Αφηρημένο

Η ενεργοποίηση του μεταγραφικού κυκλώματος βλαστικών κυττάρων είναι ένα σημαντικό γεγονός στην ανάπτυξη του καρκίνου. Παρά το γεγονός ότι τα καρκινικά κύτταρα επιδεικνύουν ένα κελί που μοιάζει με την υπογραφή της γονιδιακής έκφρασης του στελέχους, η επιγενετική ρύθμιση των γονιδίων πλειοδυναμίας που σχετίζονται με καρκίνους παραμένει ελάχιστα κατανοητή. Σε αυτή τη μελέτη, χαρακτήρισε την επιγενετική ρύθμιση των γονιδίων πλειοδυναμίας που σχετίζονται με

Nanog

,

Oct4

,

c-myc

,

KLF4

, και

SOX2

σε μία ποικιλία καρκινικών κυτταρικών σειρών και σε δείγματα πρωτογενούς όγκου, και διερευνήθηκε η εκ νέου ενεργοποίηση των ρυθμιστικών κυκλωμάτων πλειοδυναμίας στην πρόοδο του καρκίνου. Διαφορική μοτίβα μεθυλίωσης του DNA, τροποποιήσεις των ιστονών, και γονιδιακή έκφραση των γονιδίων πολυδύναμα αποδείχθηκε σε διάφορα είδη καρκίνων, η οποία μπορεί να αντανακλά την προέλευσή του ιστού τους.

Nanog

υπομεθυλίωση υποκινητή και γονιδίου ρύθμιση προς τα άνω βρέθηκαν σε μεταστατικό ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα του ήπατος και ανθρώπινου ηπατοκυτταρικού καρκινώματος (HCC) ιστούς πρωτογενούς όγκου. Η ρύθμιση προς τα πάνω του

Nanog

, μαζί με την εξάντληση p53, σχετιζόταν σημαντικά με την κλινική προχωρημένο στάδιο της HCC. Μια προ-μεταστατικό ρόλο του Nanog στα καρκινικά κύτταρα του παχέος εντέρου αποδείχθηκε επίσης, χρησιμοποιώντας ένα

Nanog

υπερεκφράζουν ορθοτοπικό όγκο μοντέλο εμφύτευση του ποντικιού. Απομεθυλίωση

Nanog

υποκινητή παρατηρήθηκε στο CD133 +

υψηλή καρκινικά κύτταρα. Σύμφωνα, η υπερέκφραση του

Nanog

οδήγησε σε αύξηση του πληθυσμού του CD133 +

υψηλής κύτταρα. Επιπλέον, αποδείξαμε ένα σταυρό ρύθμιση μεταξύ

Oct4

και

Nanog

στα καρκινικά κύτταρα μέσω επαναπρογραμματισμού της μεθυλίωσης του υποκινητή. Στο σύνολό τους, επιγενετική επαναπρογραμματισμό του

Nanog

μπορεί να οδηγήσει στην απόκτηση των ιδιοτήτων των βλαστικών κυττάρων που μοιάζουν. Τα αποτελέσματα αυτά υπογραμμίζουν την αποκατάσταση των κυκλωμάτων πλειοδυναμίας σε καρκινικά κύτταρα ως πιθανός μηχανισμός για την εξέλιξη του καρκίνου

Παράθεση:. Wang XQ, Ng RK, Μινγκ Χ, Zhang W, Chen L, Chu ACY, et al. (2013) Επιγενετική κανονισμού πολυδύναμων Γονίδια Μεσολαβεί Stem Χαρακτηριστικά κυττάρων στο ανθρώπινο ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα και καρκινικές κυτταρικές σειρές. PLoS ONE 8 (9): e72435. doi: 10.1371 /journal.pone.0072435

Επιμέλεια: Anil Kumar Tyagi, Πανεπιστήμιο του Δελχί, Ινδία

Ελήφθη: 2 του Μαΐου 2013? Αποδεκτές: 10 του Ιούλη του 2013? Δημοσιεύθηκε: 4 Σεπτέμβρη 2013

Copyright: © 2013 Wang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από τους Seed Πρόγραμμα χρηματοδότηση της βασικής έρευνας στο Πανεπιστήμιο του Χονγκ Κονγκ (11159149) και το Γενικό Ταμείο Έρευνας του Χονγκ Κονγκ Συμβουλίου Έρευνας Γκραντ (HKU778809M) με τον Wang XQ. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή οι

επιγενετικές μεταβολές θεωρούνται ως ισχυρά υποκατάστατα σε μεταλλάξεις στην απορύθμιση των γονιδίων που προάγουν την ανάπτυξη και ογκο-κατασταλτικά γονίδια [1], [2]. Έχει προταθεί ότι η διαδικασία της καρκινογένεσης περιλαμβάνει επιγενετικές μεταβολές σε βλαστικά /προγονικά κύτταρα πριν εμφανιστούν γονίδιο φύλακα μεταλλάξεις [1], [3], [4]. Αυτή η διαδικασία μπορεί πιθανώς να επηρεάσουν τόσο το γενετικό και επιγενετικό πλαστικότητα ενός κυττάρου και επιτρέπουν την απόκτηση της «βλαστική ικανότητα» χαρακτηριστικά, όπως εισβολή, μετάσταση και αντοχή φαρμάκου, κατά την διάρκεια της εξέλιξης του καρκίνου [1], [2]. Επιπλέον, γονιδιωματικό αστάθεια που προκαλείται από την υπερθέρμανση του υπομεθυλίωσης DNA βρέθηκε να είναι μία από τις πρώτες αλλαγές στην ανάπτυξη των ανθρώπινων καρκίνων [2], [5].

Ενώ η υπερέκφραση του

Oct4

,

SOX2

,

KLF4

και

c-myc

γονίδια επάγουν πλειοδυναμία σε σωματικά κύτταρα που οδηγούν στη δημιουργία εμβρυϊκών βλαστικών κυττάρων (ESC) -όπως επαγόμενα πολυδύναμα βλαστοκύτταρα (iPSCs) [6] – [8], είναι ενδιαφέρον να σημειωθεί ότι η ΟΚΕ-όπως μεταγραφικό πρόγραμμα συχνά ενεργοποιείται σε διάφορες ανθρώπινα επιθηλιακά καρκίνους [9], [10]. Μια τέτοια μονάδα ESC-σαν γονίδιο συνδέθηκε επίσης με την εξέλιξη της νόσου, π.χ. μετάσταση, και πρόωρη θνησιμότητα του καρκίνου του μαστού [9] και καρκίνου της ουροδόχου κύστης [11]. Είναι, ως εκ τούτου, προτείνει ένα κοινό μοριακό μονοπάτι που εμπλέκεται και στην παραγωγή iPSC και του καρκίνου των βλαστικών κυττάρων (CSC) για την έναρξη [12]. Επιπλέον, πρόσφατες μελέτες έχουν δείξει ότι iPSCs διατηρούν επιγενετικές μνήμη, όπως η μεθυλίωση του DNA υπογραφή, από τις απαρχές του ιστού τους [13], [14], που δείχνει τη σημασία της επιγενετικής ρύθμισης στο κελί μοίρα επαναπρογραμματισμό και ογκογένεση [15], [16].

Αν και το δίκτυο γονιδίων των κυττάρων που μοιάζουν με βλαστικά έχει αποδειχθεί σε καρκίνους [11], η ένωση των επιγενετικών επαναπρογραμματισμό και ιδιότητες CSC παραμένει ελάχιστα κατανοητή. Εδώ, ερευνήσαμε την επιγενετική ρύθμιση των γονιδίων πλειοδυναμίας που σχετίζονται με

Nanog

,

Oct4

,

c-myc

,

KLF4

, και

SOX2

, και η συσχέτιση τους με την έκφραση του γονιδίου σε κυτταρικές σειρές καρκίνου και δείγματα πρωτογενούς όγκου. Εξετάσαμε περαιτέρω το δυναμικό ρόλο τους στη διαδικασία της μετάστασης και στην έναρξη των ΚΕΠ κατά τη διάρκεια της εξέλιξης του όγκου.

Υλικά και Μέθοδοι

Δείγματα

Αξιόπιστες μη όγκου και καρκινικών ιστών δείγματα του ηπατοκυτταρικού καρκινώματος (HCC) συλλέχθηκαν από ασθενείς δεκαπέντε HCC διαγνωστεί με το στάδιο παθολογική όγκου-node-μετάσταση (ΤΝΜ) της νόσου Ι-IV [17]. Κανονική δείγματα ήπατος λήφθηκαν από πτωματικό ήπαρ δωρητές. Όλα τα δείγματα που παρέχονται από την Τράπεζα Ιστών των Διευθύνσεων του ήπατος και των χοληφόρων και του παγκρέατος Χειρουργική και μεταμόσχευση ήπατος στο Τμήμα Χειρουργικής, Νοσοκομείο Queen Mary. Συλλογή και αποθήκευση των κλινικών δειγμάτων για την τράπεζα ιστών έχει εγκριθεί από το Διοικητικό Συμβούλιο Institutional Review του Πανεπιστημίου του Χονγκ Κονγκ /Νοσοκομείο Αρχής του Χονγκ Κονγκ. Κανονική ηπατοκυττάρων και κυτταρικές σειρές HCC περιλαμβάνονται ΜΙΧΑ και L02 (κανονική ηπατοκύτταρα)? PLC (πρωτοβάθμια HCC)? και MHCC97L (97L) και MHCC97H (97H), προήλθαν από μεταστατικό HCC [18]. Άλλα μη-HCC καρκινικές κυτταρικές σειρές που περιλαμβάνονται HeLa (τράχηλος αδενοκαρκίνωμα)? MCF7 (αδενοκαρκίνωμα μαστού)? AGS (γαστρικό αδενοκαρκίνωμα)? HCT116 (ορθοκολικό καρκίνωμα)? και Κ-562 (χρόνια μυελογενής λευχαιμία). Το PLC, HeLa, MCF7, AGS, και οι γραμμές HCT116 αγοράστηκαν από την American Type Culture Collection (ATCC). L02 λήφθηκε από το Κέντρο για την Κίνα Type Culture Collection.

Γονιδιωματικό απομόνωση DNA

Ολικό γονιδιωματικό ϋΝΑ απομονώθηκε από μονοπύρηνα κύτταρα περιφερικού αίματος (PBMC), κυτταρικές σειρές, και μη όγκων και όγκων ήπατος δείγματα από ασθενείς HCC, χρησιμοποιώντας το κιτ QIAamp DNA mini (Qiagen).

Bisulfite αλληλούχιση ανάλυση

Γονιδιωματικό DNA υποβλήθηκε σε επεξεργασία για μετατροπή διθειώδους μη μεθυλιωμένων κυτοσίνες χρησιμοποιώντας το κιτ EpiTect Bisulfite (Qiagen). Το όξινο θειώδες-τροποποιημένο DNA χρησιμοποιήθηκε για PCR, με εκκινητές που αναγνωρίζουν τις αλληλουχίες DNA που έχουν μετατραπεί (Σχήμα 1Α? Σχήμα S1 στο File S1? Πίνακας S1). Τα προϊόντα PCR κλωνοποιήθηκαν σε ρΟΕΜ-Τ Easy (Promega Bioscience). Δέκα κλώνοι επιλέχθηκαν τυχαία και η αλληλουχία τους. αλληλουχίες DNA αναλύθηκαν με το λογισμικό BIO Analyzer (https://biq-analyzer.bioinf.mpi-sb.mpg.de) για την ανάγνωση CpG. Ποσοστό μεθυλίωσης αναφέρεται στον αριθμό των μεθυλιωμένων CpGs επί του συνολικού αριθμού των CpGs στην περιοχή που αναλύθηκε.

(Α) Σχηματικό διάγραμμα του γονιδίου ρυθμιστικών περιοχών του

Nanog

,

Oct4

και

c-myc

που εξετάστηκαν από όξινο θειώδες αλληλουχίας (ΤΔΔ) (κόκκινες γραμμές) και το chip (πράσινες γραμμές) πειράματα. (I) Το

Nanog

περιοχή εγγύς υποκινητή καλύπτει 10 CpG τοποθεσίες -1449 έως -952. (Ii) Η

Oct4

περιοχή προαγωγού καλύπτεται από 8 ζεύγη εκκινητών για 50 CpG τοποθεσίες -2973 – 320. (Iii) Η

c-myc

γονιδιακή περιοχή καλύπτεται από BiS εκκινητές για νησίδες CpG πριν sites TSS1 και TSS2, και CpG στο εξώνιο 2 και 3? και το chip εκκινητή για το εξόνιο 3. (Β) ανάλυση Bisulfite αλληλουχίας του

Nanog

υποκινητή σε καρκινικές κυτταρικές σειρές. συχνότητα της μεθυλίωσης του DNA παρουσιάζεται ως ποσοστά σε: φυσιολογικό ήπαρ (L02) και καρκίνο του ήπατος (PLC, 97L και 97H) κύτταρα (μπλε)? φυσιολογικά PBMC και λευχαιμικά κύτταρα Κ-562 (πορτοκαλί)? και σε HeLa, MCF7, HCT116, και AGS καρκινικά κύτταρα (πράσινο). (Γ) Κλωνική

Nanog

προτύπων μεθυλίωσης προαγωγού σε 97L, HeLa και Κ-562 κύτταρα. Ανοικτοί κύκλοι αντιπροσωπεύουν μη μεθυλιωμένα CpGs? μαύροι κύκλοι αντιπροσωπεύουν μεθυλιωμένα CpGs. (Δ) η συχνότητα μεθυλίωση του

Oct4

εγγύς υποκινητή (-530-7) σε: κανονικά και καρκίνο του ήπατος κύτταρα (μπλε)? και σε κύτταρα HeLa και HCT116 (πράσινο). (Ε) DNA συχνότητα μεθυλίωση των ανάντη και κατάντη περιοχές του

Oct4

σε κανονική και καρκίνο του ήπατος κύτταρα. «Συνολικά» καλύπτει 50 CpG τοποθεσίες -2.973-320? «5» TSS «καλύπτει 10 CpG τοποθεσίες -530-7? και «3» TSS «καλύπτει 12 CpG τοποθεσίες 61 έως 320. (F) συχνότητα Μεθυλίωση του εξονίου 3 του

c-MYC

(10 θέσεις CpG) σε: κανονικά και τα καρκινικά κύτταρα του ήπατος (μπλε)? PBMC και λευχαιμικά κύτταρα Κ-562 (πορτοκαλί)? και HeLa, MCF7, HCT116, και ο καρκίνος του AGS κύτταρα (πράσινο).

Η

χρωματίνης ανοσοκατακρήμνιση (chip) θα

Η διαδικασία τσιπ που περιγράφεται στο Current Protocols [19]. Εν συντομία, 10 έως 20.000.000 (1-2 × 10

7) L02, HCT116 και 97L κύτταρα συλλέχθηκαν και σταθεροποιήθηκαν με 37% φορμαλδεΰδη. Οι σε επεξεργασία με υπερήχους κυτταρολύματα υποβλήθηκαν σε ανοσοκαταβύθιση με 5 μα H3K4me3 ή αντισώματα H3K27me3 (Abcam) και η κανονική IgG (είσοδοι ως έλεγχος), αντίστοιχα, υπό την παρουσία πρωτεΐνης σφαιριδίων G-Sepharose (GE Healthcare) στους 4 ° C όλη τη νύκτα. Τα σφαιρίδια πλύθηκαν διαδοχικά με FA ρυθμιστικό λύσης, ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης ChIP, και ρυθμιστικό διάλυμα ΤΕ. Bound υλικά εκλούστηκαν με ρυθμιστικό διάλυμα έκλουσης ChIP. Εμπλουτισμός της τροποποίησης ιστόνης ποσοτικοποιήθηκε με πραγματικού χρόνου PCR, χρησιμοποιώντας SYBR Green (Applied Biosystems), με τα αντίστοιχα αστάρια πλινθίου (Σχήμα 1Α? Σχήμα S1 στο File S1? Πίνακας S1). Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως εμπλουτισμός φορές, χρησιμοποιώντας μια ανάλυση τύπου υπολογισμού τσιπ qPCR (www.sabiosciences.com)? εισόδους και πλαστή ΠΕ χρησιμοποιήθηκαν για την κανονικοποίηση.

Αντίστροφη μεταγραφή και ποσοτική πραγματικού χρόνου PCR (qRT-PCR)

Ολικό RNA απομονώθηκε χρησιμοποιώντας το κιτ RNeasy Mini (Qiagen) και υποβάλλεται σε επεξεργασία με ϋΝάση Ι , ακολουθούμενη από ανάστροφη μεταγραφή με τη Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit (Roche). Ανάλυση qRT-PCR πραγματοποιήθηκε με τη χρήση των προ-σχεδιασμένο ανιχνευτές TaqMan για

Nanog

(Hs02387400_g1),

POU5F1

(Hs00999634_gH),

MYC

(Hs00153408_m1), και

18S rRNA

(4333760-0807027), που επιλέχθηκαν από TaqMan Gene Expression Δοκιμασίες (Applied Biosystems). SYBR Green αντιδραστήρια (Applied Biosystems ή TaKaRa Βιοτεχνολογίας) χρησιμοποιήθηκαν για την ανίχνευση των

Oct4

,

MYC

,

KLF4, p53

και

β-ακτίνης

γονιδιακή έκφραση (αστάρι πληροφορίες στον πίνακα S2). έκφραση του γονιδίου υπολογίστηκε ως CT και ομαλοποιήθηκε ως προς το επίπεδο του

18S

ή

β-ακτίνης

.

Lentivirus μεταγωγή

Ανθρώπινο

Nanog

(NM_024865) και

Oct4

(NM_002701) γονίδια από ανθρώπινα εμβρυϊκά βλαστικά κυτταρική γραμμή κλωνοποιήθηκαν σε φορέα pWPI και επιμολύνθηκαν με ρΟΜν-dR8.91 και pMD2.G πλασμιδίων εντός του 293Τ κυτταρική σειρά συσκευασίας. Viral υπερκείμενα συλλέχθηκαν 48 ώρες μετά την επιμόλυνση και καταβυθίστηκε χρησιμοποιώντας PEG-it Solution Virus Καθίζηση (Σύστημα Biosciences). HCT116 ρ53 – /- κύτταρα μολύνθηκαν με φακοϊό εκφράζουν είτε

Oct4

ή

Nanog

παρουσία 8 μg /ml θειικής πρωταμίνης. Διαλογή κυττάρων διεξήχθη χρησιμοποιώντας FACSAria (BD Biosciences) για την απομόνωση του μετατραπέντων ρ53 HCT116 – /-. Κύτταρα

In vivo δοκιμασία μετάστασης από ορθοτοπική εμφύτευση όγκου κόλου

παλιό Τέσσερις έως έξι εβδομάδες BALB /Cann-nu (Γυμνό) ποντίκια ελήφθησαν και διατηρείται σε Εργαστήριο Μονάδα ζώων του Πανεπιστημίου του Χονγκ Κονγκ. Όλα τα πειράματα του ποντικιού εγκρίθηκαν από την Επιτροπή σχετικά με τη χρήση των ζώντων ζώων του Πανεπιστημίου του Χονγκ Κονγκ. Lentivirus μολυνθεί HCT116 ρ53 – /- κύτταρα εγχύθηκαν υποδορίως σε γυμνούς ποντικούς για να δημιουργήσει πρωτογενείς όγκους. Οι πρωτογενείς όγκοι ανατμήθηκαν εντός 1-2 mm

3 κύβους και στη συνέχεια εμφυτεύονται στο τυφλό έντερο άλλων γυμνών ποντικών [20]. Colon σε μετάσταση όγκου πνεύμονα εξετάστηκε μετά από 4 εβδομάδες εμφύτευσης τυφλού εντέρου. Το σύνολο πνεύμονες από γυμνά ποντίκια κόπηκαν και χρωματίστηκαν με Η &? Ε. Οι αλλοιώσεις όγκου κόλου στους πνεύμονες εξετάστηκαν με μικροσκοπία.

κυτταρομετρία ροής και κυτταρική διαλογή

CD133-PE (Miltenyi Biotec) σημασμένα κύτταρα HCT116 αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας FACSCalibur (BD Biosciences). CD133 +

χαμηλή, CD133 +

υψηλή, και CD133- κύτταρα υποβλήθηκαν σε διαλογή κυττάρων από FACSAria (BD Biosciences).

Η στατιστική ανάλυση

Τα δεδομένα παρουσιάστηκαν ως μέση τιμή ± SD και

t

test του Student πραγματοποιήθηκε με τη χρήση του λογισμικού SPSS.

P

& lt? 0,05 θεωρήθηκε ως στατιστικά σημαντική

Αποτελέσματα

Διαφορικές μεθυλίωσης του DNA των πλειοδυναμίας που σχετίζεται με τα γονίδια στα καρκινικά κύτταρα

Προηγούμενες μελέτες έχουν αποδείξει. η ενεργοποίηση των κατάντη στόχοι του

Nanog

,

Oct4

,

SOX2

και

MYC

γονιδίων στα επιθετικά αυξανόμενη ανθρώπινους καρκίνους [11]. Ως εκ τούτου, διερευνήθηκε το πρότυπο μεθυλίωσης CpG του

Nanog

(επίσης γνωστή ως

NANOG1

),

Oct4

,

SOX2

,

KLF4

και

c-MYC

σε ανθρώπινες καρκινικές κυτταρικές σειρές με προσέγγιση διθειώδες αλληλουχίας (Σχήμα 1Α? Σχήμα S1 σε S1 File). Σε σύγκριση με τα φυσιολογικά κύτταρα του ήπατος L02, το οποίο εμφανίζεται ένα μέτριο επίπεδο μεθυλίωσης (39%), το DNA υπομεθυλίωση του

Nanog

(Σχήμα 1Α-i) παρατηρήθηκε σε τρεις γραμμές κυττάρων καρκίνου του ήπατος, δηλαδή PLC, 97L και 97H ( 18%, 8% και 14%, αντίστοιχα), μεταξύ των οποίων η μεταστατική κυτταρική γραμμή ήπατος 97L έδειξε σχεδόν απουσία της μεθυλίωσης του DNA (Σχήμα 1 Β και 1 C). Ενώ σε λευχαιμικά κύτταρα Κ-562,

Nanog

μεθυλίωσης (39%) έδειξε μια 2-πλάσια μείωση σε σύγκριση με την κανονική μονοπύρηνα κύτταρα περιφερικού αίματος (PBMCs) (81%? Εικόνα 1Β και 1Γ). Τα καρκινικά κύτταρα από άλλες προελεύσεις ιστού εμφανίζεται απόκλιση

Nanog

μεθυλίωση υποστηρικτής? για παράδειγμα, υπομεθυλίωση παρατηρήθηκε σε HeLa (25%), ενώ υπερμεθυλίωση δείχθηκε σε MCF7, HCT116 και AGS (71%, 92% και 91%, αντίστοιχα) (Σχήμα 1Β και 1Γ).

επόμενο εξέτασε το

Oct4

μοτίβο μεθυλίωσης προαγωγό σε καρκινικά κύτταρα. Η περιοχή εγγύς υποκινητή (-503 να +7? Σχήμα 1Α-ϋ) του

Oct4

βρέθηκε υπερμεθυλίωση σε L02 (92%), Ο Miha (90%), HeLa (90%) και HCT116 (87% ) κύτταρα, τα οποία είναι σε αντίθεση με τις μειωμένα επίπεδα που παρατηρούνται σε PLC και 97L κύτταρα (70% και 41%, αντίστοιχα? σχήμα 1Δ). Εμείς επέκτεινε την ανάλυση μεθυλίωσης σε ένα σύνολο 50 CpGs που καλύπτουν τόσο το περιφερικό προαγωγό και κατάντη περιοχή της θέσης έναρξης μεταγραφής (TSS, -2973 έως +320? Σχήμα 1Α-ϋ). Η μειωμένη μοτίβο μεθυλίωσης διατηρήθηκε στο αναλύονται

Oct4

γονίδιο περιοχή PLC και 97L κύτταρα (Σχήμα 1Ε). Για το

c-MYC

γονίδιο, αν και τα CpGs που βρίσκονται ανάντη της TSS1 και TSS2 και στο εξώνιο 2 παρέμεινε μη μεθυλιωμένη σε αμφότερες τις κανονικές και καρκινικών κυττάρων (Σχήμα 1Α-ΙΙΙ? Σχήμα S2 σε S1 File), το επίπεδο μεθυλίωσης του εξονίου 3 μειώθηκε δραματικά και έγινε μεθυλιωμένος εις δύο κυτταρικές γραμμές καρκίνου του ήπατος, PLC (34%) και 97L (6%), σε σύγκριση με το μέτριο έως υψηλό επίπεδο μεθυλίωσης (51% έως 82%) σε φυσιολογικά ηπατικά κύτταρα ( Σχήμα 1F). Σε αντίθεση, τα καρκινικά κύτταρα από άλλες προελεύσεις ιστού, με την εξαίρεση των HeLa, εμφανίζεται κατάσταση υπερμεθυλίωση

c-MYC

εξόνιο 3 (που κυμαίνεται από 72% έως 99%? Σχήμα 1 F). Από την άλλη πλευρά, CpG νησίδων στις περιοχές υποκινητή του

KLF4

και

SOX2

γονίδια παρέμειναν μη μεθυλιωμένη σε όλες τις κυτταρικές σειρές που εξετάστηκαν (σχήματα S1, S3, S4 σε S1 File). Στο σύνολό τους, διαφορική πρότυπο μεθυλίωσης των γονιδίων πλειοδυναμίας που σχετίζεται παρατηρήθηκε σε ανθρώπινες καρκινικές κυτταρικές σειρές από διαφορετικές προελεύσεις ιστού.

Επιγενετική κανονισμούς των πολυδύναμων γονιδιακής έκφρασης

επόμενο επικεντρώθηκε στην πολυδύναμων έκφραση γονιδίου σε δύο κυτταρικές σειρές καρκίνου, 97L και HCT116, τα οποία έδειξαν απέναντι πρότυπα της μεθυλίωσης του DNA. ανάλυση qRT-PCR κατέδειξαν υψηλότερη έκφραση του

Nanog

,

Oct4

και

c-MYC

γονιδίων σε κύτταρα 97L αλλά όχι σε κύτταρα HCT116, σε σύγκριση με τον έλεγχο L02 και PLC κύτταρα (Σχήμα 2Α-C? Σχήμα S5A-C σε S1 File), γεγονός που υποδηλώνει την έκφραση αυτών των γονιδίων ρυθμίζεται αρνητικά από μεθυλίωσης DNA. Για

KLF4

, αυξημένη γονιδιακή έκφραση παρατηρήθηκε σε τόσο 97L και κύτταρα HCT116 (Σχήμα 2D? Σχήμα S5D σε S1 File), παρά το γεγονός ότι το CpG μοτίβο νησί μεθυλίωσης δεν διέφερε μεταξύ φυσιολογικών και καρκινικών κυττάρων (Σχήμα S3 σε S1 αρχείο)

Τα επίπεδα έκφρασης του (Α)

Nanog

, (Β)

Oct4

, (C)

γ

-.

MYC

, και (Δ)

KLF4

γονίδια προσδιορίστηκαν σε L02, PLC, 97L, και HCT116 κύτταρα με ανάλυση qRT-PCR, κανονικοποιημένη με το γονίδιο αναφοράς

18S

. Η έκφραση του γονιδίου κανονικοποιήθηκε προς L02 δείγμα, το οποίο ορίστηκε ως 1. Τα δεδομένα είναι η μέση τιμή ± SD που λαμβάνεται από 2 έως 3 πειράματα με εις διπλούν. Εμπλουτισμός της τροποποίησης των ιστονών H3K4me3 και H3K27me3 στις περιοχές υποκινητή των γονιδίων πλειοδυναμίας που σχετίζονται με (E)

Nanog

, (F)

Oct4

, (G)

γ

–

MYC

, και (H)

KLF4

μετρήθηκαν σε L02, 97L, και HCT116 με ανάλυση chip. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως εμπλουτισμός φορές και κανονικοποιούνται με τη συμβολή και πλαστή IgG ελέγχου. Ο εμπλουτισμός φορές ήταν σε σχέση με το L02 δείγμα, το οποίο ορίστηκε ως 1. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύονται με μέση τιμή που λαμβάνεται από δύο πειράματα τσιπ με μπάρες σφάλματος του προτύπου παραγωγή.

Η

Επιγενετική τροποποιήσεις στις πρωτεΐνες ιστονών έδειξε επίσης ισχυρή συνδυασμό με την έκφραση του γονιδίου. Εμείς, ως εκ τούτου, προσδιορίζεται η παρουσία των δύο είδη τροποποιήσεων ιστονών, η δραστική /ανεκτική τρι-μεθυλ-H3K4 (H3K4me3) και η κατασταλτική τρι-μεθυλ-H3K27 (H3K27me3), σε 97L και τον καρκίνο HCT116 κύτταρα. ανάλυση ChIP έδειξαν σημαντική εμπλουτισμό των δραστικών σήματος H3K4me3 στις περιοχές υποκινητή του

Nanog

και

Oct4

και η περιοχή εξονίου 3 του

c-MYC

σε κύτταρα 97L, όταν σε σύγκριση με το L02 και HCT116 κύτταρα (Σχήμα 2Ε-G, το αριστερό πάνελ). Αυτό έρχεται σε αντίθεση με το χαμηλό επίπεδο των καταπιεστικών σήματος H3K27me3 παρατηρείται σε αυτά τα κύτταρα (Σχήμα 2Ε-G, δεξιά πάνελ). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι και οι δύο τροποποιήσεις των ιστονών και τη λειτουργία της μεθυλίωσης του DNA συνεργιστικά στη ρύθμιση

Nanog

,

Oct4

και

c-myc

γονιδιακής έκφρασης. Από την άλλη πλευρά, H3K4me3 βρέθηκε πολύ εμπλουτισμένη στο

KLF4

υποστηρικτής των κυττάρων 97L, ενώ HCT116 κύτταρα έδειξε ένα μέτριο επίπεδο H3K4me3, αλλά με σχετικά χαμηλότερο επίπεδο των κατασταλτικών H3K27me3 (Σχήμα 2Η, δεξί πάνελ). Αυτό μπορεί να ευθύνεται για το υψηλό επίπεδο του

KLF4

γονιδιακής έκφρασης σε αμφότερες τις κυτταρικές σειρές (Σχήμα 2D), το οποίο είναι ανεξάρτητο της μεθυλίωσης του DNA.

υπομεθυλίωση Nanog υποκινητής σε ανθρώπινα HCC

ιστό του όγκου

Δεδομένου ότι η διαφορά

Nanog

μοτίβο μεθυλίωσης σε καρκινικές κυτταρικές γραμμές μπορεί να είναι συνέπεια του

in vitro

καλλιέργεια και όχι ένωση με κακοήθεια τους

per se

, εμείς Ως εκ τούτου, ερευνήθηκε

Nanog

μεθυλίωση προαγωγού σε πρωτογενείς όγκους HCC σε συνδυασμό με γειτονικούς ιστούς μη-όγκου (n = 15), σε σύγκριση με φυσιολογικά δείγματα ήπατος (Σχήμα 3Α). Εντυπωσιακά, το 73% των περιπτώσεων μη-όγκου (11 από 15) ήταν περισσότερο από 50% μετουσιωμένο, ενώ το 53% των περιπτώσεων καρκίνου (8 από 15) ήταν λιγότερο από το 30% μεθυλιωμένη στο

Nanog

υποστηρικτής (Σχήμα 3Β και 3C).

Nanog

επίπεδα μεθυλίωσης υποστηρικτής μειώθηκαν σημαντικά στα ζεύγη όγκους HCC σε σύγκριση με παρακείμενους ιστούς μη-όγκου (

σ

= 0.000), ενώ δεν υπάρχουν σημαντικές αλλαγές ανιχνεύθηκαν μεταξύ των κανονικών και μη όγκων του ήπατος ιστούς (

σ

= 0.301? Σχήμα 3D). Σύμφωνα με τη μειωμένη μεθυλίωση προαγωγού,

Nanog

έκφραση βρέθηκε σημαντικά υψηλότερη σε ιστό όγκου σε σχέση με μη καρκινικό ιστό (

σ

= 0.021? Σχήμα 3Ε). Αξίζει να σημειωθεί ότι τα δείγματα HCC στο στάδιο TNM III και IV, η οποία συνήθως είναι παρόν με αγγειακή εισβολή, λεμφαδένες και απομακρυσμένες μετάσταση [17], ήταν σημαντικά σχετίζονται με την υψηλή

Nanog

(

p

= 0.011) και χαμηλή

p53

(

σ

= 0,047) έκφραση (Πίνακας 1? πίνακα S3). Το χαμηλό επίπεδο των

p53

συσχετίστηκε επίσης με αγγειακή διήθηση (

σ

= 0,019? Πίνακας 1). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι η μετάσταση του όγκου απαιτεί τόσο την ανοδική ρύθμιση του

Nanog

μέσω υπομεθυλίωση υποκινητή και την καταστολή των

p53

στο HCC

(Α) H & amp?. Ε χρώση των ανθρώπινων φυσιολογικό ήπαρ (αριστερά), και HCC μη όγκου (μέση) και καρκινικού ιστού (δεξιά). κατάσταση (Β) μεθυλίωση του

Nanog

υποκινητή (-1.449 – -952) σε δεκαπέντε ζεύγη ιστούς HCC μη όγκου και όγκου. συχνότητα μεθυλίωσης DNA ταξινομήθηκε σε 50-69% (μαύρο), 30-49% (γκρι), και 19-29% (λευκό) σε HCC όγκου και των παρακείμενων ιστών μη-όγκου. (C)

Nanog

μοτίβο μεθυλίωσης υποστηρικτής εκπροσωπείται με HCC υπόθεση-297 όγκου και των παρακείμενων μη καρκινικό ιστό. (D) Στατιστική σύγκριση των

Nanog

μεθυλίωση προαγωγού σε φυσιολογικό ήπαρ (η = 3), HCC γειτονικά μη-όγκου (n = 15) και του όγκου (n = 15) σε ιστούς? δεδομένα είναι η μέση τιμή ± SD. (Ε) Στατιστική σύγκριση

Nanog

έκφραση γονιδίου σε ζεύγη HCC μη-όγκου και καρκινικό ιστό (n = 15). Κάθε ιστός του όγκου ομαλοποιήθηκε με αντίστοιχα μη καρκινικό ιστό της.

Η

έκφραση Nanog προωθεί μετάσταση όγκου

Μετά την ταυτοποίηση των

Nanog

ρύθμιση προς τα πάνω σε μεταστατικό κύτταρα HCC και δείγματα όγκων, που επιδίωκε τη μελέτη μας για να εξετάσει το

in vivo

λειτουργία του

Nanog

στην εξέλιξη του καρκίνου. Ωστόσο, η ισχυρή έκφραση του

Nanog

σε κύτταρα HCC καθιστά δύσκολο να χτυπηθεί κάτω αποτελεσματικά για

in vivo

λειτουργικές μελέτες (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Εμείς, ως εκ τούτου, επέλεξε την HCT116 κυτταρική σειρά, η οποία έχει χαμηλό ενδογενές επίπεδο Nanog, για τη μελέτη υπερέκφραση. Ένα σταθερό

Nanog

εκφράζουν HCT116 ρ53 – /- κύτταρα (Σχήμα S6a σε S1 File) εγχύθηκαν σε γυμνούς ποντικούς για σχηματισμό όγκου. Παραδόξως, τουλάχιστον 1 × 10

4 κύτταρα είτε HCT116 p53 – /- ή

Nanog

εκφράζουν ρ53 HCT116 – /- (Nanog-HCT116 p53 – /-) κύτταρα ήταν αρκετή για να σχηματίσει υποδόρια όγκους (Πίνακας S4), υποδεικνύοντας ότι ένα υψηλότερο επίπεδο του

Nanog

έκφραση δεν θα μπορούσε να ενισχύσει περαιτέρω το σχηματισμό των πρωτογενών όγκων. Ωστόσο, χρησιμοποιώντας ένα ορθοτοπικό μοντέλο ποντικού εμφύτευση του όγκου, παρατηρήσαμε σημαντικά υψηλότερο του παχέος εντέρου σε μετάσταση πνεύμονα με εμφύτευση ξενομοσχεύματος όγκους Nanog-HCT116 ρ53 – /- κυττάρων σε σύγκριση με το γονικό HCT116 ρ53 – /- κύτταρα (Σχήμα 4Α-C). Αυτό παρέχει ισχυρό

in vivo

στοιχεία που να υποστηρίζουν τη λειτουργία του

Nanog

στην προώθηση της μετάστασης των καρκινικών κυττάρων

(Α) HCT116 p53 – /. – Ή Nanog εκφράζουν HCT116 p53 – /- κύτταρα (1 χ 10

6) ενέθηκαν σε γυμνά ποντίκια υποδορίως. ιστός ξενομοσχεύματος όγκου που σχηματίστηκε αποκόπηκε και χωρισθεί σε 1-2 mm

3 κύβους που στη συνέχεια εμφυτεύονται μέσα στις cecums άλλων γυμνών ποντικών. σχηματισμός όγκου στο τυφλό έντερο παρατηρήθηκε μετά την εμφύτευση. Τα βέλη επισημαίνουν τυφλό και το πρόσφατα σχηματισμένο όγκου στο τυφλό έντερο. (Β) Colon σε μετάσταση όγκου πνεύμονα εξετάστηκε μετά από τέσσερις εβδομάδες εμφύτευση με Η &? Ε χρώση τομών ιστού πνεύμονα. Σε σύγκριση με διώξει πνευμονικού ιστού (αριστερά), μια μικρή αλλοίωση του όγκου παρατηρήθηκε σε πνεύμονα (μέση) από την ρ53 HCT116 – /- ομάδα εμφύτευση? λαμβάνοντας υπόψη ότι η μεγάλη και πολλαπλές βλάβες των όγκων του παχέος εντέρου βρέθηκαν στο p53 Nanog-HCT116 – /- ομάδα εμφύτευσης (δεξιά). (Γ) Στατιστική σύγκριση της συχνότητας των πνευμόνων μετάστασης στον ορθοτοπικό μοντέλο εμφύτευσης τυφλού εντέρου προέρχονται από HCT116 ρ53 – /- (η = 8) και Nanog-HCT116 p53 – /- (η = 11). (Δ) Ανάλυση κυτταρομετρίας ροής της έκφρασης CD133 σε κύτταρα HCT116 απέδειξαν τρεις πληθυσμούς κυττάρων? δηλαδή CD133-, CD133 +

χαμηλή, και CD133 +

υψηλή. Λιγότερο από το 1% των κυττάρων είχαν θεωρηθεί ως CD133 +

υψηλή. (Ε)

Nanog

μοτίβα μεθυλίωσης υποκινητή σε CD133-, CD133 +

χαμηλή, και CD133 +

υψηλή HCT116 κύτταρα. CD133 +

υψηλής κύτταρα έδειξαν μια σημαντική μείωση του

Nanog

μεθυλίωση του υποκινητή. (F)

Nanog

έκφραση σε CD133-, CD133 +

χαμηλή, και CD133 +

υψηλή HCT116 κύτταρα. CD133 +

υψηλής κύτταρα απέδειξαν σημαντικά αυξημένο

Nanog

έκφρασης. Η

Nanog

έκφραση σε CD133- ορίστηκε ως 1, και διπλώστε αύξηση CD133 +

χαμηλή και CD133 +

υψηλή (έναντι σε CD133-) υπολογίστηκε ως ΔΔCT. Τα δεδομένα είναι η μέση τιμή ± SD από τρία πειράματα με εις διπλούν. (G) κύτταρα HCT116 μολύνθηκαν με

Nanog

-ΟΡΡ φακοϊό και αναλύθηκαν για τους πληθυσμούς CD133 με κυτταρομετρία ροής. Τα ποσοστά των πληθυσμών CD133 συγκρίθηκαν μεταξύ HCT116 κύτταρα είτε με ενδογενή επίπεδο ή το επίπεδο υπερέκφραση του Nanog. Η υψηλή πληθυσμιακή CD133 +

(R5) αυξήθηκε σε κύτταρα με υπερέκφραση του

Nanog

.

Η

απομεθυλίωση του Nanog στα CD133 +

υψηλή πληθυσμός κυττάρων HCT116

Υψηλή έκφραση του CD133 είναι μία από τις ενδείξεις του πληθυσμού CSC σε διάφορους τύπους καρκίνων, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του παχέος εντέρου [21], [22]. Δεδομένου ότι τα τρία πολυδύναμα γονίδια

Nanog

,

Oct4

, και

γ

–

MYC

ήταν υπερμεθυλίωση στα κύτταρα HCT116 καρκινώματος του παχέος εντέρου, ρωτήσαμε αν η ίδια πρότυπο μεθυλίωσης θα πρέπει να τηρούνται σε σπάνιες υποθετικό πληθυσμό CSC σε κύτταρα HCT116. Παρατηρήσαμε πάνω από το 80% των κυττάρων HCT116 ήταν CD133 +, αλλά μόνο το 1% των κυττάρων είχαν θεωρηθεί ως CD133 +

υψηλή (Εικόνα 4D). Είναι σημαντικό ότι,

Nanog

μεθυλίωση υποστηρικτής διατηρήθηκε σε υψηλό επίπεδο σε

χαμηλή κύτταρα HCT116 (89% και 78%, αντίστοιχα), τόσο CD133- και CD133 +, ενώ μειώθηκε δραματικά σε 42% το CD133 +

υψηλής κύτταρα (Σχήμα 4Ε). Η μειωμένη μεθυλίωση βρέθηκε επίσης σύμφωνα με μια σημαντική προς τα πάνω ρύθμιση του

Nanog

έκφρασης CD133 +

υψηλής κύτταρα (Σχήμα 4F). Επιπλέον, η υπερέκφραση εξωγενούς

Nanog

στα κύτταρα HCT116 οδήγησε σε αύξηση του CD133 +

υψηλή πληθυσμιακή (Εικόνα 4G), γεγονός που υποδηλώνει ότι η μεθυλίωση του

Nanog

υποστηρικτής συμβάλλει στην έναρξη των ΚΕΠ στην ανάπτυξη των όγκων.

πλειοδυναμία ρυθμιστικών κυκλωμάτων σε καρκινικά κύτταρα

Oct4

,

SOX2

, και

Nanog

έχουν αποδειχθεί σχηματίζουν μια μεταγραφική ρυθμιστική βρόχο ΟΚΕ για τη συντήρηση των πλειοδυναμίας [23] – [25]. Ρωτήσαμε αν οι cross-ρύθμιση διατηρείται στα καρκινικά κύτταρα με παρεκκλίνουσα επιγενετικές μοτίβα. κύτταρα HCT116 με το γενετικό υπόβαθρο διαφορετικές p53 χρησιμοποιήθηκαν επειδή p53 αναφέρθηκε ως εμπόδιο για την αποκατάσταση των πλειοδυναμίας [26]. Είναι ενδιαφέρον ότι, η υπερέκφραση του εξωγενούς

Oct4

σημαντικά αυξημένο

Nanog

επίπεδα mRNA σε HCT116 ρ53 – /- κύτταρα, αλλά όχι σε HCT116 p53 + /+ κύτταρα (Σχήμα 5Α? Σχήμα S6B σε S1 File). Η επαγωγή του

Nanog

έκφραση συσχετίστηκε με μειωμένη μεθυλίωση προαγωγού σε Oct4-HCT116 ρ53 – /- κύτταρα (από 95% έως 66%? Σχήμα 5Β). Επιπλέον, η υπερέκφραση της εξωγενούς

Nanog

σημαντικά ενισχυμένη

Oct4

επίπεδα mRNA σε κύτταρα HCT116 ανεξάρτητα από το καθεστώς p53 τους (Σχήμα 5C). Αυτό υποδηλώνει ότι το ρυθμιστικό κύκλωμα πλειοδυναμία διατηρείται σε καρκινικά κύτταρα και είναι εν μέρει αποκατασταθεί στα καρκινικά κύτταρα μέσω του επιγενετικών μηχανισμό που επαναπρογραμματίζει

Nanog

μεθυλίωση προαγωγού.

(Α) HCT116 p53 + /+ και p53 – /- κύτταρα που έχουν μολυνθεί με το

Oct4

ΟΡΡ-λεντοϊού. Ισχυρή επαγωγή του ενδογενούς

Nanog

έκφραση βρέθηκε σε Oct4 εκφράζουν HCT116 p53 – /- κύτταρα. Η έκφραση του γονιδίου σε κύτταρα HCT116 χωρίς μόλυνση ορίστηκε ως 1, και φορές αύξηση σε κύτταρα HCT116 με μόλυνση υπολογίστηκε με ΔCt. Τα δεδομένα είναι η μέση τιμή ± SD από τρία πειράματα με εις διπλούν. Αξιόπιστες Φοιτητής

t

δοκιμή χρησιμοποιήθηκε για τη στατιστική ανάλυση. (Β)

Nanog

μοτίβα μεθυλίωσης προαγωγό σε HCT116 p53 – /- κύτταρα με ή χωρίς

Oct4

υπερέκφραση. (C) κύτταρα HCT116 μολύνθηκαν με

Nanog

ΟΡΡ-λεντοϊού. Σημαντική επαγωγή του ενδογενούς

Oct4

έκφρασης βρέθηκε τόσο Nanog εκφράζουν HCT116 p53 + /+ και p53 – /- κύτταρα. Ο υπολογισμός γονιδιακής έκφρασης ήταν η ίδια όπως περιγράφεται στο (Α). Αξιόπιστες Φοιτητής

t

δοκιμή χρησιμοποιήθηκε για τη στατιστική ανάλυση.

Η

Συζήτηση

Η ενεργοποίηση των μοριακών στόχων των γονιδίων πλειοδυναμίας που σχετίζονται με (

Nanog

,

Oct4

,

SOX2

, και

γ

–

MYC

) παρατηρείται συχνά σε χαμηλής διαφοροποίησης καρκίνους [11], [27].

Oct4

και

Nanog

έκφρασης έχουν βρεθεί επίσης σχετίζεται με ιδιότητες CSC σε καρκίνους του ανθρώπου [28] – [33]. Σε αυτή τη μελέτη, έχουμε επιδείξει βλαστοκυττάρων επιγενετικών υπογραφή των πλειοδυναμίας που σχετίζεται γονιδίων σε κυτταρικές σειρές καρκίνου? ιδίως αυξημένη έκφραση του

Nanog

στα μεταστατικά κύτταρα HCC και σε φτωχά προγνωστικούς ανθρώπινους όγκους HCC (Εικόνα 1Β, 1C, 2Α, 3? Πίνακας 1), η οποία πιθανώς συνδέεται με τον προαγωγέα του υπο-μεθυλιωμένα κατάσταση και την καταστολή του

p53

. Παρατηρήσαμε επίσης ότι

NANOGP8

, κωδικοποιεί μια πρωτεΐνη με πάνω από 99,5% ομοιότητα με την αυθεντική πρωτεΐνη NANOG1, εκφράζεται σε μία ποικιλία καρκινικών κυττάρων, συμπεριλαμβανομένων των κυττάρων HCT116 [34], [35]. Είναι πιθανό ότι

NANOGP8

επίπεδο μπορεί να επηρεάσει την ανίχνευση

Nanog

έκφρασης στη μελέτη μας από τον ανιχνευτή TaqMan χρησιμοποιούνται δεν μπορούν να διακρίνουν μεταξύ των δύο αλληλουχιών γονιδίων. Σημαντικά, τα δεδομένα μας έδειξαν ότι η ισχυρή

Nanog

έκφραση συσχετίστηκε με την έναρξη ενός υποθετικού πληθυσμού CSC (Εικόνα 4D-G) και προωθείται

in vivo

μετάσταση όγκου (Σχήμα 4Α-C) . Ως εκ τούτου, υποθέτουμε ότι η απομεθυλίωση του

Nanog

συμβαίνει κατά τη διάρκεια της ανάπτυξης των όγκων και την αντίστοιχη έκφραση

Nanog

παρέχει τα καρκινικά κύτταρα με μεταστατικό ιδιότητες CSC.

Τα καρκινικά κύτταρα έχουν προταθεί για την προσαρμοστούν σε μια επιγενετική υπογραφή της «βλαστική ικανότητα». Διαφορετικές καρκινικά κύτταρα εμφανίζουν μοναδικά σχέδια τους μεθυλίωσης του DNA, τροποποιήσεις των ιστονών, και έκφραση πολυδύναμα γονίδιο που μπορεί να αντανακλά τις διαφορετικές προελεύσεις ιστού. Είναι ενδιαφέρον, iPSCs λιμάνι υπολειμματικό υπογραφές μεθυλίωσης του DNA των σωματικών ιστικής προέλευσης τους [13] – [16]. Αν και είναι ακόμα να προσδιοριστεί κατά πόσον το φαινόμενο των επιγενετικών συνεργάτες μνήμης με την ανάπτυξη του καρκίνου, τα στοιχεία μας δείχνουν την πιθανότητα ότι διαφορετικές προελεύσεις ιστού των καρκίνων θα μπορούσαν να έχουν διαφορετικές καρκινογόνες δυναμικά όταν υποβάλλονται σε επιγενετικές αλλαγές, από τα οποία μερικά είναι πιο επιρρεπείς στην εκ νέου -Ενεργοποίηση πολυδύναμα γονίδια με την απόκτηση βλαστικών κυττάρων επιγενετικές υπογραφή.

Oct4 και Nanog είναι τα βασικά συστατικά των πρωτεϊνικών συμπλόκων για τη διατήρηση pluripotency και ενεργοποίηση μεταγραφικών ρυθμιστικών κυκλώματος. παρατήρηση μας

Oct4

/

Nanog

πολλαπλής εισαγωγής στα κύτταρα HCT116 καταδεικνύει περαιτέρω διατήρηση της διασυνοριακής ρυθμιστικής λειτουργίας μεταξύ παραγόντων πολυδύναμα στα καρκινικά κύτταρα (Σχήμα 5).