Αφηρημένο

Ιστορικό

Ο πνεύμονας είναι ένα συχνό ιστοσελίδα του καρκίνου του παχέος εντέρου ( CRC) μεταστάσεις. Μετά τη χειρουργική εκτομή, έχουν μεταστάσεις στους πνεύμονες υποτροπές έχουν σχετίζεται με την παρουσία του μικρομεταστάσεων, δυνητικά προσιτή σε χημειοθεραπεία υψηλής δόσης χορηγείται μέσω ανοσοενισχυτικό απομονωθεί πνεύμονα αιμάτωσης (ILP). Επιδιώξαμε να καθορίσει

in vitro

το πιο αποτελεσματικό φάρμακο όταν χορηγείται σε κυτταρικές σειρές CRC κατά τη διάρκεια μιας σύντομης έκθεσης και

in vivo

άμεση και καθυστερεί την ανοχή του όταν χορηγηθεί μέσω της ILP.

Μέθοδοι

Πρώτον, η αποτελεσματικότητα των διαφόρων κυτταροτοξικών μορίων έναντι μιας ομάδας ανθρώπινων κυτταρικών σειρών CRC ελέγχθηκε

in vitro

χρησιμοποιώντας κυτταροτοξική δοκιμασία μετά από μια έκθεση 30 λεπτών. Στη συνέχεια, στις αρχές (λειτουργική) και καθυστερημένη (1 μήνα) ανοχή των δύο συγκεντρώσεων του μορίου χορηγηθεί μέσω της ILP δοκιμάστηκε σε 19 ενήλικους χοίρους χρησιμοποιώντας αιμοδυναμική, βιολογικών και ιστολογικά κριτήρια.

Αποτελέσματα

In vitro

, γεμσιταβίνη (GEM) ήταν το πιο αποτελεσματικό φάρμακο εναντίον επιλεγμένων κυτταρικών σειρών CRC.

In vivo

, GEM χορηγήθηκε μέσω ILP σε τακτά (20 μg /ml) ή υψηλή (/ml 100 μg) συγκεντρώσεις. χορήγηση GEM συνδέθηκε με παροδικές και δοσοεξαρτώμενη πνευμονική αγγειοσυστολή, που οδηγεί σε εθελοντική μείωση στην εισροή αντλία προκειμένου να διατηρηθεί μια σταθερή πίεση της πνευμονικής αρτηρίας. Μετά από αυτή τη διαφοροποίηση, ILP χρησιμοποιώντας GEM δεν συσχετίστηκε με οποιαδήποτε συστηματική διαρροή, η συστηματική βλάβη, και οξεία ή καθυστερημένη ιστολογική πνευμονική τοξικότητα. Μελέτες φαρμακοκινητικής αποκάλυψε πρόσληψη δοσοεξαρτώμενη συνδέονται με ετερογενείς διανομή του μορίου μέσα στο πνευμονικό παρέγχυμα, και επίμονη κυτταροτοξικότητα φλεβική εκροή.

Συμπεράσματα

GEM είναι αποτελεσματικό ενάντια στα κύτταρα CRC ακόμη και μετά από μια σύντομη έκθεση . ILP με GEM είναι ένα ασφαλές και επαναλήψιμη τεχνική

Παράθεση:. Pagès P-Β, Facy O, Mordant P, Ladoire S, Magnin G, Lokiec F, et al. (2013) Μεμονωμένες πνεύμονα αιμάτωσης ως επικουρική θεραπεία του καρκίνου του παχέος εντέρου πνεύμονα μεταστάσεις: προκλινική μελέτη σε Γουρούνι μοντέλο. PLoS ONE 8 (3): e59485. doi: 10.1371 /journal.pone.0059485

Επιμέλεια: Ajay Goel, Πανεπιστήμιο Baylor Medical Center, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 23 Αύγ 2012? Αποδεκτές: 14η, Φεβρουαρίου 2013? Δημοσιεύθηκε: 18 του Μάρτη 2013

Copyright: © 2013 Pagès et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από τη γαλλική Εθνική Λίγκα κατά του καρκίνου [SW /SP-116F.2010] και της επιστημονικής επιτροπής της Ιατρικής Σχολής του Ντιζόν, Γαλλία. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Περίπου 11% των ασθενών που πάσχουν από καρκίνο του παχέος εντέρου (CRC) θα αναπτύξει τελικά μεταστάσεις στους πνεύμονες [1]. Αυτή η κατάσταση σχετίζεται με ποσοστά επιβίωσης 5 ετών που κυμαίνεται από 5 έως 50%, ανάλογα με την πιθανότητα να επιτευχθεί πλήρης χειρουργική εκτομή [2] – [7]. Παρά χειρουργική εκτομή, πνευμονική υποτροπή εμφανίζεται σε περισσότερο από το 40% των ασθενών, πιθανώς λόγω μικρομεταστάσεων που ήταν ήδη παρούσα κατά τη διάρκεια της αρχικής διαδικασίας [3]. Επικουρική χημειοθεραπεία βελτιώνει χωρίς εξέλιξη, αλλά όχι τη συνολική επιβίωση [8], και η αύξηση της συστημικής δόσης συνδέεται με απαράδεκτη τοξικότητα [9].

Η πλήρης όγκου και ελέγχου μετάσταση υπήρξε πάντα ο ακρογωνιαίος λίθος των αντικαρκινικών θεραπειών. Επιπλέον, πρόσφατα στοιχεία δείχνουν ότι η μετάσταση είναι μια πολλαπλών κατευθύνσεων διαδικασία με την οποία τα καρκινικά κύτταρα μπορούν σπόρους απομακρυσμένες θέσεις, καθώς και το ίδιο το πρωτοπαθούς όγκου [10]. Αυτό αργότερα διαδικασία, γνωστή ως «αυτο-σπορά,« έχει επικυρωθεί σε διάφορα πειραματικά μοντέλα [11], και αποτελεί ένα ισχυρό επιχείρημα υπέρ της τοπικής έλεγχο των μεταστατικών ασθενειών.

Για να μειώσετε την επανεμφάνιση του CRC πνευμονικών μεταστάσεων, μερικοί συγγραφείς έχουν αναπτύξει την τεχνική των απομονωμένων πνεύμονα αιμάτωσης (ILP) [12], η οποία επιτρέπει να αυξηθεί η δόση του κυτταροτοξικού παράγοντα που παραδίδεται στον ιστό των πνευμόνων χωρίς συστηματική έκθεση. Αυτή η τεχνική έχει αποδειχθεί ότι είναι ασφαλής και αποτελεσματική ενάντια CRC μεταστάσεων πνεύμονα σε μοντέλο τρωκτικού [13] – [17]. Οι κύριοι στόχοι αυτής της μελέτης ήταν να καθορίσει

in vitro

το πιο αποτελεσματικό φάρμακο όταν χορηγείται σε κυτταρικές σειρές CRC κατά τη διάρκεια μιας σύντομης έκθεσης και

in vivo

άμεση και καθυστερεί την ανοχή του όταν χορηγηθεί μέσω της ILP σε ένα μοντέλο χοίρου.

Υλικά και Μέθοδοι

In vitro αντι όγκων

κυτταρικές σειρές.

μια ομάδα ανθρώπινου ορθοκολικού αδενοκαρκινώματος κυτταρικές σειρές (ΗΤ29, HCT8, HCT116, SW480) επιλέχθηκε να εκπροσωπήσει την ποικιλομορφία της CRC ευαισθησία χημειο και κατάστασης μεταλλάξεων (πίνακας 1), αγοράστηκε από την αμερικανική ιστών και κυττάρων Collection (ATCC®, Rockville, MD, USA) και διατηρούνται σε καλλιέργεια όπως συνιστάται.

ενώσεις

Οι ακόλουθες ενώσεις επιλέχθηκαν ως τα πλέον αποτελεσματικά φάρμακα κατά CRC σε κλινικό περιβάλλον [18] – [19]:. γεμσιταβίνη (GEM) (Gemzar®, Lilly) , σισπλατίνη (σισπλατίνη Mylan®, Mylan), 5 φθοριοουρακίλη (5 FU) (Fluorouracile ACCORD®, Accord Healthcare), οξαλιπλατίνη (Eloxatine®, Sanofi), Raltritexed (Tomudex®, Hospira) και ιρινοτεκάνη (Campto®, Pfizer).

κυτταροτοξικότητας της δοκιμασίας.

Anti όγκων αυτών των ενώσεων προσδιορίσθηκε με τη χρήση κυτταροτοξικών δοκιμασία, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [20]. Εν συντομία, τα κύτταρα σπάρθηκαν σε πλάκες 24 φρεατίων, αφέθησαν να αναπτυχθούν μέχρι τη συρροή σε 24 ώρες, και εκτίθεται σε επιλεγμένες ενώσεις μόνες ή σε συνδυασμό για 30 λεπτά. Μετά από 4 ημέρες, τα κύτταρα χρωματίστηκαν χρησιμοποιώντας κρυσταλλικό ιώδες, και η απορρόφηση μετρήθηκε σε κάθε φρεάτιο από ένα αυτόματο φωτόμετρο (φίλτρο 590-nm, Spectra-Β ®, Varian, France). Η επιβίωση των κυττάρων υπολογίστηκε ως το ποσοστό απορρόφησης σε αγωγή

vs

μη επεξεργασμένα φρεάτια, και IC50 (συγκέντρωση επίτευξη αναστολή της ανάπτυξης του 50% των κυττάρων) προσδιορίστηκαν. Ο πιο αποτελεσματικός φάρμακο ορίστηκε ως η ένωση με το χαμηλότερο IC50 [20], και δοκιμάζονται σε συνδυασμό με το δεύτερο πιο αποτελεσματική ένωση.

Απομονωμένα Lung Perfusion

Ζώα.

Τριμηνιαία παλιό μεγάλο λευκό χοίρων (n = 19), βάρους 50 ± 3 kg το καθένα, αγοράστηκαν από Hazotte (Beaumont, Γαλλία). Τα ζώα αφέθηκαν να εγκλιματιστούν στο περιβάλλον του εργαστηρίου για 7 ημέρες με ελεύθερη πρόσβαση σε τροφή και νερό. Τα πειράματα που εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας Ζώων του Πανεπιστημίου της Βουργουνδίας, Γαλλία (A0809).

Αναισθησία.

Τα ζώα αναισθητοποιούνται όπως περιγράφηκε προηγουμένως [21]. Η συστηματική αρτηριακή πίεση του αίματος παρακολουθήθηκε μέσω ενός καθετήρα εισάγεται εντός της βραχιονίου αρτηρίας. Ο καρδιακός ρυθμός, ηλεκτροκαρδιογράφημα, ρινική θερμοκρασία, κορεσμού οξυγόνου στο αίμα παρακολουθούνταν χρησιμοποιώντας το σύστημα NICO (Novametrix Medical Systems, Wallingford, CT). Μη κλασματοποιημένη ηπαρίνη (100 UI /kg) χορηγήθηκε πριν από την αγγειακή αποκλεισμός του πνεύμονα. Για την επίτευξη περιεγχειρητική αναλγησία, 20 ml ροπιβακαϊνης 0,75% εγχύθηκαν στην περιβλαβικής δέρμα και θωρακικού τοιχώματος. Τραμαδόλη και η παρακεταμόλη είχαν συνταγογραφηθεί στην μετεγχειρητική περίοδο σε τακτά χρονικά διαστήματα.

Χειρουργική τεχνική.

Αφού τοποθετηθεί το ζώο στο δεξί πλευρική κατάκλισης, ένα αριστερό οπισθο-πλευρικό θωρακοτομή εκτελέστηκε στο τέταρτο χώρο μεσοπλεύριους . Περικάρδιο άνοιξε ευρέως, και η αριστερή κύρια πνευμονική αρτηρία (LMPA) και τα δύο αριστερά πνευμονικές φλέβες (LPV) απομονώθηκαν. Καθετηριασμό έγινε χρησιμοποιώντας ένα μεταλλικό μύτες δεξί anguled κάνουλα (High Flow αορτικό τόξο κάνουλα 3,8 χιλιοστών, Terumo®, Ann Arbor, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής) εισάγεται στο LMPA και φλεβική κάνουλα (DLP Αριστερά Καρδιά Vent καθετήρα, Medtronic®, Minneapolis, USA) εισάγεται στην σύγκλιση των LPVs μέσω του αριστερού κόλπου (LA). Μια γραμμή της οθόνης εισήχθη στην προέλευση του LMPA. Η LMPA και LA ήταν ό, τι εμπλέκεται, ο αριστερός πνεύμονας έχει εξαερισμό και το αριστερό κύριο βρόγχο είχε snared να αποφράξει το βρογχικό αρτηριακό αίμα [22].

Απομονωμένα πνεύμονα αιμάτωσης.

Η εξωσωματική κυκλοφορία αποτελείται μια αντλία (Biomedicus®, Minneapolis, USA), εναλλάκτη θερμότητας, δεξαμενή και σωλήνωση PVC του ¼ ίντσας διαμέτρου. Αστάρωμα επιτεύχθηκε με ένα διάλυμα που περιέχει 850 ml του voluven (6% άμυλο υδροξυαιθυλίου 130 /0.4) και 150 ml αίματος από την κυκλοφορία του πνεύμονα. Μετά την εκκίνηση του αιμάτωση, η ροή της αντλίας αυξήθηκε βαθμιαία για να ληφθεί μια μέση πίεση ισοδύναμη LMPA με την πίεση που μετράται πριν από τη σύσφιξη. Η χημειοθεραπεία κατόπιν εγχέεται μέσα στο κύκλωμα [23], η ροή αντλία διαμορφωμένη για να σταθεροποιήσει μέση πίεση LMPA, και χημειοθεραπεία αιμάτωση διήρκεσε για 30 λεπτά ακολουθούμενη από μία περίοδο 15 λεπτών της έκπλυσης. Σε 5, 10, 20 και 30 λεπτά της έγχυσης, ελήφθησαν δείγματα αίματος συστημική. Στις 30 λεπτά διαπότιση, δύο δείγματα πνεύμονα ελήφθησαν για να μετρηθεί η συγκέντρωση του φαρμάκου στον ιστό των πνευμόνων και να εκτιμηθεί η ιστολογική οξεία βλάβη πνεύμονα. δείγματα υγρών ελήφθησαν στο κύκλωμα εγχύσεως για τη μέτρηση της συγκέντρωσης του φαρμάκου, και τον πνεύμονα εκροής συντάχθηκε για να αξιολογήσει την κυτταροτοξική δράση του στα κύτταρα του όγκου

in vitro

. Στο τέλος της διαδικασίας, κάνουλες αποσύρθηκαν, θωρακοτομή έκλεισε προσωρινά σωλήνα στο στήθος, και τα ζώα ξύπνησαν.

Πειραματικές ομάδες.

μελέτη Φάσης Ι έχει καθορίσει μια μέγιστη ανεκτή δόση μετά μια ενδοφλέβια έγχυση διάρκειας 30 λεπτών του GEM ισοδυναμεί με συστηματική δόση των 20 μg /ml /h [24]. Ως προεξοχή, η συγκέντρωση του GEM που χρησιμοποιούνται για την ILP ήταν 0 μg /ml (ομάδα ελέγχου, η = 5), 20 μg /ml (κανονική ομάδα δόσης, η = 7 ζώα) και 100 μg /ml (ομάδα υψηλής δόσης, n = 7).

Φαρμακοκινητική.

Για να κλείσει τη συγκέντρωση GEM σε δείγματα αίματος και πνευμονικού παρεγχύματος, δείγματα spin-ξηραίνονται στους 4 ° C και 12000 G επί 10 λεπτά. Ποσοτικοποίηση της GEM στο πλάσμα και surpernatant στη συνέχεια επιτυγχάνεται χρησιμοποιώντας υψηλής απόδοσης σύστημα υγρής χρωματογραφίας (HPLC) isocatic-ανάστροφης φάσης, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [25]. Συγκέντρωση του GEM στο τέλος της ILP ιδρύθηκε το κύκλωμα, σε δύο διαφορετικές βιοψίες πνεύμονα, και στη συστηματική κυκλοφορία. Υπολειμματική κυτταροτοξικότητα της φλεβικής εκροής μελετήθηκε χρησιμοποιώντας διαδοχικές αραιώσεις και in vitro κυτταροτοξική δοκιμασία.

Οξεία συστημική τοξικότητα.

Η διαδικασία της ILP διεξήχθη σε δεκαεννέα χοίρους. Συστημική τοξικότητα του GEM αξιολογήθηκε με μέτρηση της ηπατικής και νεφρικής λειτουργίας. Αιμοδυναμική ανοχή εκτιμήθηκε με καταγραφή του καρδιακού ρυθμού και της συστηματικής αρτηριακής πίεσης.

Οξεία πνευμονική τοξικότητα.

Αναπνευστικό ανοχή εκτιμήθηκε καταγράφοντας μέση πίεση LMPA, οξυαιμοσφαιρίνη κορεσμού (SpO2) και της μερικής πίεσης του διοξειδίου του άνθρακα κατά την εκπνοή (PCO2). Η σοβαρότητα της πνευμονικών βλαβών εκτιμήθηκε ιστολογικά χρησιμοποιώντας το σκορ Chiang, η οποία δημιουργήθηκε για να αξιολογηθεί η οξεία πνευμονική βλάβη μετά την ακολουθία ισχαιμίας /επαναιμάτωσης του μεταμοσχευμένου πνευμόνων [26]. Εν συντομία, αυτό το σκορ esteems βλάβες, όπως οίδημα και διήθηση των κυττάρων. Το οίδημα βαθμολογήθηκαν ως 1 για περιαγγειακές οίδημα? 2 για περιβρογχικές ή διάμεσο οίδημα? 3 για κυψελιδικό οίδημα. κυτταρική διήθηση βαθμολογείται ως 2 για περιαγγειακή κυτταρική διήθηση? 3 για διάμεση διήθηση των κυττάρων? 4 για κυψελιδική κυτταρική διήθηση. Το άθροισμα όλων των παθολογικών βαθμολογιών ήταν η βαθμολογία για κάθε πεδίο, και στη συνέχεια υπολογίσαμε τη μέση βαθμολογία για το αριστερό πνεύμονα από το άθροισμα του άνω και του κάτω λοβού σκορ, με το 0 να είναι ένα φυσιολογικό αποτέλεσμα.

καθυστερημένη τοξικότητα.

Μετά από ένα μήνα παρακολούθησης, δώδεκα ζώα reoperated καθεξής. Καθυστερημένη τοξικότητα εκτιμήθηκε χρησιμοποιώντας τις ίδιες μεθόδους και κριτήρια που περιγράφονται για οξεία τοξικότητα. Τα ζώα στη συνέχεια θανατώνονται με ευθανασία με μία ένεση ενδοκαρδιακή πεντοβαρβιτάλης (Dolethal®, Vetoquinol).

Στατιστική ανάλυση.

κατηγορικές μεταβλητές αναφέρθηκαν ως αριθμούς και ποσοστά. Οι κανονικές συνεχείς μεταβλητές αναφέρονται ως μέσος ± τυπικές αποκλίσεις. Όσον αφορά τις αιμοδυναμικές παραμέτρους, συγκρίναμε τις μέτριες μέσες τιμές με τρόπο επαναλήφθηκε για το ίδιο ζώο με επαναλαμβανόμενες μετρήσεις ΑΝΟνΑ. Μια γραμμική παλινδρόμηση διεξήχθη για να εκτιμηθεί η συσχέτιση μεταξύ συνεχείς μεταβλητές. Όταν τα αποτελέσματα της ανάλυσης διακύμανσης ήταν στατιστικά σημαντική (p & lt? 0.05), πραγματοποιήσαμε μια

posthoc

σύγκριση με τη μέθοδο Benferroni να μειώσει τον κίνδυνο α. Οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του στατιστικού λογισμικού STATA 12 (StataCorp, College Station, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής).

Αποτελέσματα

Τα κυτταροτοξικά Δοκιμασία

χορηγούνται μέσω μιας σύντομης έκθεσης, GEM ήταν πιο αποτελεσματικό από 5 FU, σισπλατίνη, οξαλιπλατίνη και ιρινοτεκάνη (Σχήμα 1 Α & amp? Β). RALTITREXED έδειξε την ίδια αποτελεσματικότητα όπως GEM σε HCT8 και ΗΤ29, αλλά όχι σε HCT116 και SW480 κυττάρων. Adjunction της raltitrexed να GEM δεν αύξησε την κυτταροτοξικότητα του (Σχήμα 1 C). Ως εκ τούτου, GEM επιλέχθηκε και μόνο για τη διαδικασία της ILP.

Α- τιμές IC50 μετά από in vitro έκθεσης για 30 λεπτά κυττάρων CRC SW480, HT28, HCT116 και HCT8 με οξαλιπλατίνη, 5 FU, σισπλατίνη, GEM, ιρινοτεκάνη και rALTITREXED. Οι καμπύλες δόσης-απόκρισης Β- μετά από in vitro έκθεση για 30 λεπτά των κυττάρων CRC SW480, HT28, HCT116 και HCT8 με οξαλιπλατίνη, 5 FU, σισπλατίνη, GEM, ιρινοτεκάνη και raltitrexed. καμπύλες C- δόσης-απόκρισης μετά από in vitro έκθεσης για 30 λεπτά κυττάρων CRC SW480, HT28, HCT116 και HCT8 με συνδυασμό GEM και RALTITREXED.

Η

Φαρμακοκινητική

Μετά από 30 λεπτά αιμάτωση, η συγκέντρωση GEM ήταν μεγαλύτερη για την υψηλή δόση από ό, τι για την ομάδα τακτική δόσης, όταν μετράται στο κύκλωμα (74.29 ± 18.06 έναντι 22.85 ± 6.51 μg /ml, p = 0,0001) και στο πνευμονικό παρέγχυμα (141,46 ± 117,07 μg /g έναντι 56,91 ± 28,06 μg /g αντίστοιχα, ρ = 0.014). Δοκιμασία κυτταροτοξικότητας έδειξαν διατηρείται κυτταροτοξική επίδραση της εκροής του πνεύμονα κατά το τέλος της ILP, χωρίς διαφορά μεταξύ της τακτικής δόσης και της ομάδας υψηλής δόσης, ακόμη και για την αραίωση το 10% του προϊόντος εκροής πνεύμονα (Σχήμα 2). Στη συστηματική κυκλοφορία, η μέγιστη συγκέντρωση του GEM μετά την ILP ήταν 0,638 ± 0,27 μg /ml για την ομάδα υψηλής δόσης και 0,248 /ml, η ομάδα τακτική δόσης ± 0,15 μg (Πίνακας 2).

Τα κύτταρα εκτίθενται σε διαφορετικές αραιώσεις (10%, 50% και 100%) της εκροής του πνεύμονα.

η

Οξεία συστημική τοξικότητα

Όσον αφορά την συστηματική ανοχή αιμοδυναμική, καμία σημαντική αλλαγή δεν παρατηρήθηκε στην πίεση του αίματος, τον καρδιακό ρυθμό, και ηλεκτροκαρδιογράφημα όπως προσδιορίστηκε πριν, κατά και μετά τη διαδικασία (Πίνακας 3). Καμία σημαντική ηπατική ή νεφρική οξεία τοξικότητα παρατηρήθηκε (Πίνακας 4).

Η

Οξεία πνευμονική τοξικότητα

Πριν σύσφιξης, ατομικές διαφοροποιήσεις στην μέση πίεση LMPA σημειώθηκε κατά την έναρξη, με τιμές κυμαίνονται από 18 έως 34 mmHg. Μετά τη σύσφιξη, η εισροή αιμάτωση αυξήθηκε προοδευτικά για να επιτευχθεί μια εισροή των 500 έως 600 ml /min. Στις ομάδες GEM, η μέση πίεση LMPA αυξάνεται σταδιακά, με αποτέλεσμα να μειώνεται η εισροή του εξωσωματικού αντλία για να διατηρηθεί η αρχική μέση πίεση LMPA (Σχήμα 3Α). Κατά συνέπεια, η μέση πίεση LMPA δεν ήταν σημαντικά διαφορετική μεταξύ των τριών ομάδων (Σχήμα 3Β), αλλά η μέση εισροή αιμάτωση στα 30 λεπτά ήταν χαμηλότερο στις ομάδες GEM ό, τι στην ομάδα ελέγχου (Σχήμα 3Α). Υπήρχε μια αντίστροφη συσχέτιση μεταξύ της συγκέντρωσης του GEM στο κύκλωμα εγχύσεως και της μέσης ροής μετά από 30 λεπτά διάχυσης (p = 0,0158). Δεν υπήρχε διαφορά στην μέση πίεση LMPA πριν και μετά την ILP (p = 0,7187, Σχήμα 3C). Οι ιστολογικές αναλύσεις αποκάλυψαν μια μέση βαθμολογία Τσιάνγκ των 5,05 ± 3,52 στην ομάδα ελέγχου, χωρίς σημαντική διαφορά στις ομάδες GEM. Επίσης δεν υπήρχε συσχετισμός μεταξύ της Chiang σκοράρει και εγχυθεί η δόση GEM (p = 0,7491, Πίνακας 5) ή η συγκέντρωση GEM στο πνευμονικό παρέγχυμα (p = 0,7278).

Α- αιμάτωσης εισροή στο απομονωμένο πνεύμονα διαποτίστηκε με ζελατίνη (580 ± 178.88 ml /min), GEM 20 κατά τη διάρκεια 30 λεπτών (ρ = 0,0055) μg /ml (257,14 ± 202,62 ml /min) και GEM 100 μg /ml (210 +/- 138.92 ml /min). πίεση Β- Perfusion στην απομονωμένη πνεύμονα διαποτίστηκαν με ζελατίνη, GEM 20 μg /ml, και GEM 100 μg /ml κατά τη διάρκεια 30 λεπτών. C- Μέση αριστερά πνευμονική αρτηριακή πίεση πριν και μετά την ILP με ζελατίνη, GEM 20 μg /ml και GEM 100 μg /ml κατά τη διάρκεια 30 min (p = 0,7187).

Η

μακροπρόθεσμη τοξικότητα

ούτε η πνευμονική νέκρωση ούτε ίνωση παρατηρήθηκε, είτε μακροσκοπικά ή μικροσκοπικά. Πιο συχνά βλάβες που περιγράφονται ήταν περιβρογχικές οίδημα και διάμεση διήθηση των κυττάρων. Σοβαρή αλλοιώσεις όπως κυψελιδικά κυτταρική διείσδυση παρατηρήθηκαν μόνο για τα τρία πρώτα ζώα στην ομάδα ελέγχου, ο οποίος παρουσίασε μια πνευμονικό οίδημα στο τέλος της διαδικασίας ILP που σχετίζονται με την ταχεία αύξηση της εισροής. Δεν υπήρχε συσχέτιση μεταξύ της συγκέντρωσης GEM στο πνευμονικό παρέγχυμα και το σκορ Chiang (p = 0,0846) (Πίνακας 5).

Σχόλια

Αρχικά αναπτύχθηκε ως επικουρική θεραπεία των μεταστάσεων του πνεύμονα που προέρχονται από σαρκώματα, ILP έχει δημιουργήσει σημαντικό ενδιαφέρον λόγω του υψηλού πνευμονικής ποσοστό υποτροπής και μειωμένη μακροχρόνια επιβίωση σε αυτό το παθολογία, ακόμη και μετά από πλήρη χειρουργική εκτομή [3]. Δυνητικά πλεονεκτήματα της ILP περιλαμβάνουν την παράδοση της χημειοθεραπείας υψηλής δόσης στον πνεύμονα, που οδηγεί σε ταχεία κορεσμού του πνευμονικού παρεγχύματος και περιορισμένη συστηματική διαρροή [14], [27] – [29]

Το ενδιαφέρον του.

in vitro

κυτταροτοξική δοκιμασία είναι να επιλέξετε ένα φάρμακο χημειοθεραπείας για τη διαδικασία ILP, όπως προτείνεται από προηγούμενες μελέτες. Σύνδεσμος

et al

. έδειξαν ότι το

in vitro

δοκιμασίες θα μπορούσαν να προσδιορίσουν δραστικά φάρμακα για έγχυση εξατομικευμένη ηπατικής αρτηρίας [30]. Kornmann

et al

. έδειξε ότι οι ασθενείς με CRC που αποδεικνύεται

in vitro

ευαισθησία μπορούν να επωφεληθούν από τα παγκρεατικά και κολικούς περιφερειακή χημειοθεραπεία με GEM [31]. Κατά τον καθορισμό αυτής της προκαταρκτικής ανάλυσης, επιλέξαμε μια ομάδα κυττάρων που αντιπροσωπεύουν την ποικιλομορφία της CRC σχετικά με αυξητικούς παράγοντες μονοπατιών σηματοδότησης [32]. Αυτές οι οδοί στοχευμένες σε περίπτωση μεταστατική νόσο, μόνη ή σε συνδυασμό με κυτταροτοξικούς παράγοντες, συμπεριλαμβανομένων οξαλιπλατίνη και ιρινοτεκάνη [33]. Ωστόσο, αυτά τα δύο φάρμακα ήταν λιγότερο αποτελεσματικά από GEM ακόλουθη σύντομη έκθεση, πιθανώς επειδή GEM παρουσιάζει μία εξαρτώμενη από τη δόση επίδραση ενώ το αποτέλεσμα της οξαλιπλατίνης και ιρινοτεκάνης είναι περισσότερο εξαρτώμενη από τον χρόνο [24], [34], [35].

Μέχρι σήμερα, GEM δεν είναι ένα πρότυπο συστηματική θεραπεία του μεταστατικού CRC [33]. Ωστόσο, όπως αναφέρθηκε προηγουμένως, ορισμένα δημοσιεύματα δικαιολογούν τη χρήση της ΗΤΟΑ να επιλέξετε την ενεργή χημειοθεραπεία σε κύτταρα CCR κατά τη διάρκεια σύντομης έκθεσης 30 λεπτά [30], [31]. Πρέπει να σημειωθεί ότι τα φάρμακα που χρησιμοποιούνται στην περιοχική έγχυση οργάνων, όπως απομονώνεται πνεύμονα ή συκώτι αιμάτωσης, δεν είναι απαραίτητα τα μόρια που χρησιμοποιούνται για ενδοφλέβια θεραπείες. Στο θώρακα ογκολογία, Hendricks et al. έχουν αναφερθεί ενθαρρυντικά αποτελέσματα σε κλινική δοκιμή Φάσης Ι χρησιμοποιώντας μελφαλάνης κατά τη διάρκεια της ILP για τη θεραπεία των μεταστάσεων του πνεύμονα [22]. Σε αυτή τη μελέτη, πρωτογενείς καρκίνους ήταν ορθοκολικό καρκίνωμα, καρκίνωμα νεφρικών κυττάρων και του σαρκώματος, και μελφαλάνη δεν ήταν καθιερωμένη θεραπεία οποιασδήποτε από αυτές τις μορφές καρκίνου. Ομοίως, στην ηπατική ογκολογία, μελφαλάνη έχει αναφερθεί ότι σχετίζεται με την κλινική ανταπόκριση και παρατεταμένη επιβίωσης μετά απομονωμένο ήπαρ αιμάτωσης, παρά την περιορισμένη αποτελεσματικότητα του μετά ενδο φλεβική χορήγηση [28]. Απομονωμένες αιμάτωση οργάνων παραμένει μια πειραματική τεχνική που εκτελείται μόνο από μερικές χειρουργικές ομάδες στην κλινική, και όλα τα διαθέσιμα μέσα για συστηματική χορήγηση φαρμάκων δεν έχουν δοκιμαστεί για τις απομονωμένες αιμάτωση του οργάνου. Ένα από τα κύρια πλεονεκτήματα των απομονωμένων αιμάτωσης οργάνων είναι να επιτραπεί η χρήση υψηλότερων δόσεων κυτταροτοξικών παραγόντων, διευρύνοντας έτσι τον αριθμό των μορίων διαθέσιμα για να ληφθεί μια αντικαρκινική επίδραση. Ωστόσο, μέχρι σήμερα, δεν υπάρχει καμία δημοσίευση στην αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας της γεμσιταβίνης σε πνεύμονα μεταστάσεις από CRC σε κλινικό περιβάλλον.

Όσον αφορά απομονωθεί αιμάτωση των οργάνων, η κλασική σχεδίαση κλιμάκωση της δόσης είναι άχρηστη αν εξωσωματικό κύκλωμα οδηγήσει σε μια σταθερή κατάσταση εκθέτοντας το παρέγχυμα οργάνου για τις δραστικές συγκεντρώσεις που σχετίζονται με φυσιολογικό κορεσμό των ιστών [36]. Στη μελέτη μας, GEM συγκεντρώσεις που χρησιμοποιήθηκαν κατά τη διάρκεια της ILP ήταν δεκαοχτώ έως σαράντα φορές μεγαλύτερη από ό, τι

in vitro

IC50, που οδηγούν σε σταθερές συγκεντρώσεις GEM στο κύκλωμα όλη την αιμάτωση, με ελάχιστη συστηματική διαρροές. Και για τις δύο ομάδες, οι συγκεντρώσεις GEM στο κύκλωμα ήταν πολύ υψηλότερες (από τρία έως είκοσι φορές) με αυτή που βρέθηκε στο πλάσμα ασθενών που έλαβαν θεραπεία με IV GEM [24]. Περαιτέρω, η κυτταροτοξική δραστικότητα του πνεύμονα εκροής απέδειξε την διατήρηση των υψηλών συγκεντρώσεων GEM και διατηρούνται κυτταροτοξική δράση. Αυτά τα τρία στοιχεία δείχνουν κορεσμό του πνευμονικού παρεγχύματος στο σύνολό της από GEM κατά τη διάρκεια της διαδικασίας της ILP, αλλά χωρική κατανομή παραμένει αμφίβολο.

Κατά τη διάρκεια της ILP, η πίεση εισροής διατηρήθηκε ισοδυναμεί με τη μέση πνευμονική αρτηριακή πίεση μετρήθηκε πριν σύσφιξης για την πρόληψη πνευμονικό οίδημα και οξεία πνευμονική βλάβη [37], [38]. Adjunction του GEM στο κύκλωμα συνδέθηκε με μια αύξηση της ενδοπνευμονικής αγγειακή αντίσταση και επακόλουθη αύξηση της μέσης πνευμονικής αρτηριακής πίεσης (mPAP). Αυτή η παροδική αγγειακή τοξικότητα του GEM έχει ήδη αναφερθεί μετά από συστηματική χορήγηση, και περιγράφεται ως ένα παροδικό αγγειοσυστολή που σχετίζεται με το σύνδρομο διαφυγής τριχοειδών [39]. Δείξαμε ότι κατά τη διάρκεια της ILP αυτό το αγγειακό φαινόμενο είναι δοσοεξαρτώμενη και αναστρέψιμη, υπό την προϋπόθεση ότι η μείωση της εισροής ILP ελέγχει το mPAP. Τέλος, βρήκαμε ετερογενή συγκεντρώσεις του GEM στο πνευμονικό παρέγχυμα ανάλογα με την περιοχή και ό, τι η ομάδα εξέτασε, όπως έχει ήδη αναφερθεί με άλλα κυτταροτοξικών παραγόντων [40]. Αυτή η ετερογένεια μπορεί να ερμηνευθεί ως συνέπεια μιας αποσπασματική ναρκωτικά που προκαλείται αγγειοσυστολή, και μπορεί να αντισταθμιστεί από την adjunction των αγγειοδιασταλτικών κατά τη διάρκεια της ILP χρησιμοποιώντας GEM.

Ανώτατη ιστολογική βαθμολογία Chiang βρέθηκαν στην ομάδα ελέγχου σε σχέση με το GEM ομάδα, στο τέλος της διαδικασίας και μετά από ένα μήνα από την επιβίωση. Franke et al. έχουν δείξει ότι η αυξημένη πνευμονική πίεση σε ένα περιβάλλον ILP θα οδηγήσει σε επιβλαβείς επιδράσεις στη μορφολογία [37], αλλά στη μελέτη μας, η πίεση έγχυσης ήταν σημαντικά διαφορετική στις ομάδες ελέγχου και GEM. Η μόνη σημαντική διαφορά στη πνευμονική αιμοδυναμική μεταξύ των ομάδων ήταν σημαντική υψηλότερη εισροή αιμάτωσης στην ομάδα ελέγχου. Αυτή η αύξηση της εισροής αιμάτωσης μπορεί να είναι υπεύθυνος των ιστολογικών επιβλαβή αποτελέσματα.

Αυτή η μελέτη έδειξε ότι ILP με GEM είναι ένα ασφαλές και επαναλήψιμη τεχνική, που επιτρέπει να παραδώσει υψηλή δόση χημειοθεραπείας στο πνευμονικό παρέγχυμα με πολύ περιορισμένη συστηματική διαρροές. Ωστόσο, GEM-σχετίζεται παροδικές και δοσο-εξαρτώμενο πνευμονική αγγειοσυστολή οδήγησαν σε ετερογενή κατανομή του GEM στο πνευμονικό παρέγχυμα. Οι περαιτέρω πειραματισμούς που απαιτούνται για τη βελτιστοποίηση της κατανομής του φαρμάκου στο πνευμονικό παρέγχυμα και να δοκιμαστεί η αποτελεσματικότητα αυτής της προσέγγισης πριν από την εξέταση των κλινικών μελετών.

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε Paul Van Schil (Αμβέρσα, Βέλγιο ) για την ευγενική καλωσόρισμα του και ακριβής διδασκαλία της χειρουργικής τεχνικής. Ευχαριστούμε επίσης τον Valentin Derangere, Jean-Baptiste Lequeu, Thierry Benard, Philip Bastable και Pablo Ortega-Deballon για την ενθουσιώδη υποστήριξή τους στο έργο αυτό.