 ]. Επειδή το AR διαδραματίζει βασικό ρόλο στην διατήρηση της έκφρασης αυτών των γονιδίων, η έκφραση τους θα μειωθεί με παρεμβάσεις που ρυθμίζουν προς τα κάτω την AR. Στην πραγματικότητα, η έκφραση αρκετών από αυτά τα γονίδια μειώθηκε μετά από αγωγή των κυττάρων LNCaP με TQ. Επιπλέον, έκφραση από ένα ευαίσθητο σε ανδρογόνο ρεπόρτερ ανεστάλη με ταυτόχρονη ανδρογόνων και θεραπεία TQ. Αντίθετα, η ΑΤ είχε ελάχιστα αποτελέσματα επί της διαφοροποίησης των γονιδίων που αποκρίνονται στο ανδρογόνο ή προϊόντα γονιδίων. Η μειωμένη έκφραση του AR-απόκρισης γονίδια που προκαλείται από τη θεραπεία ΔΠ υποστηρίζει σθεναρά ότι η AR είναι ένας σημαντικός στόχος της ΔΠ σε καρκινικά κύτταρα του προστάτη.

Το AR αναγνωρίζεται ως σημαντική συμβολή σε όλα τα στάδια του καρκίνου του προστάτη από την καρκινογένεση σε ευνουχισμό ανθεκτική νόσο [7,12,25,26]. Μέχρι σήμερα, οι περισσότερες παρεμβάσεις κατά του καρκίνου του προστάτη να μειώσει την ενεργοποίηση AR μέσω αναστολής της παραγωγής των ανδρογόνων προσδέματα, όπως η τεστοστερόνη ή διυδροτεστοστερόνη. Οι στρατηγικές αυτές δεν επηρεάζουν την ίδια την AR. Να ρυθμίζουν δραστικότητα AR, είναι απαραίτητο να προσδιοριστούν οι παρεμβάσεις που στοχεύουν προς τα κάτω ρύθμιση της έκφρασης AR. Εδώ, αποδεικνύουμε ότι τα κάτω ρύθμιση πρωτεΐνης AR και του mRNA μπορεί να επιτευχθεί χρησιμοποιώντας TQ με μια έντονη επίδραση στις ανδρογονική δράση σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη. Είναι αξιοσημείωτο ότι η ΑΤ δεν αναστέλλει ούτε έκφραση AR ή δραστηριότητα σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη. Αυτό είναι σημαντικό καθώς αυτή είναι η μορφή του ΑΤ που αναμένεται να είναι φυσιολογικά δραστική σε αντίθεση με εστέρα συζευγμένες μορφές, όπως Ε ηλεκτρικό βιταμίνη, που υποτίθεται ότι μετατρέπονται σε α-τοκοφερόλη με την δράση εστερασών σε κύτταρα και στο σώμα.

Αν και δεν εμφανίζουν αντι-ανδρογόνο ιδιότητες στο σύστημά μας, έχουν βιταμίνη Ε (VE) ανάλογα έχουν αναφερθεί ότι επηρεάζουν AR έκφραση της πρωτεΐνης σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη. Για παράδειγμα, Zhang et al. [16] ανέφεραν ότι το VE ανάλογο, VE ηλεκτρικό, μειώνει δραστικότητα AR σε ανθρώπινα κύτταρα καρκίνου του προστάτη ανδρογόνο ευαίσθητα. Παρόμοια με TQ, VE θεραπεία ηλεκτρικό βρέθηκε να μειώνει τόσο mRNA AR και τα επίπεδα πρωτεΐνης σε κύτταρα LNCaP [16]. Σπουδαιότητας, Zhang et al. [16] βρήκαν ότι τουλάχιστον μέρος της VE δράση ηλεκτρικού οφείλεται σε μείωση της AR μετάφραση. Το εργαστήριο μας έχει ήδη αναφερθεί στην αντι-ανδρογονική δράση του άλλου VE αναλογική, 2,2,5,7,8-πεντα-6-chromonol (PMCol) [14]. Αυτό αντιοξειδωτικό ήμισυ της ΑΤ, PMCol, αποτελείται από το chromonal δομή δακτυλίου του ΑΤ αλλά στερείται την αλυσίδα φυτύλιο. Έχουμε αποδείξει ότι PMCol ανέστειλε τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων καρκίνου του προστάτη από ανδρογόνο ευαίσθητα δρα ως ανταγωνιστικός αναστολέας της σύνδεσης συνδέτη AR και ότι αναστέλλει την ενεργοποίηση PMCol AR [14]. Ωστόσο, PMCol δεν αναστέλλει την έκφραση AR. Ως εκ τούτου, οι περιορισμοί της VE ανάλογα μπορεί να περιλαμβάνουν την έλλειψη της μεταβολικής μετατροπής σε ΑΤ και, ως εκ τούτου, ΔΠ, ή την έλλειψη της πρωτεΐνης AR ρύθμισης προς τα κάτω.

Ο εντοπισμός του μηχανισμού της αντι-ανδρογόνο δράση ΔΠ και εκλεκτική αναστολή της AR έκφραση της πρωτεΐνης μπορεί να παρέχουν πληροφορίες σχετικά με τα νέα AR ρυθμιστικών μηχανισμών. Επειδή TQ είχε έντονη ανασταλτική επίδραση στους δείκτες της δραστικότητας AR, εξετάστηκε η AR σε ανδρογόνο ευαίσθητες κυτταρικές σειρές καρκίνου του προστάτη. Τόσο πρωτεΐνη AR και mRNA βρέθηκαν να μειώνονται με επεξεργασία TQ τόσο LAPC4 και LNCaP κύτταρα καρκίνου ανθρώπινου προστάτη. Ωστόσο υπήρξε σημαντική μείωση της έκφρασης πρωτεΐνης AR που προηγήθηκε της αναστολής της έκφρασης mRNA AR, αποδεικνύοντας ότι οι δράσεις TQ για AR ρύθμιση προς τα κάτω μπορεί να μην είναι εντελώς οφείλεται στην αναστολή της έκφρασης AR mRNA. Είναι ενδιαφέρον,

FOXA1

mRNA επίσης μειώθηκε με κατεργασία ΔΠ. FOXA1 αναγνωρίζεται ως ισχυρός συνεισφέρων ανδρογονική δράση για τα γονίδια του προστάτη [27]. Ωστόσο, προς τα κάτω ρύθμιση της έκφρασης του mRNA δεν ήταν φανερή δράση της δραστικότητας TQ. Για παράδειγμα,

RXRα

έκφραση mRNA δεν βρέθηκε να επηρεαστεί από τη θεραπεία ΔΠ.

Οι δράσεις του ΑΤ ως μέτρο για την ανακούφιση του καρκίνου του προστάτη είναι αμφιλεγόμενη. Λόγω διαφορών μεταξύ επιδημιολογικές μελέτες σχετικά με την AT δραστηριότητα για τον καρκίνο του προστάτη, θα πρέπει να διερευνηθούν εναλλακτικές εξηγήσεις για τα αποτελέσματα αυτών των μελετών. Για παράδειγμα, το κάπνισμα ήταν μια σημαντική διαφορά μεταξύ των συμμετεχόντων της άλφα-τοκοφερόλη, β-καροτένιο πρόληψη του καρκίνου (ATBC) δίκη [28], η οποία είναι εγγεγραμμένοι βαρείς καπνιστές, και η Δίκη σελήνιο και η βιταμίνη Ε την πρόληψη του καρκίνου (SELECT) [29] , η οποία είναι εγγεγραμμένοι ως επί το πλείστον μη-καπνιστές. Αυτό είναι ενδιαφέρον κατά την εξέταση των καρκίνο του προστάτη προληπτικών δράσεων συμπληρωματικών AT όταν λαμβάνεται από άνδρες που καπνίζουν, όπως φαίνεται μεταξύ των δύο αυτών μελετών. Για παράδειγμα, στη μελέτη ATBC, μείωση 32% στην επίπτωση του καρκίνου του προστάτη και μείωση κατά 41% της θνησιμότητας παρατηρήθηκε μεταξύ των καπνιστών λήψη συμπληρωματικών ΑΤ σε σύγκριση με τις ομάδες ελέγχου [30]. Στη μελέτη τους επαγγελματίες του Χάρβαρντ Υγεία, καμία επίδραση της συμπληρωματικής AT μόνη βρέθηκε σε συχνότητα εμφάνισης καρκίνου του προστάτη? Ωστόσο, αναφέρθηκε ότι, «μεταξύ των σημερινών καπνιστών και των πρόσφατων πρώην καπνιστές, όσοι κατανάλωναν τουλάχιστον 100 IU συμπληρωματικού AT ανά ημέρα είχαν σχετικό κίνδυνο 0.44 για μεταστατικό ή θανατηφόρου καρκίνου του προστάτη» [31]. Πρόσθετες μελέτες έχουν βρει καμία επίδραση του συμπληρωματικού AT όταν λαμβάνεται μόνο του, αλλά έκανε αναφορά σε μείωση της ανάπτυξης των καρκίνων του προστάτη μεταξύ των καπνιστών λαμβάνοντας VE συμπληρώματα [28,32,33]. Σε αντίθεση με αυτές τις αναφορές, μια πρόσφατη μελέτη διαπίστωσε ότι στην ίδια μπορεί να έχει δράση έναντι της ανάπτυξης του προχωρημένου καρκίνου του προστάτη [34]. Αυτά εξεύρεση σύγκρουση με τα αποτελέσματα από την SELECT, η οποία δεν κατάφερε να βρει τον καρκίνο του προστάτη προληπτικών δράσεων συμπληρωματικών AT [29,35]. Έτσι, αρκετές μελέτες μέχρι σήμερα δείχνουν ότι η AT μόνη της δεν μπορεί να είναι μια αποτελεσματική παρέμβαση κατά του καρκίνου του προστάτη. Υποστηρίζουν τα ευρήματα αυτά, τα αποτελέσματα από την παρούσα μελέτη δεν διαπίστωσε σημαντικές επιπτώσεις στο καρκινικά κύτταρα του προστάτη από την AT. Ωστόσο, έχουμε βρει ότι ΔΠ, το κύριο προϊόν της οξείδωσης της ΑΤ, είναι ιδιαίτερα αποτελεσματικό στη μείωση τόσο της ανάπτυξης και ανδρογονική δράση σε κυτταρικές γραμμές καρκίνου του προστάτη. Είναι ενδιαφέρον να θεωρούν ότι η ΔΠ μπορεί να είναι το ενεργό παράγωγο της AT που εμπλέκονται στην πρόληψη του καρκίνου του προστάτη μεταξύ βαρείς καπνιστές λαμβάνουν συμπληρωματική VE, η οποία με τη διαθέτει μια φυσιολογική οξειδωτικό στρες μπορεί να μετατρέψει αποτελεσματικά AT στο ΔΠ. Τα αποτελέσματα από την παρούσα μελέτη υποστηρίζουν σθεναρά περαιτέρω έρευνες για να προσδιοριστεί η αποτελεσματικότητα του ΔΠ ως τρόπου πρόληψης του καρκίνου του προστάτη.

Η υπερυψωμένη ανίχνευση των επιπέδων ΔΠ κατόπιν συμπλήρωση ΑΤ και αυξημένο οξειδωτικό στρες έχει αποδειχθεί σε ζωικά μοντέλα. Για παράδειγμα, Wurzel, Η et al. [36] πραγματοποίησε

in vivo

μελέτη που εκτίθενται αρουραίους σε χρόνια ο καπνός του τσιγάρου και η AT για 65 εβδομάδες. Στην πειραματική ομάδα, βρήκαν υψηλά επίπεδα ροπής του βρογχοκυψελιδικό έκπλυμα αποδεικνύουν ότι τα ζώα καπνό εκτεθεί δημιουργείται μια μεγαλύτερη ποσότητα οξειδωτικού προϊόντων [36]. Η ανίχνευση των ΔΠ σε ανθρώπους έχει αναφερθεί σε μια συγκριτική μελέτη της πνευμονικής ενήλικες ασθενείς συνήθως λαμβάνουν θεραπεία με οξυγόνο [37]. Η μετατροπή της AT σε ΔΠ υπό οξειδωτικές προσβολή θα μπορούσε να είναι μια πιθανή εξήγηση για την ασυμφωνία που παρατηρείται μεταξύ των δοκιμών πρόληψης που αναφέρθηκαν προηγουμένως.

Οι εκθέσεις σχετικά με τις βιολογικές επιδράσεις της ΔΠ είναι περιορισμένες. Αυτό μπορεί να οφείλεται εν μέρει στην TQ να θεωρείται απλώς ως το προϊόν της οξείδωσης ΑΤ με περιορισμένη εγγενή βιολογική δράση. Ωστόσο, TQ είναι χημικά διαφορετικό από ΑΤ και, ως εκ τούτου, μπορεί να έχουν μοναδικές βιολογικές δράσεις σε σύγκριση με το ΑΤ. Οι διακριτές βιολογικές δράσεις των ΔΠ και AT υποστηρίζεται έντονα από τα αποτελέσματα για την επιλεκτική AR ρύθμιση προς τα κάτω από το ΔΠ που παρατηρήθηκε στην παρούσα μελέτη. Μια φυσιολογική ενέργεια που σχετίζεται με ΔΠ είναι αντιπηκτική δράση [38]. Αυτό δεν αποτελεί έκπληξη το ότι η δομή της αλυσίδας κινόνης και φυτύλιο του ΔΠ θυμίζει με εκείνη της βιταμίνης Κ, μια κρίσιμη βιταμίνη που εμπλέκονται στην πήξη του αίματος. Γενικά, οι χημικές ουσίες που διαθέτουν δομές κινόνης βρεθεί να είναι τοξικό. Αυτό οφείλεται στην παρουσία ηλεκτρόφιλης κέντρων άνθρακα που υπάρχει στη δομή κινόνης που μπορεί να ενεργοποιείται από πυρηνόφιλα παρούσα σε κυτταρικά συστατικά [3] σε μεγάλο βαθμό. Στην παρούσα μελέτη, TQ δεν βρέθηκε να είναι ιδιαίτερα κυτταροτοξική. Είναι ενδιαφέρον ότι, όλες οι ηλεκτρονιόφιλες θέσεις σε TQ μπλοκαριστεί από υποκαταστάσεις μεθυλίου και έτσι TQ θα αναμένεται να είναι λιγότερο δραστικά από τις χημικές ουσίες με μη αποκλεισμένο δομές κινόνης. Επιπλέον, TQ έχει βρεθεί να είναι ένας ισχυρός υπόστρωμα για το ένζυμο NQO1 βιομετασχηματισμό [39]. Η μείωση του ΔΠ στην υδροκινόνη με NQO1 βρέθηκε να είναι τόσο αποτελεσματικό προτάθηκε ότι TQ μπορεί να είναι ένας από τους πρωταρχικούς υποστρώματα για βιολογική δραστικότητα του NQO 1 του [39]. Τα αποτελέσματα από την παρούσα μελέτη και άλλοι υποστηρίζουν σθεναρά ότι η ΔΠ έχει ισχυρές βιολογικές δράσεις που είναι διαφορετική από την AT. Σημαντικά, η έκφραση προς τα κάτω ρύθμιση AR πρωτεΐνη ΔΠ σε ανθρώπινα κύτταρα καρκίνου του προστάτη διαμεσολαβείται από μεταβολές στην κυτταρική οξειδωτικό στρες που μπορεί να καταργηθεί με αντιοξειδωτικά.

Υλικά και Μέθοδοι

Chemicals, κυτταρική καλλιέργεια, και