Αφηρημένο

Ιστορικό

Η β1,3-Ν-ακετυλογλυκοσαμινυλοτρανσφεράσης-3 γονίδιο (

B3GNT3

) κωδικοποιεί ένα μέλος της οικογένειας B3GNT που λειτουργεί ως δομή του σκελετού του διμερούς σιαλυλ-Lewis Α και εμπλέκεται στη βιοσύνθεση συνδετήρα L-σελεκτίνης, λεμφοκυττάρων και διακίνησης λεμφοκυττάρων. B3GNT3 έχει ενοχοποιηθεί ως σημαντικό στοιχείο για την ανάπτυξη ορισμένων μορφών καρκίνου. Ωστόσο, τα χαρακτηριστικά του B3GNT3 στην ανάπτυξη και εξέλιξη του καρκίνου παραμένουν σε μεγάλο βαθμό άγνωστες. Έτσι, η μελέτη μας στοχεύει να διερευνήσει το μοτίβο έκφρασης και την προγνωστική αξία της B3GNT3 σε ασθενείς με καρκίνο του τραχήλου της μήτρας σε πρώιμο στάδιο.

Μέθοδοι

Τα επίπεδα του mRNA και της πρωτεΐνης του

B3GNT3

έκφραση εξετάστηκαν σε οκτώ τραχήλου καρκινικές κυτταρικές σειρές και δέκα ζεύγη τραχήλου καρκινικών όγκων, χρησιμοποιώντας PCR πραγματικού χρόνου και κηλίδωση Western, αντιστοίχως. Ανοσοϊστοχημεία (IHC) χρησιμοποιήθηκε για την ανάλυση έκφρασης πρωτεΐνης B3GNT3 σε ιστούς παραφίνης από ασθενείς καρκίνου του τραχήλου 196 πρώιμου σταδίου. Στατιστικές αναλύσεις εφαρμόστηκαν για την αξιολόγηση της συσχέτισης μεταξύ

B3GNT3

βαθμολογίες έκφρασης και κλινικές παραμέτρους, καθώς και την επιβίωση των ασθενών.

Αποτελέσματα

B3GNT3

έκφραση ήταν σημαντικά ρυθμισμένη προς τα πάνω σε καρκίνο του τραχήλου κυτταρικές γραμμές και βλάβες, σε σύγκριση με τα φυσιολογικά κύτταρα και τα γειτονικά noncancerous τραχήλου ιστούς. Στις 196 περιπτώσεις δοκιμάστηκαν πρώιμου σταδίου δείγματα καρκίνου του τραχήλου της μήτρας, το επίπεδο της πρωτεΐνης B3GNT3 συσχετίστηκε θετικά με ΤΥΠΟΙ υψηλό κίνδυνο ανθρωπίνων θηλωμάτων (HPV) (P = 0,026), το στάδιο της νόσου (Ρ & lt? 0.001), το μέγεθος του όγκου (Ρ = 0,025), την υποτροπή του όγκου (Ρ = 0,004), ζωτική κατάσταση (Ρ & lt? 0.001), η ταυτόχρονη χημειοθεραπεία και ακτινοθεραπεία (Ρ = 0,016), lymphovascular χώρος εμπλοκή (Ρ = 0,003) και το σημαντικότερο, λεμφαδένα μετάσταση (Ρ = 0,003 ). Ασθενείς με υψηλή έκφραση B3GNT3 είχε μικρότερη συνολική επιβίωση (OS) και ελεύθερη νόσου επιβίωση (DFS) σε σύγκριση με εκείνους με χαμηλή έκφραση αυτής της πρωτεΐνης. Η πολυπαραγοντική ανάλυση έδειξε ότι η έκφραση B3GNT3 είναι ένας ανεξάρτητος προγνωστικός δείκτης για ασθενείς με καρκίνο του τραχήλου της μήτρας.

Συμπεράσματα

Η μελέτη μας έδειξε ότι η αυξημένη έκφραση B3GNT3 συνδέεται με πυελική μετάσταση στους λεμφαδένες και η κακή έκβαση σε πρώιμο στάδιο ασθενείς με καρκίνο του τραχήλου της μήτρας. B3GNT3 μπορεί να είναι ένα μυθιστόρημα προγνωστικός δείκτης και θεραπευτικός στόχος για τη θεραπεία του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας

Παράθεση:. Zhang W, Χου Τ, Niu C, Τραγούδι L, Zhang Υ (2015) Έκφραση B3GNT3 είναι ένα μυθιστόρημα Marker Συναφές με πυελική μετάσταση λεμφαδένα και φτωχού κλινικού αποτελέσματος σε πρώιμο στάδιο του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας. PLoS ONE 10 (12): e0144360. doi: 10.1371 /journal.pone.0144360

Επιμέλεια: Valli De Re, Centro di Riferimento Oncologico, IRCCS Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου, Ιταλία

Ελήφθη: 16, Ιούν 2015? Αποδεκτές: 17 του Νοέμβρη 2015? Δημοσιεύθηκε: 28 Δεκ 2015

Copyright: © 2015 Zhang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του χαρτιού

χρηματοδότηση:.. Οι συγγραφείς δεν έχουν καμία υποστήριξη ή χρηματοδότηση για να αναφέρετε

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Στις γυναίκες, ο καρκίνος του τραχήλου της μήτρας είναι ο τρίτος πιο συχνά διαγιγνώσκονται κακοήθης όγκος του αναπαραγωγικού συστήματος σε όλο τον κόσμο, αντιπροσωπεύοντας κατ ‘εκτίμηση 274.000 θανάτους παγκοσμίως κάθε χρόνο [1]. Πολυάριθμες μελέτες έχουν δείξει ότι οι τύποι υψηλού κινδύνου του ιού των ανθρώπινων θηλωμάτων (HPV) είναι ένας κύριος κίνδυνος για την αυχενική ανάπτυξης, αλλά παραμένει μη ικανοποιητική όσον αφορά τη διάγνωση και την πρόβλεψη πρόγνωση [2]. Οι πρόοδοι σε θεραπευτικές μεθόδους και διαγνωστικά εργαλεία έχουν μειωθεί η συχνότητα εμφάνισης και τη θνησιμότητα του καρκίνου [3] του τραχήλου της μήτρας. Ωστόσο, εξακολουθεί να είναι η κύρια αιτία θανάτου των γυναικολογικών ογκολογίας που σχετίζονται στις αναπτυσσόμενες χώρες, ιδιαίτερα οι ασθενείς με μετάσταση λεμφαδένα [4]. Επιπλέον, λεμφαδένα μετάσταση είναι ο ισχυρότερος προγνωστικός παράγοντας για τον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας σε πρώιμο στάδιο (στάδιο FIGO Ib-IIa) και καθορίζει τη στρατηγική θεραπείας για τον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας [5]. Altered εκφράσεις των ογκογονιδίων, όπως

Bmi-1

,

URG4

και

C14ORF166

[6-8], έχουν αναγνωριστεί ως πιθανοί προγνωστικοί δείκτες του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας. Ωστόσο, η δύναμη των πολλών προσδιορίζονται βιοδείκτες για την πρόβλεψη λεμφαδένα μετάσταση και την κλινική έκβαση των επιμέρους όγκων είναι περιορισμένη. Έτσι, η ταυτοποίηση νέων και ειδικών βιολογικών δεικτών για την έγκαιρη ανίχνευση και πρόβλεψη της λεμφαδένα μετάστασης και την πρόγνωση του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας είναι σημαντική.

Το γονίδιο που κωδικοποιεί β1,3-Ν-ακετυλογλυκοζαμινυλοτρανσφεράση-3 (B3GNT3), πρώην ονομάζεται πυρήνας 1β3GlcNAcT, βρίσκεται στο χρωμόσωμα 19q13.1 και περιλαμβάνει τρία εξόνια [9]. Είναι ένα μέλος της οικογένειας β3GlcNAcT με ένα mRNA πλήρους μήκους 2720 bp που κωδικοποιεί μια εξαιρετικά διατηρημένη πρωτεΐνη 43-kDa, η οποία έχει χαρακτηριστεί ως διαμεμβρανική πρωτεΐνη τύπου II [10]. Η οικογένεια β3GlcNAcT περιλαμβάνει τουλάχιστον οκτώ διαφορετικά β3GlcNAcTs που συνδέονται με κακοήθη μετασχηματισμό [11]. Προς τα κάτω ρύθμιση B3GNT1 σχετίζεται με κακή έκβαση σε πορογενές αδενοκαρκίνωμα του παγκρέατος [12]. Etcheverry [13] διαπίστωσε ότι B3GNT5 ήταν υπερεκφράζεται με μεθυλιωμένος υποκινητή σε ιστούς γλοιοβλαστώματος σε σύγκριση με τους ιστούς του εγκεφάλου ελέγχου. Shibata [14] απέδειξε ότι B3GNT7, το οποίο λειτουργεί στη βιοσύνθεση του αντιγόνου HMOCC-1, εκφράζεται σε υψηλότερο σε ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών σε σχέση με φυσιολογικές ωοθήκες. Το επίπεδο της μεταγραφής B3GNT8 αυξήθηκε σημαντικά και μπορεί να εμπλέκεται στην κακοήθεια σε λευχαιμία, το καρκίνωμα του λάρυγγα, του παχέος εντέρου και του καρκίνου του στομάχου [15, 16, 17, 18].

έκφραση B3GNT3 έχει παρατηρηθεί σε φυσιολογικό ιστό, συμπεριλαμβανομένων το παχύ έντερο, νήστιδα, του στομάχου, του οισοφάγου, του πλακούντα και τραχεία [19]. Πρόσφατα, Ho [20] ανέφεραν ότι B3GNT3 θα μπορούσε να διαδραματίσει ένα σημαντικό ρόλο στην καταστολή των κακοήθων φαινοτύπων των κυττάρων νευροβλαστώματος, συμπεριλαμβανομένης της μετανάστευσης και της εισβολής, με καταστολή των FAK, Akt και ERK, που είναι σημαντικά κατάντη μόρια σηματοδότησης για ιντεγκρίνες και πολυάριθμους υποδοχείς του αυξητικού παράγοντα . Ωστόσο, έχει αναφερθεί ότι B3GNT3 πρωτεΐνη συμμετέχει στην ανάπτυξη και την εξέλιξη των ανθρώπινων καρκίνων, όπως μη-Hodgkin λέμφωμα (NHL), ο καρκίνος του παχέος εντέρου, καρκίνο του οισοφάγου πλακωδών κυττάρων (OSCC), και του παγκρέατος και ηπατοκυτταρικό καρκίνους [10,19,21 ]. Για παράδειγμα, [21] διαπίστωσε συσχέτιση μεταξύ του

B3GNT3

τόπο, τα επίπεδα CA19-9 και το σιαλυλ Lewis αντιγόνο Α, το οποίο θα μπορούσε να είναι ο πιθανός μηχανισμός OSCC, του παγκρέατος και του ηπατοκυτταρικού καρκίνου. Στην αιτιολογία του NHL, B3GNT3 παίζει κυρίαρχο ρόλο στη βιοσύνθεση συνδετήρα L-σελεκτίνης, η οποία είναι σημαντική για την επιβίωση των κυττάρων του όγκου και της μετάστασης [10]. B3GNT3 είναι πιθανό να είναι η πιο πιθανή υποψήφιος που εμπλέκονται στη βιοσύνθεση της δομής ραχοκοκαλιάς του διμερούς σιαλυλ Lewis Α (Galβ1-3GlcNAcβ1-3Galβ1-3GlcNAc), η οποία είναι ένας καρκίνος που σχετίζεται αντιγόνο γλυκοσφιγγολιπιδίων σε ανθρώπινους ιστούς καρκίνου του παχέος εντέρου και του παχέος εντέρου κυτταρική γραμμή καρκίνου ΟοΙο205 [19]. Επιπλέον, Yeh et al. [9] ανέφερε ότι B3GNT3 κατευθύνει την επέκταση του πυρήνα 1 βλεννίνης τύπου Ο-γλυκάνης, η οποία συχνά αποτελεί το 6-σουλφο σιαλυλ Lewis χ αντιγόνο, έναν επίτοπο που εκφράζεται σε υψηλά ενδοθηλιακά φλεβίδια (HEV) και λειτουργεί ως συνδετήρα L-σελεκτίνης που απαιτείται για λεμφοκυττάρων. Αυτά τα ευρήματα υποδεικνύουν ότι B3GNT3 μπορεί να παίζει διαφορετικούς ρόλους στην ανάπτυξη και την εξέλιξη των διαφόρων μορφών καρκίνου. Παρ ‘όλα αυτά, οι μελέτες σχετικά με τη σύνδεση μεταξύ B3GNT3 και καρκίνους είναι σπάνιες, και δεν υπάρχει καμία δημοσιευμένη έκθεση σχετικά με τα χαρακτηριστικά της έκφρασης B3GNT3 και κλινικές /προγνωστική σημασία της στον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας, ιδιαίτερα τη συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης B3GNT3 και πυελικό λεμφαδένα μετάσταση (PLNM).

Εδώ, έχουμε ως στόχο να διερευνήσει το πρότυπο έκφρασης των B3GNT3 σε καρκίνο του τραχήλου κυτταρικές σειρές και σε πρώιμα στάδια δείγματα καρκίνου του τραχήλου της μήτρας. Επιπλέον, θα διερευνηθεί η σχέση μεταξύ αυτής και κλινικοπαθολογοανατομικές παραμέτρους και να αναλύσει την αξία της στην πρόγνωση των ασθενών με καρκίνο του τραχήλου της μήτρας σε πρώιμο στάδιο με βάση τα δεδομένα της κλινικής έκβασης.

Μέθοδοι

Δήλωση Ηθικής

Η επιτροπή δεοντολογίας στην έρευνα του Κέντρου Καρκίνου, η Sun Yat-Sen University (Κίνα) παρέχονται δεοντολογική έγκριση για τη μελέτη αυτή, και όλοι οι ασθενείς παρέχεται γραπτή συγκατάθεση. Όλα τα δείγματα χειρισμός και η αποθήκευση ανώνυμα, σύμφωνα με ηθικά και νομικά πρότυπα.

Οι κυτταρικές σειρές

Ο καρκίνος του τραχήλου κυτταρικές γραμμές ελήφθησαν από την American Type Culture Collection (ATCC, MD, USA). Οι τραχήλου καρκινικές κυτταρικές σειρές, συμπεριλαμβανομένων HeLa, HeLa229, HCC94, SiHa, ME-180, MS751, Caski και C-33Α, διατηρήθηκαν σε RPMI-1640 (Gibco BRL, Rockville, MD) συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου βοός ( FBS) (HyClone, Logan, UT, USA) και 1% αντιβιοτικά (100 U /ml πενικιλλίνη και 100 μg /ml στρεπτομυκίνη). Πρωτογενής φυσιολογικό τραχηλικό επιθηλιακά κύτταρα (NC) απομονώθηκαν από noncancerous επιθηλιακό ιστό του τραχήλου της μήτρας και αναπτύχθηκε σε πλήρες μέσο KeratinocyteSFM (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Για τη χρήση των κλινικών υλικών για ερευνητικούς σκοπούς, την προηγούμενη γραπτή πληροφορημένες συγκαταθέσεις ελήφθησαν από ασθενείς και έγκριση ελήφθησαν από το Αντικαρκινικό Κέντρο Θεσμικών Επιτροπή Δεοντολογίας Έρευνας Sun Yat-sen University.

Τα δείγματα και τα κλινικά χαρακτηριστικά

Όλοι οι ασθενείς έδωσαν ενημέρωσε γραπτή συγκατάθεση για την ανάλυση των ιστών τους για ερευνητικούς σκοπούς, και η μελέτη εγκρίθηκε από το Αντικαρκινικό Κέντρο Διοικητικού κριτική Sun Yat-sen University Θεσμική. Ένα σύνολο 193 εγκλεισμένα σε παραφίνη δείγματα καρκίνου του τραχήλου της μήτρας ελήφθησαν από το Τμήμα Παθολογίας στο Sun Yat-sen Κέντρο Καρκίνου του Πανεπιστημίου μεταξύ 2007 και 2009. όγκου στάσης και κλινικοπαθολογοανατομικές ταξινόμηση πραγματοποιήθηκαν σύμφωνα με τη Διεθνή Ομοσπονδία Μαιευτικής και Γυναικολογίας, 2009 (FIGO) ταξινόμηση του καρκινώματος του τραχήλου της μήτρας. Οι 193 ασθενείς είχαν καρκίνο του τραχήλου της μήτρας στάδιο ΙΒ1-IIA2 και όλοι έλαβαν μια ριζική υστερεκτομή και λεμφαδενεκτομή χωρίς προεγχειρητική ακτινοθεραπεία, χημειοθεραπεία, ή ορμονική θεραπεία. Στη μελέτη μας, ασθενείς με οποιοδήποτε από τους παράγοντες υψηλού κινδύνου έλαβαν μετεγχειρητική χημειοθεραπεία και /ή ακτινοθεραπεία. Πιο αναλυτικά, οι παράγοντες «υψηλού κινδύνου» περιλαμβάνονται PLNM, υψηλού βαθμού διαφοροποίησης, θετική parametrial συμμετοχή, θετικά lymphovascular συμμετοχή χώρου, θετικά χειρουργικά περιθώριο, βαθιά εισβολή στρωματικά και μεγάλο μέγεθος του όγκου (& gt? 4 cm). Εκτός αυτού, οι ασθενείς με μόνο βαθιά εισβολή των στρωματικών ή θετικά χειρουργικά όρια έλαβαν ακτινοθεραπεία. Οι ασθενείς με μόνο lymphovascular συμμετοχή χώρου, υψηλής ποιότητας διαφοροποίηση, ή μεγάλο μέγεθος του όγκου (& gt? 4 εκατοστά) έλαβαν χημειοθεραπεία. Κλινικοπαθολογοανατομικές δεδομένα συλλέχθηκαν από ανυπόμονος ιατρικά αρχεία και συνοψίζονται στον Πίνακα 1. Όλοι οι ασθενείς είχαν παρακολούθηση εγγραφές για περισσότερα από 5 χρόνια και την προθεσμία συνέχεια έγινε Ιανουαρίου 2014. Ο χρόνος επιβίωσης ήταν υπολογίζονται από την ημερομηνία της χειρουργικής επέμβασης για τη συνέχεια που up προθεσμία, ή από την ημερομηνία του θανάτου (συνήθως το αποτέλεσμα της υποτροπής του καρκίνου ή μετάστασης). Ο μέσος χρόνος παρακολούθησης για την πρωτογενή του τραχήλου της μήτρας ομάδα του καρκίνου ήταν 51 μήνες, με παρακολούθηση του χρόνου κυμαίνεται από 3 έως 99 μήνες. Η προεγχειρητική HPV δοκιμή νοσοκομείο μας χρησιμοποιείται για να εξετάσει την κατάσταση μόλυνσης των ασθενών ήταν πολυμεράσης ανίχνευση αλυσιδωτή αντίδραση του HPV. Σε αυτή την ομάδα, 153 ασθενείς με καρκίνο του τραχήλου της μήτρας έδειξαν λοίμωξη HPV (+), ενώ 40 ασθενείς καρκίνου του τραχήλου ήταν HPV λοίμωξη (-). Δεκαέξι φρέσκα καρκίνο του τραχήλου της μήτρας και σε συνδυασμό παρακείμενων noncancerous του τραχήλου της μήτρας ιστούς (ΑΝΤ) συλλέχθηκαν για PCR πραγματικού χρόνου, Western και ανοσοϊστοχημεία ανάλυση (IHC).

Η

qPCR

Το συνολικό κυτταρικό RNA απομονώθηκε από καλλιεργημένα κύτταρα και δεκαέξι φρέσκο ​​καρκίνο του τραχήλου της μήτρας και αντιστοιχισμένο παρακείμενων noncancerous δείγματα τραχηλικού ιστού χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο ΤΚΙζοΙ (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) όπως τον κατασκευαστή οδηγίες. Αυτά τα δείγματα RNA προκατεργάστηκαν με RNase-free DNase, και 2 μg RNA από κάθε δείγμα χρησιμοποιήθηκε για τη συμπληρωματική σύνθεση δεοξυριβονουκλεϊκού οξέος (cDNA) αστάρωμα με τυχαία εξαμερή. Οι εκκινητές σχεδιάστηκαν από το λογισμικό Primer Express κατά 2.0 (Applied Biosystems). Οι ακόλουθοι εκκινητές χρησιμοποιήθηκαν: B3GNT3, 5′-GCCGGAGATACTTCATCCTG-3 ‘και 5′-GAGAGGAGCAGGTAGAGGGG-3′? αφυδρογονάση 3-φωσφορικής αφυδρογονάσης (GAPDH) γονίδιο, 5’-AATGAAGGGGTCATTGATGG-3 ‘και 5′-AAGGTGAAGGTCGGAGTCAA-3’. Το αντιδραστήριο ανίχνευσης που χρησιμοποιήθηκε στο πείραμα αυτό ήταν SYBR Green. Συνολικός όγκος κάθε δείγματος ήταν 10 μΙ: 2 * SYBR Green μίγμα: 5 μΙ? cDNA: 1UL? Προώθηση αστάρι: 0.5ul? Αντίστροφη αστάρι 0.5ul? ddH2O 3 μΐ. Για την PCR-μεσολαβούμενη ενίσχυση του B3GNT3 cDNA, ένα αρχικό ενίσχυσης χρησιμοποιώντας B3GNT3-ειδικούς εκκινητές διεξήχθη με ένα στάδιο μετουσίωσης στους 95 ° C για 10 λεπτά που ακολουθήθηκε από 30 κύκλους μετουσίωσης στους 95 ° C για 60 s, συγκόλληση αρχικού τεμαχίου εις 55 ° C για 30 s, και επέκταση εκκινητή στους 72 ° C για 30 s. Μετά την ολοκλήρωση των βημάτων ποδηλασία, ένα τελικό στάδιο επέκτασης στους 72 ° C για 5 λεπτά έγινε πριν το μίγμα της αντίδρασης φυλάχθηκε στους 4 ° C. Real-time PCR ακολούθως χρησιμοποιούνται για τον προσδιορισμό της φορές αύξησης του B3GNT3 mRNA σε καρκίνο του τραχήλου κυτταρικές γραμμές σε σχέση με φυσιολογικά επιθηλιακά κύτταρα του τραχήλου της μήτρας και σε κάθε μία από τις πρωτογενείς όγκους του τραχήλου της μήτρας σε σχέση με τον παρακείμενο φυσιολογικό ιστό που λαμβάνεται από τον ίδιο ασθενή. Κάθε πείραμα πραγματοποιήθηκε εις τριπλούν και επαναλήφθηκαν τουλάχιστον τρεις φορές. Η έκφραση του mRNA του B3GNT3 κανονικοποιήθηκε προς GAPDH.

κηλίδωση Western

Η συνολική πρωτεΐνη παρασκευάστηκε χρησιμοποιώντας τις συνολικές κιτ εκχύλισης κυτταρικής πρωτεΐνης σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή (Millipore, Bedford, ΜΑ). Ίσες ποσότητες εκάστου εκχυλίσματος πρωτεΐνης (30 μg) διαχωρίστηκαν με ηλεκτροφόρηση σε πηκτώματα πολυακρυλαμιδίου SDS 9,5%. Μετά μεταφορά σε φθοριούχο πολυβινυλιδένιο (PVDF) μεμβράνες (Immobilon Ρ, Millipore, Bedford, ΜΑ), οι μεμβράνες αποκλείστηκαν για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου με 5% αποβουτυρωμένο γάλα σε αλατόνερο ρυθμισμένο με Tris που περιέχει 0.1% Tween-20 (TBST) . Οι μεμβράνες στη συνέχεια επωάστηκαν με αντίσωμα αντι-B3GNT3 (1: 1000, Proteintech, 18.098 έως 1-ΑΡ) επί μία νύκτα στους 4 ° C. αντίσωμα IgG υπεροξειδάση χράνου-συζευγμένο αντι-κουνελιού (1: 2000, Santa Cruz, SC-2004) χρησιμοποιήθηκε για να προσδιοριστεί η έκφραση B3GNT3. Τέλος, B3GNT3 έκφραση ανιχνεύθηκε με τη χρήση προνομιακή αντιδραστήριο ECL Western blotting ανίχνευση (Amersham) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Οι κηλιδωμένες μεμβράνες απογυμνώθηκαν και ανιχνεύθηκαν ξανά με ένα αντίσωμα αντι-άλφα-τουμπουλίνης (Sigma, Saint Louis, ΜΟ) ως έλεγχος φόρτωσης.

Ανοσοϊστοχημική (IHC) ανάλυση

χρώση ανοσοϊστοχημική διεξήχθη για την αξιολόγηση του προτύπου έκφρασης πρωτεΐνης B3GNT3 σε 193 εγκλεισμένοι σε παραφίνη ιστούς ανθρώπινου τραχηλικού καρκίνου. Οι διαδικασίες εκτελέστηκαν με τα κλασικά πρωτόκολλα. Εν συντομία, οι εγκλεισμένα σε παραφίνη τμήματα ιστού από ασθενείς με καρκίνο του τραχήλου της μήτρας κόπηκαν σε 4-μm πάχους τομές και ψήθηκε στους 65 ° για 30 λεπτά. Οι τομές αποπαραφινώθηκαν με ξυλόλιο και επανυδατώθηκαν ακολούθησε στο νερό. Τα πλακίδια βυθίστηκαν σε ΕϋΤΑ ρυθμιστικό αντιγονική ανάκτηση και στη συνέχεια υποβλήθηκε σε επεξεργασία σε φούρνο μικροκυμάτων για ανάκτηση αντιγόνου. Στη συνέχεια, η ενδογενής δράση υπεροξειδάσης αποκλείστηκε με υπεροξείδιο του υδρογόνου 3% επί 15 λεπτά, ακολουθούμενη από επώαση με 1% αλβουμίνη βόειου ορού για να εμποδίσει την μη ειδική σύνδεση. Τα δείγματα επωάστηκε όλη τη νύκτα στους 4 ° C με πολυκλωνικό αντίσωμα κουνελιού έναντι B3GNT3 (Upstate Biotechnology, 1: 100, Proteintech, 18098 – 1-ΑΡ). Για αρνητικούς ελέγχους, το αντίσωμα αντι-B3GNT3 αντικαταστάθηκε με φυσιολογικό ορό κατσίκας. Μετά από πλύση με PBST, τα πλακίδια ιστού διαδοχικά επωάζονται με βιοτινυλιωμένο αντι-κουνελιού δευτερογενές αντίσωμα (Sigma) σε θερμοκρασία δωματίου για 30 λεπτά, ακολουθούμενη από περαιτέρω επώαση με σύμπλεγμα στρεπταβιδίνης-υπεροξειδάσης αρμορακίας (Sigma) σε θερμοκρασία δωματίου για 30 λεπτά. Τα τμήματα ιστού βυθίστηκαν σε 3-αμινο-9- καρβαζόλιο αιθυλεστέρα και αντίθετα με το 10% αιματοξυλίνη Mayer, το αφυδατωμένο και να τοποθετηθεί στο Crystal Όρος.

Η αξιολόγηση του βαθμού ανοσοχρώση αναθεωρήθηκε και σκόραρε ανεξάρτητα από δύο παθολόγους τυφλωμένο στις ιστοπαθολογικά χαρακτηριστικά και τα στοιχεία των δειγμάτων των ασθενών. Για ημι-ποσοτική ανάλυση, η βαθμολογία του κάθε δείγμα ιστού με βάση τόσο του ποσοστού των θετικά χρωματισμένων κυττάρων όγκου και την ένταση της χρώσης. Τα αποτελέσματα ανοσοχρώση για B3GNT3 βαθμολογήθηκαν με βάση τα ακόλουθα κριτήρια: (i) η αναλογία των θετικών κυττάρων όγκου στον ιστό του όγκου: 0 (0%), 1 (1% -10%), 2 (11% -50%) , 3 (51% -75%) και 4 (76% -100%)? (Ii) χρώση ένταση: 0 (καμία χρώση), 1 (ασθενής χρώση = ανοιχτό κίτρινο), 2 (μέτρια χρώση = κίτρινο καφέ), 3 (ισχυρή χρώση = καφέ). Ο δείκτης χρώση υπολογίστηκε ως το γινόμενο του ποσοστού των θετικών κυττάρων × το σκορ ένταση χρώσης (κυμαίνονται από 0 έως 12). Τιμές αποκοπής για έκφραση B3GNT3 επιλέχθηκαν με βάση ένα μέτρο της ετερογένειας με τη δοκιμασία log-rank στατιστική ανάλυση σε σχέση με τη συνολική επιβίωση. Μια βέλτιστη τιμή αποκοπής προσδιορίστηκε ως εξής:. Η βαθμολογία δείκτη χρώση of≥ 6 θεωρήθηκε ως όγκους με υψηλή έκφραση B3GNT3 και ≤4 θεωρήθηκε ως όγκους με χαμηλή έκφραση του B3GNT3

Η στατιστική ανάλυση

Όλες οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του SPSS 16.0 στατιστικό πακέτο λογισμικού (SPSS, Chicago, USA). Chi-square test και ακριβής δοκιμασία Fisher εφαρμόστηκαν για την αξιολόγηση της σχέσης μεταξύ της έκφρασης B3GNT3 και κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά. Διμεταβλητή συσχετίσεις μεταξύ των μεταβλητών υπολογίζονται με συντελεστές βαθμό συσχέτισης Spearman του. Οι καμπύλες επιβίωσης απεικονίζονται με τη μέθοδο Kaplan-Meier, και οι διαφορές αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το τεστ log-rank. Ένα μοντέλο Cox παλινδρόμησης αναλογικών κινδύνων χρησιμοποιήθηκε για μονοπαραγοντική και πολυπαραγοντική αναλύσεις για να προσδιοριστεί η ανεξάρτητη σημασία των σχετικών κλινικών συμπαράγοντες. Οι τιμές των

P & lt? 0

.

05

σε όλες τις περιπτώσεις θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές.

Αποτελέσματα

Η αυξημένη έκφραση των B3GNT3 σε καρκίνο του τραχήλου κυτταρικές σειρές

Σε πραγματικό time PCR και κηλίδωση Western χρησιμοποιήθηκαν για να εξεταστούν τα επίπεδα έκφρασης B3GNT3 σε οκτώ τραχήλου καρκινικές κυτταρικές σειρές (HeLa, HeLa 229, HCC 94, C33A, CaSki, MS751, ME-180 και SiHa) σε σύγκριση με ένα φυσιολογικό τραχηλικό επιθηλιακή κυτταρική γραμμή (NC ).

ανάλυση κηλίδωσης Western έδειξε ότι οι οκτώ καρκίνο του τραχήλου κυτταρικές σειρές (MS751, C33A, Hela, HeLa229, SiHa, HCC94, CaSki και ME-180) εμφάνισαν σημαντικά υψηλότερα επίπεδα B3GNT3 πρωτεΐνης σε σύγκριση με το NC ( Σχήμα 1Α).

B3GNT3

έκφραση mRNA ήταν τουλάχιστον 3,5 φορές μεγαλύτερη στις καρκίνο του τραχήλου κυτταρικές σειρές σε σύγκριση με το NC (Σχήμα 1Β). Αυτά τα αποτελέσματα κατέδειξαν ότι B3GNT3 υπερεκφράζεται σε καρκίνο του τραχήλου κυτταρικές σειρές.

(α και β) Έκφραση B3GNT3 mRNA και πρωτεΐνης σε καρκίνο του τραχήλου κυτταρικές γραμμές (C33A, Ca Ski, HeLa, HeLa 229, MS751, ME- 180, SiHa και HCC 94) και φυσιολογικές κυτταρικές σειρές τραχηλικού εξετάστηκαν με κηλίδωση Western (α) και ποσοτική πραγματικού χρόνου PCR (qPCR) (β). Τα επίπεδα έκφρασης κανονικοποιήθηκαν έναντι α-τουμπουλίνης και GAPDH, αντίστοιχα. Οι μπάρες σφάλματος αντιπροσωπεύουν την τυπική απόκλιση του μέσου (SD) που υπολογίζεται από τρία παράλληλα πειράματα. * P & lt? 0.05.

Η

B3GNT3 υπερεκφράζεται σε τραχήλου καρκινικούς ιστούς

Μετά από αυτό, αν η προς τα πάνω ρύθμιση B3GNT3 βρεθεί σε καρκίνο του τραχήλου κυτταρικές γραμμές ήταν κλινικώς σχετική επιβεβαιώθηκε με ποσοτική πραγματικού χρόνου PCR (qPCR ) και κηλίδωση Western ανάλυση σε 10 τραχήλου της μήτρας καρκινικούς ιστούς (Τ) συνδυάζεται με τα παρακείμενα δείγματα noncancerous ιστού (ANT). Όπως φαίνεται στο Σχήμα 2Β, η έκφραση του

B3GNT3

mRNA ήταν δραματικά υψηλότερη στα 10 δείγματα τραχηλικού καρκινικού ιστού σε σχέση με τα ζεύγη φυσιολογικούς ιστούς, με το επίπεδο διαφορικής έκφρασης που κυμαίνονται από 4.2- έως 17,4 φορές. Συνεπής με αυτά τα αποτελέσματα, η πρωτεΐνη B3GNT3 έδειξε υψηλότερη αφθονία σε όλα τα 10 δείγματα του τραχήλου του καρκίνου σε σύγκριση με την συμφωνημένα ΑΝΤ (Σχήμα 2Α).

(α) Εκπρόσωπος εικόνες της δυτικής κηλίδωσης αναλύσεις της έκφρασης πρωτεΐνης B3GNT3 σε δέκα συμφωνημένα ζεύγη του τραχήλου της μήτρας καρκινικών ιστών (Τ) και των παρακείμενων ιστών noncancerous (ΑΝΤ). α-τουμπουλίνης χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης. (Β) Η μέση T /αναλογίες ΑΝΤ του

B3GNT3

έκφραση mRNA στο ζεύγη καρκίνου του τραχήλου (Τ) και των παρακείμενων ιστών noncancerous (ΑΝΤ) ποσοτικοποιήθηκαν με ποσοτική πραγματικού χρόνου PCR (qPCR) και κανονικοποιημένες έναντι GAPDH. Οι μπάρες σφάλματος αντιπροσωπεύουν την τυπική απόκλιση του μέσου (SD) που υπολογίζεται από τρία παράλληλα πειράματα. (Γ) Ανοσοϊστοχημική ανίχνευση έκφρασης πρωτεΐνης B3GNT3 σε δέκα ζεύγη αντιστοιχισμένων τραχήλου καρκινικούς ιστούς. * P & lt? 0.05.

Η

Σύνδεσης μεταξύ B3GNT3 υπερέκφραση και κλινικά χαρακτηριστικά του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας

Η ανοσοϊστοχημεία (IHC) διεξήχθη για να ερευνήσει το πρότυπο έκφρασης της πρωτεΐνης B3GNT3 σε μια αναδρομική ομάδα των 193 περιπτώσεων καρκίνου του τραχήλου της μήτρας , συμπεριλαμβανομένων 85 περιπτώσεων στάδιο ΙΒ1 (44,1%), 29 περιπτώσεις στάδιο Ι.Β.2 (15,0%), 56 περιπτώσεις στάδιο ΙΙΑ1 (29,0%) και 23 περιπτώσεις του σταδίου IIA2 (11,9%). Όπως φαίνεται στο Σχήμα 3Α, η ανοσοαντιδραστικότητα του B3GNT3 πρωτεΐνη ανιχνεύθηκε σε διάφορα επίπεδα και εντοπίζεται κυρίως στο κυτταρικό πλάσμα. Θετική χρώση για B3GNT3 πρωτεΐνη παρατηρήθηκε σε 78 περιπτώσεις (40,4%) του 193 εγγράφονται σε δείγματα ασθενών, ενώ 115 περιπτώσεις (59,6%) χρωματίστηκαν αρνητικά ή μόνο ασθενώς για B3GNT3 πρωτεΐνη (Πίνακας 1). Έντονη έκφραση της πρωτεΐνης B3GNT3 σημειώθηκε στο 24,7% (21/85), 41,4% (12/29), 58,9% (33/56) και 52,2% (12/23) των καρκίνο του τραχήλου της ΦΥΓΩ στάδιο ΙΒ1 Ib2, IIa1and IIa2, αντίστοιχα (

P

& lt? 0,05, χ

2 τεστ). Είναι ενδιαφέρον ότι, τα ποσοτικά στοιχεία χρώση IHC αποκάλυψε ότι οι μέσες τιμές οπτικής πυκνότητας (MOD) χρώσης B3GNT3 στην ομάδα μετάσταση λεμφαδένα ήταν στατιστικώς υψηλότερη από ότι στην μετάσταση χωρίς ομάδα λεμφαδένα (Ρ & lt? 0.001, Σχήμα 3Β).

χρώση Θετική B3GNT3 παρατηρήθηκε κυρίως στο κυτταρόπλασμα των καρκινικών κυττάρων του τραχήλου της μήτρας. (Α) Α και Β, η έκφραση B3GNT3 δεν ανιχνεύθηκε σε φυσιολογικό τραχηλικό ιστούς? γ και δ, εκπρόσωπος εικόνες του ασθενή χρώση B3GNT3 στην αυχενική καρκινικούς ιστούς? e και f, αντιπροσωπευτικές εικόνες μέτρια χρώση B3GNT3 σε τραχήλου καρκινικούς ιστούς? g και h, αντιπροσωπευτικές εικόνες των ισχυρή χρώση B3GNT3 σε τραχήλου καρκινικούς ιστούς. (Β) Οι στατιστικές αναλύσεις της μέσης μέση οπτική πυκνότητα (MOD) χρώσης B3GNT3 στην ομάδα μετάσταση λεμφαδένα και την μετάσταση λεμφαδένα-ελεύθερη ομάδα. * P & lt? 0.05. καμπύλες (C) Kaplan-Meier των δεδομένων μονοπαραγοντική ανάλυση (δοκιμασία log-rank) .Η συνολική επιβίωση (OS) και την επιβίωση ελεύθερη νόσου (DFS) για τους ασθενείς με υψηλά έναντι χαμηλών έκφραση B3GNT3.

Η

IHC χρώση των επιπέδων έκφρασης της πρωτεΐνης B3GNT3 αναλύθηκε περαιτέρω για να προσδιοριστεί η σχέση τους με τα κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας. Όπως συνοψίζεται στον Πίνακα 2, η έκφραση της πρωτεΐνης υψηλής B3GNT3 τείνουν να συσχετίζονται ισχυρά με λοίμωξη από HPV, το στάδιο της νόσου, το μέγεθος του όγκου, υποτροπής όγκου, κατάσταση υγείας, η ταυτόχρονη χημειοθεραπεία και ακτινοθεραπεία, lymphovascular εμπλοκή διάστημα και το σημαντικότερο, μετάσταση λεμφαδένα (Πίνακας 2) . Αυτά τα δεδομένα επιβεβαιώθηκαν περαιτέρω από την ανάλυση συσχέτισης Spearman (πίνακας 3). Ωστόσο, δεν υπάρχουν σημαντικές σχέσεις βρέθηκαν μεταξύ έκφραση B3GNT3 πρωτεΐνης και την ηλικία του ασθενούς, η ιστολογική βαθμός διαφοροποίησης, αντιγόνο πλακώδες καρκίνωμα, ιστολογικό τύπο, χημειοθεραπεία, ακτινοβολία, μυομήτριο εισβολή, τις ιδιότητες του χειρουργικού περιθώριο και διήθηση parauterine οργάνων σε ασθενείς με καρκίνο του τραχήλου της μήτρας .

η

Υψηλή έκφραση B3GNT3 προβλέπει κακή πρόγνωση των ασθενών με καρκίνο του τραχήλου της μήτρας σε πρώιμο στάδιο

στην ομάδα μελέτης μας, η προγνωστική επίδραση της έκφρασης της πρωτεΐνης B3GNT3 στον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας εξερευνήθηκε χρησιμοποιώντας ανάλυση Kaplan-Meier και τη δοκιμασία log-rank. Η δοκιμασία log-rank έδειξε ότι ο χρόνος επιβίωσης ήταν σημαντικά διαφορετική μεταξύ των ομάδων έκφρασης χαμηλή και υψηλή περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη B3GNT3 (τόσο P & lt? 0.001, Σχ 3C). Οι ασθενείς με υψηλά επίπεδα B3GNT3 είχαν σημαντικά μικρότερη συνολική επιβίωση (OS) και απαλλαγμένα από ασθένειες επιβίωση (DFS) από ό, τι τα άτομα με χαμηλά επίπεδα. Τα αθροιστικά ποσοστά OS και DFS ήταν 90,5% και 97,2%, αντίστοιχα, στην ομάδα χαμηλού B3GNT3, ενώ ήταν μόλις 65,7% και 84,7%, αντίστοιχα, στην ομάδα υψηλού B3GNT3. Μια ομάδα επικύρωσης χρησιμοποιήθηκε για να αξιολογήσει περαιτέρω την προγνωστική αξία της B3GNT3 για συγκεκριμένες υποομάδες ασθενών, οι οποίοι ανάλογα με την ηλικία, τη μόλυνση από HPV, ΦΥΓΩ Σκηνή, PLNM, αντιγόνο πλακώδες καρκίνωμα, το μέγεθος του όγκου, το βαθμό διαφοροποίησης, χημειοθεραπεία, ακτινοβολία, η ταυτόχρονη χημειοθεραπεία και ακτινοθεραπεία, μυομήτριο εισβολή, τις ιδιότητες του χειρουργικού περιθωρίου, η διείσδυση των parauterine οργάνων και lymphovascular συμμετοχή χώρου. Η έκφραση της B3GNT3 πρωτεΐνης συνδέθηκε έντονα με τη διάρκεια OS των ασθενών χωρίς PLNM (log-rank test, P & lt? 0.001), με αντιγόνο πλακώδες καρκίνωμα ≥ 1,5 ng /ml (δοκιμασία log-rank, P = 0,002), με HPV λοίμωξη (δοκιμασία log-rank, P = 0,001), με βαθιά εισβολή στρωματικά (δοκιμασία log-rank, P = 0,028), με κλινικό στάδιο (στάδιο Ib1-Ib2, δοκιμασία log-rank, P = 0,004? στάδιο ΙΙΑ1-IIa2 , δοκιμασία log-rank, P = 0,040), με ιστολογικές βαθμό διαφοροποίησης (Grade 1-2, δοκιμασία log-rank, P & lt? δοκιμή βαθμού 2-3, log-rank, P = 0,001), και με χημειοθεραπεία (? 0.001 log-rank test, p = 0,004) (Σχήμα 4). Οι αναλύσεις μονοπαραγοντική Cox παλινδρόμησης αποκάλυψε ότι σε ένα υψηλότερο επίπεδο από B3GNT3, PLNM, πλακώδες καρκίνωμα αντιγόνο, lymphovascular εμπλοκή χώρο και επανάληψη προβλέπουν κακή πρόγνωση για πρώιμου σταδίου καρκίνο του τραχήλου ασθενείς (Πίνακας 4). Στη συνέχεια, πολυμεταβλητή ανάλυση χρησιμοποιώντας το μοντέλο Cox αναλογικών κινδύνων για όλες τις μεταβλητές που ήταν σημαντικές στο μονοπαραγοντική ανάλυση αποκάλυψε ότι η έκφραση B3GNT3, PLNM και επανάληψης υπηρέτησε ως ανεξάρτητος προγνωστικούς παράγοντες για τους ασθενείς με καρκίνο του τραχήλου της μήτρας (Πίνακας 4). Έτσι, τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι B3GNT3 πρωτεΐνη μπορεί να αντιπροσωπεύει μια πιθανή προγνωστικός δείκτης για ασθενείς με καρκίνο του τραχήλου της μήτρας σε πρώιμο στάδιο.

(α) Η συνολική επιβίωση (OS) των ασθενών χωρίς μετάσταση στους λεμφαδένες με υψηλή έναντι χαμηλή έκφραση B3GNT3 . (Β) Το λειτουργικό σύστημα για τους ασθενείς με αντιγόνο πλακώδες καρκίνωμα & gt? 1.5ng /ml με υψηλή έναντι χαμηλή έκφραση B3GNT3. (Γ) Το λειτουργικό σύστημα για τους ασθενείς με λοίμωξη από HPV με υψηλή έναντι χαμηλή έκφραση B3GNT3. (Δ) Το λειτουργικό σύστημα για τους ασθενείς με βαθιά εισβολή στρωματικά με υψηλή έναντι χαμηλή έκφραση B3GNT3. (Ε) Το λειτουργικό σύστημα για τους ασθενείς που βρίσκονται σε στάδια Ib1-Ib2 με υψηλή έναντι χαμηλή έκφραση B3GNT3. (Στ) Το λειτουργικό σύστημα για τους ασθενείς που βρίσκονται σε στάδια ΙΙΑ1-IIa2 με υψηλή έναντι χαμηλή έκφραση B3GNT3. (Ζ) Το λειτουργικό σύστημα για τους ασθενείς που βρίσκονται σε διαφοροποίηση 1-2 με υψηλά έναντι χαμηλών έκφραση B3GNT3. (Η) Το λειτουργικό σύστημα για τους ασθενείς που βρίσκονται σε διαφοροποίηση 2-3 με υψηλή έναντι χαμηλή έκφραση B3GNT3. (I) Το λειτουργικό σύστημα για τους ασθενείς με υψηλά έναντι χαμηλών έκφραση B3GNT3 που έλαβαν χημειοθεραπεία.

Η

Συζήτηση

Στην παρούσα μελέτη, έδειξε, για πρώτη φορά, ότι η έκφραση του B3GNT3 πρωτεΐνης ρυθμίζεται αυξητικά στον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας και συσχετίζεται με τα κλινικά χαρακτηριστικά, ειδικά PLNM των ασθενών με καρκίνο του τραχήλου της μήτρας σε πρώιμο στάδιο. Επιπλέον, η έκφραση της πρωτεΐνης υψηλής B3GNT3 μείωσε το λειτουργικό σύστημα και DFS από αυτούς τους ασθενείς, ιδιαίτερα εκείνους που έλαβαν χημειοθεραπεία. Η πολυπαραγοντική ανάλυση αποκάλυψε ότι η έκφραση B3GNT3 θα μπορούσε να είναι ένας ανεξάρτητος προγνωστικός δείκτης επιβίωσης σε ασθενείς με καρκίνο του τραχήλου της μήτρας.

B3GNT3 εμπλέκεται στη βιοσύνθεση των αλυσίδων πολυ-Ν-ακετυλλακτοζαμίνης και τη βιοσύνθεση της δομής ραχοκοκαλιάς του διμερούς σιαλυλ Lewis Α . Τα βασικά ρόλοι των B3GNT3 στην ογκογένεση έχει αποκαλυφθεί πρόσφατα [10, 19, 20, 21]. Shiraishi [19] έδειξε ότι B3GNT3 ήταν ιδιαίτερα εκφράζεται στην κυτταρική σειρά καρκίνου του παχέος εντέρου ΟοΙο205. Ανέφεραν ότι οι ανθρώπινοι ιστοί καρκίνο του παχέος εντέρου και ο καρκίνος του παχέος εντέρου κυτταρική γραμμή ΟοΙο205 περιέχουν σχετίζονται με τον καρκίνο γλυκοσφιγγολιπιδίων με διμερή αντιγόνα Lewis Α (Galβ1-3 (Fucα1-4) GlcNAcβ1-3Galβ1-3 (Fucα1-4) GlcNAc) και B3GNT3 είναι πιθανό να να είναι η πιο πιθανή υποψήφιος που εμπλέκονται στη βιοσύνθεση της δομής ραχοκοκαλιάς του διμερούς σιαλυλ Lewis Α (Galβ1-3GlcNAcβ1-3Galβ1-3GlcNAc). Cerhan [10] βρήκαν ότι B3GNT3 σχετίζεται με τη λειτουργία του ανοσοποιητικού και φλεγμονή, και παίζει σημαντικό ρόλο στη διακίνηση των λεμφοκυττάρων και τη μετανάστευση, τα οποία οδηγούν στην επιβίωση των καρκινικών κυττάρων και τη μετάσταση σε NHL. Μια άλλη μελέτη έδειξε ότι η

B3GNT3

τόπος συνδέεται με τα επίπεδα CA19-9 σε καρκίνο του παγκρέατος [21]. B3GNT3 είναι ένα β-1, 3-Ν-acetylglucosmaniyltransferase που εμπλέκονται στην παραγωγή της δομής ραχοκοκαλιάς του διμερούς σιαλυλ Lewis Α, η οποία είναι ο υδατάνθρακας αντιγονικό επίτοπο του CA19-9. Ως εκ τούτου, αυτό θα μπορούσε να είναι ο πιθανός μηχανισμός που διέπουν τη σχέση μεταξύ παραλλαγές στο

B3GNT3

τόπου και συγκεντρώσεις CA19-9. Η μελέτη τους [21] πρότειναν ότι B3GNT3 διαδραματίζει ογκογόνο ρόλο σε ορισμένους τύπους καρκίνου. Ωστόσο, Ho [20] ανέφεραν ότι B3GNT3 μπορεί να παίζει έναν κρίσιμο ρόλο στην καταστολή των κακοηθών ιδιοτήτων του νευροβλαστωμάτων και αλλοιωμένη έκφραση της μπορεί να συμβάλλουν στην παθογένεση του νευροβλαστώματος. Είναι κοινό ότι ορισμένα γονίδια έχουν ογκογόνο ρόλους σε διάφορους τύπους καρκίνων, αλλά έχουν αντι-ογκογόνο ρόλους σε άλλους τύπους καρκίνων. Για παράδειγμα, PTK6 υπερεκφράζεται σε επεμβατική πορογενές καρκίνωμα μαστού, ορώδες καρκίνωμα των ωοθηκών, μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα, καρκίνωμα του παχέος εντέρου και κεφαλής και τραχήλου [22-26]. Σε αντίθεση, PTK6 μπορεί να αποτελέσει σημαντικό ογκοκατασταλτικών σε διάφορους ανθρώπινους καρκίνους, όπως του λάρυγγα ανθρώπινου καρκινώματος πλακωδών κυττάρων και οισοφαγικό καρκίνωμα των πλακωδών κυττάρων [27, 28]. Εκτός αυτού, ο ρόλος του B3GNT3in τραχηλικού καρκινώματος είναι ασαφής. Ως εκ τούτου, αξιολογήσαμε εάν B3GNT3 υπερεκφράζεται στον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας και είναι κλινικά που σχετίζονται με την ανάπτυξη και εξέλιξη του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας. Στη μελέτη μας, ανέφεραν ότι το mRNA B3GNT3 και πρωτεΐνη υπερεκφράζεται σε καρκίνο του τραχήλου κυτταρικές γραμμές και δείγματα τραχηλικού καρκίνου (στάδια Ib-IIa). Ένα εμπορικά διαθέσιμο αντίσωμα έναντι B3GNT3 χρησιμοποιήθηκε σε ανοσοϊστοχημεία. χρώση IHC έδειξαν αρνητικά ή μόνο ασθενώς με την κανονική του τραχήλου της μήτρας ιστού. Ωστόσο, θετική χρώση για B3GNT3 πρωτεΐνη παρατηρήθηκε σε δείγματα τραχηλικού καρκίνου. Επιπλέον, τα αποτελέσματα μας του Realtime-PCR, κηλίδωση Western και IHC ήταν συνεπή. Συνεπώς, αυτό το πολυκλωνικό αντίσωμα αναγνωρίζει ειδικά μόνο B3GNT3 σε τραχήλου καρκινικούς ιστούς. Επιπλέον, βρήκαμε ότι η έκφραση B3GNT3 συσχετίζεται με κλινικά χαρακτηριστικά των ασθενών με καρκίνο του τραχήλου της μήτρας σε πρώιμο στάδιο, όπως η λοίμωξη από HPV, το στάδιο της νόσου, το μέγεθος του όγκου, υποτροπής όγκου, κατάσταση υγείας, η ταυτόχρονη χημειοθεραπεία και ακτινοθεραπεία, lymphovascular εμπλοκή διάστημα και το σημαντικότερο, λεμφαδένα μετάσταση.